CC BY
11лимфоцитов первого типа [8]
Выводы. 1. Хроническое действие ФОВ (российского УХ и зарина) в течение 60 сут в суммарной в дозе, составляющей 0,6 БЬ50 (по 0,01 БЬ50 ежесуточно), в равной степени снижает иммунные реакции, связанные с функцией 1Ь1- и 1Ъ2-лимфоцитов.
список литературы
1. Забродский П.Ф., Мандыч В.Г Иммунотоксикология ксенобиотиков.- Саратов, 2007. - 420 с.
2. Общая токсикология / Под ред. Б.А. Курляндского, В.А. Филова. - М.: Медицина, 2002. - 608 с.
3. Петров А.Н., Софронов ГА., Нечипоренко С.П., Сомин И.Н. // Рос. хим. ж. (Ж. Рос. Хим. об-ва им Д.И. Менделева).- 2004. - Т XLVIII. - № 2. -С.110-116.
4. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. Пер. с англ. - М.: Мир, 2000. - 582 с.
5. Сухих ГТ, Касабулатов Н.М., Ванько Л.В. и др. // Бюл. эксперим. биол. и мед.- 2005. -Т 140. - № 12.-С. 622-624.
6. 6. Amitai G., Adani R., Fishbein E. et al. // J.Appl.Toxicol.-2006 - V 26. - № 1. -P.81-87.
7. Asquith B., Zhang Y., Mosley A.J., de Lara C.M. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 2007. - V 104. - № 19. - P. 8035-8040.
8. Georgiev VSt., Albright J.E. // Immunomodulation drugs. Ann. of the N.-Y. Acad. Sci. - 1993. - V 685. - P.284-602.
9. Kim H.S., Eom J.H., Cho H.Y. // J. Toxicol. Environ. Health.- 2007.- V 70. № 15-16.- P. 1278-1287.
10. Lenz D.E., Maxwell D.M., Korlovich I. et al. // Chem. Biol. Interact.- 2005.- V 157-158. - P.205-210.
2. Хроническая интоксикация ФОВ снижает концентрацию в крови ИФН-у, ИЛ-4, ИЛ-2, ИЛ-6 и не влияет на содержание в крови концентрации ИЛ-10.
3. При воздействии ФОВ доз 30 сут концентрация в крови кортикостерона увеличивается, а через 60 сут существенно уменьшается.
11. Sharp D. Long-term effects of sarin // Lancet. - 2006. - V 14. - № 367 (9505). P.-95-97.
12. Shin T.M., Kan R.K., McDonough J.H. // Chem. Biol. Interact.- 2005. - V 157-158. - P.293-303.
13. Tremolada P., Finizio A., Villa S. et al. // Aqat. Toxicol.- 2004. - V 67. - № 1. - P. 87-103.
14. Zabrodskiy P.F., Streltsova Ye.V , Grishin VA.
Zabrodskiy P.F.2, Streltsova Ye.V. 2, Grishin V.A. 1
Changes in activity of Th1 and Th2 lymphocytes and maintenance of cytokines in blood at chronic
intoxication by organophosphorus compounds
VI. Razumovskiy Saratov Medical University Saratov Military Institute of Biological and Chemical Safety
It was established in experiments in noninbred white mice that the chronic intoxication by organophosphorus compounds and Russian VX and Sarin (total dose of 0.6 LD50, 60 days) equally reduces immune responses bound to Th1- and Th2 lymphocytes functions and concentration of cytokines IFNy, IL-2, IL-4, IL-6; it does not affect the maintenance of IL-10 concentration in blood. At an organophosphorus exposure over 30 days the concentration of corticosteronum in blood increases and after 60 days substantially decreases.
Материал поступил в редакцию 06.05. 2011 r.
УДК 576.08 : 615.9
Симметрия и размеры ядер двуядерных лимфоцитов как показатели генотоксической активности веществ: тестовое исследование N-метил-N-нитро-N-нитрозогуанидина
Мошков Н.Е.
ФГБУ «НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина» Минздравсоцразвития России, г. Москва
В статье описан авторский метод морфо-метрии ядер лимфоцитов крови человека, подготовленных для анализа в микроядерном тесте. Исследование включает оценку генотоксической активности 5.1 - 40.8 мкмоль/ мл стандартного мутагена К-метил-К-нитро-К-нитрозогуанидина в микроядерном тесте на культуре крови человека, и параллельное определение ряда морфометрических показателей ядер двуядерных лимфоцитов. Показано, что
цитогенетические показатели нестабильности генома коррелируют с изменением размеров и степени асимметрии ядер, продемонстрирована пригодность разработанного морфометриче-ского анализа для быстрого прогноза геноток-сических эффектов.
Ключевые слова: Морфометрический анализ, генотоксичность, микроядерный тест с цитохалазином B
Введение. Динамичность развития современных технологий производства веществ и материалов (в особенности - нанотехнологий) требует создания системы скрининга, позволяющей быстро и надежно выявлять вещества, обладающие потенциальной генотоксической активностью. Эта проблема встает весьма остро, т. к. у наночастиц различного происхождения всё чаще обнаруживается мутагенная и/или канцерогенная активность. [1, 2, 3] Поскольку одной из основных компонент системы оценки риска является анализ стабильности генома, скрининг должен быть направлен на выявление показателей её снижения. К ним относятся эффекты, которые обнаруживаются in vivo и in vitro при действии мутагенов и канцерогенов: собственно генетические повреждения, асимметрия деления ядер, анеуплоидия, изменение пролиферативной активности клеток и клеточная гибель. Для оценки таких эффектов в исследовательской практике обычно используются цитогенетические методы: микроядерный (МЯ) тест с цитокинетическим блоком [4, 5], тесты на индукцию хромосомных аберраций [6, 7], метод оценки частоты сестринских хроматид-ных обменов [8, 9] и метод ДНК-комет [10, 11]. Каждый из этих методов требует высокой квалификации исследователя, значительной продолжительности самих исследований, сложной техники и дорогостоящих реактивов, что не позволяет использовать их для скрининга и делает актуальной задачу разработки и апробации простого, надежного и быстрого цитогенетическо-го метода прогноза генетической безопасности. В качестве такого метода мы предлагаем использовать морфометрический анализ лимфоцитов крови человека, подготовленных для анализа в Мя тесте с цитохалазином B (ЦХВ), что позволяет оценивать симметрию деления материнского ядра на популяции двуядерных лимфоцитов. В данной публикации представлены результаты сравнительного анализа цитогене-тических и морфометрических эффектов действия стандартного мутагена и прямого канцерогена N-метил-К-нитро-К-нитрозогуанидина (МННГ), использованного в качестве обучающей выборки.
Материалы и методы исследований. Работу проводили на культуре лимфоцитов крови человека, подготовленных для анализа в микроядерном тесте [4, 5] в соответствии с «Правилами лабораторной практики» (Приказ Минздрав-соцразвития России от 23 августа 2010 г. № 708н).
Постановка культуры; 200 мкл гепаринизи-рованной цельной венозной крови молодого некурящего и практически здорового мужчины культивировали в 3.8 мл среды F-10, содержащей 15% сыворотки крупного рогатого скота и 7 мкг ФГА. Цитохалазин B добавляли на 44
часу [4], через 28 часов лимфоциты крови стандартно фиксировали в смеси метанол - уксусная кислота (3:1). Препараты готовили нанесением нескольких капель суспензии зафиксированных клеток на сухие охлажденные предметные стекла и окрашивали азур-эозином [12]. Перед началом исследований все препараты шифровали.
Исследованные вещества: N-метил-^-нитро-N-нитрозогуанидин (МННГ) (Sigma-Aldrich Co, LLC). Водный раствор МННГ в конечных концентрациях 0.75 - 6.00 мкг/мл вводили в культуры на 24 часу от начала культивирования.
Морфометрический анализ проводили следующим образом:
При помощи оптического светового микроскопа со встроенной цифровой камерой на увеличении 10х40 выполняли снимки (1024x768 pix, 96 dpi) 100 двуядерных лимфоцитов с отдельно лежащими ядрами без видимых повреждений. Затем по полученным изображениям в ADOBE Photoshop измеряли площади ядер, используя инструменты Quick selection и Lasso, и для каждой двуядерной клетки рассчитывали: сумму ([XS]i = S1i+S2i) и отношение площадей ядер (S1i/S2i) (рис.1). Таким образом, для каждой концентрации МННГ получали массивы S1/S2 и ES, по 100 значений в каждом. Для полученных массивов рассчитывали морфометрические индексы: арифметическое среднее (M), медиану (Med), 10%, 25%, 75%, 90%. С 68% доверительным интервалом относительная погрешность значений индексов составляла не более 1.4%.
Для цитогенетического анализа использовали стандартный международный протокол микроядерного теста [4, 5] и расширенный протокол [13]. Микроскопический анализ проводился при увеличении 10x100 (масляная иммерсия) и включал 2 этапа. Сначала [13] при подсчете 500 клеток, выбранных случайным образом, определяли: % клеток в стадии митоза и апоптоза; спектр клеточных популяций и делящихся клеток; % клеток (кроме 2-ядерных) с микроядрами (МЯ), нуклеоплазменными мостами (НПМ) и суммарным уровнем повреждений (МЯ+НПМ); асимметрию деления во 2-м митозе1; индекс репликации ядер (ИР)2 и индекс пролиферации (ИП)3. Затем количество проанализированных двуядерных клеток доводили до 1000 [5] и определяли % двуядерных клеток с МЯ, НПМ и суммарным уровнем повреждений (МЯ+НПМ). С 68% доверительным интервалом точность измерения цитогенетических показателей составляла не менее 15%.
'отношение числа 3-х ядерных клеток к числу 4-х ядерных
2 ИР= [(1 % одноядерных кл.) + (2 % дву-ядерных кл.) + (3 % 3-ядерных кл.) + (4 % 4-ядерных кл.)] / 100
3 ИП = (число 1-яд. кл. + 2 число 2-яд. кл. + 3 число полияд. кл.) / число проанализированных клеток
ных клеток и численности фракции делящихся клеток в целом (табл. 1). При этом доля ускоренно делящихся клеток (прошедших 2 и более ми-тотических цикла за время культивирования) в пролиферативном пуле, напротив, увеличивалась. В совокупности эти эффекты могут свидетельствовать об укорочении клеточного цикла у зна-
Таблица1
изменения структуры пролиферативного пула в культурах лимфоцитов крови человека, экспонированных ^метил^-нитро-^нитрозогуанидином
Спектр делящихся клеток
Доза, мкг/мл % 1-ядерных клеток в популяции % делящихся клеток в популяции % 2-ядерных клеток* % 3-ядерных клеток** % 4-ядерных клеток** % полиядер-ных клеток*** % ускоренно делящихся клеток
0,00 47,20 48,80 70,49 7,79 20,08 1,64 29,51
0,75 61,40 35,60 56,18 15,73 24,72 3,37 43,82
1,50 54,20 43,80 56,62 16,44 24,20 2,74 43,38
3,00 49,60 48,40 55,79 13,64 26,45 4,13 44,21
6,00 66,20 32,00 52,50 15,63 29,38 2,50 47,50
*прошли 1 митотический цикл; ** прошли 2 митотических цикла; *** прошли >2 митотических циклов
Таблица 2
Митотическая и пролиферативная активность, апоптоз, асимметрия деления в культурах лимфоцитов крови человека, экспонированных №метил-№нитро-№нитрозогуанидином
Доза, мкг/мл индекс репликации, ед. индекс пролиферации, ед. Митотическая активность, % Апоптоз, % Асимметрия деления во 2-м митозе, ед.
0,00 1,67 1,59 0,60 3,40 0,39
0,75 1,53 1,48 1,20 1,80 0,64
1,50 1,68 1,61 1,20 0,80 0,68
3,00 1,75 1,68 0,60 1,40 0,52
6,00 1,52 1,45 0,20 1,60 0,53
Таблица 3
Цитогенетические повреждения, индуцированные ^метил-^нитро-^нитрозогуанидином
в культурах лимфоцитов крови человека
Доза, мкг/мл % 2-ядерных клеток с МЯ % 2-ядерных клеток с НПМ % 3-ядерных клеток с МЯ % 3-ядерных клеток с НПМ % 4-ядерных клеток с МЯ % 4-ядерных клеток с НПМ % полиядерных клеток с МЯ % полиядерных клеток с НПМ
0,00 2,50 0,50 10,53 5,26 12,24 4,08 0,00 0,00
0,75 2,10 4,00 25,00 21,43 11,36 34,09 16,67 66,67
1,50 3,60 0,90 2,78 2,78 15,09 11,32 16,67 16,67
3,00 3,40 0,60 3,03 9,09 6,25 3,13 0,00 0,00
6,00 8,50 1,50 24,00 20,00 23,40 19,15 0,00 25,00
Корреляционный анализ проводили в программе 8;аЙ81;1са 8.0 с использованием непараметрического критерия Спирмена. Критериальный уровень значимости р=0,05 Результаты
Влияние МННГ на пролиферацию клеток проявилось в дозозависимом снижении доли двуядер-
чительного числа клеток, способных к делению. Указанные эффекты сопровождались снижением частоты апоптоза и увеличением асимметрии деления во 2-м митозе (табл. 2). Кроме того, с увеличением дозы МННГ в культурах наблюдали увеличение числа двуядерных и четырехядер-ных клеток с повреждениями (МЯ) (табл. 3) и интегральных показателей повреждений генома (табл. 4). В целом, по результатам цитогенети-ческого анализа МННГ, можно сделать вывод о дозозависимой индукции генетических повреждений и ускорении пролиферации, сопровождавшейся увеличением асимметрии деления клеток во втором митозе.
Морфометрический анализ показал, что как суммарные размеры, так и асимметрия ядер дву-ядерных клеток уменьшаются под действием МННГ (рис.2), что в целом говорит о снижении доли двуядерных клеток с большими асимметричными ядрами с ростом дозы мутагена. Эти эффекты были более ярко выражены для малых доз МННГ по сравнению с действием максимальной дозы.
Между цитогенети-ческими и морфоме-трическими индексами выявлен ряд сильных корреляционных взаимосвязей (табл. 5, рис. 3).
Обсуждение результатов. МННГ - сильный мутаген и прямой канцероген, поэтому основными ожидаемыми эффектами его действия были индукция генетических повреждений и цитотоксичность [10], что и продемонстрировали результаты нашего цитоге-нетического анализа. В то же время, морфоме-трический анализ показал, что МННГ вызывает выраженное дозозависимое снижение размеров и степени асимметрии ядер 2-ядерных лимфоцитов.
Рис. 1. - A) Оконтуривание ядра в ADOBE Photoshop с использованием инструмента Quick selection tool; Окраска препарата - азур-эозин по Романовскому, увеличение 10 х 40.
B) Большое и малое ядра i-й двуядерной клетки
Рис. 2 - Влияние К-метил-К-нитро-К-нитрозогуанидина на морфометрические индексы ядер двуядерных лимфоцитов крови человека По оси абсцисс - доза мутагена (мкг/мл)
По оси ординат - значение индекса в относительных единицах
Этот результат - на первый взгляд - парадоксален. Однако, известно, что при обработке мутагенами может возрастать частота гиподиплоидных клеток [14, 15], при этом ожидаемым является уменьшение размеров ядер. В работе [16], кроме того, показан эффект сближения центромерных локусов гомологичных хромосом и их перемещения от мембраны к центру ядра при действии малых доз радиации. В этом случае уменьшение раз-
Таблица4
интегральные показатели повреждений генома лимфоцитов человека в культуре, вызванных действием ^метил-^нитро-^нитрозогуанидина
Доза, мкг/мл % делящихся клеток с повреждениями % двуядерных клеток с повреждениями % ускоренно делящихся клеток с повреждениями
0,00 3,82 3,00 15,28
0,75 9,18 6,10 48,72
1,50 5,75 4,50 18,95
3,00 4,52 4,00 9,35
6,00 12,27 10,00 42,11
Рис. 3. - Взаимосвязь между морфометрическими индексами и индуцированными К-метил-К-нитро-К-нитрозогуанидином цитогенетическими эффектами нестабильности генома лимфоцитов крови человека.
По оси абсцисс - доза МННГ (мкг/мл).
По оси ординат - значение индекса в соответствующих единицах
Таблица 5
Значимые корреляции между морфометрическими индексами и индуцированными ^метил-^нитро-^нитрозогуанидином цитогенетическими эффектами нестабильности
генома лимфоцитов крови человека
Морфометрический индекс Коррелирующий цитогенетический индекс Коэффициент корреляции Уровень значимости p
Среднее, Медиана, 75%, 90% % 3-ядерных клеток в популяции % апоптоза -0,90000 1,00000 0,037386 0,014306
25% % 2-ядерных клеток с МЯ -0,90000 0,037386
Среднее, 25%, 90% % апоптоза 0,90000 0,037386
Медиана, 75% % 4-ядерных клеток в популяции -0,90000 0,037386
мера ядра также является ожидаемым.
Снижение числа двуядерных клеток с большими и/или асимметричными ядрами под действием малых доз МННГ указывает на их сильную восприимчивость к воздействию мутагена по сравнению с другими клетками. Наблюдаемый при этом рост доли 3-ядерных клеток (табл. 1) на фоне снижения доли 2-ядерных клеток и его сильная корреляция с индексами S1/S2 (табл. 5) может косвенно свидетельствовать о влиянии МННГ на сокраще-
ние клеточного цикла у 2-ядерных лимфоцитов, имеющих асимметричные ядра. Это также дает основание предположить, что такие клетки под влиянием МННГ склонны к аномалиям при втором митозе, и 3-ядерные клетки образуются в процессе второго митоза из двуядерных клеток с гипердиплоидными ядрами. О том же свидетельствует сильная обратная корреляция % 4-ядерных клеток с медианой и 75% [81+82] (табл. 5). Т.е. в результате второго митоза в присутствии МННГ
из клеток с большими асимметричными ядрами образуются 3-ядерные клетки, 4-ядерные клетки при этом образуются в меньшем количестве и асимметрия деления во втором митозе возрастает (табл. 2).
Заключение.
Наличие генотоксической активности (цито-токсичность и индукция генетических повреждений) у МННГ было ранее неоднократно показано многими исследователями, что позволило использовать это соединение в качестве тестового при разработке системы морфометрического анализа площадей ядер 2-ядерных клеток, который мы провели впервые. Его результаты подтвердили заключение о генотоксической активности МННГ. Более того, наши исследования показали, что морфометрические индексы, выбранные для описания размеров и симметрии ядер, информативны, поскольку объяснимо и статистически значимо связаны с результатами цитогенетического анализа. Предсказательная сила разработанного мор-фометрического подхода определяется не только высоким уровнем и значимостью корреляцион-
ных связей, но и тем, что одни и те же морфоме-трические индексы коррелируют сразу с несколькими показателями цитогенетического эффекта, увеличивая тем самым точность прогноза.
Полученные результаты подтвердили данные о связи размеров клеточных ядер с их функциональным состоянием [17, 18], а использование технологии культивирования, применяемой в методе микроядерного теста с цитохалазином B [4, 5], дало возможность исследовать симметрию деления материнского ядра, поскольку дочерние ядра оставались в единой цитоплазме. Полученные таким образом данные оказались особенно информативными, поскольку продемонстрировали возможность эффективной оценки и, следовательно, прогноза возникновения анеуплоидии методами морфометрии.
Приведенные данные позволяют рассматривать разработанный метод морфометрического анализа как биологически обоснованный, достоверный и информативный метод оценки и прогноза гено-токсической активности веществ, пригодный для генетико-токсикологического скрининга.
список литературы
1. 1. Gonzalez L., Sanderson B.J. S. and Kirsch-Volders M. Adaptations of the in vitro MN assay for the genotoxicity assessment of nanomaterials [Journal] / Mutagenesis. - 2011. - 1 : Vol. 26. - pp. 185-191.
2. 2. Weisheng Lina, Staytona Isaac, Huangb Yue-wern [et al.] Cytotoxicity and cell membrane depolarization induced by aluminum oxide nanoparticles in human lung epithelial cells A549 [Journal] / Toxicological & Environmental Chemistry, Vol. 90, Nos. 5-6, September-December. - 2008. - Р. 983-996.
3. 3. Rahman Qamar, Dopp Elke, Pemsel Heidemarie [et al.] Evidence That Ultrafine Titanium Dioxide Induces Micronuclei and Apoptosis in Syrian Hamster Embryo Fibroblasts [Journal] / Environmental Health Perspectives, volume 110, number 8, August. - 2002. - Р. 797-800.
4. 4. Fenech M. The in vitro micronuclei test technique [Journal] / Mut. Res., Vol. 455. - 2000. - P. 81-95.
5. 5. Fenech M., Chang W.P. and Kirsch-Volders M. HUMN project: detailed description of the scoring criteria for the cytokinesis-block micronucleus assay using isolated human lymphocyte cultures [Journal] / Mut. Res.,2003.-Vol. 534, №1. - P. 65-75.
6. 6. Agence Internationale de l'Energie Atomique Biological dosimetry: chromosome aberration analysis for dose assessment [Journal] / Technical report series. - 1984. - P. 260.
7. 7. Doloy M. T., Malarbet J. L., Guedeney G. [et al.] Use of unstable chromosome aberration for biological dosimetry after the first post irradiation mitosis [Journal] / Radiat. Res. 125. - 1991. - P. 141-151.
8. 8. Tucker J. D., Ashworth L. K., Johnston G. R. [et al.] Variation in the human lymphocyte sister chromatid exchange frequency: Results of a long term longitudinal study. [Journal] / Mutation Research. - 1988. - Vol. 204. -P. 435-444.
9. 9. S nmez S., Kaya M., Aktas A. [et al.] High frequency of sister chromatid exchanges in lymphocytes of the patients with Beh et's disease [Journal] / Mutation research, 397(2). - 1998. - P. 235-238.
10. 10. Slamenova D., Gabelova A. and Ruzekova L. Detection of MNNG-induced DNA lesions in mammalian cells; validation of comet assay against DNA unwinding technique, alkaline elution of DNA and chromosomal aberrations [Journal] / Mutation research. - May 1, 1997. - 3 : Vol. 383. - P. 243-252.
11. 11. Fairbairn D. W., Olive P. L. and O'Neill K. L. The comet assay: a comprehensive review [Journal] / Mutation Research. - February 1995. - 1 : Vol. 339. - P. 37-59.
12. 12. Роскин Г И. и Левинсон Л. Б. Микроскопическая техника [Книга] / ред. Роскин Г И. - Москва : Со-
ветская наука, 1957. - третье издание.
13. 13. Ингель Ф. И. Перспективы использования микроядрного теста на лимфоцитах крови человека, культивируемых в условиях цитокинетического блока [Журнал] / Экологическая генетика. - 2006 . - 3 : Т. IV. - C. 7-19.
14. 14. Манских В. Н. Морфологические методы верификации и количественной оценки апоптоза [Журнал] / Бюллетень сибирской медицины. - 2004 . - 1.
15. 15. Тронов В. А., Крамаренко И. И., Смирнова Т Д. [и др.] Сравнение гено- и цитотоксического эффектов метилнитрозомочевины на линиях клеток, профицитных и дефицитных по коррекционной репарации ДНК (MMR) [Журнал] / Цитология. - 2006 . - 1 : Т 48.
16. 16. Spitkovsky D. M., Veiko N. N., Ermakov A. V [et al.] Structural and functional change induced by exposure to X-ray adaptive doses in human lymphocytes both normal and defective by DNA double strand break reparation. [Book Section] / The effects of low dose radiation / book auth. Burlakova E. and Naidich V.. -Utrecht-Boston : 2004.
17. 17. Wolfe Pamela, Murphy James, McGinley John [et al.] Using Nuclear Morphometry to Discriminate the Tumorigenic Potential of Cells: A Comparison of Statistical Methods [Journal] / Cancer Epidemiology Biomarkers. - June 2004. - 13 : Vol. 6. - P. 976-988.
18. 18. Huber Michael D. and Gerace Larry The size-wise nucleus: nuclear volume control in eukaryotes [Journal] / Journal of Cell Biology. - November 19, 2007. - 179 : Vol. 4. - P. 583-584.
Moshkov N.Ye.
Nucleus symmetry and sizes in binuclear lymphocytes as indicators of genotoxic activity of substances: test investigation of N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine
A.N.Sysin Research Institute for Human Ecology and Environmental Health,
An author's morphometry method for human blood lymphocytes nuclei ready for micronucleated testing is described. The investigation includes the evaluation of genotoxic activity of a standard N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine mutagen at a concentration of 5.1-40.8 |iM/ml in micronucleated test in human blood culture .A number of morphometric indicators of binuclear lymphocytes nuclei were determined in parallel. It was shown that cytogenetic indicators of genome instability correlate with changes in nuclei asymmetry extent and size. The feasibility of the developed morphometric analysis for fast forecasting of genotoxic effects is demonstrated.
Материал поступил в редакцию 16.08.2011 г.
