CC BY
16
of the blood system in mono- and combined forms of infection. Gematologiya i transfusiologiya. 2022; 67 (2): 207 (In Russ.)]
10. Иванис В.А., Маркелов Е.В., Скляр Л.Ф. Значение иммунных механизмов в патогенезе некоторых острых и хронических вирусных инфекций // Инфекция и иммунитет. 2011.Т.1. № 4. С.373 - 377. [Ivanis V.A., Markelov E.V., Sklyar L.F. The importance of immune mechanisms in the pathogenesis of some acute and chronic viral infections. Infektsya i immunitet. 2011;1(4): 373-377 (In Russ.)]
11. Зотина Е.Н. Клинико-иммунологическая характеристика и факторы прогноза хронического лимфолейкоза в асимптоматической фазе: автореф. дис. <...> канд. мед. наук. Киров, 2015. 22 с. [Zotina E.N. Kliniko-immunologicheskaya kharakteristika i faktory prognoza khronicheskogo limfoleikoza v asimptomaticheskoi faze [dissertation]. Kirov, 2015. 22. (In Russ.)]
12. Исаева Н.В., Зайцева Г.А., Докшина И.А. Характеристики иммунокомпетентных клеток у больных хроническим лимфолейкозом на этапе диагностики // Медицинская иммунология. 2015. Т.17. №6. С. 573 - 578. [Isaeva N.V., Zaitseva G.A., Dokshina I.A. Characteristics of immunocompetent cells in patients with chronic lymphocytic leukemia at the diagnostic stage. Meditsinskaya immunologiya. 2015; 17 (6): 573 - 578. (In Russ.)]
13. Калинина Н.М., Кетлинский С.А., Оковитый С.В., Шуленин С.Н. Заболевания иммунной системы. Диагностика и фармакотерапия. М.: Эксмо. 2008. 496 с. [Kalinina N.M., Ketlinskiy S.A., Okovitiy S.B., Shulenin S.N. Zabolevaniya immunnoi sistemy. Diagnostika i farmakoterapiya. Moscow: Exmo; 2008. 496 p. (In Russ.)]
14. Гаранжа Т.А., Тихомиров Д.С., Туполева Т.А., Савченко В.Г. и др. Особенности диагностики инфекции, вызванной вирусом Эпштейна - Барр, у пациентов со сниженным иммунитетом // Справочник заведующего клинико-диагностической лабораторией. 2011. №8. С.26 - 32. [Garanzha T.A., Tikhomirov D.S., Tupoleva T.A., Savchenko V.G. et al. Features of the diagnosis of infection caused by the Epstein-Barr virus, in patients with reduced immunity. Spravochnik zaveduyushego kliniko-diagnisticheskoi laboratoriei. 2011;8:26 - 32 (In Russ.)]
15. Малеева А.В., Дроков М.Ю., Сердюк Я.В., Ша-кирова Н.Т. и др. Фенотипическое разнообразие специфичных Т-лимфоцитов в клеточном продукте для терапии ЦМВ-инфекции // Гематология и трансфузиология. 2022. Т.67. №2. С.54-55. [Maleeva A.V., Drokov M.Yu., Serdyuk Ya.V., Shakirova N.T. et al. Phenotypic diversity of specific T-lymphocytes in a cell product for the treatment of CMV infection. Gematologiya i transfusiologiya. 2022; 67(2):54 - 55 (In Russ.)]
16. Йовдий А.В. Состояние противовирусного иммунитета у больных неходжкинскими лимфомами: автореф. дис. <...> канд. мед. наук. СПб, 2010. 23 с. [Yovdiy A.V. Sostoyanie protivovirusnogo immuniteta u bol'nykh nekhodzhkinskimi limfomami [dissertation]. St. Petersburg; 2010. 23 p. (In Russ.)]
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА И КЛИНИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА
УДК 616.34-022.575.174.015.3 DOI 10.24412/2220-7880-2023-1-37-41
РОЛЬ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА TLR-4 В РАЗВИТИИ И ТЕЧЕНИИ КИШЕЧНОЙ ИНФЕКЦИИ
Епифанцева Н.В., Витковский Ю.А., Мудров В.А.
ФГБОУ ВО «Читинская государственная медицинская академия» Минздрава России, Чита, Россия (672000, Забайкальский край, г. Чита, ул. Горького, д. 39а), e-mail: en1608@yandex.ru
Толл-подобные рецепторы играют одну из ведущих ролей в адаптивном и врожденном иммунитете, участвуя в распознавании лиганд патогенов. Цель работы: определить влияние полиморфизма гена TLR-4 ASP299GLY на риск развития и клиническое течение острых кишечных инфекций. В исследовании приняли участие 62 пациента с диагнозом острая кишечная инфекция и 94 условно здоровых добровольца. Все участники были отобраны методом случайной выборки с соблюдением определенных критериев включения в исследование. Определение полиморфизма гена TLR-4 ASP299GLY осуществлялось методом ПЦР с использованием праймеров ООО «Литех» (г. С.-Петербург). При статистической обработке полученных результатов за основу принимались принципы Международного комитета редакторов медицинских журналов (ICMJE) и рекомендации «Статистический анализ и методы в публикуемой литературе» (SAMPL). В результате работы установлено, что при однонуклеотидном полиморфизме ASP299GLY гена TLR-4 преобладал мажорный аллель ASP над рецессивным GLY в обеих исследуемых группах в соотношениях: 0,94:0,06 в 1 группе и 0,71:0,29 в группе контроля. В первой кагорте 87% было представлено пациентами с гомозиготным вариантом - 299ASPASP гена TLR-4, во второй кагорте варианты -299ASPASP и -299ASPGLY распределились относительно равно (47,9% и 45,7%) (хи-квадрат=37,24, df=2, р<0,001). При сопоставлении клинической картины заболевания при наличии того или иного генетического полиморфизма TLR-4 выявлены некоторые отличия. А именно: у пациентов с гомозиготным вариантом -299А/А симптоматика заболевания проявлялась более ярко
Вятский медицинский вестник, № 1(77), 2023
с выраженным лихорадочно-интоксикационным и диспепсическим синдромами. Определение полиморфизма гена TLR-4 ASP299GLY может являться биомаркером предрасположенности индивидуума к заболеванию ОКИ и прогнозированию клинического течения инфекции.
Ключевые слова: полиморфизм, кишечные инфекции, Толл-подобные рецепторы.
THE ROLE OF TLR-4 GENE POLYMORPHISM IN THE DEVELOPMENT AND COURSE OF INTESTINAL INFECTION
Epifantseva N.V., Vitkovsky Yu.A., Mudrov V.A.
Chita State Medical Academy, Chita, Russia (672000, Trans-Baikal Territory, Chita, Gorky St., 39 a), e-mail: en1608@yandex.ru
Toll-like receptors play one of the leading roles in adaptive and innate immunity, participating in the recognition of pathogen ligands. Objective: to determine the effect of TLR-4 ASP299GLY gene polymorphism on the risk of development and clinical course of acute intestinal infections. The study involved 62 patients diagnosed with acute intestinal infection and 94 apparently healthy volunteers. AII participants were randomly selected according to certain study inclusion criteria. Determination of the polymorphism of the TLR-4 ASP299GLY gene was carried out by PCR using primers of Litekh LLC (St. Petersburg). Statistical processing of the obtained results was based on the principles of the International Committee of Medical Journal Editors (ICMJE) and the recommendations «Statistical Analysis and Methods in the Published Literature» (SAMPL). As a result of the work, it was found that with a single nucleotide polymorphism ASP299GLY of the TLR-4 gene, the major ASP allele prevailed over the recessive GLY in both studied groups in the ratios: 0.94:0.06 in group 1 and 0.71:0.29 in the control group. In the first cohort, 87% were represented by patients with the homozygous variant - 299ASPASP of the TLR-4 gene, in the second cohort, the -299ASPASP and -299ASPGLY variants were distributed relatively equally (47.9% and 45.7%) (Chi-square = 37.24, df=2, p<0.001). When comparing the clinical picture of the disease in the presence of one or another TLR-4 genetic polymorphism, some differences were revealed. Namely, in patients with the homozygous variant -299A/A, the symptoms of the disease manifested themselves more clearly with pronounced febrile-intoxication and dyspeptic syndromes. Determination of the polymorphism of the TLR-4 ASP299GLY gene can be a biomarker of an individual's predisposition to AII disease and predict the clinical course of the infection.
Keywords: polymorphism, intestinal infections, Toll-like receptors.
Введение
Толл-подобные рецепторы являются ведущей сигнальной системой, ответственными за распознавание лиганд патогенов и координирующих иммунный ответ. TLRs являются активными регуляторами врожденного и адаптивного иммунитета, в высокой степени экспрессируя на иммунных клетках, обладающих активностью по надзору за микроорганизмами [1, 2]. В настоящее время изучено большое число То11-подобных рецепторов, осуществляющих распознавание экзогенных и эндогенных лигандов. Одним из наиболее изученных клеточных рецепторов является TLR4, располагающийся в цитоплазматической мембране и ответственный за идентификацию поверхностных структур бактерий, вирусов и грибов [3]. При этом необходимо отметить, что чрезмерная активация TLR-4 и других TLR значительно индуцирует экспрессию цитокинов и провоспалительных молекул, что влияет на течение и исход заболевания [4].
Целью нашей работы являлось определить влияние полиморфизма гена TLR-4 ASP299GLY на риск развития и клиническое течение острых кишечных инфекций.
Материал и методы
В исследовании приняли участие 62 человека с диагнозом острая кишечная инфекция (ОКИ), находившихся на лечении в Краевой клинической инфекционной больнице, и 94 условно здоровых добровольца (средний возраст 23,3±1,4). Диагноз кишечная инфекция был выставлен на основании клинико-эпи-демиологических и лабораторных данных. При по-
становке диагноза учитывались характерные жалобы, эпидемиологический анамнез, клиническая картина заболевания с наличием лихорадочно-интоксикационного синдрома и поражения желудочно-кишечного тракта; специфические методы исследования включали в себя кал на кишечную группу, исследование кала методом ПЦР, исследование сыворотки крови методом РНГА с определением титра АТ. В результате проведенного исследования были выделены две группы. 1-ю группу составили 33 пациента с ОКИ (средний возраст 27,2±8,7) бактериальной этиологии. В 69,7% установлена сальмонеллезная инфекция, в 15,1% - шигеллез, в 6,1% - эшерихиоз ЭПКП, в 9,1% другие уточненные бактериозы. При этом в случаях посева кала на кишечную группу положительный результат получен в 48,5%: Salmonella enteritidis (7), Salmonella typhimurium (1), Salmonella Salmonella гр. С (1), Shigella sonnei (2), Escherichia coli ЭПКП (2), Proteus vulgaris (1), Pseudomonas aeruginosa (1), Campylobacter (1); при исследовании крови методом РНГА диагностический уровень антител преимущественно определялся во второй сыворотке, забранной в среднем на 7-й день, с момента первого забора, с нарастанием в 4 и более раз; в единичных случаях в первой сыворотке, забранной на 8-9-й день болезни, определялся уровень антител 1:200. 2-я группа представлена 29 пациентами (средний возраст 23,2±8,4) с вирусной диареей: методом ПЦР в 24,1% обнаружена РНК ротавируса типа А и в 75,9% выделили РНК норовируса. Критериями отбора включения в исследуемые группы являлись: возраст старше 15 лет; отсутствие другой острой патологии и/или перенесен-
ных инфекционных и неинфекционных заболеваний в течение месяца; наличие хронических заболеваний вне периода обострения, вне стадии декомпенсации; отсутствие беременности, периода лактации, исследуемые группы сопоставимы по возрасту.
Определение полиморфизма гена TLR-4 ASP299GLY осуществлялось методом ПЦР с использованием праймеров ООО «Литех» (г. С.-Петербург). Анализу подвергалась геномная ДНК, выделенная из лейкоцитов цельной крови с помощью реагента «ДНК-экспресс-кровь» с проведением реакции амплификации с двумя парами аллель-специфичных праймеров.
При статистической обработке полученных результатов за основу принимались принципы Международного комитета редакторов медицинских журналов (ГСМШ) и рекомендации «Статистический анализ и методы в публикуемой литературе» ^АМРЬ) [5]. Полученные данные описывались с указанием абсолютных значений и процентных долей. Сравнение номинальных данных исследования проводилось при помощи критерия хи-квадрат Пирсона, позволяющего оценить значимость различий между фактическим количеством исходов или качественных характеристик выборки, попадающих в каждую исследуемую группу, и теоретическим количеством, которое можно ожидать в изучаемых группах при справедливости нулевой гипотезы [6]. Для определения силы связи между фактором риска и исходом использовался критерий V Крамера, интерпретация значений которого проведена согласно рекомендациям <^еа&РагкеЛезеагсЬ> [7]. При расчете корреляционных связей использовали коэффициент Спирме-на, г=-1+1 (г=0-0,3 - слабая связь, г=0,3-0,7 - связь
средней силы, r=0,7-1 - сильная связь; «+» - прямая связь, «-» - обратная связь).
Работа проводилась с соблюдением этических принципов согласно Хельсинской декларации (2013): World Médical Association Déclaration of Helsinki. Ethical Principles for Médical Research Involving Human Subjects. World Medical Association.
Результаты и их обсуждение
В основном острые кишечные инфекции являются самокупирующимися состояниями, часто не требующими назначения этиотропной терапии. Но в отдельных случаях заболевание, независимо от этиологического фактора, протекает тяжело с осложнениями и имеет затяжной характер течения, и это связано со многими как экзогенными, так и эндогенными факторами. Так, одним из таких эндогенных факторов является индивидуальный набор генов, отвечающих за распознавание патогенов и экспрессию молекул воспаления. Учитывая, что именно TLR-4 отвечают за распознавание лиганд кишечных патогенов, имеющих в своей основе липополисахариды, белковые оболочки, мы решили установить влияние полиморфизма гена TLR-4 в промоторной зоне ASP299GLY на риск развития ОКИ и особенности течения заболевания. После контакта с инфекционным агентом количество рецепторов на мембране клетки увеличивается, и это способствует более эффективному распознаванию лиганд микроорганизмов. При этом необходимо учитывать, что с возрастом число рецепторов уменьшается, а также активность Толл-подобных рецепторов зависит от многих факторов, таких как сниженная экспрессия, нарушения в распознавании лиганд, генетический полиморфизм [8].
Таблица 1
Частота генотипов полиморфизма гена TLR-4 ASP299GLY
Ген ОНП Генотип Исследуемые группы Статистическая значимость
1-я группа (n=33) 2-я группа (n=29) 3-я группа (n=94)
TLR-4 ASP299GLY ASPASP ASPGLY GLYGLY 84,8% (28/33) 15,2% (5/33) 0 (0/33) 93,1% (27/29) 6,9% (2/29) 0 (0/29) 47,9% (45/94) 45,7% (43/94) 6,4% (6/94) Хи-квадрат=37,96 df=6 p<0,001
В результате работы установлено, что при од-нонуклеотидном полиморфизме (ОНП) ASP299GLY гена TLR-4 преобладал мажорный аллель ASP над рецессивным GLY в соотношениях: 0,92:0,08 в 1-й группе, 0,96:0,04 - во 2-й группе и 0,71:0,29 - в группе контроля. При этом необходимо отметить, что, несмотря на доминирование гиперпродуктивного аллеля, как в исследуемых группах, так и в группе контроля среди заболевших ОКИ преимущественно были пациенты с гомозиготным вариантом -299ASPASP гена TLR-4: 85% при бактериальных ОКИ и 93% при вирусных ОКИ; в то время, как среди здоровых людей варианты -299ASPASP и -299ASPGLY распределились относительно равно (47,9% и 45,7%) (хи-квадрат=37,96, df=6, р<0,001) (табл. 1). Коэффициент Крамера равен 0,31, что подтверждает умеренную связь. Таким образом, можно с уверенностью сказать, что носительство гиперпродуктивного аллеля ASP в гомозиготном варианте --299ASPASP в случае как бактериальных, так и вирусных диарей повышает риск развития острых кишечных инфекций при встрече с патогеном. С целью построения оптимальной диагностической модели был проведен ROC анализ с построением ROC кривой. Определение
чувствительности позволяет проводить раннее прогнозирование возможности возникновения заболевания: чем выше чувствительность, тем эффективнее прогнозирование патологического процесса на ранних этапах. Специфичность направлена на исключение заболевания. Построение ROC кривой позволило наглядно оценить доминирование несущего признака в общем числе носителей исследуемого признака [6]. В нашем случае чувствительность регистрировалась в пределах 0,87, специфичность - 0,52 (AUC - 0,70, CI - 0,63-0,77, p<0,001) (рис.), что подтверждает хороший уровень эффективности прогнозирования риска развития ОКИ в зависимости от генетического полиморфизма TLR-4 -299 A/G.
В научной литературе как российских, так и зарубежных авторов имеются работы по изучению влияния полиморфизма TLR-4 -299ASP/GLY на риск и течение различных заболеваний. Например, при изучении влияния полиморфизма TLR-4 -299ASP/GLY у пациентов с мозговым инсультом установлено преимущественное носительство гомозиготного варианта по доминантному аллелю ASP, в то время как в группе контроля наличие полиморфизма гена распределилось почти в равной степени между нормозиготным и гете-
г
H
Вятский медицинский вестник, № 1(77), 2023
розиготным вариантами [9]. А избыточная экспрессия TLR-4 усугубляет течение аутоиммунных заболеваний, в то время как дефицит TLR-4 облегчает тяжесть заболевания, но не исключает риск его возникновения [10]. Другие авторы отмечают наличие корреляции между генетическим полиморфизмом TLR-4 -299ASP/GLY с доминированием мажорного аллеля A и риском развития колоректального рака среди азиатов с повышением уровня белка TLR-4 в данной группе [11]. Все это подтверждает роль полиморфизма гена Толл-подобного рецептора 4 в развитии различных заболеваний и его влияние на клинические проявления.
Анализ клинической картины острых кишечных инфекций бактериальной и вирусной этиологии, исходя из генетического полиморфизма TLR-4 —299ASP/ (If,)', установил влияние генетического полиморфизма TLR-4 -299ASP/GLY на выраженность симптоматики заболевания. Течение заболевания в исследуемых группах среди носителей мажорного аллеля Asp генотипа -299ASPASP характеризовалось более выраженным лихорадочно-интоксикационным синдромом с лихорадкой до 38 °С±0,8, головной болью, плохим сном и отсутствием аппетита. Диспепсический синдром в 1 группе проявлялся в 57% случаев тошнотой, в 29% многократной рвотой и 100% диареей в среднем до 6 раз в сутки не более 4 дней; у пациентов с вирусной диареей частота стула достигала 7-8 раз в сутки, в среднем до 4 дней, заболевание сопровождалось в
82% тошнотой и в 45% - многократной рвотой. В то время, как у носителей варианта -299ASP/GLY клиническая картина в обеих группах была менее выражена, наблюдалась субфебрильная лихорадка в пределах 37,2 °С±0,7, поражение ЖКТ проявлялось преимущественно диареей, тошнота и рвота отмечались только в первые сутки заболевания (табл. 2).
ROC Кривые
1 - Специфичность
Диагональные сегменты, сгенерированные связями.
Рис. Площадь под ROC кривой
Таблица 2
Клиническая картина у пациентов с ОКИ в зависимости от полиморфизма гена -299 ASP/GLY То11-4
Бактериальные ОКИ Вирусные ОКИ
Генотип Asp/A sp Toll-4(n=28) Генотип AspAjly Toll-4 (n=5) Геноеип Asp/Asp Toll-4 (n=27) Генотип Asp/Gly Toll-4 (n=2)
лихорадочно- интоксикационныи синдром T - 37,9±0,8 T - 37,2±0,7 T - 38,1±0,8 T -37,2±0,6
слабость, нарушение сна, головная боль, снижение аппетита
тошнота В 57% (16/28) нет В 81,5% (22/27) нет
рвота 28,6% (8/28), 3 раза/сутки нет 44,4% (12/27), 2 раза/сутки нет
диарея 4-7 раз/сутки 3-5 раз/сутки 6-8 раз/сутки 2-5 раз/сутки
в сроднем 4 дня з среднем 2 дня
метеоризм +/- - 3/У+ +/-
Установлена прямая корреляционная связь симптомов заболевания и наличием генетического средней силы между выраженностью клинических полиморфизма -299А/А (р<0,05)(табл. 3).
Таблица 3
Корреляция между полиморфизмом гена -299 ASP/GLY То11-4 и клинической картиной (р<0,05)
Бактериальные ОКИ Вирусные ОКИ
Генотип ASP/ ASP Tol3-4 (0=28) ГенотипASP/ GLY Toll-4 (n=5) Генотип ASP/ASP Toll-4 (0=27) Генотоп ASP/ GLY Toll-4 (n=2)
лихорадочно-интоксикационныИ синдром 0,503 0,525 0,476 -
диарея 0,496 0,5 0,533 -
тошнота 0,654 0,623 0,674 -
рвота 0,658 1 0,662 -
Таким образом, наличие генотипа -299ASP/ASP оказывает влияние на выраженность клинических проявлений заболевания. Следовательно, мы можем предполагать, что паттерн аллеля ASP не тольжо значительно повышает риск заболевания острыми кишечными инфекциями, но и определяет яркость клинической картины заболевания.
Выводы
1. Наличие доминантного аллеля А генетического полиморИизма TLR-4 ASP299GLY определяет риск развития острой кишечной инфекции с наибольшей частотой в группе с полиморфизмом гена -299 А/А.
2. У пациентов с полиморфизмом гена -299ASP/ ASP TLR-4 отмечаются наеболее выраженеые клинические проявления заболевания.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии явного или потенциального конфликта интересов, связанного с публикацией статьи.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Литература /References
1. Miyake K. Innate immune sensing of pathogens and danger signals by cell surface Toll-like receptors. Semin Immunol. 2007;19(1): 3-10. DOI: 10.1016/j.smim.2006.12.002.URL: https:// pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17275324/ (accessed 10.05.2022).
2. Богодухова Е.С., Байке Е.Е. Полиморфизм генов Toll-подобных рецепторов как возможный фактор предрасположенности к развитию туберкулеза // Туберкулез и болезни легких. 2018. Т 96. № 9. С. 11-16. [Bogodukhova E.S., Baike E.E. Polymorphism of genes of Toll-like receptors as a potential factor of predisposition to tuberculosis. Tuberkulez i bolezni legkikh. 2018;96(9):11-16. (In Russ.)] DOI: 10.21292/2075-1230-2018-96-9-11-16.
3. Isik Z., Leblebici A., Demir Karaman E., Karaca C., Ellidokuz H., Koc A. et al. In silico identification of novel biomarkers for key players in transition from normal colon tissue to adenomatous polyps. PLoS ONE 2022;17(4): e0267973. DOI: 10.1371/journal.pone.0267973 Available at: URL:https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/ journal.pone.0267973 (accessed 10.05.2022).
4. Okun E., Griffioen K.J., Lathia J.D., Tang S.C., Mattson M.P. et al. Toll-like receptors in neurodegeneration. Brain Res Rev. 2009;59(2): 278-292. DOI: 10.1016/j. brainresrev.2008.09.001. Available at: URL:https://pubmed. ncbi.nlm.nih.gov/18822314/(accessed 10.05.2022).
5. Lang T.A., Altman D.G. Statistical analyses and method in the published literature: The SAMPL guidelines. Medical Writing. 2016; 5(3): 31-36. DOI: 10.18243/ eon/2016.9.7.4 Available at: URL:https://journal.emwa.org/ statistics/statistical-analyses-and-methods-in-the-published-literature-the-sampl-guidelines/ (accessed 07.05.2022).
6. Мудров В.А. Алгоритмы статистического анализа качественных признаков в биомедицинских исследова-
ниях с помощью пакета программ SPSS // Забайкальский медицинский вестник. 2020. №1. С. 151-163. [Mudrov V.A. Statistical analysis algorithms of qualitative features in biomedical research using the SPSS software package. Zabaikal'skiimeditsinskii vestnik. 2020; 1: 151-163. (In Russ.)]
7. Rea L., Parker R. Designing and conducting research. 4thEdition. San-Francisco: Jossey-Bass, 2014. 353 p.
8. Тюкавкина С.Ю., Лабушкина А.В., Оксенюк О.С. Роль Toll-подобных рецепторов в иммунопатоге-незе нефропатий // Журнал фундаментальной медицины и биологии. 2017. №1. С. 17-26. [Tyukavkina S.Yu., Labushkina A.V., Oksenyuk O.S. The role of Toll-like receptors in the immunopathogenesis of the nephropathies with fibrosis. Zhurnal fundamental'noi meditsiny i biologii. 2017;1:17-26. (In Russ.)] Доступно по: URL: https://cyberleninka.ru/ article/n/rol-toll-podobnyh-retseptorov-v-immunopatogeneze-nefropatiy. Ссылка активна на 02.06.2022.
9. Крохалева Ю.А., Страмбовская Н.Н. Но-сительство генетического полиморфизма Толл-рецепторов и концентрация IL-1P, IL-6 в плазме крови у больных мозговым инсультом // Успехи современного естествознания. 2015. № 7. С. 7-11 [Krokhaleva Yu.A., Strambovskaya N.N. Nositel'stvo geneticheskogo polimorfizma TOLL-retseptorov i kontsentratsiya IL-1P, IL-6 v plazme krovi u bol'nykh mozgovym insul'tom. Uspekhi sovremennogo estestvoznaniya. 2015;7:7-11. (In Russ.)] Доступно по: URL: https://natural-sciences.ru/ru/article/ view?id=35479. Ссылка активна на 02.06.2022.
10. Freeley S.J., Giorgini A., Tulone C., Popat R.J., Horsfield C. et al. Toll-Like Receptor 2 or Toll-Like Receptor 4 Deficiency Does Not Modify Lupus in MRLl pr Mice. PLoS ONE 2013;8(9): e74112. DOI:10.1371/journal.pone.0074112 Available at: URL:https://journals.plos.org/plosone/ article?id=10.1371/journal.pone.0074112 (accessed 30.05.2022)
11. Li X.X., Sun G.P., Meng J., Li X., Tang YX. etal. Role of Toll-Like Receptor 4 in Colorectal Carcinogenesis: A Meta-Analysis. PLoS ONE. 2014; 9(4): e93904. DOI:10.1371/journal. pone.0093904Available at: URL:https://journals.plos.org/plosone/ article?id=10.1371/journal.pone.0093904 (accessed 30.05.2022).
УДК 576.53 DOI 10.24412/2220-7880-2023-1-41-45
СРАВНЕНИЕ МЕТОДОВ ВЫДЕЛЕНИЯ МОНОНУКЛЕАРОВ ИЗ КОСТНОГО МОЗГА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК
Пестрикова А.О., Попонина Е.А., БутолинаМ.А., Исаева Н.В., Минаева Н.В., Зорина Н.А., Фокина Е.С.
ФГБУН «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови ФМБА России», Киров, Россия (610027, г. Киров, ул. Красноармейская, 72), e-mail: pestrikova.work@gmail.com
Применение мезенхимальных стромальных клеток (МСК) для научных исследований и клеточной терапии требует их выращивания в достаточных количествах in vitro. В качестве источника предшественников МСК в настоящее время наиболее часто используется костный мозг. Выделение фракции мононуклеаров из костного мозга возможно несколькими способами. Целью данного исследования является сравнение градиентного и седиментационного методов выделения мононуклеаров из костного мозга, предназначенных для дальнейшего получения МСК. В настоящей работе проведено сравнение результатов выделения мононуклеаров у 25 здоровых лиц и 45 больных множественной миеломой с применением градиента плотности Lympholite-H и 0,2%-ного раствора метилцеллюлозы. Последующий посев в питательную среду позволяет получить первичную культуру МСК. Проведены расчет эффективности выделения мононуклеаров, а также оценка функциональной активности выделенных клеток путем определения количества колониеобразующих единиц фибробластов. Морфологические признаки полученной культуры и иммунофенотипическая характеристика клеток соответствовали минимальным критериям отнесения их к МСК, которые установлены Международным обществом клеточной терапии. Эффективность фракционирования костного мозга с применением обоих методов сопоставима у здоровых лиц, тем не менее колониеобразующая способность клеток выше при исполь-
