CC BY
36
BASIC RESEARCH - PRACTICAL MEDICINE ФУНДАМЕНТАЛЬНАЯ НАУКА - ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗДРАВООХРАНЕНИЮ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2017
УДК 618.11+617.51/.53]-006.04-085.277.3.015.4
Гапонова А.В., Серебрийский И.Г., Киямова Р.Г.
РОЛЬ ГЕНОВ RAD50 И SMARCA5 В РЕГУЛЯЦИИ чУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К ЦИСПЛАТИНУ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК РАКА ЯИчНИКА И РАКА ГОЛОВЫ И ШЕИ
ФГАОУ ВПО «Казанский (Приволжский) федеральный университет», 420008, г. Казань, Россия
Цель исследования - оценка влияния генов RAD50 и SMARCA5 на чувствительность к цисплатину и другим ДНК-повреждающим агентам, используемым в терапии опухолевых заболеваний (5-фторурацил, олапариб), оценка роли данных генов в регуляции ответа на повреждение ДНК в клеточных линиях рака яичника (OVCAR8) и головы и шеи (SCC61, SCC25). Материал и методы. Нами была выполнена трансфекция опухолевых клеток малыми интерферирующими РНК (миРНК) («Qiagen», Германия) для осуществления нокдауна генов RAD50 и SMARCA5, а также контрольных генов. Выживаемость опухолевых клеток в присутствии и отсутствие ДНК-повреждающих агентов оценивали спектро-фотометрическим методом с использованием реагента CellTiterBlue («Promega», США). Для оценки роли RAD50 и SMARCA5 в регуляции ответа на повреждение ДНК мы выполнили анализ фосфорилирования гистонового белка H2AX методом иммунофлуоресцентной микроскопии.
Результаты. Нами было показано влияние генов RAD50 и SMARCA5 на выживаемость опухолевых клеток и регуляцию чувствительности к цисплатину и другим ДНК-повреждающим агентам (5-фторурацил, олапариб) в клеточных линиях рака головы и шеи (SCC61, SCC25) и рака яичника (OVCAR-8). Полученные данные указывают на роль SMARCA5 в регуляции базового уровня фосфорилирования гистонового белка H2AX в отсутствие повреждения ДНК. Заключение. Полученные нами данные характеризуют гены RAD50 и SMARCA5 как перспективные терапевтические мишени в лечении и предиктивные маркеры ответа на терапию цисплатином и другими ДНК-повреждающими препаратами у пациентов с плоскоклеточной карциномой головы и шеи и раком яичника.
Ключевые слова: рак яичника; опухоли головы и шеи; цисплатин; химиотерапия; репарация ДНК.
Для цитирования: Гапонова А.В., Серебрийский И.Г., Киямова Р.Г. Роль генов RAD50 и SMARCA5 в регуляции чувствительности к цисплатину опухолевых клеток рака яичника и рака головы и шеи. Российский онкологический журнал. 2017; 22(1): 39-43. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/1028-9984-2017-22-1-39-43 Для корреспонденции: Гапонова Анна Владиславовна, младший научный сотрудник кафедры биохимии; 420008, г. Казань, ул. Кремлевская, д. 18, E-mail: [email protected].
GaponovaA.V., SerebriiskiiI.G., KiyamovaR.G.
THE ROLE OF GENES RAD50 AND SMARCA5 IN REGULATION OF SENSITIVITY TO CISPLATIN IN TUMOR CELLS OF OVARIAN, HEAD AND NECK CANCER Kazan Federal University, Kazan, 420008, Russian Federation
Aim of the study. To assess the role ofgenes RAD50 and SMARCA5 in regulation of sensitivity to cisplatin and other anticancer DNA damaging drugs (5-fluorouracil, olaparib), to assess the role of these genes in the response to the DNA damage in ovarian cancer (OVCAR-8) and head and neck cancer cell lines (SCC61, SCC25).
Material and Methods. We used small interfering RNAs (siRNAs) (Qiagen,Germany) to deplete either RAD50 andSMARCA5 or control genes and under basal and DNA damaging drug-treatment conditions, we assessed cell viability with the use of Cell Titer Blue reagent (Promega,USA) with following spectrophotometry. To assess the role ofgenes in response to DNA damage, analysis ofphospho-H2AX focus formation was performed by means of using immunofluorescence microscopy. Results. We demonstrated the role of RAD50 and SMARCA5 in regulation ofsurvival and sensitivity of ovarian cancer (OVCAR-8), head and neck cancer cell lines (SCC61, SCC25) to cisplatin and other DNA damaging drugs (5-fluorouracil, olaparib). Our data suggest the role of SMARCA5 in regulation of baseline histone H2AX protein phosphorylation in the absence of DNA damage. Conclusion. Our findings characterize genes RAD50 and SMARCA5 as promising therapeutic targets and predictive markers for response to cisplatin and other DNA damaging drugs in patients with ovarian cancer and squamous cell carcinoma of head and neck. Keywords: ovarian cancer; head and neck cancer; cisplatin; chemotherapy; DNA repair.
For citation: Gaponova A.V., Serebriiskii I.G., Kiyamova R.G. The role of genes RAD50 and SMARCA5 in regulation of sensitivity to cisplatin in tumor cells of ovarian, head and neck cancer. Rossiiskii onkologicheskii zhurnal. (Russian Journal of Oncology). 2017; 22(1): 39-43. (In Russ). DOI: http://dx.doi.org/10.18821/1028-9984-2017-22-1-39-43
For correspondence: Anna V. Gaponova, Junior Researcher of the Department of Biochemistry; Kazan, 420008, Russian Federation. E-mail: [email protected]. Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Acknowledgment. A study was sponsored by a grant from the Russian Scientific Foundation (project № 1515-20032)
Received 15 September 2016 Accepted 22 September 2016
ФУНДАМЕНТАЛЬНАЯ НАУКА - ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗДРАВООХРАНЕНИЮ
Несмотря на прогрессивное развитие таргетных противоопухолевых препаратов, воздействующих на специфические для опухолевых клеток молекулярные мишени, применение классических химиопрепаратов с высоким цитотоксическим действием продолжает занимать значительное место в монотерапии и комбинированной терапии рака.
Цисплатин, несмотря на выраженное побочное действие, остается стандартом терапии для ряда опухолей, таких как рак яичника, яичка, молочной железы (РМЖ), легкого, головы и шеи, желудка, толстой кишки, почки, мочевого пузыря и других видов рака. Цисплатин вызывает нарушения молекулярной структуры ДНК, которые заключаются в формировании моноаддуктов и поперечных сшивок, индуцирующих образование двухцепочечных разрывов ДНК и активацию сигнальных путей апоптоза в опухолевых клетках [1, 2].
Следует отметить, что эффект цисплатина варьирует у разных больных, что предположительно связано с различным ответом на применяемую терапию вследствие индивидуального разнообразия молекулярных нарушений в опухолях пациентов. Прогноз течения заболевания нередко определяется степенью чувствительности опухоли к терапии цисплатином. Устойчивые к действию цисплатина опухоли имеют крайне неблагоприятный прогноз.
Молекулярные механизмы устойчивости к циспла-тину не до конца изучены, однако известно, что в них участвуют сигнальные пути, активирующиеся в ответ на повреждение ДНК (DDR - DNA Damage Response) [3-5]. Понимание молекулярных механизмов, лежащих в основе действия цисплатина, а также поиск новых маркеров, вовлеченных в регуляцию ответа на терапию цисплатином, могут не только значительно улучшить эффект этого препарата, но также позволят предсказывать, будет ли лечение эффективным у того или иного больного.
Для поиска потенциальных опухолевых маркеров нами был использован метод SEREX (Serological Identification of cDNA Expression Libraries), который выявил два аутоантигена медуллярной карциномы молочной железы, а именно RAD50 и SMARCA5, которые могут быть вовлечены в регуляцию чувствительности злокачественных опухолей к терапии ДНК повреждающими агентами и являются потенциальными преди-ктивными маркерами терапии цисплатином [6-8].
RAD50 входит в состав комплекса MRN (Mre11/ RAD50/Nbs1), осуществляющего репарацию двухце-почечных разрывов ДНК и поддержание целостности теломер [9, 10]. Было показано, что подавление экспрессии RAD50 влияет на чувствительность клеток рака молочной железы к повреждающему действию цисплатина [11, 12].
Белок SMARCA5/SNF2H входит в состав различных ремоделирующих хроматин комплексов, а также вовлечен в ответ на повреждения ДНК. Было показано, что подавление экспрессии SMARCA5 увеличивает чувствительность опухолевых клеток к действию ионизирующей радиации, которое заключается в формировании двухцепочечных разрывов ДНК [13]. Эти данные могут свидетельствовать о потенциальной вовлеченности SMARCA5 в регуляцию ответа на терапию цисплатином, который имеет сходный механизм с действием ионизирующей радиации. Молекулярные механизмы, ответственные за привлечение RAD50 и SMARCA5 к месту повреждения ДНК, схематично представлены на рис. 1.
Целью данной работы являлась оценка влияния генов RAD50 и SMARCA5 на чувствительность к ци-сплатину и их роли в регуляции ответа на повреждение ДНК в клеточных линиях рака яичника (OVCAR8) и
головы и шеи (SCC61, SCC25). Для оценки специфичности данного влияния мы также изучали действие нокдауна данных генов на чувствительность к ряду других химиопрепаратов, таких как 5-фторурацил (5-ФУ) и олапариб, имеющих отличный от цисплатина молекулярный механизм повреждения ДНК. 5-ФУ приводит к угнетению репликации ДНК путем истощения запаса тимина в клетке, а олапариб вызывает повреждение ДНК путем ингибирования поли-(АДФ-рибоза)-полимеразы (PARP1), участвующей в репарации ДНК.
Материал и методы
Культура клеток
В экспериментах in vitro были использованы клеточные линии плоскоклеточной карциномы головы и шеи SCC61 и SCC25 (American Type Culture Collection (ATCC), США), а также клеточная линия карциномы яичника OVCAR8, резистентная к действию цисплатина. Клетки SCC61 и SCC25 культивировали в бреде DMEM-F12, содержащей 10% сыворотки теленка и 1% L-глютамин, пенициллин и стрептомицин («Sigma», США). Клетки OVCAR8 культивировали в среде RPMI-1640, также содержащей 10% сыворотки теленка и 1% L-глютамин, пенициллин и стрептомицин.
Трансфекция клеток при помощи миРНК, обработка клеток лекарственными препаратами, анализ выживаемости клеток
Все миРНК были приобретены в фирме «Qiagen» (Германия). Трансфекцию клеток проводили в 96-лу-ночном планшете при помощи 10 нМ миРНК и транс-фекционного реагента DF1 («Dharmacon», США) согласно протоколу производителя. Количество клеток, вносимых в каждую лунку 96-луночного планшета, различалось между клеточными линиями: 10 000 клеток на лунку для SCC61 и SCC25, 4000 клеток на лунку для OVCAR8 в финальном объеме питательной среды 90 мкл на лунку. Через 24 ч после трансфекции к клеткам добавляли лекарственные вещества, применяемые в лечении опухолей головы и шеи, а также рака яичника: цисплатин, (5-ФУ) и олапариб (Fox Chase Cancer Center, Cell Culture Facility, США). Через 72 ч после добавления лекарств проводили анализ выживаемости
Рис. 1. Схематическое изображение молекулярных механизмов, ответственных за привлечение RAD50 и SMARCA5 к месту повреждения ДНК. Нарушение двухцепочечной структуры ДНК ведет к активации гистонового белка Н2АХ и белка PARP1. Данные процессы в свою очередь запускают привлечение RAD50 и SMARCA с последующей репарацией повреждения.
BASIC RESEARCH - PRACTICAL MEDICINE
SCC25
Рис. 2. Кривые выживаемости клеток SCC25 (а), SCC61 (б), OVCAR-8 (в) в различных концентрациях цисплатина (кривые 1С50).
SCC61
1 2 3 4 5 102030 4050 Концентрация цисплатина, иМ
1 2 3 4 5 10 20 30 40 50 Концентрация цисплатина, иМ
100 908070605040302010-
0-
OVCAR8
1 2 3 4 5 10 20 30 40 50 Концентрация цисплатина, иМ
клеток. К клеткам добавляли 10 мкл на лунку реагента Cell Titer Blue («Promega», США). Через 3 ч после добавления реагента флюоресценцию клеток считывали при помощи спектрофотометра на длине волны 573 нм. Интенсивность сигнала была прямо пропорциональна количеству жизнеспособных клеток в лунке. Ген REV3L, известный как регулятор чувствительности к цисплатину согласно данным литературы и связанный с DDR, был взят в качестве положительного контроля сенситизации к цисплатину [14-16]. В качестве отрицательного контроля использовали РНК против гена GL2, кодирующего люциферазу светлячка, не имеющую мишени в клетках человека. Результаты анализа были нормализованы на контроль GL2.
Анализ фосфорилирования гистонового белка H2AX методом иммунофлуоресцентной микроскопии
Количественная оценка фокусов репарации ДНК, возникающих в результате фосфорилирования гистоно-вого белка H2AX (y-H2AX - обозначение для фосфори-лированной формы белка), который является маркером двухцепочечных разрывов ДНК, выполнена при помощи автоматизированного высокопроизводительного флуоресцентного микроскопа ImageXpress Micro с использованием программного обеспечения MetaXpress и AcuityXpress («Molecular Devices», Саннивейл, США). Предварительно была проведена трансфекция клеток OVCAR8, SCC61 и SCC25 в 96-луночном планшете. миРНК против гена CHEK1 использовали в качестве положительного контроля, поскольку, согласно данным литературы, нокдаун этого гена сам по себе повышает базовый уровень фокусов репарации ДНК, образованных y-H2AX [17, 18]. миРНК против гена GL2 использовали в качестве отрицательного контроля. Через 24 ч после трансфекции к клеткам было добавлено 16 и 30 uM цисплатина или питательная среда в том же объеме
в качестве контроля. Через 18 ч клетки отмыли холодным натрий-фосфатным буфером и зафиксировали 4% параформальдегидом, в течение 10 мин клетки были вновь отмыты и пермеабилизованы 0,1% раствором Triton-X100 («Sigma-Aldrich» США). Окрашивание клеток проводили с использованием первичных антител к Y-H2AX (1:1000, Mouse Monoclonal, Millipore Upstate, Биллерика, США) в течение 12 ч при 4 °C и вторичных антител, меченных FITC (1:1000, goat anti-mouse IgG (H+L), «AlexaFluor»® 488 conjugate), в течение 1 ч при комнатной температуре.
Результаты
Влияние нокдауна генов RAD50 и SMARCA5 на выживаемость и чувствительность к цисплатину и другим химиопрепаратам в клеточных линиях рака яичника OVCAR8 и плоскоклеточной карциномы головы и шеи SCC61 и SCC25
Нами были установлены влияние, которое оказывает нокдаун RAD50 и SMARCA5 на жизнеспособность опухолевых клеток человека, и роль данных генов в регуляции чувствительности опухолевых клеток к ци-сплатину, а также другим распространенным в терапии рака яичника и опухолей головы и шеи химиопрепара-там, таким как 5-ФУ и олапариб.
Для нокдауна каждого гена использовали смесь двух лучших миРНК, заявленных фирмой-производителем («Qiagen», Германия). Через 24 ч после трансфекции к клеткам добавляли цисплатин в концентрации IC20-IC30 (рис. 2) и питательную среду в таком же объеме, что и цисплатин, в качестве отрицательного контроля.
Нокдаун генов RAD50 и SMARCA5 значительно снижал жизнеспособность (на 30-60%) опухолевых клеток (рис. 3). При этом наиболее выраженный цито-токсический эффект нокдауна данных генов был пока-
см 1.5-,
I
œ I 1-°Н
s е
X g
£ = 0.5Н
s
*
а
SCC25
Т ****
JL,
I
0,0
миРНК GL2 RAD50 SMARCA5
1,5-1 1,00,50,0-
б SCC61
**** **** ****
****
GL2 RAD50 SMARCA5
1,5-1 1,00,50,0-
Контроль Щ Цисплатин ^ 5-ФУ §§§ Олапариб
В
OVCAR8
**** **** х
GL2 RAD50 SMARCA5
Рис. 3. Влияние нокдауна генов RAD50 и SMARCA5 на выживаемость опухолевых клеток (контроль), а также на их чувствительность к цисплатину, 5-ФУ и олапарибу в клеточных линиях плоскоклеточной карциномы головы и шеи SCC25 (а), SCC61 (б) и рака яичника OVCAR8 (в) (данные нормализованы на GL2-контроль). ** - р < 0,01, **** - р < 0,0001 статистическая значимость по сравнению — с GL2.
ФУНДАМЕНТАЛЬНАЯ НАУКА - ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗДРАВООХРАНЕНИЮ
зан в клеточной линии рака яичника OVCAR-8, резистентной к действию цисплатина (см. рис. 3, в). Таким образом, можно предположить, что экспрессия этих генов играет существенную роль в жизнедеятельности опухолевых клеток.
Мы оценивали влияние нокдауна генов RAD50 и SMARCA5 на чувствительность клеток непосредственно к цисплатину. После 72 ч обработки препаратом мы обнаружили повышение чувствительности к токсическому действию цисплатина в клеточных линиях опухоли головы и шеи с нокдауном генов RAD50 и SMARCA5 (для нокдауна данного гена эффект сенсити-зации наблюдался по крайней мере в одной из клеточных линий) (см. рис. 2, а, б). Эти результаты коррелируют с данными, полученными на клеточных линиях рака молочной железы для гена RAD50 [11].
В клеточной линии OVCAR-8, полученной от пациентки с приобретенной устойчивостью к терапии цисплатином, также наблюдался выраженный эффект сенситизации к цисплатину в случае нокдауна генов RAD50 и SMARCA5 (см. рис. 2, в). Эти данные могут свидетельствовать о том, что гены RAD50 и SMARCA5 могут быть вовлечены в механизм резистентности клеточной линии OVCAR8 к действию цисплатина.
Мы также определяли, насколько специфичен к действию цисплатина оказываемый эффект сенситизации, повторив эксперимент с участием других препаратов, повреждающих ДНК.
Паттерны сенситизации к 5-ФУ и олапарибу были сходны с паттерном чувствительности к цисплатину (см. рис. 2). Можно предположить, что данный эффект связан со сходными молекулярными механизмами, определяющими чувствительность опухолевых клеток к данным ДНК-повреждающим препаратам. Так, распознавание повреждений ДНК и активация систем ответа на повреждение - базовый неспеци-фический процесс, не зависящий от рода повреждающего агента (ионизирующая радиация или химиотерапевтический препарат). Повреждение ДНК связано с фосфорилированием главных киназ ATR и ATM, отвечающим за активацию множества сигнальных путей, ответственных за различные виды репарации и регуляцию клеточного цикла в клетке. Под
действием киназ АТИ/АТМ с последующей активацией киназ СНЕК1 и СНЕК2 [19] в области повреждения ДНК фосфорилируется гистоновый белок Н2АХ, что является первым этапом в запуске сигнального каскада, вызывающего привлечение в место повреждения белков и сборку комплексов репарации.
Нарушение ответа на повреждение ДНК на самых ранних этапах может лежать в основе сенситизации опухолевых клеток с нокдауном генов RAD50 и SMARCA5 к действию ДНК повреждающих препаратов.
Влияние нокдауна генов RAD50 и SMARCA5 на фос-форилирование гистонового белка Н2ЛХ, известного маркера повреждения ДНК в клеточной линии рака яичника OVCAR-8 и плоскоклеточной карциномы головы и шеи SCC6l и SCC25
Для проверки данной гипотезы о возможном молекулярном механизме, лежащем в основе сенситизации опухолевых клеток с нокдауном генов RAD50 и SMARCA5 к ДНК-повреждающим препаратам, мы исследовали влияние нокдауна данных генов на формирование фокусов репарации - Н2АХ. Хорошо известно, что повреждение ДНК, в том числе вызванное действием цисплатина, характеризуется формированием фокусов репарации, которые возникают в результате фосфорилирования ги-стонового белка Н2АХ (у-Н2АХ) [20, 21].
Было показано, что нокдаун гена SMARCA5 не оказывал влияния на уровень у-Н2АХ в присутствии цисплатина, однако приводил к увеличению базового уровня фокусов у-Н2АХ в контрольных образцах без добавления цисплатина. В то же время нокдаун гена RAD50 не менял ни базовый у-Н2АХ, ни уровень фос-форилирования гистонового белка в присутствии ци-сплатина (рис. 4).
Данные результаты указывают на роль SMARCA5 в регуляции уровня фосфорилирования гистонового белка Н2АХ. Отсутствие влияния нокдауна генов на уровень фосфорилирования Н2АХ в условиях повреждения ДНК позволяет предположить, что влияние данных генов на чувствительность к цисплатину связано с более поздними этапами активации ответа клетки
É
Л
а
SS25
É
RAD50 SMARCA5 СНЕК1
8
1
É
RAD50 SMARCA5 СНЕК1
Зй
I § 15
о о ffcvi
О -I
й г s S В о)
10
в
OVCAR8
т
JL
f
GL2 миРНК
RAD50 SMARCA5 СНЕК1
Контроль
| Цисплатин 16 иМ
| Цисплатин 30 иМ
Рис. 4. Влияние нокдауна генов RAD50 и SMARCA5 на фосфорилирование гистонового белка Н2АХ в клеточных линиях плоскоклеточной карциномы головы и шеи SCC25 (а), SCC61 (б) и рака яичника OVCAR8 (в) (данные нормализованы на GL2-контроль); * -р < 0,05, ** -р < 0,01, *** -р < 0,001, **** - р < 0,0001 - статистическая значимость по сравнению с GL2.
на повреждение. Таким образом, идентификация молекулярных механизмов регуляции данными генами чувствительности к цисплатину требует дальнейших исследований.
Обсуждение
RAD50 и SMARCA5 играют важную роль в процессах репарации ДНК и являются известными маркерами резистентности к цисплатину при раке молочной железы [9-12, 22, 23].
В данной работе нами была показана роль генов RAD50 и SMARCA5 в регуляции жизнеспособности клеток опухолей головы и шеи и рака яичника. Кроме того, мы продемонстрировали роль данных генов в регуляции чувствительности опухолевых клеток к цисплатину и другим химиотерапевтическим ДНК-повреждающим препаратам, применяемым в лечении опухолей головы и шеи и рака яичника. Нокдаун генов RAD50 и SMARCA5 значительно увеличивал чувствительность клеток данных опухолей к цисплатину, 5-ФУ и олапарибу.
Нами установлена роль гена SMARCA5 в регуляции базового уровня фосфорилирования H2AX. Однако нокдаун обоих генов не влиял на уровень y-H2AX в присутствии цисплатина.
Очевидно, молекулярные механизмы сенситиза-ции к ДНК-повреждающим препаратам в данном случае реализуются на более поздних этапах ответа на повреждение. Следует отметить, что повреждающее действие цисплатина, 5-ФУ и олапариба связано также с активацией эксцизионной репарации (nucleotide excision repair (NER)) и репарацией путем гомологичной рекомбинации (homologous recombination (HR)), а также блокадой клеточного цикла на этапе репликации ДНК (блокада G1-S и S-фазы клеточного цикла) [24-27]. Оценка роли этих процессов в сенситизации к ДНК-повреждающим препаратам, опосредованной нокдауном RAD50 и SMARCA5, требует дальнейших исследований.
Таким образом, гены RAD50 и SMARCA5 являются потенциальными терапевтическими мишенями в лечении и предиктивными маркерами ответа на терапию цисплатином и другими ДНК-повреждающими препаратами у пациентов с плоскоклеточной карциномой головы и шеи и раком яичника. Мы надеемся, что полученные нами данные помогут лучше понять механизмы возникновения резистентности и разработать возможные пути ее преодоления в клинике.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Финансирование. Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда (проект №15-1520032).
ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES
1. Chu G. Cellular responses to cisplatin. The roles of DNA-binding proteins and DNA repair. J. Biol. Chem. 1994; 269(2): 787-90.
2. Perez R.P. Cellular and molecular determinants of cisplatin resistance. Eur. J. Cancer. 1998; 34(10):1535-42.
3. Johnson S.W., Perez R.P., Godwin A.K., Yeung A.T., Handel L.M., Ozols R.F., Hamilton T.C. Role of platinum-DNA adduct formation and removal in cisplatin resistance in human ovarian cancer cell lines. Biochem. Pharmacol. 1994; 47(4): 689-97.
4. Johnson S.W., Swiggard P.A., Handel L.M., Brennan J.M., Godwin A.K., Owls R.F. et al. Relationship between platinum-DNA adduct formation and removal and cisplatin cytotoxicity in cisplatin-sensitive and -resistant human ovarian cancer cells. Cancer Res. 1994; 54(22): 5911-6.
5. Tan D.S., Kaye S.B. Chemotherapy for patients with BRCA1 and BRCA2-mutated ovarian cancer: same or different? Am. Soc. Clin. Oncol. Educ. Book. 2015: 114-21.
BASIC RESEARCH - PRACTICAL MEDICINE
6. Kiyamova R., Kostianets O., Malyuchik S., Filonenko V., Usenko V., Gurtovyy V. et al. Identification of tumor-associated antigens from medullary breast carcinoma by a modified SEREX approach. Mol. Biotechnol. 2010; 46(2): 105-12.
7. Kostianets О., Shyian M., Demidov S., Antoniuk S., Gout I., Filonenko V., Kiyamova R. Serological analysis of SEREX-defined medullary breasr carcinoma-associated antigens. Cancer Invest. 2012; 30(7): 519-27.
8. Kostianets O., Antoniuk S., Filonenko V., Kiyamova R. Immuno-histochemical analysis of medullary breast carcinoma autoantigens in different histological types of breast carcinomas. Diagn. Pathol. 2012; 7(1):161. DOI: 10.1186/1746-1596-7-161.
9. Bartkova J., Tommiska J., Oplustilova L., Aaltonen K., Tamminen A., Heikkinen T. et al. Aberrations of the MRE11-RAD50-NBS1 DNA damage sensor complex in human breast cancer: MRE11 as a candidate familial cancer-predisposing gene.Mol. Oncol. 2008; 2(4): 296-316.
10. Tommiska J., Seal S., Renwick A., Barfoot R., Baskcomb L., Jayati-lake H. et al. Evaluation of RAD50 in familial breast cancer predisposition. Int. J. Cancer. 2006; 118(11): 2911-6.
11. Abuzeid W.M., Jiang X., Shi G., Wang H., Paulson D., Araki K. et al. Molecular disruption of RAD50 sensitizes human tumor cells to cis-platin-based chemotherapy. J. Clin. Invest. 2009; 119(7): 1974-85.
12. Flores-Perez A., Rafaelli L.E., Ramírez-Torres N., Aréchaga-Ocam-po E., Frías S., Sánchez S. et al. RAD50 targeting impairs DNA damage response and sensitizes human breast cancer cells to cisplatin therapy. Cancer. Biol. Ther. 2014; 15(6): 777-88.
13. Smeenk G., Wiegant W.W., Marteijn J.A., Luijsterburg M.S., Sroc-zynski N., Costelloe T. et al. Poly(ADP-ribosyl)ation links the chromatin remodeler SMARCA5/SNF2H to RNF168-dependent DNA damage signaling. J. Cell. Sci. 2013; 126(4): 889-903.
14. Xu X., Xie K., Zhang X.Q., Pridgen E.M., Park G.Y., Cui D.S. et al. Enhancing tumor cell response to chemotherapy through nanoparti-cle-mediated codelivery of siRNA and cisplatin prodrug. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2013; 110(46): 18638-43.
15. Doles J., Oliver T.G., Cameron E.R., Hsu G., Jacks T., Walker G.C., Hemann M.T. Suppression of Rev3, the catalytic subunit of Pol{zeta}, sensitizes drug-resistant lung tumors to chemotherapy. Proc. Natl. Acad. Sci. US A. 2010; 107(48): 20786-91.
16. Huang K.K., Jang K.W., Kim S., Kim H.S., Kim S.M., Kwon H.J. et al. Exome sequencing reveals recurrent REV3L mutations in cispl-atin-resistant squamous cell carcinoma of head and neck. Sci. Rep. 2016; 6: 19552.
17. Sharma A., Singh K., Almasan A. Histone H2AX phosphorylation: a marker for DNA damage. Meth. Mol. Biol. 2012; 920: 613-26.
18. Turinetto V., Giachino C. Multiple facets of histone variant H2AX: a DNA double-strand-break marker with several biological functions. Nucleic Acids Res. 2015; 43(5): 2489-98.
19. Pabla N., Huang S., Mi Q.S., Daniel R., Dong Z. ATR-Chk2 signaling in p53 activation and DNA damage response during cisplatin-induced apoptosis. J. Biol. Chem. 2008; 283(10): 6572-83.
20. Jackson S.P. Sensing and repairing DNA double-strand breaks. Car-cinogenesis. 2002; 23(5): 687-96.
21. Paull T.T., Rogakou E.P., Yamazaki V., Kirchgessner C.U., Gellert M., Bonner W.M. A critical role for histone H2AX in recruitment of repair factors to nuclear foci after DNA damage. Curr. Biol. 2000; 10(15): 886-95.
22. Jin Q., Mao X., Li B., Guan S., Yao F., Jin F. Overexpression of SMARCA5 correlates with cell proliferation and migration in breast cancer. Tumour Biol. 2015; 36(3): 1895-902.
23. Heikkinen K., Rapakko K., Karppinen S.M., Erkko H., Knuutila S., Lundán T. et al. RAD50 and NBS1 are breast cancer susceptibility genes associated with genomic instability. Carcinogenesis. 2006; 27(8): 1593-9.
24. Wyatt M.D., Wilson D.M. Participation of DNA repair in the response to 5-fluorouracil. Cell Mol. Life Sci. 2009; 66(5): 788-99.
25. Adamsen B.L., Kravik K.L., De Angelis P.M. DNA damage signaling in response to 5-fluorouracil in three colorectal cancer cell lines with different mismatch repair and TP53 status. Int. J. Oncol. 2011; 39(3): 673-82.
26. Martin L.P., Hamilton T.C., Schilder R.J. Platinum resistance: the role of DNA repair pathways. Clin. Cancer Res. 2008; 14(5): 1291-5.
27. Meehan R.S., Chen A.P. New treatment option for ovarian cancer: PARP inhibitors. Gynecol. Oncol. Res. Pract. 2016; 3: 3.
Поступила 15.09.16 Принята к печати 22.09.16
