CC BY
9Системный оксидантно-антиоксидантный статус и его связь с клеточным метаболическим профилем венозной стенки у больных варикозной болезнью нижних конечностей классов С4-С6
© U
см со
Садовская Екатерина Андреевна,
студент Медицинской академии имени С.И. Георгиевского ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В.И. Вернадского» E-mail: irasad67@mail.ru
Черемисина Анна Алексеевна,
студент Медицинской академии имени С.И. Георгиевского ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В.И. Вернадского» E-mail: Cheremisina.anna98@mail.ru
Шакиров Олег Русланович,
студент Медицинской академии имени С.И. Георгиевского ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В.И. Вернадского, E-mail: olegchakirov@gmail.com
Клюкова Александра Сергеевна,
студент Медицинской академии имени С.И. Георгиевского ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В.И. Вернадского» E-mail: klukovaaleksandra1999@gmail.com
Сидаметова Медине Узретовна,
студент Медицинской академии имени С.И. Георгиевского ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В.И. Вернадского» E-mail: medinesidametova99@gmail.com
Цель исследования - изучение изменений системного оксидантно-антиоксидантного статуса и характера его взаимосвязи с клеточным метаболическим профилем венозной стенки у больных варикозной болезнью нижних конечностей с клиническими классами С4-С6. В исследование были включены 103 больных варикозной болезнью (ВБ) нижних конечностей (НК) классов С4-С6, перенесших флебэктомию. Материалом исследования были кровь пациентов из локтевой вены и биоптаты удаленных варикозно расширенных вен. Также в исследование были включены две контрольные группы (КГ). КГ 1 составил 101 пациент, перенесших аортокоронарное шунтирование, у которых были взяты биоптаты большой подкожной вены. В КГ 2 вошли 90 здоровых добровольцев, у которых была взята кровь из локтевой вены. Результаты. У больных ВБ НК классов С4-С6 обнаружены изменения системного оксидантно-антиоксидантного статуса: статистически значимое снижение в плазме крови общей антиоксидантной способности (p<0,001) и глутатионпероксидазы (p=0,003) и повышение тотального окислительного статуса p=0,046), индекса окислительного стресса (p=0,026) и пролидазы (p=<0,001). Установлены статистически значимые корреляции показателя общей антиоксидантной способности с уровнем глутамата (r=0,44; p=0,001) и таурина (r=0,42; p=0,002), показателя тотального окислительного статуса с уровнем таурина (r= -0,54; p=0,036) и показателя индекса окислительного стресса с уровнем глу-татиона (r= -0,57; p=0,005). Заключение. Показано, что пациенты, страдающие ВБ НК классов С4-С6 испытывают системный оксидантный стресс, обусловленный недостаточностью внутриклеточной антиоксидантной активности. Обнаруженные статистически значимые корреляции некоторых показателей системного оксидантно-антиоксидантного статуса и клеточных метаболитов венозной стенки свидетельствуют в пользу связи между изменениями системного оксидантно-антиоксидантного статуса и нарушением клеточного метаболического профиля венозной стенки у больных ВБ НК классов С4-С6.
Ключевые слова: варикозная болезнь нижних конечностей, оксидантно-антиоксидантный статус, метаболический профиль.
Введение
Варикозная болезнь (ВБ) нижних конечностей (НК) регистрируется у 80% общей популяции населения, является ведущей причиной хронической венозной недостаточности (ХВН) и резкого снижения качества жизни [1]. Патогенез заболевания сложный, недостаточно изучен. В последнее время считается, что свободные радикалы играют важную роль в патогенезе широкого спектра заболеваний, включая ВБ. Триггером, запускающим формирование ВБ, являются практически все типы активированных лейкоцитов (преимущественно нейтрофилы) на эн-дотелиальной стенке. Активированные нейтрофилы выделяют ряд медиаторов, включая активные формы кислорода (АФК) [2]. В физиологических условиях АФК участвуют в передаче внутриклеточных сигналов, регуляции экспрессии генов, клеточной пролиферации и апоптозе, обеспечивая нормальное функционирование клеток. Образование АФК происходит под строгим контролем ферментативной и неферментативной антиоксидантной системы [3]. Мембрана клеток венозной стенки содержит молекулы ненасыщенных жирных кислот, которые легко окисляются АФК. В результате этого компенсаторные процессы гипертрофии и пролиферации гладкомышечных клеток приводят к развитию эн-дотелиальной дисфункции и изменению периферической гемодинамики, тем самым способствуя развитию ВБ [4,5].
В некоторых исследованиях указывается на роль аномального клеточного метаболизма в патогенезе ВБ НК [6-8]. Метаболиты принято рассматривать как конечные продукты генома, представляющие собой молекулы с низкой молекулярной массой, которые участвуют в обменных реакциях внутри клеток, необходимых для их нормального функционирования [9]. К метаболитам относится широкий спектр соединений, включая низкомолекулярные полярные летучие соединения и классы высокомолекулярных полярных глюкозидов, неполярных липидов и неорганических соединений [10]. Различные факторы окружающей среды, диета, лекарственные препараты и болезнь влияют на клеточный метаболизм, и, следовательно, на пулы метаболитов во внеклеточных тканях и жидкостях [11]. Считается, что аномальный клеточный метаболизм также влияет на стенку вены [7], в данном аспекте особый интерес представляют работы Lim CS, et al. [6] и Anwar MA, et al. [8], в которых показано, что метаболические профили тканей варикозных вен отличаются от здоровых тканей вен. В исследованиях было обнаружено, что глутамат, мио-инозитол, таурин, сфингомиелин, фосфатдил-холин являются дифференциальными биомарке-
рам, которые различают ткань варикозных и здоровых вен. Кроме того, автором установлено, что изменение клеточного метаболического профиля влияет на сокращение стенки вены и приводит к ее расслаблению и слабости, что может быть причиной извилистого и рыхлого вида пораженной вены. Однако в ходе анализа литературных данных мы не встретили работ, посвященных изучению взаимосвязи оксидантно-антиоксидантного статуса и клеточного метаболического профиля у больных ВБ НК классов С4-С6.
Цель исследования
Изучение изменений системного оксидантно-антиоксидантного статуса и характера его взаимосвязи с клеточным метаболическим профилем венозной стенки у больных варикозной болезнью нижних конечностей с клиническими классами С4-С6.
Материалы и методы
В исследование были включены 103 пациента (мужчины - 37 (35,9%), женщины - 66 (64,1%), средний возраст - 46,9 [31,6;;51,8] лет, страдающих ВБ НК классов С4-С6 согласно классификации Clinical Etiological Anatomical Pathophysiological (CEAP), которым выполнена плановая флебэктомия на базе ООО Примус мед «Медицинский центр ФЛЕБО+» г. Казань. Материалом исследования были кровь пациентов, набранная из локтевой вены и биопта-ты удаленных варикозно расширенных вен, расположенных в средней трети бедра. Кроме того, в исследование были включены две контрольные группы, сопоставимые по полу и возрасту. Контрольную группу 1 составил 101 пациент (мужчины - 41 (40,6%), женщины - 60 (59,4%), средний возраст - 48,1 [36,9;54,1] лет, которым выполнено аортокоронарное шунтирование на базе ГАУ МЗ «Республиканская клиническая больница № 2» г. Казань. Материалом исследования были биопта-ты, полученные при иссечении большой подкожной вены. В контрольную группу 2 вошли 90 здоровых добровольцев (мужчины - 38 (42,2%), женщины -52 (57,8%), средний возраст - 45,9 [33,0;53,2] лет, проходивших ежегодный профилактический медицинский осмотр на базе медицинского центра «Ге-мокод» г. Симферополя. Материалом исследования были кровь, набранная из локтевой вены. Перед включением в исследование у всех участников было получено письменное информированное согласие.
Критерии включения пациентов в основную группу: возраст 18-80 лет; установленный диагноз ВБ НК классов С4-С6 продолжительностью не менее 12 месяцев; первичное варикозное расширение вен НК; письменное информированное согласие пациента на участие в исследовании. Критерии невключения пациентов в основную группу: возраст старше 80 лет; притоковый варикоз, не связанный с патологическим рефлюксом по стволам подкожных вен; ранее выполненные операции на венах
НК по поводу ВБ, острого варикотромбофлебита и другие; рецидив ВБ после оперативного лечения; вторичное варикозное расширение вен НК; острый восходящий варикотромбофлебит; тяжелые или де-компенсированные сопутствующие соматические заболевания, которые могут затруднять участие пациента в исследовании и влиять на его результаты; обострение хронических соматических заболеваний; аутоиммунные, гематологические и онкологические заболевания;курение,алкоголизм или наркомания в анамнезе; хирургические вмешательства в предшествующий месяц до начала исследования; беременность и лактация;; отказ пациента от участия в исследовании.
В работе использовались следующие методы исследования: клинический класс хронической венозной недостаточности определяли согласно классификации Clinical Etiological Anatomical Pathophysiological (CEAP) [12].Состояние оксидантно-антиоксидантного статуса оценивали на основании определения в плазме крови общей антиоксидант-ной способности (TAC), тотального окислительного статуса (TOS), индекса окислительного стресса (OSI) посредством колориметрического анализа при использовании наборов реагентов «ImAnJx Kit», «PerOx Kit» фирмы «Immundiagnostik», Германия. Активность пролидазы в сыворотке крови определяли по методу Myara et al. (1982), основанный на измерении пролина реактивом Чинар-да (Чинард,1952). Активность фермента глутати-онпероксидазы (GSHPx) измеряли с помощью коммерческих наборов на спектрофотометре DU-640 (Beckman Instruments, Калифорния, США). Активность GSHPx определяли спектрофотометрически в GSHPx эритроцитов (Paglia and Valentine, 1967). Забор крови из локтевой вены у пациентов основной группы выполнялся в предоперационном периоде, натощак, в утренние часы (7.00-9.00) в состоянии покоя.Для оценки содержания клеточных метаболитов фосфатидилхолина, сфингомиелина, инозина, глутамата и таурина в биоптатах ткани венозной стенки использовали метод спектроскопии ядерного протонного магнитного резонанса (ЯМР 1 Н) и высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС) в сочетании с методом жидкостной хроматографией гидрофильного взаимодействия (HILIC-профилирования.) Для этого во время операции у пациентов с ВБ НК и у пациентов контрольной группы 1 были взяты образцы ткани венозной стенки. Затем эти образцы замораживали в жидком азоте и хранили при температуре -80 °C. Для проведения исследования образцы тканей разрезали по окружности и использовали средний вес образца 140+/- 5 мг. Приготовление аликвот, содержащих водные и органические экстракты из образцов ткани венозной стенки для проведения ЯМР 1 Н и ВЭЖХ-МС осуществляли согласно методике, предложенной Anwar MA, et al. [13]. Водные экстракты из образцов ткани венозной стенки изучали с помощью ЯМР 1Н и ВЭЖХ-МС в комбинации с методом HILIC-профилирования, органические
сз о
о Л о
о сз о в
экстракты - с помощью ВЭЖХ-МС согласно ранее опубликованным протоколам [13,14].
Статистическая обработка полученных данных была выполнена с помощью пакета прикладных программ STATISTICA 8.0 (Stat Soft.Inc., США). При нормальном распределении показателей определяли среднее значение и стандартное отклонение, при распределении, отличном от нормального, -медиану, 25-й и 75-й процентили. Нормальность распределения проверялась при помощи распределения Гаусса. Для качественных признаков определяли долю и абсолютное количество значений. Сравнительный анализ для нормально распределенных количественных признаков проводили c
помощью параметрического Ькритерия Стьюден-та, при распределении, отличном от нормального, - с помощью и-критерия Манна-Уитни, для качественных признаков - с помощью критерия х2 (хи-квадрат). Для оценки взаимосвязи признаков рассчитывали коэффициент корреляции Спирме-на. Различия считали статистически значимыми при р <0,05.
Результаты
Характеристика пациентов с ВБ НК классов С4-С6 и пациентов контрольных групп представлена в табл.1.
Таблица 1. Характеристика пациентов с варикозной болезнью нижних конечностей классов С4-С6 и пациентов контрольных групп
Показатель Основная группа (n= 103) Контрольная группа 1 (n=101) Контрольная группа 2 (n=90) p
Мужчины/женщины, п (%) 37 (35,9)/66 (64,1) 41 (40,6)/60 (59,4) 38 (42,2)/52 (57,8) 0,891
Средний возраст, годы [25%; 75%] 46,9 [31,6;;51,8] 48,1 [36,9;54,1] 45,9 [33,0;53,2] 0,909
Индекс массы тела, кг/м2 25,2±4,4 25,6±3,9 25,6±3,9 0,945
Курение в настоящее время, да/нет, п (%) 31 (30,1)/72 (69,9) 37 (36,6)/64 (63,4) 31 (30,1)/72 (69,9) 0,802
Артериальная гипертония, п (%) 16(15,5) 17 (16,8) - 1,000
Ишемическая болезнь сердца, п (%) 14 (13,6) 12 (11,9) - 0,955
Сахарный диабет, п (%) 5 (4,9) 6 (5,9) - 1,000
ХОБЛ, астма, п (%) 5 (4,9) 4 (3,9) - 1,000
е
U
см со
Примечание: ХОБЛ - хроническая обструктивная болезнь легких
Клиническая характеристика пациентов с ВБ НК классов С4-С6 представлена в табл. 2. Среди пациентов преобладали женщины в возрасте от 40 до 59 лет, с длительностью заболевания более 10 лет, преимущественно класса С4 по классификации СЕАР.Большинство в качестве сопутствующей патологии имели сердечно-сосудистые заболевания.
Таблица 2. Клиническая характеристика пациентов с варикозной болезнью нижних конечностей классов С4-С6
Показатель Основная группа (n= 103)
Длительность заболевания, годы:
1-5 лет, n (%) 12 (11,6)
5-10 лет, n (%) 26 (25,2)
10-20 лет, n (%) 41 (39,8)
>20 лет, n (%) 24 (23,4)
Классы хронической венозной недостаточности по классификации CEAP:
Класс С4, n (%) 70 (67,9)
Класс С5, n (%) 21 (20,4)
Класс С6, n (%) 12 (11,7)
У пациентов с ВБ НК классов С4-С6 в плазме крови значения TAC были статистически значимо ниже - в 1,3 раза (p<0,001), а значения TOS и OSI
статистически значимо выше - в 1,5 раза (р=0,046) и в 2,3 раза (р=0,026) соответственно по сравнению с аналогичными показателями КГ. Кроме того, у пациентов с ВБ НК классов С4-С6 в плазме крови активность фермента глутатионпероксидазы была статистически значимо ниже - в 1,7 раза (р=0,003), а пролидазы статистически значимо выше - в 1,7 раза (р= <0,001) по сравнению с аналогичными показателями КГ (табл. 3).
Таблица 3. Сравнительный анализ показателей системного оксидантно-антиоксидантного статуса у пациентов с варикозной болезнью нижних конечностей классов С4-С6 и пациентов контрольной группы (mean±CD)
Показатель Основная группа (n= 103) Контрольная группа 2 (n= 101) р
ТАС, нмоль/мл 306,3±18,9 401,9±17,5 <0,001
TOS, нмоль/мл 222,1±34,0 144,6±18,4 0,046
OSI 0,9±0,2 0,4±0,1 0,026
GSHPx, ЕД/мл 30,0±3,8 51,2±5,9 0,003
Пролидаза, ЕД/л 67,9±2,3 38,9±4,2 <0,001
Примечание: ТАС - общая антиоксидантная способность, TOS - тотальный окислительный статуса, OSI - индекс окислительного стресса, GSHPx - глутатионпероксидаза
При сравнении клеточного метаболического профиля биоптатов интактной ткани венозной стенки в группах обследованных установлено, что в биоптатах варикозно изменной венозной стенки пациентов с ВБ НК классов С4-С6 по сравнению
с биоптатами здоровой венозной стенки пациентов КГ наблюдалось статистически значимое снижение содержания глутамата (р=0,048), мио-инози-тола (р=0,048), таурина (р=0,048), сфингомиелина (р=0,048) и фосфатдилхолина (р=0,048).
Таблица 4. Сравнительный анализ показателей клеточного метаболического профиля биоптатов ткани венозной стенки у пациентов с варикозной болезнью нижних конечностей классов С4-С6 и пациентов контрольной группы (mean±CD)
Метаболит Детектируемая молекулярная формула Врем удерживания (мин.) Детектируемое значение m/z Стандартное значение m/z Р Ошибка определения масс, Appm Выше в группе
Фосфатидил-холин С46Н87NO8P+[M+H] + 08,61 0813.6229 813.6203 0,006 3,0 ВБ
Сфингомиелин C47H94N2O6P+[M+H] + 12,77 0813.6874 813,6844 0,0007 1,3 ВБ
Инозин C10H11N4O5-[M-H]- 00.54 0267.0724 267.0735 0,001 1,3 ВБ
Глутамат C5H8NO4-[M-H]- 7.467 146.0455 146.0458 <0,0001 1,5 ВБ
Таурин C2H6NO3S-[M-H]- 5.808 124.0071 124.0073 0,006 1,2 ВБ
Примечание: ВБ - варикозная болезнь, m/z - отношение массы иона к его заряду в электрическом или магнитном поле.
4.
В ходе уточнения взаимосвязи изменений системного оксидантно-антиоксидантного статуса с показателями клеточного метаболического профиля венозной стенки у пациентов с ВБ НК С4-С6 получены статистически значимые корреляционные связи показателя TAC с уровнем глутамата (r=0,44; p=0,001) и таурина (r=0,42; p=0,002). Так же удалось установить связь между значением TOS и уровнем таурина (r= -0,54; p=0,036). Значение oSl имеет обратную корреляционную связь с уровнем глута-тиона (r= -0,57; p=0,005).
Заключение
Показано, что пациенты, страдающие ВБ НК классов С4-С6 испытывают системный оксидантный стресс, обусловленный недостаточностью внутриклеточной антиоксидантной активности. Обнаруженные статистически значимые корреляции некоторых показателей системного оксидантно-антиоксидантного статуса и клеточных метаболитов венозной стенки свидетельствуют в пользу связи между изменениями системного оксидантно-антиоксидантного статуса и нарушением клеточного метаболического профиля венозной стенки у больных ВБ НК классов С4-С6.
Литература
1. Колобова О.И., Симонова О.Г., Лещен-ко В.А. Роль эндотелиальной дисфункции в патогенезе варикозной болезни. Политравма. 2015; 1:36-41.
2. Krzysciak W, Kozka M. Generation of reactive oxygen species by a sufficient, insufficient and varicose vein wall. Acta Biochim Pol. 2011;58:89-94.
3. Trachootham D, Lu W, Ogasawara MA, et al. Redox regulation of cell survival. Antioxid Redox Signal. 2008; 10: 1343-1374. doi: 10.1089/ ars.2007.1957
Woodside KJ, Hu M, Burke A, et al. Morphologic characteristics of varicose veins: possible role of metalloproteinases. J Vasc Surg. 2003;38:162-169. doi:10.1016/S0741-5214(03)00134-4
5. Guzik B, Chwala M, Matusik P, et al. Mechanisms of increased vascular superoxide production in human varicose veins. Pol Arch Med Wewn. 2011;121:279-286.
6. Lim CS, Davies AH. Pathogenesis of primary varicose veins. Br J Surg. 2009;96(11):1231-1242. doi:10.1002/bjs. v96:11
7. Anwar MA, Shalhoub J, Vorkas PA, et al. In-vitro identification of distinctive metabolic signatures of intact varicose vein tissue via magic angle spinning nuclear magnetic resonance spectroscopy. Eur J Vasc Endovasc Surg. 2012;44(4):442-450. doi: 10.1016/j.ejvs.2012.05.020
8. Anwar MA, Adesina-Georgiadis KN, Spagou K, et al. A comprehensive characterisation of the metabolic profile of varicose veins; implications in elaborating plausible cellular pathways for disease pathogenesis. Sci Rep. 2017; 7:989. doi:10.1038/ s41598-017-02529-y
9. Whiley L, Godzien J, Ruperez FJ, et al. Invial dual extraction for direct LC-MS analysis of plasma for comprehensive and highly reproducible metabolic fingerprinting. Anal Chem. 2012;84(14):5992-9. doi:10.1021/ac300716u
10. Li JV, Holmes E, Saric J, et al. Metabolic profiling of a Schistosoma mansoni infection in mouse tissues using magic angle spinning-nuclear magnetic resonance spectroscopy. International journal for parasitology. 2009;39(5):547-58. doi: 10.1016/j. ijpara.2008.10.010
11. Nicholson JK, Connelly J, Lindon JC, Holmes E. Metabonomics: a platform for studying drug toxicity and gene function. Nat Rev Drug Discov. 2002;1(2):153-61. doi:10.1038/nrd728
12. Eklof B, Rutherford RB, Bergan JJ, et al. Revision of the CEAP classification for chronic venous disorders: consensus statement. J Vasc
C3
о
о Л о
о сз о в
Surg. 2004;40(6):1248-1252. doi: 10.1016/j. jvs.2004.09.027
13. Anwar MA, Vorkas PA, Li JV, et al. Optimization of metabolite extraction of human vein tissue for ultra-performance liquid chromatography-mass spectrometry and nuclear magnetic resonance-based untargeted metabolic profiling. Analyst. 2015;140(22):7586-7597. doi:10.1039/c5a-n01041a
14. Vorkas PA, Isaac G, Anwar MA, et al. Untarget-ed UPLC-MS profiling pipeline to expand tissue metabolome coverage: application to cardiovascular disease. Anal Chem. 2015;87(8):4184-4193. doi:10.1021/ac503775m
SYSTEMIC OXIDANT-ANTIOXIDANT STATUS AND ITS RELATION TO THE CELLULAR METABOLIC PROFILE OF THE VENOUS WALL IN PATIENTS WITH VARICOSE VEINS OF THE LOWER EXTREMITIES OF CLASSES C4 - C6
Sadovskaya E.A., Cheremisina A.A., Shakirov O.R., Klyukova A.S., Sidametova M.U.
Crimean Federal University named after V.I. Vernadsky
The aim of the study was to study changes in the systemic oxidant-antioxidant status and the nature of its relationship with the cellular metabolic profile of the venous wall in patients with varicose veins of the lower extremities with clinical classes C4-C6. The study included 103 patients with varicose veins of the lower extremities (NC) of classes C4-C6 who underwent phlebectomy. The study material was the blood of patients from the ulnar vein and biopsies of removed varicose veins. Two control groups (KG) were also included in the study. KG 1 consisted of 101 patients who underwent coronary artery bypass grafting, from whom biopsies of the large saphenous vein were taken. KG 2 included 90 healthy volunteers who had blood taken from the ulnar vein. Results. Changes in the systemic oxidant-antioxidant status were found in patients with C4-C6 HCV: statistically significant decrease in blood plasma total antioxidant capacity (p<0.001) and glutathione peroxidase (p=0.003) and increase in total oxidative status (p=0.046), oxidative stress index (p=0.026) and prolidase (p=<0.001). Statistically significant correlations of the indicator of total antioxidant capacity with the level of glutamate (r=0.44; p=0.001) and taurine (r=0.42; p=0.002), the indicator of total oxidative status with the level of taurine (r= -0.54; p=0.036) and the index of oxidative stress with the level of glutathione (r= -0.57; p=0.005). Conclusion. It has been shown that patients suffering from HCV of classes C4-C6 experience systemic oxidative stress due to insufficient intracellular antioxidant activity. The statistically significant correlations of some indicators of the systemic oxidant-antioxidant status and cellular metabolites of the venous wall are found in favor of the relationship between changes in the systemic oxidant-antioxidant status and a violation of the cellular metabolic profile of the venous wall in patients with HCV of classes C4-C6.
Keywords: varicose veins of the lower extremities, oxidant-
antioxidant status, metabolic profile.
References
1. Kolobova O.I., Simonova O.G., Leshchenko V.A. The role of endothelial dysfunction in the pathogenesis of varicose veins. Polytrauma. 2015; 1:36-41. (In Russian)] URL: https://www.eli-brary.ru/item.asp?id=23148079
2. Krzysciak W, Kozka M. Generation of reactive oxygen species by a sufficient, insufficient and varicose vein wall. Acta Biochim Pol. 2011;58:89-94.
3. Trachootham D, Lu W, Ogasawara MA, et al. Redox regulation of cell survival. Antioxid Redox Signal. 2008; 10: 1343-1374. doi: 10.1089/ars.2007.1957
4. Woodside KJ, Hu M, Burke A, et al. Morphologic characteristics of varicose veins: possible role of metalloproteinases. J Vasc Surg. 2003;38:162-169. doi:10.1016/S0741-5214(03)00134-4
5. Guzik B, Chwala M, Matusik P, et al. Mechanisms of increased vascular superoxide production in human varicose veins. Pol Arch Med Wewn. 2011;121:279-286.
6. Lim CS, Davies AH. Pathogenesis of primary varicose veins. Br J Surg. 2009;96(11):1231-1242. doi:10.1002/bjs. v96:11
7. Anwar MA, Shalhoub J, Vorkas PA, et al. In-vitro identification of distinctive metabolic signatures of intact varicose vein tissue via magic angle spinning nuclear magnetic resonance spec-troscopy. Eur J Vasc Endovasc Surg. 2012;44(4):442-450. doi: 10.1016/j.ejvs.2012.05.020
8. Anwar MA, Adesina-Georgiadis KN, Spagou K, et al. A comprehensive characterisation of the metabolic profile of varicose veins; implications in elaborating plausible cellular pathways for disease pathogenesis. Sci Rep. 2017; 7:989. doi:10.1038/ s41598-017-02529-y
9. Whiley L, Godzien J, Ruperez FJ, et al. Invial dual extraction for direct LC-MS analysis of plasma for comprehensive and highly reproducible metabolic fingerprinting. Anal Chem. 2012;84(14):5992-9. doi:10.1021/ac300716u
10. Li JV, Holmes E, Saric J, et al. Metabolic profiling of a Schistosoma mansoni infection in mouse tissues using magic angle spinning-nuclear magnetic resonance spectroscopy. International journal for parasitology. 2009;39(5):547-58. doi: 10.1016/j.ijpara.2008.10.010
11. Nicholson JK, Connelly J, Lindon JC, Holmes E. Metabonomics: a platform for studying drug toxicity and gene function. Nat Rev Drug Discov. 2002;1(2):153-61. doi:10.1038/nrd728
12. Eklof B, Rutherford RB, Bergan JJ, et al. Revision of the CEAP classification for chronic venous disorders: consensus statement. J Vasc Surg. 2004;40(6):1248-1252. doi: 10.1016/j. jvs.2004.09.027
13. Anwar MA, Vorkas PA, Li JV, et al. Optimization of metabolite extraction of human vein tissue for ultra-performance liquid chromatography-mass spectrometry and nuclear magnetic resonance-based untargeted metabolic profiling. Analyst. 2015;140(22):7586-7597. doi:10.1039/c5an01041a
14. Vorkas PA, Isaac G, Anwar MA, et al. Untargeted UPLC-MS profiling pipeline to expand tissue metabolome coverage: application to cardiovascular disease. Anal Chem. 2015;87(8):4184-4193. doi:10.1021/ac503775m
e
u
CM CO
