CC BY
185
УДК 619:616.995.132:1-07
СИСТЕМА ПРОБОПОДГОТОВКИ ДЛЯ ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕ ДОВАНИЙ «РАКА8ЕР» И ЕЕ АПРОБАЦИЯ ДЛЯ
ДИАГНОСТИКИ ГЕЛЬМИНТОЗОВ СВИНЕЙ
Р.Т. САФИУЛЛИН доктор ветеринарных наук С.К. ШИБИТОВ, А.В. КОТКОВ аспиранты
Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им.
К.И. Скрябина
Система пробоподготовки для паразитологических исследований «Рагаэер» с искусственной закладкой яиц аскарид и эзофагостом свиней показала 60 и 75%-ную диагностическую эффективность, а флотационный метод Фюллеборна 90 и 95%-ную соответственно. Апробацию системы проводили в условиях свиноводческого хозяйства Московской области и она подтвердила ранее полученные результаты.
Ключевые слова: свиньи, «Parasep», метод Фюллеборна.
Необходимость постоянного усовершенствования методов диагностики паразитарных болезней вызвана тем, что эти болезни имеют широкое распространение, наносят животноводству значительный экономический ущерб и для борьбы с ними проводят противопаразитарные мероприятия в хозяйствах разных форм собственности. Весьма важно то, что эти мероприятия проводятся в стране в большом объеме и на них затрачиваются значительные финансовые средства, поскольку основу противопаразитарных мероприятий составляют диагностические исследования и профилактические обработки животных [2, 5]. При этом как целесообразность, так и результативность многомиллионных обработок
животных определяют диагностическими паразитологическими исследованиями [5]. Кроме того, постоянно появляются новые методы или системы диагностики паразитарных болезней, которые должны быть оценены с точки зрения пригодности и эффективности для практического использования при диагностике гельминтозов животных.
Исходя из отмеченного, перед собой поставили задачу испытать в условиях лаборатории ВИГИС диагностическую эффективность системы пробоподготовки для паразитологических исследований «Parasep» для диагностики аскаридоза и эзофаго-стомоза свиней, предоставленную нам фирмой Dia Sys Corparation
(США) и апробировать ее в условиях производства в Московской области.
Материалы и методы
Сравнительное испытание эффективности концентраторов «Para-sep» для паразитологических исследований в сравнении с наиболее часто используемым на практике флотационным методом диагностики гель-минтозов свиней по Фюллеборну (базовый метод) проводили в январе-апреле 2007 г. в условиях лаборатории ВИГИС. Первоначально проводили обследование проб фекалий свиней разного возраста, полученные из неблагополучного хозяйства Московской области на зараженность нематодами по флотационному методу [1, 4]. Яйца аскарид и эзофаго-стом собирали путем снятия поверхностной пленки с помощью металлической петли и подсчитывали их количество в 1 капле, а затем в 1 мл собранного материала. Определенное количество собранных яиц закладывали в пробы фекалий, свободные от яиц нематод, которые использовали в опытах. Собранные яйца аскарид и эзофагостом при моноинвазии закладывали в количестве 20 экз. в стандартные пробы фекалий, равные 1 г и свободные от яиц нематод. Для оценки диагностической эффективности смешанной инвазии в стандартные пробы закладывали по 20 яиц аскарид и 10 яиц эзофагостом. Исходя из количества заложенных в пробы фекалий яиц нематод, оценку эффективности осуществляли количественным методом, а полученные данные подвергали статистическому анализу.
По первому методу подготовленные таким образом пробы фека-
лий (п=40) массой 1 г брали с помощью специального шпателя входящего в конструкцию пробирки помещали в камеру системы «Parasep» с буферной смесью и тщательно перемешивали, используя шпатель, присоединяли камеру с образцом к пробирке, закручивая до срабатывания замка, предупреждающего проливание содержимого. Тщательно встряхивали пробирку до получения равномерно окрашенной взвеси. Переворачивали пробирку и помещали в центрифугу, центрифугировали при скорости 2500 об/мин в течение 5 мин, после этого, держа пробирку строго вертикально, аккуратно отсоединяли камеру, удаляли пробку из этилацетата и жировых частиц, с помощью пипетки отбирали осадок и микроскопировали. Метод основан на концентрировании яиц кишечных паразитов методом центрифугирования и фильтрации через специальный фильтр. Концентраторы представляют собой пластиковые пробирки, состоящие из нескольких компонентов: пробирка для пробы, в которую заливают эфир - формалиновая смесь и тритон - Х, сюда же помещают образец пробы; фильтр; емкость для сбора отфильтрованного материала. После помещения материала для анализа в пробирку, последнюю герметично закрывают и помещают в центрифугу фильтром вверх. Затем проводят центрифугирование, в ходе которого имеющиеся в пробе яйца и цисты паразитов проходят через фильтр и скапливаются в нижнем отсеке пробирки. Благодаря тому, что сетка в пробирке расположена вертикально, фильтрация пробы происходит горизонтально (латерально), и за счет того, что размер ячейки сетки
фильтра специально подобран по размеру (425 мкм), грубые частицы непереваренной пищи и клетчатка оседают в смесительной камере, а жидкая часть с выделившимися в нее паразитами и их яйцами под давле-
нием фильтруется и центрифугируется в конической пробирке. В нижний отдел пробирки попадает минимум твердых компонентов пробы и максимум имеющихся паразитов и яиц (рис-)-
Рис. Система пробоподготовки для паразитологических исследований «РагаБер»
Результаты и обсуждение
Проведенные исследования показали, что при использовании системы пробоподготовки «РагаБер» с искусственной закладкой выявили 60 % яиц аскарид и 75 % эзофагостом, а по методу Фюллеборна было выяв-
лено 90 % яиц аскарид и 95 % эзофагостом. Плотность насыщенного раствора поваренной соли, использованного по флотационному методу, составила 1,18. Следует отметить, что при использовании системы «Рага-Бер» заложенные искусственно яйца
нематод свиней находились в осадке в смеси с непереваренными остатками корма, которые затрудняли просмотр материала и это отразилось на результатах.
На следующем этапе проводили апробацию системы пробоподготов-ки для паразитологических исследований «Parasep» по сравнению с флотационным методом Фюллеборна в условиях неблагополучного по гель-минтозам свиноводческого хозяйства Московской области с использованием стандартных проб фекалий (1 г) от спонтанно зараженных аскаридами и эзофагостомами свиноматок (n=50). Результаты исследований показали, что при использовании системы «Pa-rasep» количество выявленных в поле зрения яиц аскарид колебалось от з до 5, эзофагостом от 2 до 4, тогда как при исследовании по методу Фюлле-борна количество выявленных яиц составило 7-8,10 и более соответственно. Кроме того, при микроскопии осадка из пробирок «Parasep» были выявлены балантидии в 3-х пробах и другие недифференцируемые яйца (по нашему мнению, яйца эндопаразитов синантропных грызунов, попавшие в пробы при сборе фекалий свиней или с кормом) в 3-х пробирках.
При использовании системы «Parasep» затраты рабочего времени на подготовку и проведение одного копроскопического исследования составили 7 мин, а по базовому флотационному методу Фюллеборна 45 мин. Количество выявленных яиц нематод в поле зрения по системе «Parasep» колебалось от 2 до 4, иногда больше, а по методу Фюллеборна 15-20 экз. Небольшое количество выявленных яиц нематод при использовании первого метода обу-
словлено наличием осадка, который в определенной степени затрудняет быстроту нахождения яиц в анализируемой пробе. Благодаря отмеченному, затрачиваемое рабочее время ветврача на выявление яиц нематод по системе «Parasep» составляет 5 мин, а по методу Фюллеборна 1 мин. Следует отметить, что при использовании системы пробоподготовки «Parasep» в анализируемой пробе имеет место значительное количество примесей непереваренных частиц корма, тогда как по базовому методу их незначительно.
В числе положительных моментов следует подчеркнуть, что при использовании системы пробоподго-товки «Parasep» исключается контакт персонала с исследуемым материалом, а при постановке проб по Фюл-леборну контакт с материалом возможен. Немаловажно то, что при работе с системой «Parasep» подготовка и последующая обработка посуды не требуются, т. к. они одноразовые, тогда как по методу Фюллеборну это необходимо. Стоимость использованных материалов при работе с «Pa-rasep» в расчете на одну пробу составляет 50, а по методу Фюллеборна 7 руб. Стоимость затраченного времени с учетом отчислений в обязательные фонды по базовому методу Фюллеборна составила 8,6, а при работе с системой «Parasep» 1,3 руб., и всего прямых затрат по базовому методу на исследование одной пробы 15,9 и при работе с системой «Parasep» 51,3 руб. Если доля материалов в прямых затратах по базовому методу Фюллеборна равнялась 45,9 %, то по системе пробоподготовки «Para-sep» 97,5 %, что подчеркивает большую материалоемкость нового метода (табл.).
Таблица 1
Характеристика разных методов диагностики нематодозов свиней, их _____________________эффективность и затраты_________________________
№ п/п Показания Единица измерения Метод пробоподготовки по
Фюллеборну «РагаБер»
1. Масса обследованной пробы фекалий г 1 1
2. Время подготовки пробы мин 5 2
3. Затраченное время на проведение 1 копроско-пического исследования мин 45 7
4. Количество выявленных в поле зрения яиц нематод экз. 15-20 2-4
5. Время затраченное на выявление яиц нематод мин 1-2 5
6. Наличие примеси и частиц корма да/нет незначительное значительное
7. Контакт персонала с исследуемым материалом да/нет возможен исключен
8. Необходимость последующей обработки посуды да/нет требуется не требуется
9. Эффективность при: аскаридозе эзофагостомозе % 90 95 60 75
10. Стоимость использованных материалов руб. 7,3 50
11. Стоимость затрачиваемого времени с учетом отчислений в обязательные фонды руб. 8,6 (6,8+1,5) 1,3
12. Всего прямых затрат руб 15,9 51,3
13. Доля материалов в прямых затратах % 45,9 97,5
Литература
1. Котельников Г.А. Диагностика гельминтозов животных. - М.,1974. -
270 с.
2. Сафиуллин Р.Т. // Тр. Всерос. ин-та гельминтол. - М., 2001. - Т 37. -С.149-159.
3. Сафиуллин Р.Т. Тр. Всерос. ин-та гельминтол. - М., 2001. - Т 37. - С. 218-237.
4. Степанов А.В. Лабораторная диагностика гельминтозов сельскохозяйственных животных тропических стран. - М.,1983. - 78 с.
5. Хренов В.М. // Ветеринария. - 1996. - № 8. - С. 55.
System of sample preparation for parasitological researches «Parasep» and its approbation for diagnostics of pig’s helminthosis
R.T. Safiullin, S.K. Shibitov, A.V. Kotkov
The system of sample preparation for parasitological researches «Parasep» with artificial bookmark of Ascaris suum and Oesophagostomum radiatum eggs of pigs has shown 60 and 75 % diagnostic efficiency and flotational method of Fulle-born 90 and 95 % respectively. Approbation of system carried out in conditions of pig-breeding facilities of Moscow region and has confirmed earlier received results.
