CC BY
32
ПЕРЕДОВАЯ СТАТЬЯ
УДК 616.127-005.8
РОЛЬ ФЕНОТИПА ТРОМБОЦИТОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ ИНФАРКТА МИОКАРДА
З.А. Габбасов1
ФГБУ «РКНПК» Минздрава России
1 Габбасов Зуфар Ахнафович, д-р биологич. наук, ведущий научный сотрудник лаборатории стволовых клеток человека. Тел.: 8 (495) 414-62-79.
Несмотря на перечисленные сложности, определение у конкретного пациента набора мембранно-связанных белков, уровень которых жестко ассоциирован с прогнозом заболевания и может реально помочь врачу в диагностике и индивидуальном подборе лекарственного средства, в ограниченном масштабе возможно проводить уже сейчас. Первоначально определение фенотипических характеристик тромбоцитов может быть использовано для уточнения диагноза в комбинации с известными биомаркерами.
Ключевые слова: фенотип тромбоцитов, инфаркт миокарда, гли-копротеин VI и SDF-1
Key words: phenotype of platelets, myocardial infarction, glycoprotein of VI and SDF-1
Инфаркт миокарда является тяжелейшим заболеванием и на протяжении последних десятилетий занимает основную долю в структуре заболеваемости и смертности населения в пожилом возрасте. Основная причина острого инфаркта миокарда (ОИМ) — быстрое закрытие коронарных артерий вследствие образования ок-клюзирующего тромба. Исследование состава тромба, образующегося при окклюзии коронарных артерий у пациентов с ОИМ, показывает, что его основными компонентами являются нити фибрина и клеточные элементы крови, однако клеточный состав окклюзирующего тромба сильно зависит от времени ишемии. В первые 1—3 ч после наступления инфаркта фибриновые нити являются главным компонентом тромба, составляя 48,4 ± 21% объема тромба. Тромбоциты, эритроциты и лейкоциты вместе формируют оставшийся клеточный объем. При этом количество тромбоцитов в «свежем» тромбе оказывается наибольшим, достигая 24,9 ± 23% общего объема тромба. Со временем количество фибрино-вых нитей возрастает до 66,9 ± 9%, а количество тромбоцитов падает до 9,1 ± 6% через 6 ч после ишемии [1]. Роль активации тромбоцитов в патогенезе окклюзирующего процесса подчеркивается и тем наблюдением, что количество тромбоцитов в образующемся тромбе положительно коррелирует с уровнем экспрессии трансмембранного гликопротеина CD40 — лиганда, высвобождаемого из активированных тромбоцитов (г= 0,40, р = 0,02) [2]. Эти результаты подтверждаются исследованиями в экспериментах на животных, в которых были изучены ранние стадии формирования тромбов сразу после пов-
реждения сосудистой стенки, когда первичный тромб состоит практически из одних активированных тромбоцитов, которые быстро стабилизируются нитями фибрина, с последующим постепенным уменьшением количества тромбоцитов в тромбе [3,4].
Таким образом, первичное взаимодействие тромбоцитов с поврежденной стенкой сосуда является пусковым моментом, который инициирует накопление тромбоцитов в месте повреждения. Последующее формирование окклюзирую-щего тромба в большой степени зависит как от адгезивных свойств тромбоцитов, так и способности тромбоцитов быстро реагировать на активирующие стимулы, появляющиеся в месте повреждения [5]. Эти свойства тромбоцитов определяются их мембранным фенотипом, который может быть охарактеризован трансмембранными рецепторами, ответственными за адгезию и активацию тромбоцитов в условиях потока. Исследования показывают, что взаимодействие присутствующего на поверхности обнаженного субэндотелия фактора Виллебранда с рецептор-ным гликопротеиновым комплексом Ib—IX—V на поверхности тромбоцитов является начальным этапом взаимодействия, который определяет замедление тока тромбоцитов вдоль зоны повреждения [6]. Дальнейшее взаимодействие белков адгезии c гликопротеиновым комплексом IIb—IIIa (интегрином aIIbß3) на поверхности тромбоцитов приводит к плотному захвату и прикреплению клеток на поврежденной поверхности. Massberg и соавт. показали, что ингибирова-ние тромбоцитарного гликопротеина Ib значительно подавляет оба процесса. В то же время
ингибирование интегрина aIIbp3 только незначительно влияет на «скольжение» тромбоцитов вдоль места повреждения, однако практически полностью препятствует прикреплению тромбоцитов к сосудистой стенке [7]. Последующая активация прикрепленных к поверхности тромбоцитов определяется уже гликопротеином VI (GPVI) — еще одним специфическим гликопро-теином, от которого зависят взаимодействие с фибриллами коллагена и активация тромбоцитов.
Указанные гликопротеины и их комплексы экспрессируются исключительно на поверхности тромбоцитов. Наиболее изучен среди них гликопротеиновый комплекс IIb—IIIa (интег-рин aIIbp3). Интегрин aIIbp3 является одним из главных тромбоцитарных рецепторов с 50—80 тыс. копий на тромбоцит. Этот мембранный белковый комплекс постоянно присутствует на плазматической мембране, но в процессе активации тромбоцитов он претерпевает конфор-мационные изменения, которые могут быть зарегистрированы с помощью моноклональных антител, специфически узнающих неактивированную и активированную (оккупированную фибриногеном) конформации рецептора. Еще один мембранный гликопротеиновый комплекс Ib—IX—V имеет примерно 50 тыс. копий на тромбоците и является вторым наиболее часто встречающимся рецептором тромбоцитов. Гликопротеиновый комплекс Ib—IX—V также постоянно присутствует на плазматической мембране тромбоцитов и отвечает за взаимодействие с фактором Виллебранда [8]. Гликопротеин VI (GPVI) — член суперсемейства иммуноглобулинов, экс-прессируемый также исключительно тромбоцитами, служит главным сигнальным рецептором для коллагена, взаимодействие с которым приводит к активация aIIbp3 интегрина и формированию тромбоцитарного тромба [9]. На поверхности тромбоцита располагается около 3000 копий GPVI. GPVI-опосредованные взаимодействия с коллагеном сильно зависят от количества рецепторов на тромбоцитах. Уменьшение экспрессии молекулы до 500 копий связано с нарушением связывания с коллагеном и с умеренным риском кровотечения [10,11]. В модельных экспериментах с адгезией тромбоцитов на коллагене было показано, что GPVI имеет важное значение для формирования крупных тромбоцитарных агрегатов. Однако у пациентов или мышей с дефицитом GPVI не наблюдаются серьезные крово-
течения. Это говорит о том, что ингибирование СРУ1 может подавлять формирование тромба, не повышая при этом значительно риск кровотечения [12].
Взаимосвязь различных функциональных реакций тромбоцитов с количеством соответствующих белков на мембране тромбоцитов была продемонстрирована для гликопротеинового комплекса 11Ь—111а (интегрин аПЬрЗ) [13], гли-копротеина 1Ь [14] и гликопротеина VI [15]. Таким образом, количество этих белков и их комплексов на поверхности тромбоцита может быть важным показателем реактивности тромбоцитов. В первую очередь важно, что количество этих белков на поверхности тромбоцитов может значительно варьировать как у здоровых добровольцев, так и у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями — примерно в 2 раза для гли-копротеинового комплекса ПЬ—Ша и гликопротеина 1Ь [16,17], в 5 раз для гликопротеина VI [18]. Таким образом, мембранный фенотип тромбоцитов, т. е. качественный и количественный состав экспрессируемых на поверхности тромбоцитов специфических белков и белковых комплексов может быть важнейшим фактором, определяющим особенности течения сердечнососудистых заболеваний.
Фенотип тромбоцитов при остром инфаркте миокарда
При описании фенотипа тромбоцитов мы остановимся на количественных и качественных характеристиках поверхностного состава мембран (мембранный фенотип), наиболее важных для участия тромбоцитов в процессах свертывания крови, иммунных реакциях и процессах заживления тканей после повреждения. Модифи-кационная изменчивость мембранного фенотипа тромбоцитов, которая определяется отклонениями от нативной, неактивированной формы, имеет ряд особенностей. В отличие от большинства клеток тромбоциты не содержат ядра и, таким образом, они не в состоянии адаптироваться к изменению внешних условий, активируя синтез собственных белков. Тем не менее существуют некоторые доказательства возможности остаточного синтеза белков посредством мРНК, полученного клетками от мегакариоцитов [19]. Показано, что, сохраняя родительскую мРНК, тромбоциты продолжают содержать структуры,
необходимые для синтеза белка. При этом синтез белков изменяется в ответ на активацию тромбоцитов, а синтезируемые белки могут менять как фенотип, так и функциональную активность тромбоцитов [20,21].
Мембранный фенотип тромбоцитов в первую очередь определяется многообразными трансмембранными рецепторами, количество и состояние которых определяет большинство функциональных проявлений клеток. К ним относят множество интегринов (аПЬрЗ, а2р1, а5р1, а6р 1, аУр3), лейцин-богатых повторных рецепторов (гликопротеиновый комплекс 1Ь—IX—У, 1о11-подобные рецепторы), трансмембранных рецепторов, сопряженных с С-протеином (РАИ-1 и РАИ-4 тромбиновые рецепторы, P2Y1 и P2Y12 АДФ-рецепторы, ТРа и ТРр тромбоксан, А2-ре-цепторы), протеинов, принадлежащих к суперсемейству иммуноглобулинов (гликопротеин VI, РсуШ1А), С-тип лектиновых рецепторов (Р-се-лектин), тирозин-киназных рецепторов (тромбо-поэтиновый рецептор, Саэ-6, эфрины и ЕрИ-ки-назы) и других различных типов (CD63, CD36, Р-селектин лиганд 1, Т№ тип рецепторов и т. д.). Многие из этих рецепторов обнаруживаются на других типах клеток, но есть и уникальные рецепторы, экспрессируемые исключительно на поверхности тромбоцитов, например гликопро-теин 1Ь, гликопротеин VI или интегрин аПЬрЗ. Большинство из этих рецепторов имеют важное значение в проявлении гемостатической функции тромбоцитов, обеспечивая специфическое взаимодействие и специфический функциональный ответ на воздействие адгезивных белков сосудистой стенки и/или на растворимые гуморальные активаторы. Кроме того, появляется все больше свидетельств, что ряд рецепторов оказывается вовлеченным в менее изученные реакции тромбоцитов, например, такие как участие в воспалительных и иммунологичесих реакциях или метастазировании раковых клеток [8,22].
Мембранный фенотип может изменяться при активации тромбоцитов за счет экзоцитоза внутриклеточных гранул при активации и за счет взаимодействия с микровезикулами, которые продуцируются другими типами клеток. В альфа-гранулах содержатся как экспрессируемые на поверхности мембранно-связанные белки, так и растворимые белки, высвобождаемые во внеклеточное пространство. Большинство мембранно-связанных белков экспрессируются на поверх-
ности неактивированной плазматической мембраны. Эти белки включают некоторые интегри-ны, рецепторы семейства иммуноглобулинов, лейцин-богатые повторные рецепторы и другие рецепторы [23-25]. Тем не менее не все мемб-ранно-связанные белки, находящиеся в а-грану-лах, обнаруживаются на поверхности неактивированных тромбоцитов. Ряд белков, которые в покоящихся тромбоцитах локализованы исключительно во внутриклеточных гранулах, например Р-селектин, SDF-1, CD107a или CD109, появляются на поверхности тромбоцитов только при их активации [23]. Перераспределение этих белков связано с активационно-зависимым экзо-цитозом гранул и слиянием их мембран с плазматической мембраной тромбоцита. Таким образом, обнаружение Р-селектина и других аналогичных белков на поверхности тромбоцитов является специфическим показателем активации тромбоцитов.
Еще один способ изменения мембранного фенотипа тромбоцитов заключается в том, что клетки способны расширять свои ограниченные возможности в синтезе специфических белков, получая их через захват циркулирующих в кровотоке микрочастиц (микровезикул), которые продуцируются другими типами клеток [26,27]. Циркулирующие микрочастицы — это небольшие фрагменты мембран высвобождаемых при активации и/или апоптозе клеток, включая тромбоциты, лейкоциты и эндотелиальные клетки. Происхождение микрочастиц определяется по антигенам родительской клетки. Взаимодействие лейкоцитарных микрочастиц с тромбоцитами было продемонстрировано в экспериментах при помощи иммунной электронной микроскопии и цитофлюорометрии [28,29]. Все микрочастицы обладают прокоагулянтной активностью: содержат на своей поверхности анионные фосфо-липиды — субстрат для тромбообразования. Такой механизм обмена специфическими белками через синтез и захват клетками микрочастиц может являться эффективным инструментом для координации различных стадий сложных клеточных реакций, например таких как атеротромбоз или иммунный ответ организма. При этом за счет захвата микрочастиц, произведенных при активации других типов клеток, тромбоциты будут изменять не только свои функциональные характеристики, но также и свой текущий поверхностный мембранный фенотип.
Неактивированные тромбоциты проявляют очень слабую прокоагулянтную активность и не имеют на своей поверхности прокоагулянтных фосфолипидов. Эти фосфолипиды располагаются на внутренней поверхности мембраны и начинают экспрессироваться на поверхности активированных тромбоцитов благодаря особому механизму, который Нешкег и соавт. назвали «флип-флоп». При активации тромбоцитов прокоагу-лянтные фосфолипиды (в основном фосфати-дилсерины) путем процесса «флип-флоп» переносятся с внутренней на наружную поверхность, что приводит к увеличению поверхности этих фософолипидов на мембране клетки с 2 до 12% [30]. Так интактные тромбоциты становятся прокоагулянтными. Факторы свертывания связываются с прокоагулянтными липидами, приводя к активации Х фактора и формированию комплекса протромбиназы. Наличие анионных фосфолипидов на поверхности тромбоцитов может быть определено при окраске тромбоцитов на аннексин, специфический лиганд для аминофософолипидов [31]. Появление анионных фосфолипидов на тромбоцитах обеспечивает формирование поверхности для тромбообра-зования в месте повреждения [32] и также влияет на мембранный фенотип тромбоцитов.
Гистологические исследования тромбов из ок-клюзированных коронарных артерий у пациентов с острым инфарктом миокарда показывают, что в зоне окклюзии повышается уровень микрочастиц, которые несут на своей поверхности тканевой фактор (ТФ), Повышение ТФ-позитив-ных микрочастиц в окклюзированной коронарной артерии у пациентов с инфарктом миокарда предполагает их участие в процессе атеротромбо-за [33,34]. Установлено образование этих микрочастиц активированными лейкоцитами, но механизм аккумуляции в окклюзирующем тромбе не ясен [35]. Потенциально, поступление может быть опосредовано тромбоцитами.
Ранее в своей работе мы оценивали наличие тромбоцитов, несущих на своей поверхности лейкоцитарный маркер CD45 в крови у пациентов при остром инфаркте миокарда. Было обнаружено, что фракция CD45-позитивных тромбоцитов значительно выше у пациентов в первые сутки и увеличивается в дальнейшем на 8-10-й день после инфаркта миокарда [36]. Мы предположили, что тромбоциты могут приобретать ТФ, связывая лейкоцитарные микрочастици. Данное
предположение было подтверждено в экспери-мантальных моделях in vitro при совместной инкубации тромбоцитов и микрочастиц, выделенных из активированных гранулоцитов. Т. е. появление на поверхности тромбоцитов ТФ может сопровождать острый коронарный синдром.
Еще один белок, наличие которого на поверхности тромбоцитов может активно воздействовать на развитие инфаркта миокарда, — это С-ре-активный белок (СРБ). Выяснено, что СРБ — не только маркер, но и потенциально активный участник воспалительного процесса. Недавние исследования показали, что СРБ существует, по крайней мере, в двух конформациях: циркулирующий растворимый нативный пентамер (пСРБ) и малорастворимый мономер (мСРБ). Было показано, что мСРБ формируется при диссоциации пСРБ, которая происходит на поверхности мембран и представляет собой мембранно-связан-ную форму СРБ [37]. Физиологически важный механизм диссоциации противовоспалительного пСРБ активированными тромбоцитами и отложение провоспалительного мСРБ в воспаленных тканях были выявлены совсем недавно [38]. Molins и соавт. показали, что диссоциация циркулирующего в крови пСРБ в мСРБ происходит на растущем тромбе и что вновь сформированные мСРБ индуцируют дальнейший рост тромба. Кроме того, в противоположность пСРБ, мСРБ способствует активации и агрегации тромбоцитов [39]. Определение микрочастиц, содержащих провоспалительный мСРБ, в крови пациентов с инфарктом микарда подтвердили гипотезу, что диссоциация циркулирующего в крови пСРБ катализируется активированными мембранами тромбоцитов, содержащими лизофосфолипиды [40]. Эти данные показывают, что мСРБ, который образуется при диссоциации из пСРБ на поверхности активированных тромбоцитов, может способствовать развитию атеротромботических осложнений у пациентов с острым коронарным синдромом, поддерживая местное воспаление.
Еще одна сторона активного участия тромбоцитов в воспалительных реакциях отражается в их способности регулировать хоуминг клеток-предшественников в места повреждений тканей. Первоначально считалось, что эндотелиальные и гладкомышечные клетки вновь формируемой стенки сосудов (в том числе неоинтимы) формируются исключительно из близлежащих клеток стенки сосуда, которые мигрируют в места пов-
реждения и там пролиферируют. Однако более поздние работы доказали участие в ремоделиро-вании и восстановлении поврежденных участков стенки сосуда клеток-предшественников костномозгового происхождения [41]. При этом важным этапом реакции организма на повреждение является направленная миграция костномозговых стволовых клеток-предшественников в поврежденные ткани. Способность стволовых клеток к направленной миграции в «родной» орган или в область повреждения обусловлена специфическими биохимическими сигналами, исходящими из «нужной» области [42].
Одним из наиболее изученных сигналов для направленного хоуминга стволовых клеток является белок SDF-1 (в1гошаМегг^ fac1oг-1), который продуцируется стромальными клетками костного мозга и «удерживает» стволовые клетки в своей стволовой нише. Оказалось, что при взаимодействии с поврежденной тканью активированные тромбоциты экспрессируют на своей поверхности SDF-1, создавая таким образом первоначальный градиент этого хемокина в местах повреждения стенки сосуда [43]. Позднее в клинических исследованиях была показана повышенная экспрессия SDF-1 на поверхности циркулирующих тромбоцитов у пациентов с острым коронарным синдромом по сравнению с пациентами со стабильной стенокардией напряжения [44]. Таким образом, тромбоциты активно участвуют в создании ниш для хоуминга и в последующей направленной дифференцировке захваченных в места повреждений стволовых клеток-предшественников. Иными словами, тромбоциты способны не только участвовать в развитии тромботических реакций и воспалительного процесса в стенке сосудов при остром инфаркте миокарда, но также активно участвовать в регенерации ее поврежденных участков [45-47].
Клиническое значение фенотипа тромбоцитов у пациентов с инфарктом миокарда
Роль тромбоцитов в атерогенезе и патогенезе инфаркта миокарда до конца остается неясной, и изучение различных функций тромбоцитов при ИБС является важной частью многих клинических исследований. В настоящее время существует несколько методов исследования, позволяющих измерить реактивность и функцию тромбоцитов, а также оценить эффективность
антиагрегантной терапии. Исследование активности тромбоцитов может стать эффективным способом оценки риска кровотечения и тромбоза в случае агрессивной антиагрегантной терапии при остром коронарном синдроме [48]. Высокая активность тромбоцитов рассматривается как фактор риска у пациентов с инфарктом миокарда. Повышение риска, ассоциированное с высокой активностью тромбоцтов, было продемонстрировано различными методами исследования их функции [49]. Многие исследователи старались определить наилучший метод для монитори-рования активности тромбоцитов, определения терапевтического окна и оптимальный уровень активности тромбоцитов, при котором риск кровотечения и ишемических осложнений был бы минимальным. Однако большинство методов показали слабую корреляцию уровня активности и риска ишемических событий и не могли предсказать неблагоприятные сердечно-сосудистые события [50].
В настоящее время в клинической практике наиболее применимы тесты по оценке агрегации тромбоцитов. В то же время среди этих тестов оценка фенотипа тромбоцитов наименее исследована. Тем не менее все новые клинические данные указывают, что детерминированность экспрессии некоторых мембранных протеинов на поверхности тромбоцитов может быть использована в клинической практике как дополнительный ранний маркер при стратификации риска сердечно-сосудистых осложнений. Заслуживают внимания несколько новых клинических исследований, которые оценивали предсказательную ценность двух разных мембранно-ассоцииро-ванных белков (гликопротеина VI и SDF-1) для выявления пациентов высокого риска развития коронарных событий при остром коронарном синдроме.
Недавно опубликованы результаты исследования, в котором предсказательная ценность уровня поверхностного гликопротеина VI тромбоцитов определялась в группе пациентов с сим-птомным течением ИБС для выделения пациентов с высоким риском коронарных событий. Обследованы 1003 пациента, у которых экспрессия тромбоцитами гликопротеина VI определялась с помощью проточной цитофлюорометрии. Исследование показало, что у пациентов с острым коронарным синдромом (n = 485) значительно более высокий уровень поверхностной экспрессии
тромбоцитами гликопротеина VI, чем у пациентов со стабильной стенокардией (п = 518). Логистический регрессионный анализ показал, что повышенный уровень экспрессии гликопротеи-на VI может быть биомаркером острого коронарного синдрома независимо от таких маркеров, как тропонин и креатинкиназа-МВ. Более того, у пациентов с повышенным уровнем гликопротеи-на VI отмечен высокий остаточный уровень агрегации тромбоцитов на фоне двойной антиагре-гантной терапии в сравнении с пациентами с низким уровнем экспрессии этого белка [51]. На следующем этапе эта группа исследователей изучила 1004 плановых пациента со стенокардией в проспективном дизайне. У 416 (41,4%) из них был выявлен острый коронарный синдром, у 233 (23, 2%) — стабильная стенокардия, а у 355 пациентов (35,4%) — наличие загрудинной боли некоронарной природы. У пациентов с острым коронарным синдромом уровень экспрессии тромбоцитами гликопротеина VI был значительно выше, чем у пациентов со стабильной стенокардией и у пациентов с болью некоронарной природы. Более того, пациенты с повышенным уровнем экспрессии этого белка имели худший прогноз клинического исхода: инфаркт миокарда, инсульт и кардиваскулярная смерть в течение 3 мес наблюдения [52]. И наконец в последнем проспективном исследовании 2213 пациентов со стенокардией анализ выживаемости по методу Каплана — Мейера показал, что бессобытийная выживаемость у пациентов с низким уровнем гликопротеина VI значительно выше, чем у пациентов с высоким его уровнем [53].
Еще один поверхностный белок тромбоцитов, который был изучен в крупном клиническом исследовании, — это SDF-1. Хемокин SDF-1 экс-прессируется на поверхности активированных тромбоцитов и способствует привлечению и аресту стволовых клеток костного мозга на адгезиро-ванных к внеклеточному матриксу тромбоцитах [54]. В экспериментальных исследованиях экспрессия SDF-1 в богатом тромбоцитами тромбе отмечалась на 30-й мин после повреждения сосудистой стенки [43]. Она повышается во время ишемических событий, и это может иметь важное значение для привлечения стволовых клеток в места повреждения для последующего восстановления тканей и неоваскуляризации. В другом проспективном исследовании у 1000 пациентов с
загрудинной болью в отделении неотложной кардиологии уровень экспрессии гликопротеина I и SDF-1 исследовали с помощью проточной цито-флюорометрии. Обнаружено, что у пациентов с острым коронарным синдромом значительно более высокий уровень SDF-1, чем у пациентов со стабильной стенокардией и загрудинной болью из-за других причин. Логистический регрессионный анализ показал, что повышенная экспрессия тромбоцитами SDF-1 значимо ассоциируется с острым коронарным синдромом [55].
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Тромбоциты являются весьма сложными клетками, которые «наполнены» активными молекулами и метаболитами различной природы и при активации способны быстро изменять свой нативный фенотип. Установлено, что повышенная активность тромбоцитов у пациентов с острым коронарным синдромом может вносить вклад в атеротромбоз и развитие воспалительных реакций. Эта активность в значительной степени определяется фенотипом тромбоцитов, который может быть описан экспрессией на поверхности клетки различных типов мембранно-связанных белков. Мембранно-связанные белки, которые участвуют и/или регулируют процессы тромбо-образования и воспаления, в перспективе могут оказаться идеальными маркерами функционального статуса тромбоцитов, отражающими роль тромбоцитов в развитии негативных процессов при остром коронарном синдроме. Исследования показывают, что первыми претендентами на эту роль могут быть гликопротеин VI и SDF-1. Однако в настоящее время определение фенотипа тромбоцитов требует довольно сложных исследований, включая как дорогостоящее оборудование (обычно цитофлюорометр), так и высококвалифицированный персонал.
Несмотря на перечисленные сложности, определение у конкретного пациента набора мемб-ранно-связанных белков, уровень которых жестко ассоциирован с прогнозом заболевания и может реально помочь врачу в диагностике и индивидуальном подборе лекарственного средства, в ограниченном масштабе возможно проводить уже сейчас. Первоначально, определение фенотипических характеристик тромбоцитов может быть использовано для уточнения диагноза в комбинации с известными биомаркерами.
ЛИТЕРАТУРА
1. Silvain J., Collet J.P., Nagaswami C., Beygui F., Ed-mondson K.E., Bellemain-Appaix A., Cayla G., Pena A, Brugier D., Barthelemy O., Montalescot G., Weisel J.W. Composition of coronary thrombus in acute myocardial infarction // J. Am. Coll. Cardiol. 2011. Vol. 57. № 12. P. 1359-1367.
2. Abu el-Makrem M.A., Mahmoud Y.Z., Sayed D., Nas-sef N.M., Abd el-Kader S.S., Zakhary M., Ghazaly T., Matta R. The role of platelets CD40 ligand (CD 154) in acute coronary syndromes // Thromb. Res. 2009. Vol. 124. № 6. P. 683-688.
3. Shand R.A., Butler K.D., Davies J.A., Menys V.C., Wallis R.B. The kinetics of platelet and fibrin deposition on to damaged rabbit carotid arteries in vivo: involvement of platelets in the initial deposition of fibrin // Thromb. Res. 1987. Vol. 45. № 5. P. 505-515.
4. Balasubramanian V., Grabowski E., Bini A., Nemerson Y. Platelets, circulating tissue factor, and fibrin colocalize in ex vivo thrombi: real-time fluorescence images of thrombus formation and propagation under defined flow conditions // Blood. 2002. Vol. 100. № 8. P. 2787-2792.
5. Ruggeri Z.M. Platelets in atherothrombosis // Nat. Med. 2002. Vol. 8. № 11. P. 1227-1234.
6. Savage B., Saldivar E., Ruggeri Z.M. Initiation of platelet adhesion by arrest onto fibrinogen or translocation on von Willebrand factor // Cell. 1996. Vol. 84. № 2. P. 289-297.
7. Massberg S. et al. A Critical Role of Platelet Adhesion in the Initiation of Atherosclerotic Lesion Formation // J. Exp. Med. 2002. Vol. 196. № 7. P. 887-896.
8. Clemetson K.J., Clemetson J.M. Platelet receptors. In Platelets, ed Michelson AD (Elsevier/Academic Press, San Diego, CA), Third ed. 2013. P. 169-194.
9. Nieswandt B., Brakebusch C., Bergmeier W., Schulte V., Bouvard D., Mokhtari-Nejad R., Lindhout T., Heem-skerk J.W., Zirngibl H., Fassler R. Glycoprotein VI but not alpha2beta1 integrin is essential for platelet interaction with collagen // EMBO J. 2001. Vol. 20. № 9. P. 2120-2130.
10. Chen H., Locke D., Liu Y., Liu C., Kahn M.L. The platelet receptor GPVI mediates both adhesion and signaling responses to collagen in a receptor density-dependent fashion // J. Biol. Chem. 2002. Vol. 277. № 4. P. 3011-3019.
11. Dumont. B, Lasne D., Rothschild C., Bouabdelli M., Ollivier V., Oudin C., Ajzenberg N., Grandchamp B., Jan-drot-Perrus M. Absence of collagen-induced platelet activation caused by compound heterozygous GPVI mutations // Blood. 2009. Vol. 114. Vol. 9. P. 1900-1903.
12. Jung S.M., Moroi M. Platelet glycoprotein VI. Adv. // Exp. Med. Biol. 2008. Vol. 640. P. 53-63.
13.Sirotkina O.V., Khaspekova S.G., Zabotina A.M., Shi-manova Y.V., Mazurov A.V. Effects of platelet glycopro-tein IIb—IIIa number and glycoprotein IIIa Leu33Pro polymorphism on platelet aggregation and sensitivity to glycoprotein IIb—IIIa antagonists // Platelets. 2007. Vol. 18. № 7. P. 506-514.
14. Baker R.I., Eikelboom J., Lofthouse E., Staples N., Af-shar-Kharghan V., Lopez J.A., Shen Y., Berndt M.C., Hankey G. Platelet glycoprotein Ibalpha Kozak polymorphism is associated with an increased risk of ischemic stroke // Blood. 2001. Vol. 98. № 1. P. 36-40.
15. Joutsi-Korhonen L., Smethurst P.A., Rankin A., Gray E., Jsseldijk M., Onley C.M. et al. The low-frequency allele of
the platelet collagen signaling receptor glycoprotein VI is associated with reduced functional responses and expression // Blood. 2003. Vol. 101. P. 11. P. 4372-4379.
16. Huang T., Sahud M.A. Association of C807T, Pl(A) and —5C/T Kozak genotypes with density of glycoprotein receptors on platelet surface // Thromb. Res. 2003. Vol. 112. № 3. P. 147-150.
17. O'Halloran A.M., Curtin R., O'Connar F., Dooley M., Fitzgerald A., O'Brian J.K. et al. The impact of genetic variation in the region of the GPIIIa gene on PlA2 expression bias and GPIIb—IIIa receptor density in platelets // Br. J. Haematol. 2006. Vol. 132. № 4. P. 494-502.
18. Furihata K., Clemetson K.J., Deguchi H., Kunicki T.J. Variation in human platelet glycoprotein VI content modulates glycoprotein Vl-specific prothrombinase activity // Artherioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2001.Vol. 21. № 11. P. 1857-1863.
19. Denis M.M., Tolley N.D., Bunting M., Schwertz H., Jiang H., Lindemann S., Yost C.C., Rubner F.J., Alber-tine K.H., Swoboda K.J., Fratto C.M., Tolley E., KraissL.W., Mclntyre T.M., Zimmerman G.A., Wey-rich A.S. Escaping the nuclear confines: signal-dependent pre-mRNA splicing in anucleate platelets // Cell. 2005. Vol. 122. № 3. P. 379-391.
20. Thon J.N., Devine D.V. Translation of glycoprotein IIIa in stored blood platelets // Transfusion. 2007. Vol. 47. № 12. P. 2260-2270.
21. Weyrich A.S., Schwertz H., Kraiss L.W., Zimmerman G.A. Protein synthesis by platelets: historical and new perspectives // J. Thromb. Haemost. 2009. Vol. 7. № 2. P. 241-246.
22. Labelle M., Begum S., Hynes R.O. Direct signaling between platelets and cancer cells induces an epithelial-mes-enchymal-like transition and promotes metastasis // Cancer. Cell. 2011. Vol. 20. № 5. P. 576-590.
23. Maynard D.M., Heijnen H.F., Horne M.K., White J.G., Gahl W.A. Proteomic analysis of platelet alpha-granules using mass spectrometry // J. Thromb. Haemost. 2007. Vol. 5. № 9. P. 1945-1955.
24. Berger G., Caen J.P., Berndt M.C., Cramer E.M. Ultrastructural demonstration of CD36 in the alpha-granule membrane of human platelets and megakaryocytes // Blood. 1993. Vol. 82. № 10. P. 3034-3044.
25. Suzuki H., Murasaki K., Kodama K., Takayama H. Intra-cellular localization of glycoprotein VI in human platelets and its surface expression upon activation // Br. J. Hae-matol. 2003. Vol. 121. № 6. P. 904-912.
26. Owens III A.P., Mackman N. Microparticles in hemostasis and thrombosis // Circ. Res. 2011. Vol. 108. № 10. P. 1284-1297.
27. Angelillo-Sch.rrer A. Leukocyte-derived microparticles in vascular homeostasis // Circ. Res. 2012. Vol. 110. № 2. P. 356-369.
28. Del Conde I., Shrimpton C.N., Thiagarajan P., Lopez J.A. Tissue-factor-dearing microvesicles arise from lipid rafts and fuse with activated platelets to initiate coagulation // Blood. 2005. Vol. 106. № 5. P. 1604-1611.
29. Pluskota E., Woody N.M., Szpak D., Ballentyne C.M., Soloviev D.A., Simon D.I., Plow E.F. Expression, activation, and function of integrin aMa2 (Mac-1) on neu-trophil-derived microparticles // Blood. 2008. Vol. 112. № 6. P. 2327-2335.
30. Hemker H.C., van Rijn J.L., Rosing J., van Dieijen G., Bevers E.M., Zwaal R.F. Platelet membrane involvement in blood coagulation // Blood Cells. 1983. Vol. 9. № 2. P. 303-317.
31.Dormann D., Kardoeus J., Zimmermann R. E. et al. Flowcytometric analysis of agonist-induced annexin V, factor Va and factor Xa binding to human platelets // Platelets. 1998. Vol. 9. № 3-4. P. 171-177.
32. Sims P.J., Wiedmer T., Esmon C.T., Weiss H.J., Shattil S.J. Assembly of the platelet prothrombinase complex is linked to vesiculation of the platelet plasma membrane. Studies in Scott syndrome: an isolated defect in platelet procoagulant activity // J. Biol. Chem. 1989. Vol. 264. № 29. P. 17049-17057.
33. Morel O., Pereira B., Averous G. et al. Increased levels of procoagulant tissue factor-bearing microparticles within the occluded coronary artery of patients with ST-segment elevation myocardial infarction: role of endothelial damage and leukocyte activation // Atherosclerosis. 2009. Vol. 204. № 2. P. 636-641.
34. Palmerini T.1., Tomasi L.1., Barozzi C.1., Della Riva D.1., Mariani A.1., Taglieri N.1., Leone O.2., Ceccarelli C.3., De Servi S.4., Branzi A.1., Genereux P.5., Stone G.W.5, Ahamed J.6. Detection of tissue factor antigen and coagulation activity in coronary artery thrombi isolated from patients with ST-segment elevation acute myocardial infarction // PLoS One. 2013. Vol. 8. № 12. P. 81501.
35. Mallat Z., Benamer H., Hugel B., Benessiano J., Steg P.G., Freyssinet J.M., Tedgui A. Elevated levels of shed membrane microparticles with procoagulant potential in the peripheral circulating blood of patients with acute coronary syndromes // Circulation. 2000. Vol. 101. № 8. P. 841-843.
36. Gabbasov Z., Ivanova O., Kogan-Yasny V., Ryzhkova E., Saburova O., Vorobyeva I., Vasilieva E. Activated platelet chemiluminescence and presence of CD45+ platelets in patients with acute myocardial infarction // Platelets. 2013. Oct 8.
37. Wu Y., Wang H.W., Ji S.R., Sui S.F. Two-dimensional crystallization of rabbit C-reactive protein monomeric sub-units // Acta Crystallogr D Biol Crystallogr. 2003. Vol. 59 (Pt. 5). P. 922-926.
38. Eisenhardt S.U., Habersberger J., Peter K. Monomeric C-reactive protein generation on activated platelets: the missing link between inflammation and atherothrombotic risk // Trends Cardiovasc. Med. 2009. Vol. 19. № 7. P. 232-237.
39. Molins B., Peña E., de la Torre R., Badimon L. Monomeric C-reactive protein is prothrombotic and dissociates from circulating pentameric C-reactive protein on adhered activated platelets under flow // Cardiovasc. Res. 2011. Vol. 92. № 2. P. 328-337.
40. Habersberger J.1, Strang F., Scheichl A., Htun N., Bassler N., Merivirta R.M., Diehl P., Krippner G., Meikle P., Eisenhardt S.U., Meredith I., Peter K. Circulating microparticles generate and transport monomeric C-reactive protein in patients with myocardial infarction // Cardiovasc. Res. 2012. Vol. 96. № 1. P. 64-72.
41. Jiang S., Walker L., Afentoulis M., Anderson D.A., Jau-ron-Mills L., Corless C.L., and Fleming W.H. Transplanted human bone marrow contributes to vascular en-dothelium. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004; 101 (48): 16891-16896.
42. Lapidot T. and Petit I. Current understanding of stem cell mobilization: the roles of chemokines, proteolytic enzymes, adhesion molecules, cytokines, and stromal cells // Exp. Hematol. 2002. Vol. 30. № 9. P. 973-981.
43. Massberg S., Konrad I., Schürzinger K., Lorenz M., Schneider S., Zohlnhoefer D., et al. Platelets secrete stro-
mal cell—derived factor 1 and recruit bone marrow—derived progenitor cells to arterial thrombi in vivo // J. Exp. Med. 2006. Vol. 203. № 5. P. 1221-1233.
44. Stellos K., Bigalke B., Langer H. et al. Expression of stro-mal-cell-derived factor-1 on circulating platelets is increased in patients with acute coronary syndrome and correlates with the number of CD34+ progenitor cells // Eur. Heart. J. 2009. Vol. 30. № 5. P. 584-593.
45. Langer H., May A.E., Daub K. et. al. Adherent Platelets Recruit and Induce Differentiation of Murine Embryonic Endothelial Progenitor Cells to Mature Endothelial Cells In Vitro // Circ. Res. 2006. Vol. 98. № 2. P. e2-10.
46. Daub K., Langer H., Seizer P., Stellos K., May A.E., Goy-al P., Bigalke B., Schonberger T., Geisler T., Siegel-Axel D., Oostendorp R.A., Lindemann S., Gawaz M. Platelets induce differentiation of human CD34+ progenitor cells into foam cells and endothelial cells // FASEB. J. 2006. Vol. 20. № 14. P. 2559-2561.
47. Stellos K., Bigalke B., Langer H., Geisler T., Schad A., Kögel A., Pfaff F., Stakos D., Seizer P., Müller I., Htun P., Lindemann S., Gawaz M. Expression of stromal-cell-derived factor-1 on circulating platelets is increased in patients with acute coronary syndrome and correlates with the number of CD34+ progenitor cells // Eur. Heart. J.
2009. Vol. 30. № 5. P. 584-593.
48.Aradi D., Sibbing D., Bonello L. Current evidence for monitoring platelet reactivity in acute coronary syndrome: a plea for individualized antiplatelet treatment // Int. J. Cardiol. 2013. Vol. 167. № 5. P. 1794-1797.
49. Franchi F., Rollini F., Cho J.R., Ferrante E., Angiolillo D.J. Platelet function testing in contemporary clinical and interventional practice // Curr. Treat. Options. Cardiovasc. Med. 2014. May. Vol. 16. № 5. P. 300.
50. Tantry U.S., Bonello L., Aradi D. et al. Working Group on On-Treatment Platelet Reactivity. Consensus and update on the definition of on-treatment platelet reactivity to ad-enosine diphosphate associated with ischemia and bleeding // J. Am. Coll. Cardiol. 2013. Vol. 62. № 24. P. 2261-2273.
51. Bigalke B., Geisler T., Stellos K., Langer H., Daub K., Kremmer E., Seizer P., May A.E., Lindemann S., Gawaz M. Platelet collagen receptor glycoprotein VI as a possible novel indicator for the acute coronary syndrome // Am. Heart. J. 2008. Vol. 156. № 1. P. 193-200.
52. Bigalke B., Haap M., Stellos K., Geisler T., Seizer P., Kremmer E., Overkamp D., Gawaz M. Platelet glycopro-tein VI (G.PVI) for early identification of acute coronary syndrome in patients with chest pain // Thromb. Res.
2010. Vol. 125. № 5. P. e184-e189.
53. Bigalke B., Stellos K., Geisler T., Lindemann S., May A.E., Gawaz M. Glycoprotein VI as a prognostic biomarker for cardiovascular death in patients with symptomatic coronary artery disease // Clin. Res. Cardiol. 2010. Vol. 99. № 4. P. 227-233.
54. Zernecke A., Schober A., Bot I. et al. SDF-1alpha/CXCR4 axis is instrumental in neointimal hyperplasia and recruitment of smooth muscle progenitor cells // Circ. Res. 2005. Vol. 96. № 7. P. 784-791.
55. Wurster T., Stellos K., Haap M., Seizer P., Geisler T., Ot-ton J., Indermuehle A., Ishida M., Schuster A., Nagel E., Gawaz M., Bigalke B. Platelet expression of stromal-cell-derived factor-1 (SDF-1): an indicator for ACS? Int. J. Cardiol. 2013. Vol. 164. № 1. P. 111-115.
Поступила 02.07.2014
