CC BY
28УДК 579.695
Роль метаногенных архебактерий в переработке органических отходов в условиях замкнутой экосистемы
Заяц В.С. Буглак П.А.
ЗАО «Струнные технологии», г. Минск, Беларусь
99
Рассмотрена группа метаногенных бактерий, относящаяся к домену АгсЬаеа (археи), позволяющая осуществлять полную переработку органических отходов без использования кислорода. Изучено влияние жизнедеятельности метаногенов в закрытой экосистеме: анаэробная переработка органического вещества, усвоение метаболитов-ингибиторов, уменьшение органической массы при её утилизации, а также минимизация возможных негативных эффектов - выделения метана и других газов (углекислого газа, аммиака, сероводорода, водорода). Предложен способ очистки образующихся газов.
Ключевые слова:
архебактерии, метаногенные бактерии, биодеградация отходов, биофильтр, метанотрофы, закрытая экосистема, ЭкоКосмоДом (ЭКД).
Введение
Жить за пределами Земли - сложная задача, для её решения важно построить биорегенеративную систему жизнеобеспечения - замкнутую искусственную экосистему, сформированную на экологических принципах, в которой кислород, вода и основные источники питания перерабатываются с использованием биотехнологий. Следовательно, создание микросреды, аналогичной земной [1], позволило бы решить вопросы систем жизнеобеспечения на космических станциях, а также в герметичных куполах или бункерах для сохранения человеческой популяции в случаях значительного ухудшения экологических параметров окружающей среды, не позволяющих людям открыто существовать на поверхности планеты [2].
Эксперименты по закрытым экосистемам проводились в США («Биосфера-2»), Китае («Лунный дворец-1»), а также в Красноярском институте биофизики бывшего СССР (в настоящее время - Институт биофизики Сибирского отделения РАН). Наиболее успешные результаты получены в Красноярске. Советские учёные разработали экспериментальные комплексы БИОС-1, БИОС-2, БИОС-3, в которых испытуемые смогли прожить более полугода, не потребляя кислород из внешней среды [3]. Весь круговорот кислорода и углекислого газа был зациклен благодаря
фотосинтезирующим растениям и водорослям. Кроме того, в закрытой системе восполнялась и потребность в углеводах, воде и кислороде для дыхания. Однако переработка органических отходов осуществлялась физико-химическими методами - растворением в кислоте, минерализацией, нейтрализацией солей, внесением солей в почву для культивирования растений [4]. Для белкового питания экипажа также использовались мясные консервы, запасённые в начале эксперимента.
При создании ЭкоКосмоДома (ЭКД) [2] переработка органических отходов должна проводиться биологическими методами - без использования неприродных технологий. Очевидная проблема закрытых систем жизнеобеспечения - потребление кислорода при аэробном разложении органических отходов. Дело в том, что анаэробное разложение органики (брожение) с точки зрения биотехнологии связано с рядом трудностей, таких как выделение токсичных газов, частая остановка процессов брожения и консервации микроорганизмов вследствие накопления органических кислот и спиртов. Процесс разложения можно ускорить, если в систему внести архебактерии в качестве закваски.
Архебактерии выделяют в отдельное царство по причине того, что у них найдено большое количество отличий от остальных групп микроорганизмов [5, 6]. К археям относят различные виды организмов, способных существовать
в экстремальных условиях при предельно высоких показателях температуры (термофилы), рН (ацидофилы), солёности (галофильные бактерии). Помимо этого, археи включают такие виды, как продуцирующие метан (метано-генные) и серовосстанавливающие бактерии [7, 8].
Все известные виды метаногенных бактерий принадлежат данному царству. Они используют в своей жизнедеятельности продукты брожения других бактерий, в результате чего выделяется метан, а также ещё некоторые газы (С02, аммиак, сероводород, водород). Благодаря деятельности метаногенных бактерий происходит практически полная переработка органических отходов, образуется перегной без опасных патогенов, плодородный и полезный для растений.
Из отмеченных групп микроорганизмов наибольший практический интерес с точки зрения функционирования ЭКД представляют метаногенные бактерии, позволяющие осуществлять полное бескислородное разложение органических отходов, возникающих в процессе жизнедеятельности человека, животных и растений.
В настоящее время распространение получила технология использования способности микроорганизмов перерабатывать и обезвреживать органические загрязнители в системах очистки сточных вод. В таблице приведены сравнительные характеристики аэробной и анаэробной очистки [9].
Образование метана при анаэробной деградации -сложный процесс, который можно разделить на четыре фазы: гидролиз, ацидогенез, ацетогенез и метано-генез [10]. Этапы деградации осуществляются разными
Таблица - Сравнение показателей
аэробной и анаэробной очистки сточных вод [9]
Аэробный процесс Анаэробный процесс
Высокие энергетические затраты на аэрацию Не требуется аэрация (энергопотребление анаэробного процесса в 10 раз ниже, чем аэробного)
Требуется разбавление концентрированных стоков Возможна очистка высококонцентрированных стоков
Образование значительного количества биомассы активного ила (1-1,5 кг на 1 кг разлагаемых загрязнений) Небольшой прирост биомассы активного ила (0,1-0,2 кг на 1 кг разлагаемых загрязнений)
Высокое потребление кислорода Кислород потребляется только на начальных этапах биоразложения из разлагаемого субстрата
консорциумами, частично находящимися в синтрофической взаимосвязи и предъявляющими определённые требования к окружающей среде. Первую группу микроорганизмов составляют гидролитические бактерии. Они гидролизуют полимерные материалы до мономеров посредством внеклеточных гидролитических ферментов (целлюлазы, ксиланазы, амилазы, протеазы, липазы). Большинство бактерий являются строгими анаэробами; среди них бактериоциды, клостридии и бифидобактерии. Кроме того, задействованы некоторые факультативные анаэробы - Streptococci и Enterobacteriaceae. Вторая группа микроорганизмов - это ацидогенные бактерии. Они превращают сахара и аминокислоты в углекислый газ, водород, аммиак и другие органические кислоты. В третью группу входят ацетогенные бактерии. Высшие летучие жирные кислоты преобразуются в уксусную кислоту и водород облигатными ацетогенны-ми бактериями. Типичными гомоацетогенными бактериями считаются Acetobacterium woodii и Clostridium aceticum. В конце процесса разложения две группы метаногенных бактерий производят метан из уксусной кислоты или водорода и диоксида углерода. Эти бактерии являются строгими анаэробами и требуют более низкого окислительно-восстановительного потенциала для роста, чем большинство других анаэробных бактерий. Только немногие виды способны разлагать уксусную кислоту до метана и углекислого газа, например Methanosarcina barkeri, Methanococcus mazei и Methanothrix soehngenii [11].
Основная цель исследования - изучение наличия архебактерий, при необходимости их внесение в установку по очистке сточных вод, расположенную в коллекторе дома № 12 в Крестьянском (фермерском) хозяйстве «Юниц-кого» (КФХ «Юницкого) в г. Марьина Горка, а также оценка возможных рисков использования указанной группы микроорганизмов в условиях замкнутой экосистемы. Коллектор дома № 12 создавался как модельная система очистки сточных вод (в дальнейшем запланировано применение опытной конструкции в ЭКД). Данное изыскание позволит изучить возможность создания системы для переработки сточных вод в условиях замкнутой экосистемы.
Описание метода исследования
Культивирование архебактерий
Архебактерии тяжело поддаются лабораторному культивированию, для их внесения в коллектор дома необходимо соорудить особую установку для наработки культуры. Простейшее подобное оборудование можно сконструировать из полимерной герметизируемой бочки на 30-50 л.
Примерная схема показана на рисунке 1. Предварительно следует предусмотреть возможность для действия бактериальной ассоциации, подготавливающей субстрат для метаногенов (окисление, брожение).
В кишечном тракте крупного рогатого скота всегда присутствуют метаногенные микроорганизмы как важная составляющая эндосимбионтов. Именно поэтому экзо-метаболиты данных животных содержат значительное количество метаногенов. В опытную установку, показанную на рисунке 1, закладывается смесь воды и навоза в соотношении 1 : 1. По окончании протекания анаэробного брожения запускается процесс метаногенеза, который характеризуется бурным выделением биогаза. С этого момента в смеси имеется достаточное количество метаногенных бактерий в активном состоянии и возможно их внесение в резервуар коллектора в качестве инокулята.
Для культивирования архебактерий в установке нужно соблюсти определённые этапы.
1. Выделить микроорганизмы или приобрести в коллекции.
2. Культивировать в условиях, имитирующих окружающую среду [12].
При создании условий необходимо задать параметры окружающей среды, из которой были выделены
микроорганизмы. К таким характеристикам относят соответствующие физико-химические показатели, требуемые источники метаболической энергии, питательных веществ и микроэлементов (например, витаминов, органических соединений, жидкостей почвенного выщелачивания или экстракта клеток). Для устранения микробных загрязнителей и повышения эффективности культивирования некоторых архей включаются другие добавки (в частности, специфические антибиотики, такие как канамицин и стрептомицин, подавляющие рост бактерий [13, 14], а также ингибиторы грибков - нистатин или азоксистробин [15, 16]). Все компоненты среды поставляют в соответствующих концентрациях для поддержания наблюдаемого роста во время культивирования.
3. Инкубировать микроорганизмы в изолированной анаэробной камере.
В статье [17] изучено общее количество микроорганизмов коллектора. В настоящее время произведён отбор проб сточной жидкости из дома № 12 в КФХ «Юницкого» для анализа наличия архебактерий. Кроме того, необходимо спланировать создание установки для дальнейшего культивирования данной группы микроорганизмов.
После наработки суспензии метаногенных бактерий её вносят в коллектор дома с целью постановки эксперимента по утилизации сточных вод.
Газоотводная трубка
Бак ёмкостью 30-50 л для сбраживания субстратов
Уровень
жидких субстратов
Мешалка
1
т
Датчик
температуры, °С
Гидрозатвор
(канистра ёмкостью 10 л, наполненная водой до половины)
Газ
Уровень воды
Подогреватель бака
ХХХХХХХХХХХ,
Автоматика управления подогревом бака
220 В
Щит питания
Рисунок 1 - Схема установки для культивирования метаногенных архебактерий
Постановка эксперимента
Эксперимент по жизнедеятельности архебактерий проходит в условиях подземного коллектора (рисунок 2), созданного под домом № 12 на базе КФХ «Юницкого». Подобный тип конструкции можно отнести к установке анаэробной очистки сточных вод. В предыдущем эксперименте на этом же оборудовании определялось общее количество микроорганизмов, обитающих в коллекторе [17].
Данное сооружение представляет собой резервуар со стенками, проницаемыми для корней растений. Основная его роль - сбор стоков из туалетов и кухни дома, а также фильтрация загрязнённой жидкости через слои органики. В коллекторе происходит минерализация веществ (за счёт действия микроорганизмов) и высвобождение макро-и микроэлементов в почву, где они могут поглощаться корнями растений.
Вместе с тем повторный подсчёт общего количества микроорганизмов показал дальнейшее его снижение в образцах с 1 х 107 КОЕ/мл до 1 х 105 КОЕ/мл, что говорит о гибели микроорганизмов вследствие низкого содержания в исследованной воде питательных веществ.
Полученные данные свидетельствуют о вероятном отсутствии метаногенов в резервуаре коллектора. После наработки микроорганизмов в указанной установке планируется их заселение в коллектор дома. Активное размножение и выделение газа наступает на 21-й день. По истечении этого времени будет измеряться биологическое потребление кислорода (БПК), показатели которого предполагается задействовать для оценки интенсивности роста и размножения бактерий и, соответственно, в качестве критерия эффективности очистки сточных вод и разложения органического материала.
Биоколлектор Рисунок 2 - Схема внутридомового биоколлектора [17]
На предыдущих этапах эксперимента начато изучение микробиологических показателей образцов сточной жидкости. Первые результаты продемонстрировали значительное снижение общего количества микроорганизмов в воде, отобранной из коллектора, - в 1000-2000 раз [17]. Такое существенное уменьшение количества бактерий может говорить об очистке воды, так как минерализация органического вещества вследствие его разложения приводит к отсутствию кормовой базы для гнилостных и бродильных бактерий и, как результат, к падению их численности.
При проведении настоящего исследования авторы также отобрали две пробы содержимого коллектора в объёме 3 л для изучения возможного газообразования и подтверждения прохождения процесса метаногенеза при жизнедеятельности микроорганизмов (рисунок 3).
Образцы были оставлены при температуре 20 °С, характерной для сточных вод коллектора. Однако в ходе наблюдения в течение месяца газообразования не отмечалось.
Рисунок 3 - Пробы сточной жидкости из коллектора
Очистка газов от метана биологическими фильтрами
В процессе жизнедеятельности метаногенных бактерий выделяется биогаз, что нежелательно в условиях закрытой биологической системы. Образующийся метан при смешивании с воздухом становится взрывоопасным. Следовательно, важно предусмотреть варианты менее рискованного использования метана. Одним из методов утилизации является применение архебактерий для получения биогаза - экологически чистого, экономичного средства, альтернативного ископаемому топливу. В рамках условий замкнутой экосистемы ЭКД отсутствует необходимость в дополнительной выработке топлива из биогаза, так как рассматривается иной источник энергии (солнечная). В связи с этим в данной статье изучаются другие варианты утилизации образующегося газа.
Если ориентироваться на экологичную и безопасную утилизацию метана, то одним из решений обезвреживания биогаза может стать создание систем улавливания [18]. Наиболее перспективным способом улавливания метана и других биогазов является биологическая фильтрация [19], которая предполагает удаление и уничтожение органических соединений, содержащихся в загрязнённом воздухе (например, летучих органических веществ или пахучих субстанций), и задействование микроорганизмов. Воздушный поток, имеющий органические загрязнители, передаётся через слой биологически активного вещества (основу биофильтра), где загрязнители адсорбируются в биоплёнке, а затем разлагаются специальными бактериями, которые используют загрязняющие вещества в качестве источника углерода и энергии. Важный факт: при разложении загрязняющих веществ и пахучих субстанций образуются, как правило, безвредные продукты, такие как двуокись углерода и вода. Поскольку загрязнители разлагаются, а не просто адсорбируются, то в биофильтре не сохраняются остатки органических соединений, удалённых из загрязнённого воздушного потока (рисунок 4).
В качестве основы биофильтра чаще всего используются смеси, полученные из органического материала: почвы, компоста, торфа, древесных опилок. Иногда применяются синтетические материалы.
Биофильтрацию обычно называют процессом фиксированной плёнки. В большинстве случаев биоплёнку образуют сообщества различных микроорганизмов (бактерии, грибы, дрожжи и др.), макроорганизмов (простейшие, черви, личинки насекомых и др.) и внеклеточных полимерных веществ.
Очищаемую воду можно периодически или непрерывно наносить на фильтр посредством подъёма или опускания. Как правило, биофильтр предполагает две или три фазы:
• твёрдую (среда);
• жидкую (вода);
• газообразную (воздух).
Органическое вещество и другие компоненты из жидкости диффундируют в биофильтр, в котором происходит обработка (в основном путём биодеградации). Активность микроорганизмов является ключевым фактором эффективности процесса. Определённое влияние также оказывают: состав воды, гидравлическая нагрузка биофильтра, тип среды, стратегия питания (просачивание или погружение среды), возраст биоплёнки, температура, аэрация.
Применение биофильтров оправдано, когда существуют проблемы выбросов в атмосферу, связанные с контролем запахов, или выявлены загрязнения летучими органическими соединениями. Очистка газов - одна из главных задач при использовании компостного оборудования, биогазовых станций, очистных сооружений и др.
Эффективность биофильтрации зависит от способности микроорганизмов к биологическому разложению загрязняющих веществ. Очищающая способность биофильтров -75-99 %. Характер загрязнений определяется набором микроорганизмов, иммобилизованных в биофильтре.
Подача
загрязнённого воздуха в биофильтр
Вывод очищенного воздуха из биофильтра
Бактерии разлагают загрязняющие вещества, адсорбированные в биофильтре
Рисунок 4 - Принцип процесса биофильтрации [19]
При проектировании биофильтров для эффективной работы микроорганизмов крайне важно создать оптимальные условия. Они задаются исходя из особенностей метаболизма выбранных для биофильтрации бактерий. Значимыми параметрами оценки считаются влажность, кислотность, питательные вещества и температура.
Основные преимущества биофильтров - это невысокая стоимость самой установки и низкие эксплуатационные расходы по сравнению с биогазовой установкой.
Наиболее подходящими микроорганизмами, способными поглощать метан в биофильтрах, считаются метано-трофные микроорганизмы. Они представляют собой группу метилотрофов (организмов, использующих одноуглерод-ные соединения для роста), которые потребляют метан в качестве единственного источника углерода и энергии. Такие организмы являются строго аэробными грамотрица-тельными бактериями; растут на простых минеральных солях и метане. Включают пять родов: МеМу/оооооиз, Ме-Му!оЬаШг, МеМу/отопэз, МеМу/ооуз^з и МеМу/озпиз [20]. На первом этапе своего метаболического пути данные
аэробные организмы используют ферменты метанмоно-оксигеназа (MMO) для окисления метана до метанола [21]. Скорость поглощения метана почвой с лишайниками, содержащей Methyloaffinis lahnbergensis, составляет от -0,4 мг до -0,6 мг CH4 м-2сут-1 [22].
Кроме метанотрофных бактерий некоторые низшие почвенные грибы также могут поглощать метан в процессе своей жизнедеятельности. Метан для гриба Fusarium solani-это источник углерода и энергии. Максимальная элиминирующая способность Fusarium solani - 42,2 г CH4 м-3ч-1. Существуют биофильтры на основе гриба Fusarium solani, а также комбинированные биофильтры Fusarium solani с метанотроф-ными бактериями Methylomicrobium album и Methylocystis sp. Комбинированные биофильтры показывают более высокую скорость поглощения метана [23].
Планируется проведение эксперимента по изучению потребления метана метанотрофами Methylomicrobium, Methylocystis sp. совместно с грибом Fusarium solani [24]. Полученную биомассу используют в качестве инокулята. Схема устройства лабораторной установки показана на рисунке 5.
Воздух <у>
Воздух + пентан
Датчик давления
Испаритель пентана
Цилиндр с метаном
Воздух + вода
7 \
Клапан
°0°о° О о
О О . О О
°о°о
о°о°0
Воздух + пентан + метан
Увлажнитель
G-SP []:
G-SP Q:
G-SP f
G-SP -Oi
Перистальтический насос
Питательная среда
Рисунок 5 - Схема лабораторной установки по изучению удаления метана метанотрофами и грибом Fusarium solani [24]: G-SP - отверстие отбора проб газа; Т - термоэлемент (Т„ Т2, Т3)
Предложенный способ очистки совместно с культивированием архебактерий будет применяться сначала в коллекторе дома № 12 в КФХ «Юницкого», а в дальнейшем (при удачных испытаниях) - в ЭКД.
Выводы
и дальнейшие направления исследования
Рассмотрена возможность задействования метано-генных архебактерий в переработке органического вещества в условиях ЭКД без потребления кислорода и необходимости затрат энергии и материалов для осуществления процесса минерализации.
Однако жизнедеятельность метаногенов связана с выделением метана, что затрудняет их использование в закрытой системе. Решением данной проблемы может быть установка биофильтров, которые позволяют устранять до 99 % побочных газообразных продуктов, образующихся при анаэробном процессе перегнивания органических веществ. Помимо этого, метан можно рассматривать как исходное сырьё для синтеза метилового спирта.
В коллекторе дома № 12 в КФХ «Юницкого» не обнаружено жизнеспособных архебактерий, поэтому необходимо
внесение данной группы метаногенных микроорганизмов извне. Предложено апробировать лабораторную установку для наработки биомассы культуры архей, а также представлена методика очистки выделяемого метана при помощи биофильтра.
В дальнейшем планируется выделить в условиях природы штаммы аэробных микроорганизмов и метанотрофов, способных к элиминации метана и других биологических газов; применить установку для культивирования архебактерий; получить необходимое количество бактерий; провести пролонгированный эксперимент в условиях коллектора дома № 12 с целью изучения выживаемости исследуемой культуры.
Штаммы архебактерий не токсичны для человека, их использование экологично в рамках замкнутой экосистемы, что является приоритетным фактором для ЭКД. Реликтовые архебактерии будут способствовать поддержанию экологического баланса, а также повысят безопасность технологий биопереработки органических отходов.
Для элиминации из системы биогаза (в частности, большую его часть - метан) предлагается дополнительно задействовать биофильтры, позволяющие разложить метан до оксида углерода (IV) и воды. Такой подход поможет избежать отрицательного эффекта от анаэробного разложения органических отходов.
Литература
1. Establishment of a Closed Artificial Ecosystem to Ensure Human Long-Term Survival on the Moon / Y. Fu [et al.]// bioRxiv. - 2021. - 23 p.
2. Юницкий, А.Э. Струнные транспортные системы: на Земле и в Космосе: науч. издание /А.Э. Юницкий. - Силакрогс: ПНБ принт, 2019. - 576 с.: ил.
3. Дегерменджи, А.Г. Создание искусственных замкнутых экосистем земного и космического назначения/А.Г. Дегерменджи, А.А. Тихомиров // Вестник Российской академии наук. - 2014. - Т 84, № 3. - С. 233-240.
4. Подсистема физико-химических реакторов минерализации отходов для биолого-технических систем жизнеобеспечения космического назначения /Е.А. Морозов [и др.]// Сибирский журнал науки и технологии. -2017. - Т18, № 3. - С. 585-591.
5. Sergey's Manual of Systematic Bacteriology. Vol. 5: The Actinobacteria / eds. W.B. Whitman [et al.]. - New York: Springer, 2012. - P. 171-206.
6. Cohan, F.M. Systematics: The Cohesive Nature of Bacterial Species Taxa /F.M. Cohan//Current Biology. - 2019. -Vol. 29, No. 5. - P. 169-172.
7. Лысак, В.В. Микробиология: учеб. пособие / В.В. Лы-сак. - Минск: БГУ 2008. - 343 с.
8. Rossello-Mora, R. Introducing a Digital Protologue: A Timely Move Towards a Database-Driven Systematics of Archaea and Bacteria /R. Rossello-Mora, M.E. Trujillo, I.C. Sutcliffe // Antonie Van Leeuwenhoek. - 2017. - No. 110. - P. 455-456.
9. Пучкова, Т.А. Микробиологическая очистка сточных вод: курс лекций [Электронный ресурс]/ Т.А. Пучкова. -Режим доступа: http://www.bio.bsu.by/microbio/files/ presentations/puchkova/microbiol_ochistka_vody.pdf. -Дата доступа: 24.03.2021
10. Demirel, B. Two-Phase Anaerobic Digestion Processes: A Review/ B. Demirel, O. Yenigun //Journal of Chemical Technology & Biotechnology. - 2002. - Vol. 77, No. 7. - P 743-755.
11. Christy, P.M. A Review on Anaerobic Decomposition and Enhancement of Biogas Production Through Enzymes and Microorganisms /P.M. Christy, LR. Gopinath, D. Divya//Renewable and Sustainable Energy Reviews. - 2014. - Vol. 34. - P167-173.
12. Cultivation of A Thermophiiic Ammonia Oxidizing Archaeon Synthesizing Crenarchaeol/J.R. de la Torre [et al]// Environmental Microbiology. - 2008. - Vol. 10, No. 3. - P 810-818.
13. Cultivation of Autotrophic Ammonia-Oxidizing Archaea from Marine Sediments in Coculture with Sulfur-Oxidizing Bacteria /B.-J. Park [et al]//Applied and Environmental Microbiology. - 2010. - Vol. 76, No. 22. - P 7575-7587.
14. Cultivation of Mesophilic Soil Crenarchaeotes in Enrichment Cultures from Plant Roots/H.M. Simon [et al]// Applied and Environmental Microbiology. - 2005. - Vol. 71, No. 8. - P. 4751-4760.
15. Modeling of Soil Nitrification Responses to Temperature Reveals Thermodynamic Differences between Ammonia-Oxidizing Activity of Archaea and Bacteria / A.E. Taylor [et al.]// The ISMEJournal. - 2017 - Vo. 11, No. 4. - P 896-904.
16. Evidence for Different Contributions of Archaea and Bacteria to the Ammonia-Oxidizing Potential of Diverse Oregon Soils /A.E. Taylor [et al.]//Applied and Environmental Microbiology. - 2010. - Vol. 76, No. 23. - P 7691-7698.
17. Верещак, С.Н. Применение реликтовых архебактерий как потенциальных микробиологических объектов в замкнутых экосистемах/ С.Н. Верещак, М.М. Парфенчик// Безракетная индустриализация ближнего космоса: проблемы, идеи, проекты: материалы III междунар. науч.-техн. конф, Марьина Горка, 12 сент. 2020 г. / Астроинженерные технологии, Струнные технологии; под общ. ред. А.Э. Юниц-кого. - Минск: СтройМедиаПроект, 2021. - С. 424-433.
18. Чусов, А.Н. Исследования состава биогаза на полигоне твёрдых бытовых отходов / А.Н. Чусов, В.И. Масликов, Д.В. Молодцов //Безопасность в техносфере. - 2013. - Т. 2, № 6. - С. 24-28.
19. Способ очистки отходящих газов и биофильтр для его осуществления: пат. RU 2106184 C1 / А. И. Хлытчиев, РИ. Милькина, Н.В. Лакеев, Б.А. Зимин. - Опубл. 10.03.1998.
20. Murrel, J.C. Molecular Ecology of Marine Methanotrophs / J.C. Murrel, A.J. Holmes // Molecular Ecology of Aquatic Microbes. - 1995. - Vol. 38. - P. 365-390.
21. Koo, Ch.W. Biochemistry of Aerobic Biological Methane Oxidation / Ch.W. Koo, A.C. Rosenzweig // Chemical Society Reviews. - 2021. - Vol. 50. - P. 3424-3436.
22. Methane-Oxidizing Communities in Lichen-Dominated Forested Tundra Are Composed Exclusively of High-Affinity USCa Methanotrophs / S.E. Belova [et al]// Microorganisms. - 2020. - Vol. 8, No. 12. - P. 20-47.
23. Biodegradation of Benzo[a]pyrene, Toluene, and Formaldehyde from the Gas Fhase by a Consortium of Rhodococcus erythropolis and Fusarium solani / A. Vergara-Fernandez [et al.]//Applied Microbiology and Biotechnology. - 2017. -Vol. 1, No. 17. - P 6765-6777
24. A Comparative Assessment of the Performance of Fungal-Bacterial and Fungal Biofilters for Methane Abatement / A. Vergara-Fernandez [et al] //Journal of Environmental Chemical Engineering. - 2020. - Vol. 8, No. 5. - P. 2-8.
