CC BY
68
№ 5 - 2011 г.
14.00.00 медицинские и фармацевтические науки
УДК 615.322:547.56
ИССЛЕДОВАНИЕ ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ В НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ МЕДУНИЦЫ МЯГКОЙ
Д.С. Круглов1, Н.С. Фурса2
1ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России (г. Новосибирск)
ГБОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России (г. Ярославль)
С использованием метода ВЭЖХ установлено, что фенольный комплекс в генеративных побегах и в розеточных листьях медуницы мягкой близок по составу фенолкарбоновых и оксикоричных кислот и существенно различается по составу флавоноидов. Различия в качественном составе флавоноидов в генеративных
и вегетативных органах медуницы мягкой может обуславливать и различия
в фармакологических эффектов фитопрепаратов, изготавливаемых из различных органов растения.
Ключевые слова: медуница мягкая, фенольные соединения, виценин,
дигидрокверцетин, феруловая кислота, анемия, ВЭЖХ
Круглов Дмитрий Семенович — кандидат технических наук, старший преподаватель кафедры фармакогнозии и ботаники ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, e-mail: [email protected]
Фурса Николай Сергеевич — доктор фармацевтических наук, профессор, заведующий кафедрой фармакогнозии и фармацевтической технологии ГБОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, email: [email protected]
Растения рода медуниц широко используются в официнальной и народной медицине Европейских стран. В частности, настой из листьев медуницы лекарственной (Pulnonaria officinalis L.) используются в Британской травяной фармакопее [7] в качестве откашливающего средства. В работе А. В. Киселевой было проведено исследование влияние настойки медуницы мягкой (Pulmonaria mollis Wulf. ex Horn.) на некоторые показатели свертывающей системы крови «in vitro» и установлен дозозависимый эффект [1]. Нами была установлена антианемическая активность препаратов м.мягкой [2], причем антианемическая активность препаратов из генеративных побегов оказалась выше чем у препаратов, изготовленных из розеточных листьев [4]. Необходимо заметить, что м.мягкая будучи эфемероидом имеет своеобразный цикл развития. Весной развивается цветоносный побег (генеративный побег), который в конце весны плодоносит и отмирает.
В конце фазы цветения начинается рост розеточных листьев и формирование прикорневой розетки. Антианемическая активность фитопрепаратов м.мягкой обусловлена специфическим микроэлементным составом растения [3] и полисахаридно-белковым комплексом [5], выполняющим роль матрикса для трехвалентных ионов железа. Вместе с тем в растении содержится комплекс соединений фенольной природы, которые безусловно должны играть немаловажную роль в формировании фармакологической активности фитопрепаратов из м.мягкой. В этой связи представляется актуальным сравнительное исследование фенольного комплекса различных органов м.мягкой.
В качестве объектов исследования использовались высушенные генеративные побеги и розеточные листья м.мягкой, собранные в конце фазы цветения на территории Колыванского района Новосибирской области.
Исследование состава фенольных соединений проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы «GILSTON» (модель 305,ФРАНЦИЯ) с ручным инжектором (модель RHEODYNE 7125, США) с последующей компьютерной обработкой результатов с помощью программы «Multichrom for Winuows». В качестве неподвижной фазы использовалась металлическая колонка размером 4,6 х 250 мм. В качестве неподвижной фазы была использована металлическая колонка размером 4,6 х 250 мм KROMASIL С18 с величиной частиц 5 микрон, в качестве подвижной фазы — метанол-вода-фосфорная кислота, концентрированная в соотношении 400:600:5. Анализ проводили при комнатной температуре со скоростью подачи элюента 0,8 мл/мин. Продолжительность анализа составляла 120 мин. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора «GILSTON» UV/VTS модель 151 при длине волны 254 нм.
Для изучения состава воздушно-сухое сырье измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм. 5,0 г сырья помещали в колбу объемом 250 мл, прибавляли 50 мл 70 % спирта этилового, присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 2 часов с момента закипания спирто-водной смеси в колбе. Смесь охлаждали, фильтровали через бумажный фильтр в черную колбу объемом 100 мл и доводили спиртом этиловым 70 % до метки, перемешивали и фильтровали (исследуемый раствор). Параллельно готовили серию
0,02 % растворов сравнения в 70 % спирте этиловом: рутина, кверцетнна, лютеолина, лютеолин-7-гликоэида, кемпферола, кумарина, гиперознда, геперидина, апигенина, галловой кислоты, кофейной кислоты, хлорогеновой кислоты, неохлорогеновой кислоты, коричной кислоты, феруловой кислоты, катехина, умбеллиферона, о-кумаровой кислоты, эпигаллокатехингаллата, эпикатехина, дикумарина, арбутина,
Объем вводимой исследуемой пробы и растворов сравнения составлял 50 мкл. Идентификацию разделяемых веществ проводили путем сопоставления времени удерживания компонентов смеси со временем удерживания стандартных образцов. Количественное определение идентифицированных веществ в исследуемом образце проводили по площади пика, используя метод внутренней нормализации. Полученные результаты представлены в табл. 1 и 2.
Фенольные соединения генеративных побегов м.мягкой
№ □. □ Время \-дерм5вання. мнн Содержанис.% Идентифицированное соединение
] 3,495 9.16 Растворитель
т Зг91 20гб0 Галловая кислота
3 4,60? 2,22 Какмн
4 5,905 3,75 Хлорогеновал кислота
3 7,857 3,34 Кофейная !лслота
б 5,705 2,49 —
7 9,645 2.55 Нсохлорогсновая кислотэ
5 10,66 2,60 —
9 13.4 22,50 Феруловая кисло-та.
10 25,57 5.11 Днгидроквериетин
11 з:.в? 4,73 —
12 35,34 5.20 —
13 41.47 10,11 —
14 50.86 0.55 —
15 55,89 Мб Ксмффол
Фенольные соединения розеточных листьев м.мягкой
№ п п Время удерживания, мин Содфжаяк,% Илентнфицнрйв^нное со длинен не
1 3.505 8,45 Растворитель
2 3,921 24,23 Г 1Л.Ю31Я кислота
3 4.64 1.80 Кагехнн
4 з:4Б£ 0.94 Хлоротеновая кислота
5 6,3 8 9 1.79 Вииенин (6.8-ди-С-глихозид апигенина)
6 7.827 3.40 ЦнкорнеЕая кислота
7 8.50Е 2,36 —
5 9.559 2.97 Неохлорогеновая кислота
9 10,65 2.08 —
10 15,31 17,78 Ферулмм кислот!
11 10,82 1.16 Л ЮТ( ООНН-1 -ГЛНК0д
12 27,96 8.68 —
13 32,55 4.41 —
14 34,84 >.17 —
15 40,67 14.60 —
16 68,21 0.18 Апнгеннн
Фенольный комплекс в генеративных побегах м.мягкой представлен 14-ю соединениями, из которых было идентифицировано 8 с суммарным содержанием 65,16 %. Фенольный комплекс в розеточных листьях представлен 15-ю соединениями с общим содержанием 51,35 %. Полифенольные соединения представлены в обоих органах дубильными веществами с преобладанием гидролизуемых форм, причем содержание дубильных веществ, оцениваемое по сумме галловой кислоты и катехина, в розеточных листьях выше 26,03 против 22,82 % в генеративном побеге. Состав оксикоричных кислот сходен и доминирующей кислотой является феруловая кислота, но количественно суммарное содержание этой группы биологически активных соединений выше в генеративных побегах 32,77 против 25,09 % в розеточных листьях. Различия в составе флавоноидов весьма существено. В генеративных побегах содержатся флавонолы с преобладанием дигидрокверцетина, в розеточных листьях содержатся флавоны производные апигенина и лютеолина. Причем суммарное содержание флавоноидов значительно выше в генеративных побегах 9,57 и 2,83 % соответственно.
Известно [6], что дигидрокверцетин является эталонным антиоксидантом. Он обладает мощным противовоспалительным и противоаллергенным свойствами, укрепляет и восстанавливает соединительную ткань, способствует снижению уровня холестерина, усиливает действие многих полезных веществ (витамина С и витамина Е); укрепляет сосуды и капилляры, улучшает микроциркуляцию крови, препятствует образованию тромбов, снижает воспалительные явления в простате, укрепляет иммунитет. Кемферол является производным кверцетина, который обладает капилляроукрепляющим
действием. Наличие дигидрокверцетина и кемпферола должно быть с позиций противоанемического эффекта весьма существенным. Фитопрепараты из генеративных побегов должны обладать не только патогенетическим, но и этиотропным действием при анемиях геморрагического генеза. Очевидно именно этим обстоятельством объясняется различных характер действия фитопрепаратов генеративных побегов и розеточных листьев медуницы, установленный ранее [4].
По результатам проведенных исследований можно сделать следующие выводы:
1. Фенольный комплекс вегетативных и генеративных органов медуницы мягкой представлен дубильными веществами гидролизуемой группы, оксикоричными кислотами и флавоноидами.
2. Впервые установлено наличие в составе фенольного комплекса медуницы мягкой дигидрокверцетина, апигенина и виценина.
3. Установлено, что в генеративных органах содержание флаваноидов, представленных флавонолами (дигидрокверцетин и кемпферол) в 3 раза выше чем в вегетативных органах, в которых содержатся флавоны (производные апигенина и лютеолина).
4. Различия в качественном составе флавоноидов в генеративных и вегетативных органах медуницы мягкой может обуславливать и различия в фармакологических эффектах фитопрепаратов, изготавливаемых из различных органов растения.
Список литературы
1. Киселева А. В. Биологически-активные вещества лекарственных растений Южной Сибири / А. В. Киселева, Т. А. Волхонская, В. Е. Киселев. — Новосибирск : ЦСБС «Наука Сиб. отд.», 1991. — 135 с.
2. Круглов Д. С. Некоторые аспекты фитотерапии железодефицитной анемии / Д. С. Круглов, М. А. Ханина // Современные проблемы фитотерапии : материалы I Международного съезда фитотерапевтов. — М. : Оверлей, 2006. — С. 143-146.
3. Круглов Д. С. К вопросу о специфической активности суммарного извлечения из медуницы мягчайшей / Д. С. Круглов // Basic Science for Medicine : сб. трудов 3-й Международной конф. — Новосибирск, 2007. — 39 с.
4. Круглов Д. С. Возможность применения медуниц в фитотерапии железодефицитной анемии / Д. С. Круглов, М. А. Ханина, О. В. Третьякова // Человек и лекарство : сб. материалов (тез. докл.) XV Рос. нац. конгресса. — М. : Щербинская типография, 2008. — С. 646.
5. Круглов Д. С. Полисахаридно-белковый комплекс в составе наиболее распространенных растений рода Pulmonaria / Д. С. Круглов // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции : сб. науч. тр. — Пятигорск : Изд-во ПГФА, 2009. — Вып. 64. — С. 68-70.
6. Колхир В. К. Диквертин — новое антиоксидантное и капилляропротекторное средство / В. К. Колхир и [др.] // Хим.-фарм. журн. — 1995. — № 9. — С. 61-64.
7. Britisch Herbal Pharmacopoeia. — Bournemouth : B.H.M.A, 1983. — 255 p.
RESEARCH OF PHENOLIC BANDINGS IN THE ABOVE-GROUND PART OF THE LUNGWORT
D.S. Kruglov1, N.С. Fursa2
1SEI HPE «Novosibirsk State Medical University Minhealthsocdevelopment» (Novosibirsk c.) 2SEI HPE «Yaroslavl State Medical Academy Minhealthsocdevelopment» (Yaroslavl c.)
With using HELC method it is established that the phenolic complex in generative bines and in rosellate leaves of lungwort is close on its structure to phenol carboniferous and oxycinnamic acids, but essentially differs from structure of flavonoids. Differences in qualitative flavonoids structure in generative and vegetative organs of lungwort can determine he differences in pharmacological effects of the phytopreparations made from various plant organs.
Keywords: lungwort, phenolic bandings, vicetin, dihydroquercetin, ferulic acid, anemia, HELC
About authors: Kruglov Dmitry Semenovich — candidate of technical science, senior teacher o pharmacognosy and botany chair at SEI HPE «Novosibirsk State Medical University Minhealthsocdevelopment» e-mail: [email protected]
Fursa Nikolay Sergeevich — doctor of pharmaceutical sciences, professor, head of pharmacognosy and pharmaceutical technology chair at SEI HPE «Yaroslavl State Medical Academy Minhealthsocdevelopment», e-mail: [email protected]
List of the Literature:
1. Kiseleva A. V. Biologically-active substances of herbs of the Southern Siberia / A. V. Kiseleva, T. A. Volkhonskaya, V. E. Kiselev. — Novosibirsk: the CSBG «the Science of Sib. Br», 1991. — 135 P.
2. Kruglov D. S. Some aspects of a phytotherapy of iron deficiency anemia / D.S. Kruglov, M. A. Khanina// Modern problems of phytotherapy: materials of I International congress of phytotherapists. — M: Overlay, 2006. — P. 143-146.
3. Kruglov D. S. Question of specific activity of total extraction from the softest lungwort / D. S. Kruglov // Basic Science for Medicine: Col. of Works of 3rd International conf. — Novosibirsk, 2007. — 39 P.
4. Kruglov D. S. Opportunity of application of lungworts at iron deficiency anemia phytotherapy / D. S. Kruglov, M. A. Khanina, O. V. Tretyakova // The Person and medicine: Col. of Materials (thesises of reports) The XV of Rus. Nat. Congress. — M: Shcherbinsky printing house, 2008. — P. 646.
5. Kruglov D. S. The Polysaccharide proteine complex as part of the most widespread plants of Pulmonaria genus / D. S. Kruglov // Working out, research and marketing of new pharmaceutical production: col. scien. writ. — Pyatigorsk: Publishing house PSFA, 2009. — Iss. 64. — P. 68-70
6. Kolkhir V. K. Diquertin — new antioxidant and capillary protective agent / V. K. Kolkhir and [others] // Chemical-farm. magaz. — 1995. — № 9. — P. 61-64.
7. Britisch Herbal Pharmacopoeia. — Bournemouth : B.H.M.A, 1983. — 255 p.
