CC BY
64
СИСТЕМА ИНТЕРФЕРОНА У БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ, ИНФИЦИРОВАННЫХ ВИРУСАМИ ГЕПАТИТА В и С
Р. М. БалабановаЕ. В. Братских1, Т. П. Оспельникова2, В. И. Киселева3. 'ГУ Институт ревматологии РАМН, Москва 2ГУН ИИ эпидемиологии и микробиологии РАМН им. Н. Ф. Гамалеи, Москва 3Медицинский радиологический научный Центр РАМН, г. Обнинск
Резюме
Цель. Уточнить состояние интерферонового статуса (ИНФ-статуса) у больных ревматоидным артритом (РА), ассоциированным с вирусами гепатита В, С и криоглобул и не мне и (КГМ). Материал и методы. Проведено определение показателей ИФН-статуса 74 больных с достоверным РА, распределенных на 4 группы: инфицированные вирусами гепатита С (НС\') и В (НВУ) (соответственно 1 и 2 группы), 3 - РА с криоглобулинемией (КГМ), 4 - РА без гепатита В, С, КГМ. Показатели ИФН-статуса определяли микрометодом в цельной гепаринизированной крови
Результаты. У носителей вирусов гепатита (1 и 2 группы) существенно повышен титр циркулирующего ИФН при глубоком подавлении ИФН-продуцирующей способности иммуноцитов. У больных РА с гепатитом В угнетение продукции а и у- ИФН было максимальным (111 степень), при РА с гепатитом С - несколько слабее (И степень).
Заключение. Изучение ИФН-статуса больных РА, ассоциированным с вирусами гепатита и КГМ, является важным не только в теоретическом, но и в практическом отношении. Актуальность дальнейшего исследования этой проблемы обусловлена необходимостью выбора для терапии препаратов с учетом патологии системы ИФН.
Кл ючевые слова: ревматоидный артрит, система интерферона, криоглобулинемия, вирусы гепатита В и С.
Система интерферона (ИФН) - неспецифическая система, направленная на защиту организма от чужеродной генетической информации и обеспечивающая тем самым нуклеиновый гомеостаз организма в целом [6, 7).
Система ИФН сформировалась у позвоночных в филогенезе одновременно с возникновением иммунной системы, отличаясь уже на ранних этапах формирования элиминацией чужеродных нуклеиновых кислот со специфическими механизмами их распознавания. В отличие от эволюции иммунной системы, которая шла по пути увеличения разнообразия антител и специализации клеток иммунной системы (В- и Т- лимфоциты, хелперы, супрессоры, эффекторы), система ИФН совершенствовалась по пути видовой специфичности распознавания "своего от чужого” |6], что сделало ее важнейшим фактором неспеиифической резистентности организма.
Среди многочисленных механизмов действия ИФН, таких как противовирусный, антимикробный, антипролифе-ративньгй, антитуморогенный и др., наиболее важным для ревматологии является иммуномодулирующнй (за счет стимуляции фагоцитоза, активности естественных киллеров, экспрессии главного комплекса гистосовместимости, угнетения выработки антител, пролиферации лимфоцитов, реакций гиперчувствительности замедленного типа) [6].
ИФН-а синтезируют практически все иммуноциты, но преимущественно макрофаги и В-лимфоциты. Основными продуцентами ИФН-р являются клетки фибробластного и эпителиоидного типа, ИФН-у - Т-лимфоциты с участием вспомогательных клеток, в основном моноцитов и макрофагов [7].
Ф. И. Ершовым в 1986 г для характеристики функциональной активности системы ИФН организма было предложено интегральное понятие - "интерфероновый ста-
Адрес: 115522, Каширское шоссе, 34а, ГУ ИР РАМН
Тел.: 114-44-80
тус"[6], включающее содержание различных типов ИФН в циркулирующей крови, способность клеток продуцировать ИФН. В норме физиологический ИФН-статус характеризуется низкими концентрациями ИФН в сыворотке крови вместе с выраженной способностью лейкоцитов и лимфоцитов продуцировать а и у-ИФН ¡6, 7, 14].
При обследовании здоровых лиц установлено, что в подавляющем большинстве случаев титры циркулирующего ИФН не превышают фоновых значений (< 2-S МЕ\мл), у 80% наблюдается высокий уровень ИФН-а (>640- 1280 МЕ\мл) и средний уровень ИФН-у (> 32- 64 МЕ\мл), ИФН спонтанный <2 ЕД\мл 16|.
Нарушения интерфероногенеза могут быть первичными или вторичными (приобретенными). Первичная недостаточность интерферонообразования может быть связана с дефектами генов, контролирующих продукцию ИФН. Примером могут служить цитогенетические аномалии 5-й хромосомы, где локализуются гены, контролирующие продукцию ИФН. К настоящему времени изучено состояние системы ИФН у больных, страдающих различными острыми и хроническими вирусными, онкологическими, аутоиммунными, аллергическими и другими заболеваниями. Однако нет единого мнения в отношении того, является ли дефицит системы ИФН первичной причиной возникновения различных заболеваний или же, напротив, эти заболевания приводят к развитию вторичного дефицита системы ИФН [5, 7-11]. Решение этого вопроса особенно значимо для хронических заболеваний, т. к. вирусы, являясь иммуносупрессорами и персистируя в организме хозяина, вызывают нарушения как в системе иммунитета, так и в системе ИФН. С другой стороны, возможно, именно дефект в системе ИФН способствует хронизации вирусной инфекции, в том числе при ревматических заболеваниях.
Ранее нами было показано, что у больных РА снижена способность лейкоцитов и лимфоцитов к продукции а -и у-ИФН 11-3, 12, 13, 15. 16, 17|.
Цель настоящего исследования: уточнить состояние ИФН статуса у больных РА, течение которого осложнено инфицированием вирусами гепатита В, С.
Материал и методы
Нами обследовано 74 пациентов (26 муж, 48 жен) с достоверным диагнозом РА по критериям Американской Коллегии Ревматологов, 1987. Клиническая характеристика больных приведена в таблице К Возраст больных варьировал от 17 до 70 лет и в среднем составил 48,93 ± 11,52 лет; средняя продолжительность заболевания - 63,7±69,7 мес (от 2 до 302 мес). Преимущественное большинство составили больные II (42 чел) и 111 степени активности РА (20 чел). Серопозитивными по ревматоидному фактору были 56 больных (75%).
Все пациенты были разделены на 4 группы:
1 группу составили 19 больных РА, инфицированных вирусом гепатита С, из них фаза репликации вируса - у 16 больных; во 2 группу включены 22 пациента с РА, инфицированных вирусом гепатита В, из та фаза репликации вируса - у 3 человек; 3 группу составили 14 больных РА с криоглобули-немией (КГМ); в 4 группу были включены 19 больных РА без сопутствующей вирусной инфекции и КГМ. Вирусологическая характеристика обследованных пациентов приведена в таблице 2. Определение маркеров вирусов гепатита В. С проводилось на базе отдела радиационной биохимии (рук. отдела - д.м.н., проф A.C.Саенко) Медицинского радиологического научного Центра РАМН, г. Обнинск.
ИФН статус оценивали путем определения сывороточного, спонтанного ИФН, способности продуцировать ИФН-а, ИФН-у лейкоцитами при его индукции in vitro вирусом Ньюкасла (ГУНИИ эпидемиологии и микробиологии РАМН им. Н.Ф. Гамалеи, лаборатория интерфероноге-неза, завлаб, д.м.н. акад. РАМН Ф.И. Ершов). Показатели ИФН статуса определяли микрометодом в цельной гепари-низированной крови [4].
Кровь забирали из вены в объеме 0,5-1,0 мл и переносили в стерильную центрифужную пробирку, содержащую 10- 20 Ед гепарина. Определение показателей ИФН статуса осуществляли в стерильных 96- луночных круглодонных планшетах в 3-х повторах (9 лунок на каждую пробу). В лунки, содержащие каждая по 160 мкл среды R.PM1 - 1640 (с глютамином и гентамицином), вносили в первые три -по 20 мкл ВБН (вирус болезни Ньюкасла, штамм Канзас), а во вторые - по 20 мкл ФГА, в третьи - по 20 мкл среды RPM1 - 1640, затем во все 9 лунок - по 20 мкл цельной крови. Содержимое каждой лунки перемешивали. Планшеты закрывали крышкой и инкубировали при 37°С 24 часа в атмосфере 5% С02. Оставшуюся кровь центрифугировали для получения сывороточного ИФН.
Определение активности ИФН: титрование ИФН проводили в 96- луночных плоскодонных планшетах с диплоидной культурой фибробластов человека М19 в среде Игла с 2% бычьей сывороткой (105 кл\мл). Предварительно куль-
Таблица /
Клиническая характеристика больных РА
Параметры Количество больных п=74 % от общего числа пациентов
Жен 48 64,9
Муж 26 35,1
Возраст, годы 48,93±11,52
До20 1 1.4
20-40 16 21.6
41-60 45 60,8
старше 60 12 16,2
Длительность РА, мес. 63,7±69,7
Менее 1 года 6 8,1
1-3 года 21 28,4
4-6 лет 6 8,1
7-10 лет 15 20,2
более 10 лет 26 35.2
Серопозитивные по РФ 56 75
Активность РА: I степень 12 16.2
11 степень 42 56,8
III степень 20 27
Рентгенологические стадии 1 18 24,3
2 33 44,5
3 11 14,9
4 12 16,3
туру клеток М-19 в объеме 200мкл на 1 лунку выращивали 24-48 часов (до образования сплошного монослоя) при 37°С 24часа в атмосфере 5% С02. В качестве тест-вируса использовали вирус везикулярного стоматита, штамм Индиана. За единицу активности ИФН принимали величину, обратную его разведению, задерживающую деструкцию монослоя на 50% (МЕ\мл). В каждое титрование брали рефе-ренс-ИФН с известной активностью, любезно предоставленный профессором В. П. Кузнецовым.
Результаты исследования
ИФН статус у обследованных больных отличался от показателей у здоровых лиц. Так, у носителей вирусов гепа-
Таблица 2
Вирусологическая характеристика больных РА
Маркеры 1 группа PA+HCV n=19 2 группа PA+HBV п=22 3 группа РА+ КГМ п=14 4 группа п=19
Абс. число % от группы Абс. число % от группы Абс. число % от группы Абс. число % от группы
HBsAg - - 12 54,5 - - - -
At HBsAg - 10,5 12 54,5 - - - -
AtHBcor суммар. 1 5,2 18 81,8 - - - -
At НВсог IgM 1 5,2 1 4,5 - - * -
HBeAg 1 5,2 1 4,5 1 7,1 - -
At HeeAg - - 19 86,3 - - - -
AtHCV суммар. 19 100 1 4,5% - - - -
AtHCV IgM 13 68.4 - - - - - -
DNA 11BV - - 3 19 - - » -
RNA HCV 16 3 - - - - - -
Поми&т«яи СКВоротомского И*Н
1 2 3
или
biuanni iuu їй
Z і"Ю
|||»Э □ ІііКЕ |||»S ■ litt
І?7Ш
I Mem—8D Mezn-SD ГуЗ Меш-8Е Меап-SE
■ Me tvi
Ilt >• Пшш Шт ■ la
ГРУППА
Псасаоатедж сподаамкого HtH
■ ••КЗ
шл
•urS
1ш
Таблица 3
Показатели ИФН статуса у больных РА с сопутствующим инфицированием ВГВ, ВГС и криоглобулинемией
Показатель, МЕ\мл 1 группа PA+HCV п=19 2 группа PA+HBV п=22 3 группа РА+КГМ п=14 4 группа РА п=19 Норма
а - ИФН Min Мах Медиана 126,31+11 5,3 8 320 80 79,61 ±94,78 8 320 32 196,6±20 ,83 40 640 80 150,55±129,8 8 20 480 100 640-1280 1280
у - ИФН Min Мах Медиана 24,63±31,2 2 128 16 51,71 ± 136,36 6 2 640 16 35,2±20,9 8 64 32 35,33±26,6 16 128 16 32-64
Сывороточный ИФН Min Мах Медиана 14,1± 19,4 2 8 11,8± 19,18 0 80 8±4,5 4 16 20±21,6 0 64 2-8 < 4
Спонтанный ИФН Min Мах Медиана 1,73±0,5 0 2 2 1,6±0,74 0 2 2 1,6±0,8 0 2 2 0,47±0,8 0 2 0 < 2
тита (1 и 2 группы) был существенно повышен титр циркулирующего ИФН при глубоком подавлении ИФН-проду-цирующей способности иммуноцитов. У больных РА с гепатитом В угнетение продукции а и у- ИФН было максимальным (III степень), при РА с гепатитом С - несколько слабее (И степень).
Полученные нами данные выявили некоторые статистически значимые различия в ИФН статусе у обследованных больных (таблица 3, рисунок)
При проведении множественного сравнения групп с использованием теста Ньюмена- Кейлса получено достоверное различие между показателями спонтанного ИФН у больных неосложненным РА и РА с сопутствующим инфицированием вирусом гепатита С (р=0,000004), вирусом гепатита В (р = 0,000014), КГМ (р = 000069).
Состояние системы ИФН у больных РА с КГМ можно расценить как промежуточное между показателями 1, 2 и 4
групп. Фоновые показатели циркулирующего ИФН у этой группы больных сочетались с умеренной недостаточностью а и у- ИФН (I и II степени). При проведении множественного сравнения групп с использованием теста Ныомена-Кейлса получено достоверное различие между показателями - ИФН во 2 и 3 группах (р = 0,01).
У больных РА без гепатита В и (или) С изменения ИФН статуса оказались не столь выраженными, как у пациентов 1 и 2 групп, хотя у них обнаруживался сывороточный ИФН, снижение продукции а - ИФН I и II степени.
Обсуждение
Определение ИФН-статуса при стрессах, острых вирусных и бактериальных инфекциях (грипп, ОРВИ, мико-плазменные пневмонии, гепатит) и аллергических заболеваниях показало различную степень его нарушениий, проявляющихся в основном глубоким подавлением ИФН-про-
дуцирующей способности иммуноцитов [21|. При хронических заболеваниях вирусной природы (герпес, гепатит) наблюдается особо глубокое подавление интерфероногенеза, причем степень подавления, как правило, коррелирует с тяжестью хронического процесса. Реже встречается выпадение одного из звеньев системы ИФН, что выражается в подавлении продукции ИФН-а и ИФН- у. Так, при аутоиммунных заболеваниях (системной красной волчанке, РА), на фоне умеренного уровня циркулирующего ИФН-у обнаружена ингибиция продукции лейкоцитами ИФН-а [19].
Наши ранние работы также свидетельствуют о нарушении ИФН-статуса при РА [1-3,12, 13, 15, 16, 171.Частота рецидивирующих вирусных инфекций свидетельствует о дефекте противовирусного барьера у этих больных.
Распространенность гепатита в России не может не настораживать, т.к. по мнению экспертов ВОЗ, свыше 90% первичного рака печени этиологически связано с вирусами гепатита В. С. Более того, вирусные гепатиты среди всех вирусных инфекций занимают первое место по летальности 118.20].
Эта проблема актуальна и для ревматологов как с точки зрения влияния хронической вирусной инфекции на клинические проявления РА, так и с позиции переносимости терапии нестероидными противовоспалительными и базисными препаратами, большинство из которых метабо-лизируется в печени и обладают гепатотоксическими свойствами.
Полученные нами данные свидетельствуют о глубокой депрессии ИФН-продуцирующей способности лейкоцитов у больных РА с сопутствующим инфицированием вирусами гепатита В, С, что может способствовать хронизацин гепатита и отягощению внесуставных проявлений РА, таких как васкулит, синдром Рейно, поражение периферической нервной системы, внутренних органов и т. д.
Изучение иммунологической реактивности организма и, в том числе, функциональной активности системы ИФН при РА с сопутствующим инфицированием вирусами вирусов гепатита В, С необходимо, в первую очередь, для выбора патогенетически обоснованного корригирующего лечения.
ЛИТЕРАТУРА
1. Балабанова Р. М. Иммуномодулирующая терапия ревматоидного артрита. Тер. архив,1991, 63,5,124 -129.
2. Балабанова Р. М., Дементьева С. П., Панасюк А. Ф., Миронова Л. Л. Система ИФН при ревматоидном артрите. Тер. архив, 1989, 61,5, 15-18.
3. Балабанова Р. М., Егорова О. Н. Новые подходы к терапии ревматоидного артрита. Тер. архив, 1996, 68,12,78-82.
4. Григорян С.С., Майоров М. А., Иванова А. М., Ершов Ф. И. Оценка интерферонового статуса по пробам цельной крови. Вопр. вирусол.,1988, 4, 433-436,
5. Ершов Ф. И. Противовирусные средства. Клинич.фар-макол. и терапия, 1995, 4,72-75.
6. Ершов Ф. И. Система интерферона в норме и при патологии. М., Медицина, 1996, 135-145.
7. Ершов Ф. И., Жданов В.М. Интерферон и гомеостаз. Вестник АМН СССР,1985, 7,35-40.
8. Ершов Ф.И., Чижов Н.П. Лечение вирусных инфекций. Клинич. фармакол. и терапия, 1995, 4, 75-7S.
9. Игнатова Т.М. Хронический гепатит С: клинико-морфологическая характеристика, течение, лечение. Дисс. д.м.н. М.,2000, 40.
10. Крель П. Е. а-интерферон в лечении хронических вирусных заболеваний печени. Medical market, 2000, 34, 1, 20-21.
11. Крель П. Е., Игнатова Т. М., Апросина 3. Г., Вязов С. О. Опыт лечения хронического вирусного гепатита С ИФН-а и комплексом цитокинов. Клинич.фармакол.и терапия, 1996, 5,1,24 -29.
12. Насонова В.А., Балабанова P.M., Плесковская Г.Н. и соавт. Эффективность индукторов эндогенного интерферона на течение аутоиммунного процесса у F1 ин
бредных NZB\NZW мышей. Вопр.вирусол., 1990,35,5,40S-411.
13. Олюнин 10.А, Балабанова P.M. Комбинированная иммуномодулирующая терапия при ревматоидном артрите. Тер. архив, 1996, 68,5, 13-16.
14. Оспельиикова Т. П. Системы интерферона и иммунитета при воспалительных гинекологических заболеваниях. Коррекция нарушений индукторами интерферона. Диссер. к. м.н. М., 1998, 12.
15. Сейланов Л.С., Балабанова P.M. Система интерферона при ревматоидном артрите. Ревматол., 1990,2,54-60.
16. Шегловитова О. Н., Балабанова Р. М.. Кульева А. М. и соавт. Система интерферона у больных ревматоидным артритом и системной склеродермией. Вопр.внру-сол.,1993,37,154-60.
17. Яршшна А. А., Никонова М. Ф., Литвина М. М., Балабанова Р. М., Ярилин А. А. Эффект ?-2Ь-интерферо-на на функциональную активность Т- лимфоцитов у больных ревматоидным артритом in vitro и in vivo. Тер. архив, 2000, 72,5, 9-17.
18. Davis G.L., Hoofnagle J. Н. Interferon in viral hepatitis: role in pathogenesis and treatment. Hepatol., 1986, 6, 5, 1038-1041.
19. Kurichara Т., Abe K., lshiguro H. et al. Effect of interferon therapy in patient with chronic active hepatitis type С associated with interstinal pneumonia and rheumatoid arthritis: a case report. Clin. Ther., 1994,lb, 1028-1035.
20. Tolentino P., Dianzani F., Zucca М., Gianchino R. Decreased interferon response by lymphocytes from children with chronic hepatitis. J. Interf. Res.,1992, May,3-6.
21. Uze G., Lutella G. Mogensen К. E. Review: ? and ?- interferons and their receptors and their friends and relations. J. Interf. Res., 1995, 15,1, 3-26.
Absract
Interferon system in patients with rheumatoid arthritis infected with hepatitis В and С viruses.
R.M. Balabanova, E. V. Vratskih, T.P. Ospelnikova, V.l. Kiseleva
Objective. To assess interferon (IFN) status state in pts with rheumatoid arthritis (RA) associated with hepatitis В and С viruses and cryoglobulinemia (CGM).
Material and methods. IFN status was assessed in 74 pts with definite RA divided in 4 groups: infected with viruses of hepatitis С (HCV) and В (HBV) (respectively group 1 and 2), RA with CGM (group 3), RA without hepatitis В, С and CGM. IFN status indices were assessed with micromethod in hole heparinized blood.
Results. Hepatitis viruses carriers (groups 1 and 2) had significantly elevated circulating IFN level and deep immunocytes IFN producing ability down regulation. In HBV+ RA pts and IFN production decrease was maximal (degree III), in HCV+ RA pts - weaker (degree II).
Conclusion. IFN status examination in pts with RA associated with hepatitis viruses and CGM has not only theoretical but also practical importance. Actuality of further study of this problem is determined by necessity of appropriate treatment selection considering IFN system pathology.
Key words: rheumatoid arthritis, interferon system, cryoglobulinemia, hepatitis В and С viruses
Поступила 4.04.03
