CC BY
10Оригинальные исследования
УДК: 616.517
Синтез цитокинов TNF-a и IL-1P индуцированными мононуклеарными лейкоцитами у больных псориазом в зависимости от клинической эффективности использования пелоидов Сакского озера
Кауд Дия
TNF-a and IL-1 cytokine synthesis by induced mononuclear leucocytes in patients with psoriasis depending on clinical efficacy of application of Saki lake peloids
Diya Kaoud
ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В.И. Вернадского», Медицинская академия имени С.И. Георгиевского, г. Симферополь
Ключевые слова: цитокины, псориаз, пелоидотерапия
Медико-социальная значимость псориаза обусловлена, прежде всего, широкой распространенностью дерматоза, увеличением числа больных с тяжелыми формами заболевания, быстро приводящими к инвалидизации больного, а также недостаточной эффективностью проводимых терапевтических мероприятий [11].
В современном учении о псориатической болезни весомое место отводится иммунопатологической (аутоиммунной) патогенетической «составляющей» хронического дерматоза, характеризующейся гиперпролиферацией эпидермальных клеток, нарушением кератинизации, воспалением в дерме, патологическими изменениями опорно-двигательного аппарата, внутренних органов и нервной системы [12]. В этих процессах важную роль играют цитокины - низкомолекулярные регуляторные
белки, которые продуцируются почти всеми эука-риотическими клетками. Они осуществляют свои биологические эффекты через взаимодействие со специфическими клеточными поверхностными рецепторами, которые экспрессируются в небольшом количестве на соответствующих клетках. Цитоки-ны участвуют в опосредовании как воспалительных, так и иммунных реакций и являются критическими элементами в ответе кожи на повреждение или инфекционно-вирусное поражение. Среди ци-токинов имеются как иммуностимулирующие, так и иммуносупрессорные факторы, а также факторы, способствующие пролиферации и дифференциров-
1295006, Россия, Республика Крым, г. Симферополь, бульвар Ленина 5/7, e-mail office@csmu.strace.net
ке клеток. К цитокинам относятся такие медиаторы, как интерлейкины, хемокины, колониестимули-ирующие факторы, факторы роста, интерфероны, факторы некроза опухолей, супрессорные факторы и другие [5].
Именно расшифровка цитокин-ассоциированных механизмов патогенеза псориаза позволила включить в протоколы лечения заболевания биологические модификаторы иммунного ответа - антивоспалительные цитокины, моноклональные антитела, антагонисты рецепторов, растворимые рецепторы [6, 7]. Вместе с тем, недостаточная эффективность лечебных мероприятий при псориазе, особенно при таких торпидно протекающих формах, как псориа-тическая эритродермия и артропатический псориаз, обусловливает необходимость продолжения научного поиска [7, 11].
В комплексной терапии псориаза традиционно значимое место занимают курортные лечебные факторы, включающие использование пелоидов и рапы рассольных водоемов [1, 3, 4]. У многих больных псориазом эти факторы оказывают быстрый и выраженный лечебно-реабилитационный эффект, что способствует сокращению приема фармакологических препаратов и уменьшает вероятность развития побочных эффектов и осложнений [1, 4]. В Крыму для лечения дерматозов используются природные факторы озера Саки, находящегося вблизи Западного побережья Черного моря.
Проблема лечения лиц с дерматозами в условиях санатория осложняется отсутствием научно аргументированных критериев оценки эффективности санаторно-курортной реабилитации. Отсутствует также сравнительная характеристика групп больных с дерматозами с позитивным клиническим эффектом санаторно-курортной реабилитации и без клинического эффекта. Последнее, по нашему мнению, может явиться основой для дифференцированного выбора методов лечения в условиях санатория.
Таким образом, продолжение научного поиска возможностей повышения эффективности медицинской реабилитации лиц с псориазом с использованием природных факторов озера Саки представляется нам вполне обоснованным.
Основной целью исследования явилось изучение эффективности использования высокоминерализи-рованных иловых сульфидных пелоидов Сакского озера для коррекции дисбаланса цитокинового го-меостаза у больных бляшечным псориазом в стационарно активной стадии. В настоящей работе нами in vitro исследовалась динамика уровня цитокинов IL-10 и TNF-a в культуральной среде клеточной культуры мононуклеарных лейкоцитов больных псориазом в зависимости от клинической эффективности пелоидотерапии.
Материал и методы
Обследовано 24 больных (9 женщин и 15 мужчин) Крымского региона, страдающих бляшечным псориазом, стационарно активной стадией, в возрасте от 27 до 60 лет, с давностью заболевания от 6 до 19 лет, проходивших санаторно-курортное лечение на базе Сакского центрального военного клинического санатория имени Н.И. Пирогова.
На основании клинико-морфологической картины у обследованных больных оценивали дерматологический статус с последующим расчетом индекса PASI (Psoriases Area and Severity Index). У данных больных был выявлен распространенный кожный процесс, который характеризовался наличием папул и крупных инфильтрированных, сливных бляшек, с мелко и крупнопластинчатым шелушением, от яркого до сине-багрового цвета, диссеминирую-щих на кожу туловища и конечностей.
Все больные, поступившие на санаторно-курортное лечение, получали лечение иловыми средне-сульфидными грязями в виде аппликаций на туловище и конечности, исключая левую, переднюю половину грудной клетки, при температуре 38-40°С, с экспозицией 15-20 минут, через день, получая на курс 14 процедур с расходом грязи 70-80 кг. Лечение грязью сочетали с купанием в море и озере в весенне-летний период. Применение локальных и системных стероидов было исключено, некоторые больные продолжали использовать индифферентные и редуцирующие мази.
С учетом динамики клинико-морфологических показателей (по индексу PASI) по завершении лечения все больные были разделены на две группы: 1-ю группу составили 18 больных с позитивной клинической динамикой (достоверное снижение индекса PASI), 2-ю - 6 больных, у которых позитивная клиническая динамика отсутствовала (существенная динамика индекса PASI не выявлена).
Перед началом санаторно-курортного лечения и после его окончания у всех больных псориазом в супернатанте культуральной среды культуры мо-нонуклеарных лейкоцитов оценивали уровень IL-1Р с использованием тест-системы ТОО «Цитокин» (Россия), а также уровень TNF-a с использованием тест-системы ProCon ТОО «Протеиновый контур» (Россия). Оптическую плотность конечного продукта ферментативной реакции определяли фотометрически.
Для культивации мононуклеарных лейкоцитов использован метод краткосрочных органных культур по Лурия Е.А. [8], обеспечивающий культивирование клеток in vitro. Культивация проводилась в присутствии антибиотиков (бензилпенициллина натриевой соли 1000 ЕД и стрептомицина сульфата 0,01 г на 1 мл культуральной среды). Мононуклеар-ные лейкоциты выделяли из гепаринизированной крови центрифугированием на градиенте плотности фиколл-верографина.
Табл. 1
Динамика индекса PASI под влиянием пелоидотерапии у больных 1-й и 2-й групп
Группы Стат. Индекс PASI
показатель До лечения После лечения
1-я группа (клиническое улучшение) M ± m 15,5 ± 1,9 6,8±1,6
n 18 18
Р - < 0,001
2-я группа (отсутствие клинического улучшения) M ± m 15,8 ± 2,8 14,6 ± 2,6
n 6 25
P - > 0,5
Примечание: р - достоверность различий, высчитанная в сравнении с первым этапом исследования (при поступлении).
Табл. 2
Влияние пелоидотерапии на уровень провоспалительных цитокинов TNF-a и IL-ip в супернатанте культу-ральной среды культуры мононуклеаров больных 1-й и 2-й групп, пг/мл
Группы Стат. показатель TNF-a IL-1P
До лечения После лечения До лечения После лечения
1-я группа (клиническое улучшение) M ± m n P 17,6 ± 0,7 18 14,5 ± 0,8 18 < 0,01 14,7 ± 0,6 18 11,2±0,5 18 < 0,001
2-я группа (отсутствие клинического улучшения) M ± m n Р P1 23,2 ± 2,2 6 < 0,02 21,6±2,4 6 > 0,5 < 0,01 19,0 ± 1,8 6 < 0,05 18,4 ± 1,6 6 > 0,5 < 0,001
Примечание: р - достоверность различий, высчитанная в сравнении с соответствующим показателем на первом этапе исследования (до лечения), р1 - достоверность различий, высчитанная в сравнении с соответствующим показателем у больных 1-й группы на том же этапе исследования.
Результаты и обсуждение
Результаты исследования динамики индекса PASI у больных 1-й и 2-й групп под влиянием пелоидотерапии представлены в табл. 1.
Результаты исследования влияния пелоидотерапии на индуцированный (LPS) синтез мононуклеар-ными лейкоцитами больных псориазом цитокинов TNF-a и IL-10 в культуральной экспериментальной модели представлены в табл. 2.
Как видно из табл. 2, уровень цитокина TNF-a в культуральной среде культуры стимулированных LPS мононуклеарных клеток у больных 2-й группы на 31,8% (рг < 0,02) выше в сравнении с 1-й группой больных. Под влиянием проведенного лечения у больных 1-й группы выявлено снижение исследованного показателя на 17,7% (р < 0,01); у больных 2-й группы существенного изменения уровня цито-кина TNF-a в культуральной среде не обнаружено.
Уровень еще одного провоспалительного цитокина IL-10 в культуральной среде культуры мононуклеарных клеток у больных 2-й группы на 29,3% (рг < 0,05) выше, в сравнении с 1-й группой больных. Под влиянием пелоидотерапии у больных 1-й группы выявлено снижение уровня IL-1P в культураль-ной среде на 23,8% (р < 0,001). У больных же 2-й группы статистически значимого изменения уровня цитокина IL-1P в культуральной среде также не обнаружено.
При осмыслении полученных фактов нужно
учитывать, что согласно современному учению о воспалении, важнейшее участие мононуклеарных лейкоцитов в инициации, течении и разрешении воспалительных процессов любого генеза, характера и локализации представляется бесспорным [2]. В рамках «цитокин-зависимой» патогенетической концепции псориаза мононуклеары относятся к основным «цитокинпродуцирующим» клеткам [15].
Известно также, что при псориазе Т-лимфоциты (прежде всего - CD4-позитивные T-клетки) - наиболее часто встречающиеся клетки in loko morbi [15]. Установлено также, что CD8+ T-клетки при обострении мигрируют в сторону поврежденного эпидермиса и клиническое улучшение коррелирует с уменьшением указанной субпопуляции клеток в эпидермисе [14]. В исследовании Litjens N. и соавт. (2004) установлено, что Т-лимфоциты периферической крови больных псориазом, стимулированные ЛПС, синтезируют повышенный уровень IL-12p70 [13]. В очаге воспаления при псориазе обнаружена фиксация Т-клеток к активированным эндотели-альным клеткам при участии молекул клеточной адгезии (CAM) и последующее трансэндотелиаль-ное перемещение лимфоцитов in loko morbi. Молекулы клеточной адгезии (ICAM-1, VCAM-1) выявлены также в дерме и синовиальной оболочке суставов [10]. Важное участие мононуклеарных лейкоцитов в патогенезе псориаза документировано и в других исследованиях [9].
Таким образом, нами установлено, что у больных псориазом, у которых существенного изменения индекса PASI под влиянием курса лечения иловыми грязями не отмечено, имеет место изначальный (до начала лечения) более выраженный (в сравнении с больными 1-й группы) дисбаланс местного (в очаге воспаления на уровне кожи, куда мигрируют моно-нуклеарные лейкоциты) провоспалительного цито-кинового потенциала (по уровню цитокинов Т^-а и ^-10, синтезируемых мононуклеарами) - важной составляющей субклинической системной воспалительной реакции, являющейся, в свою очередь, весомым патогенетическим фактором псориаза [11].
Установлено также, что достоверное снижение индекса PASI после 14-дневного курса лечение иловыми средне-сульфидными грязями в виде аппликаций на туловище и конечности (1-я группа больных) характеризуется статистически значимым снижением уровня цитокинов Т^-а и ^-10 в культуральной среде культуры стимулированных мононуклеарных клеток. У больных псориазом, у которых существенного изменения индекса PASI под влиянием курса лечения иловыми грязями не отмечено (2-я группа больных), динамики уровня цитокинов Т№-а и ^-10 в культуральной среде не выявлено.
Выводы
• У больных бляшечным псориазом, стационарно активной стадией, динамика клинико-морфо-логических показателей (по индексу PASI) под влиянием 14-дневного курса лечения иловыми средне-сульфидными грязями в виде аппликаций характеризуется статистически значимым снижением системного уровня цитокинов Т№-а и ^-10 в культуральной среде культуры стимулированных мононуклеарных клеток. У больных псориазом с отсутствием клинического улучшения (по индексу PASI) под влиянием курса лечения динамики уровня цитокинов Т^-а и ^-10 в культуральной среде не выявлено.
• Важным фактором формирования резистентности к пелоидотерапии у больных бляшечным псориазом стационарно активной стадией является более глубокий (в сравнении с больными 1-й группы) цитокиновый дисбаланс, характеризующийся более высоким синтезом провоспалительных цитоки-нов Т№-а и ^-10 мононуклеарными лейкоцитами.
• Оценка цитокинового потенциала у больных псориазом при отборе больных для санаторно-курортного лечения может быть полезна при прогнозировании эффективности пелоидотерапии.
иона через кожу в организм из сероводородных ванн / И.И. Гусаров // Вопросы курортологии, физиотерапии и ЛФК — 2000. — № 6. — С. 27-31.
4. ДацковскийЯ.С. Лечение псориаза концентрированным бром-йодным рассолом: автореф. дис... канд. мед. наук / Я.С. Дацковский. — К., 2005. — 37 с.
5. Кетлинский СА., Симбирцев А.С. Цитокины. — СПб: ООО «Издательство Фолиант», 2008. — 552 с.
6. Корсунская И.М. Стратегия терапии псориатической болезни / И.М. Корсунская. — К., 2008. — 234 с.
7. Кубанова АА. Иммунные механизмы псориаза. Новые стратегии биологической терапии / А.А. Кубанова, Дж. Ф. Николас // Вестник дерматологии и венерологии. — 2010. — № 1. — С.35-47.
8. Лурия ЕА. Органные культуры кроветворной и лимфоидной ткани: автореф. дис. на соиск. науч. степени канд. мед. наук: спец. 03.099 / ЕА. Лурия. — М, 1972. — 37 с.
9. Curran SA.,^ Fit^Gerald O.M., Costello P.J., et al. Nucleotide sequencing of psoriatic arthritis tissue before and during methotrexate administration reveals a complex inflammatory T cell infiltrate with very few clones exhibiting features that suggest they drive the inflammatory process by recognising autoantigens / Curran SA., FitzGerald O.M., Costello P.J., et al. // J.
2004. - Vol. 172. — Р. 1935—1944.
10. Early biomarkers of joint damage in rheumatoid and psoriatic arthritis / Mc Ardle A., Flatley B., Pennington S.R., et al. // Arthritis Res. Ther. -2015. - Vol. 17. - P.141-147.
11. Griffiths C.E. Pathogenesis and clinical features of psoriasis / Griffiths C.E., Barker J.N. // Lancet. - 2007. - Vol.. 370, N. 9583. - P. 263 -271.
12. Kreuger J.G. Psoriasis pathophysiology: current concepts of pathogenesis / Kreuger J.G., Bowcock A. // Ann. Rheum. Dis. - 2005. - Vol. 64, N. II. - P. 30 - 36.
13. Psoriasis is not associated with IL-12p70/IL-12p40production and IL12B promoter polymorphism / Litjens N.H., van der Plas M.J., Ravensbergen B., et al // J. Invest:. Dermatol. - 2004. - Vol. 122(4). - P. 923-926.
14. Psoriatic arthritis jointfluids are characterised by CD8 and CD4 T cell clonal expansions appear antigen driven / Costello P.J., Winchester R.J., Curran SA, et al. // J. Immunol - 2001. - Vol. 166. - P. 2878-2886.
15. Veale D.J. Immunopathology of psoriasis and psoriatic arthritis / Veale
15. Veale D.J. Immunopathology of psoriasis and psoriatic arthritis / Veale D.J., Ritchlin C, FitzGerald O. // Ann Rheum. Dis.- 2005. - Vol. 64. -P. 26-29.
Литература
1. Андрашко Ю.В. Терапевтическая и липидонормализующее действие курортных факторов Солотвино при псориазе: автреф. дис... д-ра мед. наук / Ю.В. Андрашко. — К., 2003. — 45 с.
2. Воспаление. Руководство для врачей / Под ред. В.В. Серова, В.С. Паукова. — М.:Медицина, 1995. — 640 с.
3. Гусаров И.И. Сравнение поступления сероводорода и гидросульфида
Синтез цитокинов TNF-A И IL-1B индуцированными монону-клеарными лейкоцитами у больных псориазом в зависимости от клинической эффективности использования пелоидов Сак-ского озера
Кауд Дия
У жителей Крымского региона, страдающих кожными формами псориаза, изучена динамика уровня провоспалительных цитокинов IL-1ß и TNF-a в культуральной среде клеточной культуры мононуклеарных лейкоцитов в зависимости от клинической эффективности использования пелоидов Сакского озера (по индексу PASI). Обследовано 24 больных (9 женщин и 15 мужчин) Крымского региона, страдающих бляшечным псориазом стационарно активной стадией, в возрасте от 27 до 60 лет, с давностью заболевания от 6 до 19 лет, проходивших санаторно-курортное лечение на базе Сакского центрального военного клинического санатория имени Н.И. Пирогова. Все больные, поступившие на санаторно-курортное лечение, получали лечение иловыми средне-сульфидными грязями в виде аппликаций на туловище и конечности, исключая левую, переднюю половину грудной клетки, при температуре 38-40 °С, с экспозицией 15-20 минут, через день, получая на курс 14 процедур с расходом грязи 70-80 кг. Лечение грязью сочетали с купанием в море и озере в весенне-летний период.
Установлено, что у больных псориазом, у которых существенного изменения индекса PASI под влиянием курса лечения иловыми грязями не отмечено (2-я группа), имеет место изначальный (до начала лечения) более выраженный (в сравнении с больными 1-й группы - клиническое улучшение) дисбаланс местного (в очаге воспаления на уровне кожи, куда мигрируют мононуклеарные лейкоциты) провоспалительного цитокинового потенциала (по уровню цитокинов TNF-a и IL-1ß, синтезируемых мононуклеарами).
Установлено также, что достоверное снижение индекса PASI после 14-дневного курса лечение иловыми средне-сульфидными грязями в виде аппликаций на туловище и конечности (1-я группа больных) характеризуется статистически значимым снижением уровня цитокинов TNF-a и IL-1ß в культуральной среде культуры стимулированных мононуклеарных клеток. У больных псориазом, у которых существенного изменения индекса PASI под влиянием курса лечения иловыми грязями не отмечено (2-я группа больных), динамики уровня цитокинов TNF-a и IL-1ß в культуральной среде не выявлено. Последнее расценивается как важный фактор формирования резистентности к пелоидотерапии у больных бляшечным псориазом, стационарно активной стадией.
Обсуждается целесообразность оценки цитокинового потенциала у больных псориазом при отборе больных для санаторно-курортного лечения. Ключевые слова: цитокины, псориаз, пелоидотерапия.
TNF-a and IL-1 cytokine synthesis by induced mononuclear leucocytes in patients with psoriasis depending on clinical efficacy of application of Saki lake peloids
Diya Kaoud
The dynamics of the level of pro-inflammatory cytokines IL-ip and TNF-a in culture medium of mononuclear leucocytes depending on clinical efficacy of application of Saki lake peloids has been studied in the Crimeans (using PASI index). 24 patients (9 females and 15 males) of the Crimean region aged 27 to 60 have been examined. All the patients had had plaque psoriasis (active stationary stage) for 6 to 19 years and were undergoing sanatorium treatment at Saki Central Clinical Sanatorium named after N.I. Pirogov. All the patients admitted to the sanatorium were treated with silt sulfide-containing muds applied to the trunk and limbs excluding the left anterior region of the chest. The temperature of mud was 38-40 °C, every session taking 15-20 minutes each other day. The course consisted of 14 sessions, mud consumption being 70-80 kg. Mud therapy was accompanied by sea-bathing in spring and summer.
It has been established that those patients with psoriasis who showed no considerable changes in PASI score after treatment with silt sulfide-containing muds (the 2nd group) had had more severe (in comparison with the patients of the 1st group who showed clinical improvement) initial (before the treatment) imbalance of local (in the focus of inflammation of the skin where mononuclear leucocytes migrate to) pro-inflammatory cytokine potential (according to the level of cytokines IL-1p and TNF-a synthesized by mononuclear cells).
It has also been determined that PASI score reduced reliably after 14-day course of treatment with silt sulfide-containing muds applied to the trunk and limbs (the 1st group of patients). The process was characterized by statistically significant reduction in the level of cytokines IL-1P and TNF-a in culture medium of stimulated mononuclear cells. In patients with psoriasis of the 2nd group who did not show considerable changes in PASI score after the course of treatment with silt muds, no dynamics in the level of cytokines TNF-a and IL-1P in culture medium was revealed. The latter fact is considered to be an important factor for development of resistance to peloid therapy in patients with plaque psoriasis at the active stationary stage.
Advisability of estimation of cytokine potential in patients with psoriasis when selecting patients for sanatorium treatment is being discussed. Key words: cytokines, psoriasis, peloid therapy.
