CC BY
88
БИОЛОГИЯ
УДК 577.151
СКРИНИНГ БАКТЕРИЙ РОДА AZOSPIRILLUM ПО СПОСОБНОСТИ К ПРОДУКЦИИ ВНЕКЛЕТОЧНОЙ ЛИГНИН-ПЕРОКСИДАЗЫ И ДЕГРАДАЦИИ МОДЕЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ЛИГНИНА И АЗОКРАСИТЕЛЕЙ
С. В. Петров1, М. А. Купряшина2, Е. Г. Пономарёва2, С. А. Воробьёва1, Е. В. Глинская1, В. Е. Никитина2
Саратовский национальный исследовательский государственный университет имени Н. Г. Чернышевского E-mail: petrov.s.v.999@mail.ru
2Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, Саратов E-mail: kupryashina_m@mail.ru
Лигнин-пероксидаза является одним из главных ферментов грибов-деструкторов древесины, который способен к неспецифическому окислению многих ароматических и полициклических соединений. К началу наших исследований сведения о способности к продукции данного фермента бактериями практически отсутствовали. Относительно недавно нами была обнаружена активность лигнин-пероксидазы в смывах с поверхности бактериальных клеток и во внутриклеточных экстрактах азоспирилл. В ходе данного исследования был проведен скрининг 6 штаммов бактерий рода Azospirillum по способности к продукции внеклеточной лигнин-пероксидазы, а также потенциал данных микроорганизмов к деградации модельных соединений лигнина и азокрасителей. Активность фермента в культуральной жидкости определяли по окислению вератрилового спирта до вератрового альдегида. Лигнин-деградирующий потенциал бактерий определяли по методу Ahmad с использованием препаратов нитрированного лигнина. При исследовании деградирующей способности азоспирилл в отношении синтетических красителей в качестве модельного азокрасителя был выбран метиловый оранжевый. В ходе исследования обнаружена продукция внеклеточной лигнин-пероксидазы у всех взятых в эксперимент штаммов рода Azospirillum. В результате скрининга выявлена способность азоспирилл к деградации модельных соединений лигнина. Впервые обнаружена способность бактерий рода Azospirillum к разрушению азокрасителей. В большинстве случаев отмечена положительная корреляция между уровнем активности внеклеточной лигнин-пероксидазы и способностью к деградации лигниноподобных соединений, а также сложных ароматических красителей.
Ключевые слова: лигнин-пероксидаза, Azospirillum, деградация, модельные препараты лигнина, метиловый оранжевый, азокрасители.
Screening of Genus Azospirillum for their Ability to Produce Extracellular Lignin-Peroxidase and the Degradation of Model Lignin Compounds and Azo Dyes
S. V. Petrov, M. A. Kupryashina, E. G. Ponomareva, S. A. Vorobeva, E. V. Glinskaya, V. E. Nikitina
Lignin peroxidase is one of the main enzymes of fungi decomposers of wood, that is capable to many non-specific oxidation of aromatic and polycyclic compounds. By the beginning of our research there were virtually no data of the bacteria's ability to produce the lignin peroxidase. Rather recently lignin peroxidase activity was detected by us in the washouts from the surface of the bacterial cells and in intracellular extracts of bacteria from genus Azospirillum. In this study, 6 strains of bacteria of the genus Azospirillum was screened by their ability to produce extracel-
© Петров С. В., Купряшина М. А., Пономарёва Е. Г., Воробьёва С. А., Глинская Е. В., Никитина В. Е., 2017
lular lignin peroxidase, and by the potential of these microorganisms to the degradation of lignin model compounds and azo dyes. The enzyme activity in the culture fluid was determined by oxidation of veratryl alcohol to veratric aldehyde. Lignin-degrading capacity of the bacteria was determined by the method of Ahmad, using preparations of nitrided lignin. In the study of the bacteria of the genus Azospirillum by their ability to degrading the synthetic dyes, the methyl orange was selected as a model of the azo dye. The study found production of extracellular lignin peroxidase from all strains of bacteria of the genus Azospirillum taken in the experiment. As a result of screening revealed Azospirillum ability to degradation of lignin model compounds. For the first time discovered the ability of bacteria of the genus Azospirillum to the destruction of azo dyes. In most cases showed positive correlation between the level of activity of extracellular lignin peroxidase and ability to degradation of lignin model compounds and aromatic complex dyes. Key words: lignin peroxidase, Azospirillum, degradation, model lignin compounds, methyl orange, azo dyes.
DOI: 10.18500/1816-9775-2017-17-2-170-176
Лигнин-пероксидаза (EC 1.11.1.14) - один из главных внеклеточных неспецифических окислительных ферментов многих грибов белой гнили. Уникальные кинетические характеристики данной пероксидазы позволяют ей участвовать в процессах деградации многих полициклических соединений, в том числе и лигнина. Показано, что благодаря высокому редокс-потенциалу лигнин-пероксидаза способна к обесцвечиванию ряда азокрасителей [1].
Сведения о способности бактерий к продукции лигнин-пероксидаз крайне фрагментарны. К началу наших исследований активность данного фермента детектировалась у Streptomyces viri-dosporus T7A [2] и Pseudomonas sp. SUK1 [3]. Никитиной с соавторами [4] была обнаружена лигнин-пероксидазная активность в смывах с бактериальной поверхности и во внутриклеточных экстрактах у ряда штаммов бактерий рода Azospirillum - почвенных азотфиксирующих микроорганизмов, способных к ассоциативному и эндофитному симбиозу. По данным литературы, некоторые микроорганизмы, способные к продукции внеклеточной лигнин-пероксидазы, участвуют в разрушении лигнина и лигнинопо-добных соединений, а также сложных ароматических красителей [5].
В связи с вышеизложенным в ходе данного исследования был проведен скрининг бактерий рода Azospirillum по способности к продукции внеклеточной лигнин-пероксидазы, а также к деградации модельных соединений лигнина и азокрасителей.
Материалы и методы
В качестве объектов исследования были выбраны следующие штаммы: A. brasilense
Sp245, Sp107, Sp7, SR 80, A. lipoferum Sp59b и A. tiophilum Bv-S из коллекции микроорганизмов ИБФРМ РАН (Саратов).
Бактерии культивировали на жидкой ма-латно-солевой среде следующего состава (г/л): KH2PO4 - 0,1; K2HPO4 - 0,4; NaCl - 0,1; Na2MoO4-7H2O - 0,002; MgSO47H2O - 0,2; FeSO47H2O - 0,02; яблочная кислота - 5,0; NaOH - 1,7; NH4Cl - 1,0; CaCl2 - 0,02; pH 6,8. Посевным материалом служила 12-часовая культура, выращенная на среде того же состава.
Активность внеклеточной лигнин-перок-сидазы определяли в культуральной жидкости по скорости окисления вератрилового спирта до вератрового альдегида при длине волны 310 нм [6]. Реакцию начинали добавлением 100 мкл 0,4 мМ H2O2. За единицу удельной активности фермента принимали изменение поглощения на единицу за 1 мин на 1 мг белка. Концентрацию белка определяли по методу Бредфорд [7].
Лигнин-деградирующий потенциал бактерий определяли с использованием метода, предложенного Ahmad [8]. В эксперимент были взяты два модельных препарата лигнина Клас-сона, полученные из нативных (не подвергнутых метанолизу) и метанолизных дубовых опилок, предоставленных сотрудниками лаборатории биохимии ФГОУ ВПО «Пензенская ГСХА». Спектрофотометрическое определение лиг-ниндеградирующей способности проводили в полистироловых 96-луночных планшетах на им-муноферментном анализаторе Multiskan Ascent в Центре коллективного пользования научным оборудованием в области физико-химической биологии и нанобиотехнологии «Симбиоз» ИБФРМ РАН. Обработка результатов измерений осуществлялась с помощью программы Ascent Software for Multiskan Ascent («Thermo Electron», Финляндия).
В качестве модельного азокрасителя при исследовании деградирующей способности азо-спирилл в отношении синтетических красителей был выбран метиловый оранжевый [9]. Степень разрушения красителя выражали в процентах и рассчитывали по формуле
А — А
о/ _ inn нач кон
% обесцвечивания = 100 х л -
Анач
где А нач - начальное поглощение, а А кон - конечное поглощение красителя после культивирования [10]. Также нами было оценено влияние на процесс деградации красителя таких параметров, как концентрация вносимого вещества, время и температура культивирования.
Все эксперименты проводились минимум в трех повторностях в трех независимых экспериментах. При оценке полученных результатов пользовались методом расчета стандартного отклонения среднего арифметического с использованием программы Microsoft Office Excel 2010; данные имеют соответствующие доверительные интервалы при уровне доверительной вероятности 0,95.
Результаты и их обсуждение
Первым этапом нашей работы явилось обнаружение активности лигнин-пероксидазы в культуральной жидкости исследуемых штаммов после 24 часов выращивания. Для детекции
ферментативной активности нами был выбран метод, основанный на образовании вератрового альдегида из вератрилового спирта. По данным литературы, главным специфическим субстратом лигнин-пероксидазы является именно вератри-ловый спирт [11].
Как видно из данных, представленных на рис. 1, продукция внеклеточной лигнин-перок-сидазы была установлена для всех исследуемых штаммов. При этом наибольшими показателями активности фермента обладал штамм А. brasilense Бр245. Минимальной лигнин-перок-сидазной активностью в 56 ед./мг белка обладал штамм А. brasilense Бр107.
250
150
Рис. 1. Обнаружение внеклеточной лигнин-пероксидазной активности азоспирилл: I - A. brasilense Sp7; II - A. brasilense SR80; III - A. brasilense Sp245; IV - A. brasilense Sp107; V - A. lipoferum Sp59b; VI - A. tiophilum Bv-S
Впервые вопрос наличия ферментов лиг-нин-деградирующего комплекса у бактерий рода Azospirillum рассматривался в статье 2010 г. Никитиной с соавторами [4]. В данной работе при исследовании штаммов А. brasilense Бр245, Бр7, Бр107 и А. lipoferum 59Ь на предмет наличия активности лигнин-пероксидазы внутри и на поверхности клетки удалось обнаружить присутствие фермента только у штамма А. brasilense Бр7. Стоит отметить, что значения лигнин-пероксидазной активности данного штамма были крайне малы, при этом в смывах с бактериальной поверхности активность и вовсе имела следовые значения. В ходе нашего исследования у штамма А. brasilense Бр7 внеклеточная активность лигнин-пероксидазы достигала значения 115 ед./мг белка. Таким образом, при использовании вератрилово-го спирта в качестве специфического субстрата лигнин-пероксидазы все взятые в эксперимент
штаммы бактерий рода Azospirillum демонстрируют высокую ферментативную активность.
Ранее нами было показано, что внесение в среду культивирования азоспирилл 2 мМ вератрилового спирта, представляющего собой вторичный метаболит растений, приводит к увеличению лигнин-пероксидазной активности [12]. Учитывая тот факт, что лигнин-пероксидаза является основным ферментом лигнин-деградирующего комплекса грибов белой гнили, а также факт индукции ферментативной активности азоспирилл вератриловым спиртом, образование которого связано с процессом разложения лигнина, нами был проведён скрининг с целью установления способности бактерии рода Azospirillum к разрушению лигниноподобных соединений.
Для выявления способности азоспирилл к деградации лигнина мы использовали метод Ahmad [8], в котором о процессе окисления препаратов
лигнина свидетельствует увеличение оптическои плотности раствора в течение 20 мин, что связано с выделением фенольных продуктов, образующихся при деградации нитрированного лигнина. С помощью данного метода нами установлено, что все исследуемые штаммы способны разрушать модельные соединения лигнина как полученные из метанолизных, так и из нативных опилок (рис. 2). Как известно, метанолиз древесных
опилок приводит к изменениям в молекуле лигнина, выражающимся в повышении содержания метоксильных групп, а также моно-, ди- и олиго-мерных фенольных производных, что в результате сказывается на степени её конденсированности. По данным литературы, модифицированные подобным образом субстраты разрушаются грибами в значительно большеи степени нежели лигнин, находящийся в нативной форме [13].
с Е
ф ц :1
Рис.2. Выявление способности азоспирилл к деградации модельных препаратов лигнина: I - А. ЬтзИете Бр7; II - А. ЬгазИете БЯ80; III - А. ЬгазИете Бр245; IV - А. ЬгазИете Бр107; V - А. Ыро/етт Бр59Ъ; VI - А. йорЫЫт Бу-Б; 1 - лигнин Классона, 2 - лигнин Классона с повышенным содержанием метоксильных групп
Интересно отметить тот факт, что все штаммы, кроме А. Ьrasilense Бр245, показали большой потенциал в деградации метанолиз-ного препарата. При этом деградирующий потенциал А. Иро/егыт Бр59Ъ к разложению модифицированного субстрата оказался почти в два раза выше по сравнению с нативным. А. Ьrasilense Бр245, обладающий максимальной активностью лигнин-пероксидазы среди исследуемых штаммов, единственный из взятых в эксперимент оказался способен к более эффективной деградации препарата лигнина, полученного из немодифицированных опилок. Вероятнее всего, это связано со способностью А. Ьrasilense Бр245 колонизировать корневые волоски и межклетники проводящей системы корня [14], образовывая эндофитный симбиоз с травянистыми растениями. Интересным представляется тот факт, что лигнин травянистых растений характеризуется низкой степенью метаксилированности [15].
Таким образом, в ходе исследования нами подтверждено предположение о том, что наличие
внеклеточной лигнин-пероксидазы опосредует способность бактерии рода Azospirillum к деградации модельных соединений лигнина.
Как отмечалось ранее, уникальные кинетические характеристики лигнин-пероксидазы позволяют участвовать данному ферменту в процессах деградации многих полициклических соединений, в том числе сложных ароматических красителей [5]. В связи с этим следующим этапом нашей работы явилось обнаружение способности азоспирилл к разрушению азокрасителей на примере метилового оранжевого. Был проведён ряд исследований, позволивших установить степень деградации красителя данными микроорганизмами в зависимости от концентрации вносимого вещества, времени и температуры культивирования.
Исходя из данных, представленных на рис. 3, все штаммы, взятые нами в эксперимент, оказались способны в той или иной степени деградировать краситель. Наименьшую способность к обесцвечиванию красителя показали штаммы А. ИорЪИит Бу-Б и А. Иро/етт Бр59Ъ, не су-
100,0
90,0
50,0
vp о4
ГС 70,0
ц
ф
1-S •60,0
О
то
^ 50,0
ГС
s
J го 40,0
:
го
30,0
Ф
п
20,0
10,0
0,0
1 2 3 4
1 2 3 4 II
1 2 3 4 III
1 2 3 4 IV
IN
1 2 3 4 V
1 2 3 4 VI
Рис. 3 I - A.
Деградация красителя при различных концентрациях, мМ: 1 - 1; 2 - 0,1; 3 - 0,05; 4 - 0,01; tiophilum Bv-S; II - A. brasilense Sp 107; III - A. brasilense Sp7; IV - A. brasilense Sp245; V - A. lipoferum Sp59b; VI - A. brasilense SR80
мев преодолеть порог деградации метилового оранжевого в 10,5 и 12,5% соответственно. Необходимо отметить, что активность лигнин-пероксидазы данных штаммов была выше, чем у A. brasilense Sp107, потенциал которого в обесцвечивании красителя превышал 55%. При внесении метилового оранжевого в среду культивирования в конечной концентрации 1 мМ было установлено угнетение роста микроорганизмов, что, вероятнее всего, обусловлено токсическим действием данного соединения, при этом нами отмечалось снижение степени деградации красителя. Присутствие азокраси-теля в среде выращивания в концентрации от 0,1 до 0,01 мМ не оказывало ингибирующего
действия на рост всех исследуемых штаммов. Максимальные показатели разрушения метилового оранжевого детектировалось при концентрации 0,1 Мм. Однако в то же время степень обесцвечивания красителя уменьшалась при использовании в эксперименте концентрации метилового оранжевого ниже 0,05 мМ. Возможно, этот факт можно объяснить тем, что данная концентрация является менее токсичной для бактерии и не вызывает активации механизмов резистентности.
Для всех взятых в эксперимент штаммов было характерно увеличение степени обесцвечивания внесенного красителя с течением времени (рис. 4). Однако штаммы А. ИорЫЫт Бу-Б и
70,0
га ч:
so,о
JÜ.0
.III
1 2 3 4 1
1 2 3 4 Л
1 2 3 4 VI
Рис. 4. Деградация красителя в зависимости от времени культивирования, сут.: 1 - 2-е; 2 - 4е; 3 - 6-е; 4 - 8-е; I - A. tiophilum Bv-S; II - A. brasilense Sp 107; III - A. brasilense Sp7; IV - A. brasilense Sp245; V - A. lipoferum Sp59b; VI - A. brasilense SR80
A. lipoferum Бр59Ь даже с увеличением времени культивирования до 8 дней не могли преодолеть порог деградации красителя в 22%, в то время как A. brasilense Бр107 и БЯ 80 обесцвечивали среду более чем на 45% уже на 2-е сутки выращивания, при этом процент разрушения метилового оранжевого данными штаммами с течением времени культивирования значительно не изменялся. Для штаммов A. brasilense Бр7 и Бр245 было характерно более выраженное увеличение степени обесцвечивания красителя с течением времени, что позволяло данным штаммам на 8-е сутки культивирования по своей эффективности в деко-лоризации достичь уровня штаммов A. brasilense Бр107 и БЯ80.
При изучении влияния температуры культивирования на процесс разрушения красителя нами обнаружено, что исследуемые штаммы наиболее эффективно деградировали метиловый оранжевый при температуре 35°С (рис. 5). Также необходимо отметить, что при температуре 45°С эффективность обесцвечивания красителя всех изученных штаммов значительно снижалась. Интересным представляется тот факт, что штаммы A. brasilense Бр7 и Бр245 продемонстрировали высокую стабильность в широком диапазоне температур, в то время как эффективность штаммов A. brasilense Бр107 и БЯ80 находилась в большей зависимости от выбранной температуры культивирования.
100,0 90,0
о; с
* |
тс з
га ч: га
&■ ::
111
1 2 3 4 5 I
1 2 3 4 5 11
1 2 3 4 5 III
1 2 3 4 5 IV
1 2 3 4 5 V
1 2 3 4 5 VI
Рис. 5. Деградация красителя в зависимости от температуры культивирования, °С: 1 - 25; 2 - 30; 3 - 35; 4 - 40; 5 - 45; I - Л. tiophilum Бу-Б; II - Л. brasilense Бр 107; III - Л. brasilense Бр7; IV - Л. brasilense Бр245; V - Л. Нро/егит Бр59Ь; VI - Л. brasilense БЯ80
Таким образом, в результате исследований нами обнаружена активность внеклеточной лигнин-пероксидазы у взятых в эксперимент штаммов бактерий рода Azospirittum, при этом все изученные штаммы оказались в той или иной степени способны к разрушению модельных соединений лигнина и азокрасителей. Анализ полученных данных показал, что штамм Л. brasilense Бр245, обладая наибольшей из всех исследуемых штаммов внеклеточной лигнин-пе-роксидазной активностью, оказался способен в большей степени разрушать препарат нативного лигнина по сравнению с метанолизным, а также продемонстрировал высокую стабильность и эффективность при разложении красителя, как и Л. brasilense Бр7. Штамм Л. brasilense 8Я80. напротив, демонстрируя средние показатели активности фермента, обладал высоким лигнин-деградирующим потенциалом в отношении метано-
лизного препарата лигнина и оказался способен достаточно эффективно разрушать метиловый оранжевый. Все взятые в эксперимент бактерии оказались способны к деградации азокрасителей, однако, необходимо отметить тот факт, что наименьшей способностью к обесцвечиванию метилового оранжевого обладали два штамма: Л. Нро/егит Бр59Ь и Л. ИорЪйит Бу-Б, у которых также был отмечен низкий лигнин-деградирую-щий потенциал. Таким образом, в большинстве случаев нами отмечена положительная корреляция между уровнем активности внеклеточной лигнин-пероксидазы и способностью к деградации лигниноподобных соединений, а также сложных ароматических красителей.
Вопрос о функциональной значимости фенолоксидаз в целом и лигнин-пероксидазы в частности у бактерий рода AzospirШum изучен в недостаточной степени. Однако уже сейчас
можно сделать предположение об участии данного фермента в механизмах приспособления и адаптации бактерий, колонизации ими как поверхностных, так и внутренних тканей растений. Изучение бактериальной лигнин-пероксидазы представляет большой теоретический и практический интерес.
В современном мире во всех сферах деятельности человека на первое место выходят так называемые «зелёные» технологии, подразумевающие значительное уменьшение загрязнения окружающей среды и в перспективе её активную очистку и восстановление. Учитывая сложившиеся тенденции, активное изучение и внедрение в биотехнологические циклы микроорганизмов, особенности жизнедеятельности которых позволяют применять их в биодеградации полициклических ароматических соединений, в том числе с повышенной токсичностью, полученные нами данные могут быть перспективными в дальнейших исследованиях в области биоремедиации.
Список литературы
1. Pasti-Grigsby M. B., Paszczynski A., Goszczynski S., Crawford D. L., Crawford R. L. Influence of aromatic substitution patterns on azo dye degradability by Streptomyces spp. and Phanerochaete chrysosporium // Appl. Environ. Microbiol. 1992. Vol. 38. P. 3605-3613
2. Ramachandra M., Crawford D. L., Hertel G. Characterization of an extracellular lignin peroxidase of the lignocellulolytic actinomycete Streptomyces viridosporus // Appl. Environ. Microbiol. 1988. Vol. 54, № 12. P. 3057-3063.
3. Kalyani D. C., Patil P. S., Jadhav J. P., Govindwar S. P. Biodegradation of reactive textile dye Red BLI by an isolated bacterium Pseudomonas sp. SUK1 // Bioresour Technol. 2008. Vol. 99. P. 4635-4641.
4. Никитина В. Е., Ветчинкина Е. П., Пономарева Е. Г., ГоголеваЮ. В. Фенолоксидазная активность бактерии рода Azospirillum // Микробиология. 2010. Т. 79, № 3. С. 344-351.
5. BholayA. D., BorkhatariaBhavna V., JadhavPriyanka U., Palekar Kaveri S., Dhalkari Mayuri V., Nalawade P. M.
Bacterial lignin peroxidase : A tool for biobleaching and biodegradation of industrial effluents // Univ. J. Environ. Res. Technol. 2012. Vol. 2, № 1. P. 58-64.
6. Orth A. B., Royse D. J., Tien M. Ubiquity of lignin-degrading peroxidases among various wood-degrading fungi // Appl. Envir. Microb. 1993. Vol. 59, № 12. P. 4017-4023.
7. Bradford M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microorganisms qualities of protein utilizing the principle of protein-dye binding // Anal. Biochem. 1976. Vol. 72. P. 248-254.
8. AhmadM., Taylor C. R., PinkD., Burton K., EastwoodD., Bending G. D., Bugg T. D. H. Development of novel assays for lignin degradation: comparative analysis of bacterial and fungal lignin degraders // Mol. Biosyst. 2010. № 6. P. 815-821.
9. Pourbabaee A. A., Malekzadeh F., Sarbolouki M. N., MohajeriA. Decolorization of methyl orange (As a model azo dye) by the newly discovered Bacillus sp. // Iranian J. Chem. Eng. 2005. Vol. 24. P. 41-45.
10. NidadavoluS. VS.S.S. L.H.B., GudikandulaK., PabbaS.K., Maringanti S. C. Decolorization of triphenyl methane dyes by Fomitopsis feei // Natural Science. 2013. Vol. 5, № 6. P. 30-35.
11. Ахмедова З. Р. Лигнинолитические ферменты базиди-альных грибов. Лигнин-пероксидазы гриба Pleurotus ostreatus УзБИ-ZAX 108. Выделение, очистка и характеристика изоферментов // Биохимия. 1996. Т. 61, № 8. С. 1385-1394.
12. Никитина В. Е., Купряшина М. А., Петров С. В., Глинская Е. В. Влияние условий культивирования на лигнин-пероксидазную активность эндофитного и эпи-фитного штаммов Azospirillum brasilense // Изв. Сарат. ун-та. Нов. сер. Сер. Химия. Биология. Экология. 2012. Т. 12, вып. 4. С. 52-56.
13. Ильина Г. В. Эколого-физиологический потенциал природных изолятов ксилотрофных базидиомицетов : дис. ... д-ра биол. наук. Саратов, 2011. 364 с.
14. Schloter M., Hartmann A. Endophytic and surface colonization of wheat roots (Triticum aestivum) by different Azospirillum brasilense strains studied with strain specific monoclonal antibodies // Symbiosis. 1998. Vol. 25. P. 159-179.
15. Далимова Г. Н., АбдуазимовХ. А. Лигнины травянистых растений // Химия природных соединений. 1994. № 2. С. 160-177.
Образец для цитирования:
Петров С. В., Купряшина М. А., Пономарёва Е. Г., Воробьёва С. А., Глинская Е. В., Никитина В. Е. Скрининг бактерий рода Аzospirillum по способности к продукции внеклеточной лигнин-пероксидазы и деградации модельных соединений лигнина и азокрасителей // Изв. Сарат. ун-та. Нов. сер. Сер. Химия. Биология. Экология. 2017. Т. 17, вып. 2. С. 170-176. DOI: 10.18500/1816-9775-2017-17-2-170-176.
Cite this article as:
Petrov S. V., Kupryashina M. A., Ponomareva E. G., Vorobeva S. A., Glinskaya E. V., Nikitina V. E. Screening of Genus Azospirillum for their Ability to Produce Extracellular Lignin-Peroxidase and the Degradation of Model Lignin Compounds and Azo Dyes. Izv. Saratov Univ. (N. S.), Ser. Chemistry. Biology. Ecology, 2017, vol. 17, iss. 2, pp. 170-176 (in Russian). DOI: 10.18500/1816-9775-2017-17-2-170-176.
