CC BY
72
показателей, что можно связать с начинающимися процессами ресорбции преднизолона.
При изучении влияния тималина на способность Т-клеток образовывать розетки с Э барана была выявлена высокая степень индивидуальной вариабельности в чувствительности этих клеток к препарату (см. табл.З) вплоть до полной нео-твечаемости Т-лимфоцитов на тималин. Кроме того, увеличение числа Е-РОК периферической крови человека под действием тималина не имело высокой выраженности, что, по-видимому, связано с низкой чувствительностью зрелых Т-клеток к пептидам тимуса. Вместе с тем удавалось определить оптимальные условия воздействия тималина на Т-клетки, концентрация которого составляла при этом 1 мг/мл, а продолжительность инкубации — 60-120 минут.
Можно полагать, что высокая степень индивидуальных различий в чувствительности Т-лим-фоцитов по отношению к тималину связана с различным содержанием в периферической крови людей незрелых Т-клеток, наиболее восприимчивых к тимическим пепидам. Поэтому в дальнейших исследованиях изучали способность тималина оказывать воздействие на способность тимо-цитов новорожденных поросят образовывать розетки с Э барана в концентрации 1 мг/мл и в процессе одночасовой инкубации. В этом же тесте определяли степень падения биологической активности тималина после инкубации его с человеческими Э в течение 60 минут.
Было установлено, что под действием тималина происходило увеличение числа Е-РОК в культуре тимоцитов в среднем на 28,8±1,5%. Падение биологической активности тималина после инкубации его с Э различных людей составляло в среднем 83,4±2,5% (р<0,001).
Анализируя полученные результаты, можно заключить, что человеческие Э обладают способностью сорбировать БАВ типа глюкокортикоидов (преднизолон) и тимических пептидов (тималин), оказывающих разнонаправленное воздействие на ИО организма. Химическая разнородность этих соединений и других БАВ, изучавшихся в предыдущих исследованиях [1,2], позволяет предположить, что сорбционные свойства Э носят неспецифический характер. Сорбционная способность Э прямо пропорциональна концентрации препарата в культуральной среде, но возрастание ее с увеличением концентрации препарата происходит до определенного предела. Продолжительность инкубации Э с БАВ также имеет количе-
ственные пределы, за которыми эффективность сорбции снижается.
На основании полученных результатов представляется целесообразным при разработке метода иммунокоррекции с использованием аутологичных Э в качестве носителей БАВ в организме производить определение индивидуальных особенностей в чувствительности клеток иммунной системы к различным БАВ и в сорбционных свойствах Э, используя при этом концентрации преднизолона в пределах 0,1-1 мкг/'мл, тималина — 1 мг/мл и продолжительность инкубации препаратов с Э в 60 минут.
ЛИТЕРАТУРА
1. Кирдей Е.Г., Беломестнова Е.Ю., Верхозин И.А. и др. О способности эритроцитов связывать биологически активные вещества и о влиянии таких клеток на иммунный ответ /Тез.докл. I съезда иммунологов России. — Новосибирск, 1992, 208 с.
2. Кирдей Е.Г., Беломестнова Е.Ю., Дмитриева JI.A. О перспективах развития экстракорпоральной иммунокоррекции с использованием аутологичных клеток крови /Акт. пробл. эксперим. и клин, медицины. — Иркутск, 1994, разд.З, с.101-104.
3. Кожевников И.JI.,Рыбкин А.Г., Яковлев А.А. Способ оценки сорбционной активности рецепторного аппарата эритроцитов человека /Авт. свид № 1778707 AI, 1992.
4. Понякина И.Д. Нагрузочные тесты в розеткооб-разовании /Лаб. дело. — 1984, № 10, с.66-69.
5. Пазюк Е.А., Маянский А.Н. НСТ-тест в клинике инфекционно-аллергических заболеваний /Тер. архив. — 1981, т.53, № 11, с.18-21.
6. Чернушенко Е.Ф., Когосова Л.С. Иммунологические исследования в клинике. — Киев: Здоровье, 1978, 159 с.
7. Шмелев Е.И., Бумагина Т.К., Метерев Ю.Г. К оценке теста восстановления нитросинего тетра-золия у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких /Лаб. дело. — 1975, № 9, с.524-528.
Summary
The possibility of human erythrocytes to nonspecific adsorbtion the Prednisolomim and Thymalinum was shown on vitro. The optimum of adsorbtion the biological active substances by erythrocytes was investigated. It was determined the high individual variability in blood cell sensitivity to Prednisolonum and Thimalinum and erythrocytes adsorbtion.
© УШАКОВ Р.В., ЦАРЕВ В.Н., 1995 УДК
РОЛЬ БАКТЕРИЙ ГРУППЫ БАКТЕРОИДОВ В ЭТИОЛОГИИ ОДОНТОГЕННЫХ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЧЕЛЮСТНО-ЛИЦЕВОЙ ОБЛАСТИ
Ушаков Р.В., Царев В.Н.
(Иркутский государственный медицинский университет, кафедра хирургической стоматологии — зав. каф. проф. Р.В.Ушаков)
Резюме. Проведен анализ микрофлоры щих анаэробных бактерий, из которых
гнойных очагов 355 больных одонтогенны- большое значение имеют микроорганизмы
ми воспалительными заболеваниями челю- группы бактероидов. Изучение уровней
стно-лицевой области. Установлено коли- антител к полисахаридным антигенам Р.-
чественное преобладание неспорообразую- те1ашподешеи8 и Р.азассЬого1уМси8 с по-
мощью иммуноферментного анализа подтверждает ведущее значение этой группы бактерий в развитии одонтогенной инфекции у 1/3 больных гнойно-воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области.
Проблема гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области занимает значительное место в стоматологии. Вместе с тем даже в специальной литературе мы наблюдаем значительное смещение акцента в сторону главенствующей роли в этиологии одонтогенного воспаления факульта-тивно-анаэробных микроорганизмов, особенно стафилококков и стрептококков [1]. Гипердиагностика, прежде всего стафилококковой инфекции, в стоматологической практике обусловлена частично слабым материально-техническим состоянием микробиологической службы, высокой стоимостью бактериологических исследований с применением анаэробной техники культивирования и идентификации микрофлоры [3]. В пользу привлечения современных методов исследования говорит высокий процент так называемых «стерильных» посевов из гнойных очагов, что позволяет предположить анаэробный характер инфекционного агента. Вместе с тем данные, полученные в современных лабораториях, позволяют выявить наиболее часто встречаемые виды бактерий и их сочетаний, чувствительность к антибактериальным средствам, что дает основание для проведения полноценной антибактериальной терапии.
Установлено, что в развитии гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области принимают участие ассоциации резидентных микроорганизмов (как факультативно-, так и обли-гатно-анаэробных), включающих 2-7 видов [2,4,6]. Однако ассоциативный характер микрофлоры ставит закономерный вопрос: равнозначна ли роль отдельных видов при развитии одонтогенного воспаления? Высокая частота выделения анаэробных бактерий группы бактероидов косвенно свидетельствует о их этиологической значимости. Вместе с тем это положение требует более аргументированного подтверждения.
Целью данного исследования явилось определение роли строго анаэробных бактерий группы бактероидов в развитии и течении одонтогенных гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области.
Методы и материал
Проведено изучение качественного и количественного состава микрофлоры 355 больных различными формами воспалительных заболеваний лица и челюстей.
Забор клинического материала производили непосредственно после вскрытия гнойного очага с помощью предложенного нами стандартного сорбирующего тампона из поливинилформаля марки Аквипор 3500/40 [5]. Культивирование бактерий производили в аэробных и анаэробных условиях. Анаэробиоз достигался в анаэростате м.745, где атмосферный воздух замещался газовой смесью, состоящей из 80% азота, 10% СО,, 10% Н„. Продолжительность культивирования 5-7 суток при 37°С.
Видовую идентификацию осуществляли на основании морфологических признаков микроорганизмов, культуральных свойств, биохимии (мультитест АР1-20, Франция), хроматографии и серологического анализа с помощью предложенного нами краткого «ключа» [5]. Кроме этого, использовали разработанную нами методику «кассетной антибиотикограммы», которая построена
фак.анаэробы
Рис.1. Частота преобладания облигатно- и факультативно-анаэробных бактерий в составе микробных ассоциаций при абсцессе и флегмоне лица и шеи
на принципе чувствительности бактерий к антибиотикам не подверженной выраженному развитию резистентности. Анализ полученных данных проводили с учетом новой классификации (Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology — 9, 1994 Group — 6). Всего проанализировано 1128 штаммов микроорганизмов.
Для определения уровня антител в сыворотке крови больных к антигенам бактерий, наиболее часто выделяемых при одонтогенном воспалении, применяли твердофазный метод иммуноферментного анализа (ИФА). Полисахаридный антиген получали по усовершенствованной нами методике [5]. Полученные данные сравнивали с результатами ИФА крови детей (42 человека) и практически здоровых доноров (25 человек).
Результаты и их обсуждение
При анализе качественного и количественного состава микрофлоры гнойных очагов больных одонтогенными воспалительными заболеваниями установлено, что в 95,6% случаев определялись ассоциации 2-9 видов факультативно-анаэробных и строго-анаэробных бактерий (всего идентифицировано 58 видов). Из общего количества выделенных штаммов от 57,6% (при лимфадените) до
Рис.2. Сочетание бактерий группы бактероидов в ассоциациях с другими микроорганизмами (в % к количеству больных с выделением данного вида)
Таблица І
Уровни АТ к полисахаридным антигенам бактерий группы бактероидов
Уровень АТ (ЕД ИФА) Достоверность
P.melaninogenicus P.asacchorolyticus различий
Г руппы сравнения
Здоровые доноры 100±8,5
Больные с — бак.анализом 165,8±25,5
Больные с + бак.анализом 219,7±20,2
64,5% (при флегмоне) составляли неспорообразующие анаэробные виды. Необходимо отметить, что практически у каждого больного они встречались в составе микробных ассоциаций гнойного очага в диагностически значимых концентрациях (>105 КОЕ/мл) и в 2/3 случаев доминировали.
Наиболее часто выделялись бактерии группы бактероидов: от 18,18% — при аденофлегмоне и лимфадените, до 30,14% — при одонтогенной флегмоне (от всех штаммов). Данные микроорганизмы принадлежали к трем родам: Porphyro-monas, Prevotella, Bacteroides, Porphyromonas asacchorolyticus (3,03-5,48% всех штаммов) встречались преимущественно у больных одонтогенной флегмоной. Из других пигментообразующих бактерий большинство составляли представители рода Prevotella. Типовой штамм P.melaninogeni-cus наблюдался в 6,06-9,59%, остальные виды (P.capillosus, P.oralis) — в пределах 3-6% всех выделенных штаммов микроорганизмов.
Для определения их места в составе микробных ассоциаций нами проведен анализ сочетаний бактерий группы бактероидов с другими микроорганизмами. Наиболее часто бактероиды сочетались с факультативно-анаэробными и строгоанаэробными грамм+ кокками (Staphylococcus, Streptococcus, Pertostreptococcus) — 15-20% ассоциаций и бактероидами других родов и видов (12%). Причем концентрация бактероидов в гнойном экссудате в 31,5% случаев была преобладающей, и эта тенденция сохранялась при исследованиях в процессе лечения (рис.1,2).
Вместе с тем даже количественное преобладание одного из видов в составе микробной ассоциации не всегда свидетельствует о безусловно доминирующей роли в развитии заболевания. В связи с этим нами проведен иммуноферментный анализ уровней антител к полисахаридным антигенам тех видов, которые определялись наиболее часто и в высоких концентрациях.
При использовании полисахарида Prevotella melaninogenicus выявлена следующая закономерность: уровни АТ к данному антигену у детей были существенно ниже (67,4±12,5 ЕД ИФА), чем у взрослых доноров (100,0±8,5 ЕД ИФА) и больных воспалительными заболеваниями лица и шеи (178,8±12,0 ЕД ИФА). Во всех случаях разница 5ыла достоверной Р<0,025. В то же время уро=, вень АТ больных был достоверно выше, чем у здоровых лиц (Р<0,05). Аналогичные данные по-' лучены и при определении АТ к ПСА Ро-rphyromonas asacchorolyticus. Следовательно, титр АТ к ПСА P.melaninogenicus, P.asacchorolyticus — нормальных обитателей полости рта увеличивается с возрастом почти в 2 раза. Однако при развитии одонтогенной инфекции наблюдается дальнейшее нарастание уровней АТ, что может рассматриваться (разумеется, в сочетании с положительным результатом бактериологического исследования) как доказательство роли этих видов в развитии острого гнойного воспаления челюстно-лицевой области.
Для подтверждения этого заключения мы про-
100,0+15,5 —
173.0+11,0 Р<0,05
250,0±26,0 Р<0,05
вели раздельный анализ результатов ИФА в двух группах больных — с положительным и отрицательным результатом бактериологического исследования (табл.1).
Анализ индивидуальных значений ИФА показывает, что в группах больных с положительным баканализом по исследуемым бактериям положительные результаты ИФА (Jcp±3a) наблюдались у 100% пациентов. Между тем у 20% (для ПСА P.melaninogenicus) и 25% (для ПСА P.asacchorolyticus) наблюдались высокие уровни АТ при отрицательном бактериологическом исследовании, что может быть объяснено трудностями выделения данных возбудителей и возможной перекрестной реакцией с другими видами этих родов. Вместе с тем в группе практически здоровых лиц положительных результатов ИФА (то есть значений >3ст) не выявлено ни в одном случае.
Полученные результаты свидетельствуют о важной роли (у 1/3 больных доминирующей) бактерий группы бактероидов родов Porphyromonos, Prevotella, Bacteroides в развитии и течении одон-тогенных гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области, что, безусловно, должно учитываться при проведении антибактериальной терапии.
ЛИТЕРАТУРА
1. Воспалительные заболевания чеяюстно-лицевой области и шеи /Под ред. А.Г.Шаргородского — М.: Медицина, 1985, 352с.
2. Захаров Ю.С. Клиника и хирургическая тактика при бактериальных инфекциях челюстно-лице-вой области /Стоматология — 1987, № 3, С.43-45.
3. Колесов А.П., Столбовой А.В., Кочеровец В.И. Анаэробные инфекции в хирургии. — М.: Медицина, 1989, 158 с.
4. Кочеровец В.И., Балин В.Н., Гук А.С. Неспорообразующие анаэробные микроорганизмы при одонтогенных острых гнойных заболеваниях челюстно-лицевой области /Стоматология —1982, № 2, С.43-45.
5. Царев В.Н., Ушаков Р.В. Комплексная бактериологическая и иммунологическая диагностика воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области и шеи. /Метод, рекомендации —М., 1991, 28 с.
6. Tabagcheli S. Anaerobic infections in the head and neck region. /S. Scand. J. Infect. Des. — 1993, v.57, P.24-34.
Summary
'The у analysis of the purulent foci of microflora in 355 patients with odontogenic inflammatory diseases of the maxillofacial region was performed. The predominant number of non-sporing anaerobic bacteria (microorganisms of bacterioid group being the most important) was determined. The investigation of antibodies levels to polysaccharide antigenes P.melaninogenicus and P.asacchorolyticus with the aid of immunoenzymatic test confirms the principal role of this bacterial group for odontogehic infection development in 1/3 pations of purulent inflommatory diseases of maxillo-facial region.
