CC BY
6"BicHUK стоматологи", № 1, 2018
УДК 616.08:517.15:616.311
А. В. Вальда1, М. А. Остафийчук2, А. П. Левицкий3, д. биол. н., С. А. Шнайдер3, д. мед. н.
'Одесский национальный медицинский университет 2Высшее государственное учебное учреждение «Буковинский государственный медицинский университет» Государственное учреждение «Институт стоматологии и челюстно-лицевой хирургии Национальной академии медицинских наук Украины»
РОЛЬ ИММУНОДЕФИЦИТА В РАЗВИТИИ КОРТИКОСТЕРОИДНОГО СТОМАТИТА У КРЫС
У крыс, получавших в течение 14 дней преднизолон, в слизистой полости рта развивается дисбиоз и воспаление, которые являются следствием иммунодефицита как специфического (лимфоцитарного), так и неспецифического (лизоцимного).
Ключевые слова: стоматит, кортикостероид, иммунодефицит, дисбиоз, лизоцим.
О. В. Вальда1, М. О. Остафшчук2, А. П. Левицький3, С. А. Шнайдер3
'Одеський нацюнальний медичний ушверситет 2Вищий державний навчальний заклад «Буковинський державний медичний уншерситет» 3 Державна установа «1нститут стоматологи та щелепно-лицево! хiрурril Нацюнально1 академи медичних наук Украши»
РОЛЬ 1МУНОДЕФ1ЦИТУ В РОЗВИТКУ КОРТИКОСТЕРО1ДНОГО СТОМАТИТУ У ЩУР1В
У щурiв, як отримували на протязi 14 днiв предтзо-лон, в слизовш оболонц порожнини рота розвиваеть-ся дисбюз i запалення, ят е на^дком iмунодефiциту, як специфiчного (niмфоцитарного) так i неспецифiч-ного лзоцимного)
Ключов1 слова: стоматит, кортикостеро'1'д, iмуно-дефщит, дисбiоз, л1зоцим.
A. V. Valda1, M. A. Ostafychuk2, A. P. Levitsky3, S. A. Shnajder3
'Odessa National Medical University 2Bukovinian State University 'State Etablishment «The Institute of Stomatology and Maxillo-Facial Surgery of the National Academy of Medical Science of Ukraine»
THE ROLE OF IMMUNODEFICITE IN THE DEVELOPMENT OF CORTICOSTEROID STOMATITIS IN RATS
The aim. To determine state of specific and nonspecific immunities and stomatitis presence in rats which received prednisolone.
The materials and methods. Prednisolone introduced rats by per os in dose 10 mg/kg firts 2 days and in dose 5 mg/kg following 12 days. The content of leucocytes, lymphocytes and neutrophils determined in blood. The lyso-zyme activity determined in serum, liver and oral mucosa. The levels of activity urease, elastase, catalase and content of malonic dialdehide determined into oral mucosa. The findings. The specific immunity (lymphocyte) and nonspecific immunity (lysozyme) decreased after predni-solone introduce into all tissues. The stomatitis and dysbiosis developed into oral mucosa rats, which received prednisolone.
Key words: stomatitis, corticosteroid, immunodeficite, dysbiosis, lysozym.
Побочные действия кортикостероидной терапии при длительном лечении артритов или бронхиальной астмы состоят в развитии остео-пороза, гепатита и поражении слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта, воспалительно-дистрофических процессах в пародонте [1-5]. В патогенезе этих осложнений существенную роль играют дисбиотические явления [6, 7], развитие которых определяется наличием иммунодефицита [8, 9].
Цель настоящего исследования. Определение состояния неспецифического и специфического иммунитетов у крыс, получавших кортико-стероиды и у которых возникли воспалительно -дистрофические процессы в слизистой оболочке полости рта.
Состояние специфического иммунитета оценивали по уровню в крови лимфоцитов и лимфо-цитарному индексу, а состояние неспецифического иммунитета - по активности лизоцима, содержанию нейтрофилов и продуктов перекисно-го окисления липидов.
Материалы и методы исследования. В работе использовали препарат преднизолона «Преднизолон-Дарница», в таблетках по 5 мг, производства ЧАО «Фармфирма «Дарница», № регистрации UA/2587/02/01.
Эксперименты были проведены на 32 белых крысах линии Вистар, характеристика которых представлена в таблице 1. Контрольную группу составляли 16 крыс, которые получали стандартный зерновой рацион вивария. Опытная группа (16 крыс) получала per os преднизолон: по 10 мг/кг первые 2 дня и по 5 мг/кг последующие 12 дней. Для сравнения влияния пола и возраста на биохимические показатели слизистой оболочки полости рта крысы были разделены на 2 экспе-
© Вальда А. В., Остафийчук М.А., Леыицкий А. П., Шнайдер С. А., 2018.
"Вiсник стоматологИ", № 1, 2018
риментальные серии (табл. 1). мг/кг) путем тотального кровопускания из серд-
Умерщвление животных осуществляли на ца. 15-й день под тиопенталовым наркозом (20
Таблица 1
Характеристика экспериментальных серий (белые крысы линии Вистар, контроль = интактные, опыт = преднизолон)
Показатели I се рия II серия
контроль опыт контроль опыт
Число крыс 8 8 8 8
Пол самки самки самцы самцы
Возраст, мес. 3 3 12 12
Живая маса, г 139 140 374 381
Суточная доза преднизолона 0 10 мг/кг - 2 дн. 5 мг/кг - 12 дн. 0 10 мг/кг - 2 дн. 5 мг/кг - 12 дн.
Продолжительность опыта, дн. 14 14 14 14
В крови определяли содержание лейкоцитов, нейтрофилов и лимфоцитов и по соотношению лимфоциты/нейтрофилы рассчитывали лимфо-цитарный индекс (ЛИ) [10]. В сыворотке крови определяли активность лизоцима (показатель неспецифического иммунитета) [11]. Активность лизоцима определяли также и в печени, учитывая ее важную роль в функциональной активности лизоцима [12].
В гомогенате слизистой щеки определяли уровень маркеров воспаления [13]: содержание
малонового диальдегида (МДА) и активность эластазы. В слизистой определяли активность уреазы (показатель микробного обсеменения) [14], активность лизоцима [11] и по соотношению их относительных активностей рассчитывали степень дисбиоза по А. П. Левицкому [14]. О состоянии антиоксидантной системы слизистой судили по активности каталазы [13] и по антиок-сидантно-прооксидантному индексу АПИ [13].
Результаты исследований подвергали стандартной статобработке.
Таблица 2
Показатели специфического (Л и ЛИ) и неспецифического (лизоцим) иммунитета
у крыс,получавших предшзолон
Показатели Контроль п=16 Опыт п=16
Кровь
Лейкоциты, х109/л 14,4±0,6 16,1±0,5 р<0,05
Лимфоциты (Л), х109/л 8,34±0,5 5,21±0,4 р<0,01
Нейтрофилы (Н),_ 4,95±0,3 9,80±0,4 р<0,01
Лимфоцитарный индекс (Л/Н) 1,68±0,11 0,53±0,03 р<0,01
Сыворотка крови
Лизоцим, ед/л 143±8 103±7 р<0,05
Печень
Лизоцим, ед/кг 116±10 53±7 р<0,01
Результаты и их обсуждение. В табл. 2 представлены результаты определения лейкоцитов крови и активности лизоцима в сыворотке и в печени. Из этих данных видно, что введение преднизолона достоверно увеличивает содержание лейкоцитов за счет двукратного увеличения числа нейтрофилов. При этом в 1,5 раза снижается содержание лимфоцитов и более чем в 3 раза - лимфоцитарный индекс. Это может свиде-
тельствовать об угнетении специфического иммунитета под влиянием преднизолона.
Активность лизоцима достоверно снижается и в сыворотке, и в печени крыс, получавших предни-золон, что свидетельствует о снижении уровня этого звена неспецифического иммунитета.
В табл. 3 представлены результаты определения в слизистой щеки крыс ряда биохимических показателей. Видно, что в обеих сериях
"Вiсник стоматологи", № 1, 2018
опытов наблюдается достоверное увеличение что свидетельствует о развитии воспаления (сто-уровня маркеров воспаления (МДА и эластазы), матита).
Таблица 3
Биохимические показатели слизистой щеки у крыс, получавших предшзолон
Показатели I се рия II серия
контроль n=8 опыт n=8 контроль n=8 опыт n=8
МДА, ммоль/кг 32,6±1,2 44,7±3,9 р<0,01 10,2±1,6 10,0±1,1 р<0,05
Эластаза, нкат/кг 44±3 55±4 р<0,05 33±2 43±2 р<0,05
Уреаза, мк-кат/кг 0,59±0,05 0,68±0,04 р>0,05 1,11±0,31 1,65±0,29 р>0,05
Лизоцим, ед/кг 440±50 130±50 р<0,01 194±20 84±10 р<0,01
Каталаза, ммоль/кг 9,1±0,3 6,9±0,3 р<0,01 5,6±0,5 5,2±0,5 р>0,3
АПИ 2,73±0,13 1,54±0,10 р<0,01 5,49±0,41 3,25±0,29 р<0,05
Степень дисбиоза 1,00±0,12 3,83±0,27 р<0,01 1,00±0,15 3,47±0,24 р<0,01
У крыс, получавших преднизолон, наблюдается явная тенденция к росту активности уреазы, а следовательно увеличению микробной обсеме-ненности. Возможной причиной этого может быть резкое (в 2-3,5 раза) снижение активности лизоцима.
Активность каталазы достоверно снижается лишь в I серии опытов, тогда как индекс АПИ достоверно снижается в обеих сериях опытов. Эти данные можно расценивать как ослабление антиоксидантного потенциала слизистой, возможно, необходимого для увеличения уровня свободно-радикального окисления и образования бактерицидных веществ перекисной природы.
Введение преднизолона значительно (в 3,53,8 раза) увеличивает степень дисбиоза в слизистой полости рта, что может быть существенной причиной развития стоматита.
Полученные нами данные дают основание рекомендовать для профилактики кортикостеро-идного стоматита использовать антидисбиотиче-ские средства.
Выводы. 1. Введение преднизолона снижает уровень специфического (лимфоцитарного) и неспецифического (лизоцимного) иммунитета.
2. Введение преднизолона вызывает развитие в слизистой полости рта дисбиоза и на этой основе - стоматита.
3. Для профилактики кортикостероидного стоматита, по-видимому, целесообразно использовать антидисбиотические средства.
Список литературы
1. Состояние печени крыс с преднизолоновым иммунодефицитом / В. Л. Васюк, А. И. Гоженко, А. П. Левицкий [и др.] // Journal of Health Sciences. - 2014. - т. 04, № 08. - С. 181-188.
2. Гиперкортицизм и ожирение / Н. А. Кравчун, Л. Г. Полозова, С. С. Попова [и др.] // Международный эндокринологический журнал. - 2014. - № 2(58). - С. 81-84.
3. Генделека Г. Ф. Стероидный диабет. Особенности диагностики и лечения / Г. Ф. Генделека, Е. Н. Павловская // Вгсник морсько! медицини. - 2004. - № 1(24). - С. 85-87.
4. Голованова Н. Ю. Стероидный остеопороз при диффузных болезнях соединительной ткани и системных вас-кулитах у детей / Н. Ю. Голованова, Г. А. Лыскина, А. Г. Ильин // Российский педиатрический журнал. - 1998. - № 3.
- С. 8-10.
5. Stolyar V. Вплив пол1валентного орального гелю на бiохiмiчнi показники дисбюзу i запалення в яснах щур1в з предтзолоновим пародонтитом / V. Stolyar, A. Borysenko, A. Levitsky // Journal of Health Sciences. - 2014. - т. 04, № 02.
- С. 257-268.
6. Левицкий А. П. Взаимосвязь дисбактериоза и стоматологических заболеваний у детей (обзор литературы) / А. П. Левицкий, О. Э. Рейзвих // East European Scientific Journal (Wschodnioeuropejskie Crasopismo Nankowe). - 2016. v. 1, № 5(9). - P. 99-103.
7. Микробиологические и иммунологические характеристики дисбиотических нарушений биотопов слизистых оболочек респираторного и урогенитального трактов / Е. А. Воропаева, С. С. Афанасьев, В. А. Алешкин [и др.]. // Вестник РАМН. - 2006. - № 1. - С. 3-5.
8. Мельников О. Ф. Местный иммунитете и концепция диагностики иммунной недостаточности на основе определения уровня защитных белков в секретах / О. Ф. Мельников, Д. Д. Заболотная // Сучасш медичш технологи.
- 2009. - № 2. - С. 37-42.
9. Мелехов С. В. Состояние местного иммунитета и микробиоценоза полости рта у больных хроническим генерализованным пародонтитом / С. В. Мелехов, Н. В. Колесникова, Е. С. Овчаренко // Пародонтология. - 2013. - т. 18, № 1 (66). - С. 3-9.
10. Базарнова М. А. (ред.). Руководство по клинической лабораторной диагностике. Ч. 1 / М. А. Базарнова - К.: Вища школа, 1981. - С. 55.
11. Левицкий А. П. Лизоцим вместо антибиотиков / А. П. Левицкий. - Одесса: КП ОГТ, 2005. - 74 с.
12. Маянский Д. Н. Влияние лизоцима на резистентность гепатоцитов / Д. Н. Маянский, С. Н. Кутина, Э. Г. Щербакова // Антибиотики и химиотерапия. - 1988. - т. 33, № 2. - С. 128-131.
"BicnuK стоматологИ", № 1, 2018
13. Биохимические маркеры воспаления тканей ротовой полости: методические рекомендации / А. П. Левицкий, О. В. Деньга, О. А. Макаренко [и др.] - Одесса: КП ОГТ, 2010. - 16 с.
14. Патент на корисну модель, Украша 43140, МПК (2009) G01N 33/48. Споиб оцшки ступеня дисбюзу (дисбак-терюзу) оргашв i тканин / Левицький А. П., Деньга О. В., Селшанська I. О. [та ш.]. - Опубл. 10.08.2009, Бюл. № 15.
REFERENCES
1. Vasyuk V. L., Gozhenko A. I., Levitsky A. P.i dr.
State of the rats liver with prednisolone immunodeficiency. Journal of Health Sciences. 2014; 4(8): 181-188.
2. Kravchun N. A., Polozova L. G., Popova S. S. i dr. Cushing and obesity. Mezhdunarodnyy endokrinologicheskiy zhurnal. 2012; 2(58): 81-84.
3. Gendeleka G. F., Pavlovskaia E. N. The steroid diabet. The peculiarity of diagnostic and therapy. Visnik morskoi meditsini. 2004; 1(24): 85-87.
4. Golovanova N. Yu., Lyskina G. A., Ilyn A. G. Steroid osteoporosis in diffuse connective tissue diseases and systemic vasculitis in children. Rossiyskiy pediatricheskiy zhurnal. 1998; 3: 8-10.
5. Stolyar V., Borysenko A., Levitsky A. The effect of polyvalent oral gel on biochemical parameters of dysbiosis and gum inflammation in the rats with prednizolone-induced periodontitis. Journal of Health Sciences. 2014; 04(02): 257-268.
6. Levitsky A. P., Reizvikh O. E. The correlation of dysbiosis and stomatological diseases in children (review). East European Scientific Journal (Wschodnioeuropejskie Crasopismo Nankowe). 2016; 1(5(9): 99-103.
7. Voropaeva E. A., Afanasev S. S., Aleshkin V. A. i dr.
The microbiological and immunological references of dysbiotic disturbances of mucosa of respirator and urogenital tracts. VestnikRAMN. 2006; 1: 3-5.
8. Melnikov O. F., Zabolotnaya D. D. Local immune system and diagnostics concept of immune deficiency on the basis of determining the level of protective proteins in the secretions. Suchasni medychni tekhnologii. 2009; 2: 37-42.
9. Melekhov S. V., Kolesnikova N. V., Ovcharenko E. S. The local immunity and microbiocenose states of oral cavity in ills with the chronic general periodontitis. Parodontologiia. 2013; 18(1(66): 3-9.
10. Bazarnova M. A. Rukovodstvo po klinicheskoy laboratornoy diagnostike [Manual of Clinical Laboratory Diagnostics]. Ch. 1. Kiyev, Vyshcha shkola; 1981: 55.
11. Levitsky A. P. Lizotsym vmesto antibiotikov [Lyso-zyme instead of antibiotics]. Оdеssа, KP OGT, 2005: 74.
12. Maianskii D. N., Kutina S. N., Shcherbakova E. G. Influence of lysozyme on hepatocytes resistence. Antibiotiki i khimioterapiia. 1988; 33(2): 128-131.
13. Levitsky A. P., Denga O. V., Makarenko O. A. i dr. Biokhimicheskie markery vospaleniya tkaney rotovoy polosti: metodicheskie rekomendatsii [Biochemical markers of inflammation of oral cavity tissue: method guidelines]. Оdеssа, KP OGT, 2010: 16.
14. Levitsky A. P., Denga O. V., Selivanskaya I. A. i dr. The method of estimation of the degree of dysbiosis (dysbacteriosis) of organs and tissues. Patent of Ukraine 43140. IPC (2009) G01N 33/48. Application number u 200815092. Date of filling: 26.12.2008. Publ.: 10.08.2009. Bul. № 15.
Поступила 20.02.18
