CC BY
4
Влияние пестицидов на ЕЦТ (в отн. ед.) спленоцитов мышей (М±т)
Лоза в долях 1-DJO 1 -и группа 2-я группа
Вещество срок исследования, сутки
1-е 3-и 7-е 14-е 1-е 3-н 7-е 14-е
Вода (контроль)
1,9±0,4 1,5±0,2
7,7±0,9* 19,7±1,9* 14,8±0,7* 21,1+2,2* 2,5±0,7 2,7±0,6 1,6±0,2 1,8±0,2
6,1 ±0,4* 25,9±2,1* 10,2± 1,2* 20,2+2,0* 1,6±0,2 2,1 ±0,4 1,9±0,3 1.4±0,1
5,4±0,5* 19,0± 1,4* 9,3± 1,2* 12,3+1,2* 2,0±0,4 3,0±0,7 1,6±0,1 1,3±0,1
2,4±0,2 19,0±1,9* 11,4±2,0* 3,5±0,9 1,0±0,1 3,3±0,8 1,7 + 0,1 1,1 ±0,1
1.4±0,3 19,1 ±1,6* 6,3±0,2* 1,5±0,1 1,3±0,1 2,0+0,4 1,6+0,2 1,0±0,1
3,4±0,8 16,1±1,5* 6,0±0,6* 1,8±0,3 1,4±0,1 2,4 ±0,5 1,5+0,2 1,4±0,1
Карбофос '/юо
/50 ¡га
2,4-Д ¡/юо
До / 20
Примечан и е. Звездочка — достоверные различия с контролем (р<0,05).
эффект наблюдался во все сроки эксперимента. Цитотокси-ческая активность ЕК-клеток у подопытных 2-месячных мышей, затравленных тремя дозами гербицида, была достоверно выше, чем в контроле, лишь на 3-й и 7-е сутки. При этом влияние 2,4-Д на активность ЕК-клеток было менее выраженным, чем воздействие карбофоса.
Полученные данные позволяют предположить, что карбофос и 2,4-Д либо повышают функциональную активность ЕК-клеток селезенки, либо увеличивают долю активных форм в популяции ЕК у 2-месячных мышей и не оказывают влияния на цитотоксическне свойства этих клеток у более старших особей. Некоторое превышение значений результатов реакции ЕЦТ при действии карбофоса по сравнению с 2,4-Д, возможно, обусловлено особенностями клеточной токсикокинетнки и метаболизма каждого из них. Не исключено, что повышение ЕЦТ у животных 1-й группы при отравлении ядохимикатами может быть опосредовано активацией других иммунокомпе-тентных клеток из пула спленоцитов, обладающих свойствами ЕК- Известно, например, что определенную роль в регуляции активности ЕК играют и другие популяции лимфоцитов, а также моноциты, макрофаги, нейтрофилы и эозинофилы [14]. Одни из этих клеток принимают непосредственное участие в реализации ЕЦТ, а другие осуществляют регуляторное действие опосредованно, не проявляя при этом свойств ЕК [6]. Предполагается, что макрофаги способны воздействовать на ЕЦТ лимфоцитов путем супрессии ими цитотоксичности ЕК (12]. Последнее, возможно, имеет место у 4-месячных .мышей.
Таким образом, цитотокснчность ЕК у мышей половозрелого возраста оказалась более чувствительной к воздействию испытанных пестицидов, чем у животных, достигших репродуктивного периода.
Литература
1. Западнюк И. П., Западнюк В. И., Захария £ А , Западнюк Б. В. Лабораторные животные.— Киев, 1983.
2. Петров Р. В. Им.уунология.— М., 1982.
3. Саратиков А. С.. Новожеева Т. П., Потапова Г. В и др. // Фармакол. и токсикол,— 1987.— Т. 50, № 1,— С. 52—57.
4. Сидоренко Г. И., Федосеева В. Н., Шарецкий А. И., Арис-товская JJ. В. // Гиг. и сан.— 1989.— № 3.— С. 7—11.
5. Федорова J1. М., Белова Р. С. // Там же,— 1974.— № 2,— С. 105-107.
6. Bloom Е. Т., Babitt J. Т., Kawakarni К. // J. Immunol.— 1968,— Vol. 137,— P. 172-178.
7. Cudcowicz G., Hochman P. // Immunol. Rev.— 1979.— Vol. 44,- P. 13-36.
8. Dean J. H., Luster M. L., Boorman G. A., Lower L. // Pharmacol. Rev.— 1982,— Vol. 34,— P. 137—148.
9. Descotes G., Mazve G. 11 Immunotoxicology (Orlando).— 1987,— Vol. 31.- P. 95-119.
10. Herberman R. B. NK-Cells and Other Killer Cells.— New York, 1982.
11. Luster M. L., Ackerman M. F., Germolec D. R., Rosenthal G. J. // Environ. Hlth. Perspect.— 1989,— Vol. 81,— P. 157—162.
12. Minato N.. Amagai Т., Yodoi J. et al. // J. exp. Med.— 1985.— Vol. 162,— P. 1161—1181.
13. Morgade C., Burquet A. // J. Toxicol, environ. Hlth.— 1982,- Vol. 10,- P. 321-325.
14. Seaman W. £., Gindari T. D., Blackman M. A., Dalai B. // J. clin. Invest.— 1982,— Vol. 69,— P. 876—888.
Поступила 12.07.90
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 1991 УДК 613.633:676.0831-092.9:612.017.31-07
Л. М. Соседова, Н. К. Новохатский, В. В. Ильина СЕНСИБИЛИЗИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА ПЫЛИ КОРМОВЫХ ДРОЖЖЕЙ
Институт гигиены труда и профзаболеваний Восточно-Сибирского филиала Сибирского отделения АМН СССР, Ангарск
Опыт промышленного производства кормового белка свидетельствует о наличии выраженных сенсибилизирующих свойств у белковой пыли микробной массы и готового продукта [2, 6, 11]. Целью настоящей работы являлось изучение сенсибилизирующей активности кормовых дрожжей, полученных при переработке сульфатных отходов Братского биолесохимического завода, при различных путях поступления в организм морских свинок.
Для оценки возможности проявления сенсибилизирующего эффекта 1-й группе экспериментальных животных вводили однократно в кожу наружной поверхности уха 200 мкг исследуемого препарата. Данный метод позволяет определить ал-
лергенную активность независимо от пути поступления аллергена. 2-й группе наносили 50 % взвесь кормовых дрожжей в вазелиновом масле на депилированный участок боковой поверхности туловища ежедневно в течение 2 нед. При изучении опасности развития сенсибилизации при вдыхании изучаемого препарата был применен метод ингаляционной затравки с 4-часовой экспозицией на протяжении 1 мес в концентрациях 10,3±1,31, 4,1 ±0,49 и 0,8±0,12 мг/м3. Аллергенные свойства кормовых дрожжей оценивали с помощью комплекса методов: внутрикожных аллергических проб, показателя повреждения нейтрофилов — ПГ1Н [12], реакции специфической агломерации лейкоцитов — РСАЛ 110], базофилыюго
Результаты аллерготестирования морских свинок, подвергавшихся подострому ингаляционному воздействию пыли кормовых дрожжей (М±т)
Группа жипотных
БТ. %
ППН. усл. ел.
РСАЛ. усл. ед.
(10,3±1,31 мг/м3) 12± 1,43* 0,108±0,014* 1,74±0,14*
2-я
(4,1 ±0,49 мг/м3) 7,75± 1,37* 0,065±0,011 1,35±0,01
3-я
(0,8±0,12 мг/м3) 4,5± 1,04 0,042±0,006 1,24±0,06
4-я (контроль) 3,89 ± 1,03 0,045+0,005 1,25±0,05
Примечание. Звездочка—достоверные различия с контролем (р<0,05).
теста — БТ [7), внутрибрюшинной гистаминовой провокационной пробы со специфическим аллергеном [9].
Полученные результаты аллерготестирования позволили выявить, что изучаемые кормовые дрожжи при интер- и эпикутанном способах введения обладают способностью сенсибилизировать организм экспериментальных животных, однако аллергенная активность зависит от пути поступления препарата. Положительные снутрикожные аллергические пробы зарегистрированы у 6 из 12 морских свинок 1-й группы и у 9 из 10 — 2-й группы. При этом у последних интенсивность учитываемых кожных проб была выражена значительно сильнее: в половине случаев величина площади отека и эритемы достигала 1 —1,2 см2, тогда как в 1-й группе животных лишь в одном случае выявлена эритема площадью 0,9 см2. Анафилактическая реакция после провокации гистамином со специфическим аллергеном развилась у 9 из 10 животных, сенсибилизированных накожными аппликациями. У 2 морских свинок появились судороги мышц, непроизвольное мочеиспускание, нарушение координации движений и дыхания. У остальных наблюдались зуд кожи различной интенсивности, почесывание морды лапками, беспокойство, чихание, дрожь. Анафилактический индекс составлял 1,9. Положительная реакция по типу слабого анафилактического шока у животных, сенсибилизированных инъекцией в ухо, отмечена лишь у 3 из 12 морских свинок, при этом анафилактический индекс был равен 0,25.
С учетом перспективности использования биохимических критериев [1] в практике гигиенического регламентирования промышленных аллергенов биологической природы проведено исследование комплекса следующих показателей: активности в плазме крови глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ), пероксидазы (П) [8j и аспартатаминотрансферазы (ACT) [ 13), содержания малонового диальдегида (МД) [5J и гидроперекисей лнпидов (ГЛ) [4]. Показано, что у сенсибилизированных кормовыми дрожжами животных достоверно значимо по сравнению с контролем в крови увеличивалась активность Г-6-ФДГ и П, возрастало содержание МД, имели тенденцию к повышению уровня ACT и ГЛ. Можно предположить, что рассмотренные изменения сопровождались усилением перекисного окисления липидов и как следствие — напряжением антираднкальной и антиперекисной защиты. На это указывало повышение в крови экспериментальных животных активности Г-6-ФДГ и П.
Полученные нами результаты согласуются с данными литературы [1, 9], согласно которым для ранних стадий аллергических реакций характерно нарушение функции клеточных бномембран с развитием в них белково-липидной перестройки и изменением их проницаемости. Вследствие этого за пределы клетки выходят ферменты и медиаторы иммунных реакций, являющиеся активными стимуляторами аллергии. В совокупности эти данные свидетельствуют о том, что первичные биологические механизмы сенсибилизации, видимо, тесно связаны с истощением запасов антиоксидантов, избыточным образованием свободных радикалов, перекиси водорода и продуктов перекисного окисления липидов.
Таким образом, при интер- и эпикутанном способах вве-
дения пыль кормовых дрожжей обладает способностью сенсибилизировать организм морских свинок, которая более выражена при повторном нанесении изучаемого препарата на кожу.
При аллерготестировании животных, подвергавшихся ингаляционной затравке пылью кормовых дрожжей, выраженность групповых реакций зависела от интенсивности воздействия, что подтверждает концепцию пороговости действия вредных факторов, в том числе и аллергенных [2, 3, 6]. Результаты исследования кожной гиперчувствительности морских свинок показали, что наибольшее число положительных внутри-кожных проб со специфическим аллергеном (6 из 10) наблюдалось у животных, вдыхавших пыль в концентрации Ю,3±1,39 мг/м3 (отмечались резкая гиперемия и развитие отека). При воздействии концентрации 4,1 ±0,49 мг/м3 кожные реакции были положительными у незначительной части животных (3 из 10) и интенсивность их проявления была низкой (слабая гиперемия). У остальных животных результаты кожного аллерготестирования были отрицательными.
При проведении внутрибрюшинной гистаминовой провокации со специфическим аллергеном у всех животных, вдыхавших пыль в наибольшей концентрации, развились характерные признаки сенсибилизации: почесывание лапами морды, чихание, зуд кожи, кратковременные судороги, дрожь. Описанные явления постепенно ослабевали и через 1,5—2 ч исчезали совсем. Интенсивность и частота проявления реакции были несколько ниже (7 из 10) у морских свинок, ингали-ровавших белковую пыль в концентрации 4,1 ±0,49 мг/м3, а при вдыхании концентрации 0,8±0,12 мг/м3 положительный результат зафиксирован лишь в одном случае.
Результаты аллергологических реакций in vitro (БТ, ППН и РСАЛ) свидетельствуют о выраженной сенсибилизации к пыли кормовых дрожжей. Причем полученные данные коррелировали с результатами кожных и внутрибрюшннной провокационной проб (см. таблицу). У животных, подвергавшихся воздействию пыли изучаемого продукта в концентрации 10,3± ±1,31 мг/м3, отмечались статистически достоверные изменения по сравнению с контролем. Изменения изучаемых тестов наблюдались также и у животных, вдыхавших пыль в концентрации 4,1 ±0,49 мг/'м3, однако они встречались не у всех морских свинок и интенсивность их проявления была невысокой. При испытании концентрации 0,8±0,12 мг/м3 сенсибилизирующее действие не обнаружено, так как показатели всех аллерготестов in vitro достоверно значимо не отличались от контроля.
Как свидетельствуют результаты проведенных исследований, пыль кормовых дрожжей, полученных при утилизации сульфатных отходов целлюлозно-бумажного производства, оказывает выраженное сенсибилизирующее действие на организм экспериментальных животных. При этом степень сенсибилизации находится в зависимости от интенсивности воздействия. Так, при ингаляции белковой пыли в концентрации 10,3±1,31 мг/м отмечался статистически значимый аллергенный эффект по всем изучаемым показателям. Концентрация 4,1 ±0,49 мг/м3 вызывала менее интенсивные изменения показателей как по выраженности, так и по частоте выявления. Таким образом, четко прослеживается пороговость действия, а следовательно, и зависимость доза — аллергенный эффект.
На основании вышеизложенного концентрация кормовых дрожжей 4,1 ±0,49 мг/м3 при повторном ингаляционном воздействии оказалась близкой к пороговой, а концентрация 0,8±0,12 мг/м3 была расценена как недействующая по аллергенному эффекту.
Литература
1. Адо А. Д. Общая аллергология,— М., 1978.
2. Алексеева О. Г. // Гиг. труда,— 1989,— № 1.— С. 1—4.
3. Виноградов Г. И. // Гиг. и сан,— 1989,— № 3,— С. 63—67.
4. Гаврилов Б. Б., Мешкорудная М. И. // Лаб. дело,— 1983,— № 3,— С. 33-35.
5. Гончаренко М. С., Латинова А. М. // Там же.— 1985.— № 1,— С. 60—61.
6. Заремба О. В. // Сборник трудов НИИ санитарии и гигиены им. Г. М. Натадзе,— Тбилиси. 1980.— Т. 16,— С. 209—210.
7. Польнер А. А., Серова Т. И., Поспелова Р. А. и др. Лабораторные методы специфической аллергологической диагностики.— М., 1976.
8. Попов Т., Нейковска Л. // Гиг. и сан.— 1971.— № 10.— С. 89-91.
9. Постановка исследований для обоснования ПДК производственных штаммов микроорганизмов и на их основе готовых форм препаратов в воздухе рабочей зоны: Метод, указания,— М„ 1983.
10. СосонкинИ. £ //Лаб. дело.— 1968.—№ 12,—С. 707—709.
11. Стомахина Н. В., Якимова Е. Р., Немыря В. И., Барыше-ва А. А. // Структурно-функциональные и биохимические механизмы влияния факторов окружающей среды на организм человека и экспериментальных животных.— М.,
1986,— С. 74—77.
12. Фрадкин В. А. Аллергодиагностика in vitro.— М., 1975.
13. Reitman S., Trankef S. 11 Amer. J. clin. Path.— 1957.— Vol. 28,- P. 56.
Поступила 08.02.90
Summary. Sensibilization activity of the fodder yeasts grown on the sulphate wastes of pulp and paper mills in inhalation, into and onto skin injection experiments with guinea pigs was studied. This activity depended on the action intensivity. Application onto skin is more effective, than injection into skin. 10 mg/m3 caused statisticaly significant allergic effects in inhalation experiments, but 0,8 mg/m3 — had no significant effects.
© В. В. ВЛАСОВ. 1991 УДК 614.7:312.6|-07:519.22
В. В. Власов
ОЦЕНКА БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЗНАЧИМОСТИ ИЗМЕНЕНИЙ В ОРГАНИЗМЕ ПРИ ВНЕШНИХ ВОЗДЕЙСТВИЯХ
Военно-медицинский факультет при Саратовском медицинском институте
Специфика объекта исследований в биологии и медицине состоит прежде всего в вариабельности показателей жизнедеятельности организма, что определяет необходимость применения статистических методов обработки и анализа полученных данных. Вместе с тем эти методы являются лишь средствами анализа и не могут заменить правильного построения клинического, токсикологического и любого другого эксперимента [12]. По различным причинам ошибки в применении статистических методов встречаются в большей части медицинских публикаций [2). В одних случаях они оказываются относительно безобидными, в других — приводят авторов к неверным выводам. Применительно к оценке влияния на организм внешних факторов неверное понимание существа статистического оценивания приводит, в частности, к созданию специальных методов и рекомендаций, ложность которых в конечном виде оказывается далеко не очевидной.
Под статистической недостоверностью различий обычно понимают достаточно низкую вероятность ошибки вывода о том, что различие реально существует. Использование в качестве критической величины вероятности ошибки 5 % (р<0,05) означает, что допустимая ошибка вывода о реальности различий может наблюдаться не более чем в 1 случае из 20. Причем критические величины 5 и 1 % были предложены R. Fisher в свое время произвольно и не имеют строгого медико-биологического обоснования.
Важно подчеркнуть, что обычно проводимая оценка достоверности различий направлена на вычисление вероятности ошибок только 1-го типа (ошибочное отклонение нулевой гипотезы, т. е. гипотезы об отсутствии различий). Исследователь может допустить и другую ошибку (2-го типа), если сделает вывод об отсутствии различий, в то время как они реально имеют место (могут быть обнаружены при более широких испытаниях). Важно подчеркнуть, что отсутствие достоверного различия не означает достоверного отсутствия различий. Иными словами, для того, чтобы сделать вывод об отсутствии различий, следует оценивать не вероятность ошибок 1-го типа, а вероятность ошибок 2-го типа.
Проведение соответствующих вычислений детально описано в различных руководствах. В общем они сводятся к сопоставлению различия между наиболее типичными для сравниваемых групп величинами (например, между средними величинами при вычислении критерия Стьюдента t). Величина ошибки прямо зависит от вариабельности изучаемого параметра и обратно — от численности изучаемой группы. Чем выше численность исследуемой группы, тем выше точность определения средней величины. Значит, любое самое малое раз-личие между группами может быть выявлено с установленной вероятностью ошибок 1-го типа, если исследованные
группы будут иметь достаточную численность. Следовательно, выявление или невыявление достоверных различий зависит от численности исследованных групп.
Вполне очевидно, что биологическая значимость изучаемого явления (изменений величин параметров организма, заболеваемости, смертности) не может зависеть от того, сколько организмов исследовано.
Если изучаемый признак носит количественный характер (активность фермента, концентрация вещества, функциональные возможности), то значимость его изменений для организма определяется направлением и величиной изменений. Оценка достоверности различий или изменений служит только для того, чтобы показать, что изучаемые различия не носят случайного характера. Если изучаемый признак носит качественный (альтернативный) характер, то значимость различий определяется тем, насколько чаще указанные симптомы наблюдаются у лиц, подвергавшихся воздействию изучаемого фактора внешней среды, по сравнению с контрольной группой, Различие между 90 и 3 % будет всегда более значимым, чем различие между 15 и 12 %, даже если первое установлено при р=0,05, а второе — при рл0,0001 [12].
В результате неверного понимания статистической достоверности различия достижение ее рассматривается иногда как критерий вредности воздействия [10], как критерий значимости признаков в прогнозировании течения заболеваний. Зависимость достоверности различия от величины воздействия (при постоянном числе исследуемых животных) предлагалось рассматривать как основу поиска порога вредности [6]. Однако статистическая достоверность не является критерием значимости или вредности изменений [13]. В недавней дискуссии на страницах гигиенических журналов критическим уровнем статистической значимости предлагалось манипулировать в зависимости от вариабельности изучаемого параметра [7]. Между тем зависимость величины критерия достоверности различий от вариабельности изучаемого параметра лежит в основе расчетов статистических показателей, и дополнительный учет вариабельности является следствием непонимания существа статистического оценивания. Неверно и предложение снижать требования к достоверности выявления различий при испытании опасных веществ или в других ответственных ситуациях [7, 9]. Увеличение допустимой вероятности ошибки 1-го типа ведет к возрастанию числа не только истинно положительных, но и ложноположительных решений. Поскольку сценка достоверности включает учет численности исследуемых групп, возникает соблазн уменьшать или ограничивать объем экспериментов, и авторам таких предложений избежать этого соблазна, как правило, не. удается [6, 7, 10]. В эпидемиологическом исследовании манипули-
