CC BY
15МЕДИЦИНСКИЕ НАУКИ
РОЛЬ ПОЛИМОРФНОГО ЛОКУСА ГЕНА ЕNOS3 И ИХ ВЗАИМОСВЯЗИ ПРОТИВО- И ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ ПРИ СЕМЕЙНОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЕ Аралов Н.Р.1, Окбоев Т.А.2, Дусанов А.Д.3, Юлдашева Д.А.4, Носирова Д.Э.5, Рустамова Ш.Ш.6
1Аралов Нематилла Равшанович - заведующий кафедрой; 2Окбоев Тошпулат Алихужаевич - ассистент;
3Дусанов Абдугафур Дусанович - доцент; 4Юлдашева Дилфуза Ахматовна - ассистент;
5Носирова Дилдора Эркиновна - ассистент;
6Рустамова Шахризода Шухратовна - студент магистратуры, кафедра внутренних болезней № 4, Самаркандский государственный медицинский институт, г. Самарканд, Республика Узбекистан
Аннотация: обследовано 118 больных, страдающих бронхиальной астмой(БА), получавшие стационарное лечение в аллерго-пульмонологическом отделении СамГМО. В основную группу были отнесены 48 больных семейной БА из них 29 женщин (60,4%) и 19 мужчин (39,6%), а в дополнительную группу были отнесены их родственники в I-III поколениях - 70 больных из них 40 женщин (57,1%), 30 мужчин (42,9%). Верификация больных проводилась согласно международной классификации ВОЗ (Х-пересмотр, МКБ-10) и в соответствии с диагностическими критериями Глобальной стратегии лечения и профилактики БА (GINA, 2006) и критериями отечественных программных документов по диагностике, лечению и профилактике БА. Иммунологические анализы больных семейной БА определили в сыворотке крови ИЛ - 6 и у- интерферон методом ИФА. Анализ полиморфного варианта гена еNOS3 осуществляли методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР). При анализе частот аллелей гена еNOS3 отмечается повышение частоты аллели 27N у больных БА (222-94,06%) по сравнению с контрольной группой (99-90%). В семьях средние показатели IL-6 в сыворотке крови генотипа N/N у больных с БА аллергической формой составляет (15,6±3,2 пг/мл), что указывает на достоверное увеличение от показателей у больных генотипа N/del (8,6±2,4 пг/мл), а также при генотипа N/del у больных неконтролируемой семейной БА средние показатели у- IFN составляет (5,6±0,8 пг/мл), что указывает на достоверное (р <0,05) увеличение от показателей генотипа N/N у больных (3,5±0,8 пг/мл).
Ключевые слова: семейной бронхиальной астмой, ИЛ - 6 и у- интерферон, генотипа N/N и N/del.
Актуальность. Наблюдаемая в последние годы заметная тенденция к увеличению заболеваемости бронхиальной астмой(БА) и ее более тяжёлому течению, поставила данную патологию в один ряд с наиболее актуальными проблемами современной медицины диктуя необходимость ее всестороннего изучения [3-9; 30-33]. Генетическим исследованиям мультифакториальных заболеваний во многом способствует детальное описание патогенеза изучаемых болезней [1-4; 13-16]. Среди множества генов-кандидатов, представляет определенный интерес ген еNOS3 являющийся важным компонентом наследственной составляющей подверженности к БА [17-21; 29-31].
Основным звеном патогенеза БА является изменение иммунологического состояния организма. Цитокины являются составной частью иммунной системы, которые участвуют в развитии воспалительного процесса и отвечают за характер
течения воспалительного процесса. Разновидностью цитокинов является интерлейкины, которые при БА усиливают иммунное воспаление и оказывает противовоспалительное действие [8-15; 22-26].
Выяснение взаимосвязей между иммунологическими показателями и ген еNOS3 у больных является одним из наиболее актуальных направлений современной иммунологии. Интерес к этой проблеме объясняется перспективностью подобных исследований как для изучения механизмов осуществления функций генов иммунного ответа человека, так и для изучения возможной генетической обусловленности отдельных форм дисбаланса иммунной системы, существенных для патогенеза ряда заболеваний [27-29]. Следует отметить исследование полиморфизма гена еNOS3 при БА в узбекской популяции проводится впервые.
Цель исследования. В связи с вышеизложенным, целью настоящего исследования явилось роль полиморфного локуса гена еNOS3 и их взаимосвязи противо- и провоспалительных цитокинов при семейной БА.
Материал и методы. Соответственно поставленной цели нами изучены распределения частот аллелей и генотипов полиморфного варианта гена еNOS3 у больных БА и здоровых индивидов узбекской национальности. Обследовано 118 больных, страдающих бронхиальной астмой. Всем больным с семейной БА были проведены комплексные клинико-функциональные и лабораторные обследования. Верификация больных проводилась согласно международной классификации ВОЗ (Х-пересмотр, МКБ-10) и в соответствии с диагностическими критериями Глобальной стратегии лечения и профилактики БА (GINA, 2006) и критериями отечественных программных документов по диагностике, лечению и профилактике БА.
Анализ полиморфного варианта гена еNOS3 осуществляли методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР) на амплификаторе и ПДРФ-анализом с последующим электрофорезом в полиакриламидном геле. Данные исследования проводились в «Центре медицинской генетики» Института Биохимии Академии Наук РУз (директор д.м.н., профессор Мухамедов Р.С.). Иммунологические анализы больных семейной БА проведены в лаборатории института иммунологии и иммунодиагностики АНРУз. При этом использовали «Вектор-Бест» тест разработанный в 2002-2007гг. в г. Новосибирске и определили в сыворотке крови ИЛ - 6 и у- интерферон методом ИФА. Количественная оценка результатов проведено на программе Excel 2004.
Контрольную группу составляли практически здоровые лица проживающие в Республике Узбекистан в возрасте 17 - 62 лет ( средний возраст 28,64) 45 человек (из них 23 мужчин и 22 женщин) .
Полученные данные подвергали статистической обработке на персональном компьютере Pentium-IV по программам, разработанным в пакете EXCEL с использованием библиотеки статистических функций с вычислением критерия х2 и вероятности ошибки (р).
Результаты и обсуждение. Полученные результаты показывают, что в обследованной популяции имеется положительная связь заболевания гена еNOS3. Для изучения роль полиморфного локуса гена еNOS3 и их взаимосвязи противо- и провоспалительных цитокинов при семейной БА были обследованы больные БА, получавшие стационарное лечение в аллергопульмонологическом отделении Самаркандского городского медицинского объединения. Из всех проанализированных у 48 больных были выявлены случаи семейной БА. В семьях 48 больных, были выявлены 70 больных с БА. С каждой семьи с поставленным диагнозом БА пробанды были обследованы и разделены на группы. При обследовании семей всех больных с применением клинико-генеалогического метода, были составлены генеалогические карты на 48 семей. В основную группу были отнесены 48 больных семейной БА из них 29 женщин (60,4%) и 19 мужчин (39,6%), а
в дополнительную группу были отнесены их родственники в I-III поколениях - 70 больных из них 40 женщин (57,1%), 30 мужчин (42,9%). Возраст всех обследованных варьировал от 17 до 56 лет, составляя в среднем 38±0,3 лет.
При анализе частот аллелей гена еNOS3 отмечается повышение частоты аллели 27N у больных БА (222-94,06%) по сравнению с контрольной группой (99-90%). Распределение генотипов также отличалось в изучаемых группах. Отмечалось существенное повышение частоты генотипа N/N у больных БА (107-90,7%) по сравнению с контрольной группой (45-81,8%).
Таблица 1. Распределение частот аллелей и генотипов 27del/Nполиморфизма гена еNOS3
при БА
Полиморфизм гена Группы Аллель генотип
27N 27 del N/N N/del del/del
Больные n=118 22294,06% 14-5,94% 107-90,7% 86,8% 32,5%
Контроль n=55 9990% 1110% 45-81,8% 9-16,4% 11,8%
Проведенный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного варианта - 27del/N гена еNOS3 выявил высокую тенденцию к накоплению гомозиготного генотипа N/N и аллеля 27N при статистически достоверном отличии между общей группой больных БА и контрольной выборкой в узбекской популяции.
При проведении исследования ИЛ-6 и у- интерферона при различных патогенетических формах генотипов 27del/N полиморфизма гена еNOS3 у больных семейной БА, генотипа N/N у больных БА средние показатели в общей группе ИЛ-6 и у-интерферона составляли (13,5±2,9; 7,8±1,2 пг/мл) (13,2±2,9; 7,6±1,2 пг/мл). Средние показатели IL-6 в сыворотке крови генотипа N/N у больных с БА аллергической формой (15,6±3,2 пг/мл), что указывает на достоверное увеличение от показателей у больных генотипа N/del (8,6±2,4 пг/мл), однако у больных генотипа N/N средние показатели IFN-y (5,1±0,9 пг/мл) достоверно не отличились от показателей генотип N/del (5,6±0,9 пг/мл). Средние показатели IL-6 в сыворотке крови N/del у больных с БА неаллергической формы (12,6±2,9 пг/мл) существенно недостоверное увеличение от показателей у больных генотипа N/N (10,9±2,6 пг/мл), однако у больных генотипа N/N средние показатели IFN -у (11,2±1,4 пг/мл) достоверно не отличились от показателей генотип N/del (10,9±2,6 пг/мл). При смешанной форме семейной БА генотипа N/N средние показатели IL-6 ва IFN-y в сыворотке крови составляли (14,3±3,1; 8,2±1,1 пг/мл) достоверно не отличились от показателей генотип N/del (15,3±3,4; 8,3±1,1 пг/мл).
Таблица 2. Показатели иммунный статус в зависимости от полиморфизма гена еNOS3 при патогенетических формах семейной БА
Группы больных Иммунологический показатели пг мл Генотипы Р
N /N N/del
Общий группы IL-6 13,5±2,9 13,2±2,9 Нд
IFN-y 7,8±1,2 7,6±1,2 Нд
Аллергический БА IL-6 15,6±3,2 11,2±3, 1 0,05
IFN-Y 5,1±0,9 5,6±0,9 Нд
Неаллергический БА IL-6 10,9±2,6 12,6±2,9 0,01
IFN-Y 13,1±1,3 11,2±1,4 Нд
Смешанный БА IL-6 14,3±3,1 15,3±3,4 Нд
IFN-Y 8,2±1,1 8,3±1,1 Нд
При проведении исследований иммунологических показателей генотипа N/N у больных контролируемой семейной БА средние показатели IL-6 в сыворотке крови составляет (10,6±3,3 пг/мл), что указывает на достоверное увеличение от показателей генотипа N/ del у больных (8,7±2,6 пг/мл), средние показатели у- IFN генотипа N/N составляет (4,8±0,7 пг/мл) у генотипа N/ del у больных (4,2±0,7 пг/мл) что указывает на отсутствие достоверной разницы между двумя показателями. При генотипа N/del у больных неконтролируемой семейной БА средние показатели IL-6 в сыворотке крови составляет (16,6±3,4 пг/мл) у генотипа N/N у больных (15,7±3,1 пг/мл) что указывает на отсутствие достоверной разницы между двумя показателями, у генотипа N/ del у больных БА средние показатели у-IFN составляет (5,6±0,8 пг/мл), что указывает на достоверное (р <0,05) увеличение от показателей генотипа N/N у больных (3,5±0,8 пг/мл).
Таблица 3. Показатели иммунный статус в зависимости от полиморфизма гена еNOS3
при контрола над БА
Группы больные Иммунологические показатели пгмл Генотипы Р
N /N N/del
Контролируемой БА IL-6 10,6±2,9 8,7±2,6 Нд
IFN-Y 4,8±0,7 4,2±0,7 Нд
Неконтролируемой БА IL-6 15,7±3,1 16,6±3,4 Нд
IFN-y 3,5±0,6 5,6±0,8 0,05
Результаты, полученные в ходе проведения молекулярно-генетических исследований, свидетельствуют о немаловажном вкладе полиморфного варианта гена еNOS3, в формирование генетической структуры предрасположенности к БА в узбекской популяции.
Таким образом, выявленная ассоциация с одной стороны аллеля 27N, а с другой генотипа N/N гена eNOS с развитием БА, позволит по-новому подойти к пониманию генетических механизмов патогенеза, и на этой основе оптимизировать методы диагностики, лечения и профилактики БА.
В среди семьях средние показатели IL-6 в сыворотке крови генотипа N/N у больных с БА аллергической формой составляет (15,6±3,2 пг/мл), что указывает на достоверное увеличение от показателей у больных генотипа N/del (8,6±2,4 пг/мл), а также при генотипа N/del у больных неконтролируемой семейной БА средние показатели у- IFN составляет (5,6±0,8 пг/мл), что указывает на достоверное (р <0,05) увеличение от показателей генотипа N/N у больных (3,5±0,8 пг/мл). Эти показатели являются диагностическим маркером и прогностическом значением при семейной бронхиальной астме.
Список литературы
1. Азизова Н.Д. Современный подход к лечению бронхиальной астмы у детей //Проблемы биологии и медицины. 2012. Т. 1. С. 17.
2. Аралов Н.Р. и др. HLA-ассоциированная предрасположенность к бронхиальной астме //Аллергология и иммунология. 2006. Т. 7. №. 3. С. 308a-308.
3. Аралов Н.Р., Зиядуллаев Ш.Х. Иммунный статус подростков больных бронхиальной астмой, проживающих в табаководческом районе //Тюменский медицинский журнал. 2011. №. 2.
4. Аралов Н.Р., Давидьян А.А., Зиядуллаев Ш.Х.Функциональное состояние Т системы иммунитета у больных бронхиальной астмой в табаководческой зоне Ургутского района //Вестн. врача (Самарканд). 2007. №. 4. С. 154.
5. Ахмедов М.Ж., Лим В.И. Факторы риска развития инфекционно-токсического шока у детей с пневмонией //Практическая медицина. 2008. №. 30.
6. Ахмеджанова Н.И. Эффективность региональной лимфатической антибиотикотерапии и иммунокоррекции при хронических пиелонефритах у детей : дис. ташкент : Автореф. дис.... канд. мед. наук, 2010.
7. Ахмеджанова Н.И., Ибатова Ш.М., Ахмеджанов И.А. Новые методы диагностики и лечения хронического пиелонефрита у детей //Здоровье, демография, экология финно-угорских народов. 2017. №. 4. С. 92-95.
8. Гариб Ф.Ю. и др. Иммунозависимые болезни. 1996.
9. Гарифулина Л.М., Кудратова Г.Н., Гойибова Н.С. Степень метаболических нарушений у детей и подростков с ожирением и артериальной гипертензией //Актуальные вопросы современной науки. 2016. №. 4. С. 19-24.
10.Давидян А.А., Аралов Н.Р. Влияние производства табака на иммунный статус подростков //Журн. теорет. и клин. медицины. 2005. №. 4. С. 85.
11. Жураева Г.С., Баратова Д.Т. Клиническая эффективность цефамеда в терапии острой пневмонии у детей раннего возраста // Проблемы биологии и медицины.
2012. Т. 1. С. 64.
12. Зиядуллаев Ш.Х., Хаитова Н.М., Аралов Н.Р. Применение полиоксидония при бронхиальной астме у подростков //Сибирский медицинский журнал (Иркутск). 2011. Т. 106. №. 7.
13. Зиядуллаев Ш.Х. и др. Роль некоторых регуляторных цитокинов в иммунопатогенезе экзогенных аллергических альвеолитов //Здобутки кттчно! i експериментально! медицини. 2017. № 1. С. 38-41.
14. Ибрагимова Ф.И., Идиев Г.Э. Состояние здоровья у рабочих производства синтетических моющих и чистящих средств //Проблемы биологии и медицины-Самарканд. 2012. № 1. С. 68.
15. Исмоилова З.А., Ахматов А.А. Состояние сердечно сосудистой системы у детей с хроническим пиелонефритом на фоне гиперурекемии //Вопросы науки и образования. 2019. № 4 (49).
16. Исмоилова З.А., Юлдашев Б.А., Ахматов А.А. Хронический пиелонефрит у детей на фоне нарушенного обмена мочевой кислоты: особенности анамнеза и клинико-лабораторная характеристика //Вопросы науки и образования. 2019. №. 4 (49).
17. Курбаниязов З.Б. и др. Современная концепция лечения больных с гигантскими послеоперационными вентральными грыжами //Проблемы биологии и медицины. 2016. № 1. С. 86.
18. Мамурова Н.Н. и др. Значение вредного профессионального фактора в диагностике бронхо-легочной патологии //Интеллектуальный и научный потенциал XXI века. 2017. С. 108-111.
19. Мухамадиева Л.А. Внутрибронхиальная озоно и лазеротерапии у детей с хроническим бронхитом //Аспирантский вестник Поволжья. 2012. №. 5-6. С. 162166.
20. Негмаджанов Б.Б., Худоярова Д.Р., Рахимова Г. Э. Эффективность двухэтапного лечения маточных кровотечений пубертатного периода на фоне эндемического зоба //Врач-аспирант. 2009. №. 6. С. 467-471.
21. Окулов А.Б., Негмаджанов Б.Б. Секстрансформационные операции при нарушениях органов репродуктивной системы //Пробл. Эндокринол. 1993.
22. Окбоев Т.А., Клеблеева Г.Д., Аралов Н.Р. Роль полиморфного локуса гена еNOS3 в формировании бронхиальной астмы //Академический журнал Западной Сибири.
2013. Т. 9. №. 1. С. 54-55.
23. Тоштемиров И.У., Аралов Н.Р., Холлиев Р. Х. Коррекция неврологических расстройств у больных хронической обструктивной болезнью легких //Аллергология и иммунология. 2012. Т. 13. №. 4. С. 324-325.
24. Шавази Н.М., Лим М.В., Тамбриазов М.Ф. Генеалогические аспекты острого обструктивного бронхита у детей //Вестник врача. С. 39..
25. Шамсиев А.М., Раббимова Д.Т., Шамсиев Ж.А. Дифференцированный подход к реабилитации младенцев, перенесших сепсис //Детская хирургия. 2018. Т. 22. №. 5. С. 269-271.
26. Шамсиев А.М., Юсупов Ш.А., Шарипов Р.Х. Влияние озонотерапии на показатели перекисного окисления липидов у детей с распространенными формами аппендикулярного перитонита //Анналы хирургии. 2001. №. 5. С. 77.
27. Шамсиев А.М., Атакулов Ж.А., Лёнюшкин А.М. Хирургические болезни детского возраста //Ташкент: Из-во «Ибн-Сино. 2001.
28.Хаитова Н М., Зиядуллаев Ш.Х., Аралов Н.Р. Иммунокорригирующая терапия в комплексном лечении подростков с бронхиальной астмой //научно-практический и информационный журнал. 2011. С. 39.
29.Холжигитова М.Б. и др. Клиническая взаимосвязь IL1P при хроническом обструктивном бронхите у подростков //Академический журнал Западной Сибири. 2013. Т. 9. №. 3. С. 18-19.
30. Холжигитова М.Б., Аралов Н.Р. Изучение уровня продукции IL-8 в бронхоальвеолярном лаваже у больных хроническом обструктивным бронхитом в подростковом возрасте //Академический журнал Западной Сибири. 2013. Т. 9. №. 1. С. 10-10.
31. Gavriely N. Breath sounds methodology. Boca Raton (FL): CRC Press; 1995; 203 p.
32. Slepov V.P. et al. Use of ethonium in the combined treatment of suppurative and inflammatory diseases in children //Klinicheskaia khirurgiia. 1981. №. 6. С. 78.
33. Shamsiyev A.M., Rabbimova D.T. Comprehensive approach to the problem of rehabilitation of infants submitted sepsis //Voprosy nauki i obrazovaniya. 2017. С. 152.
