CC BY
20
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ МОРФОЛОГИЯ
УДК 616-001.17:616-003.93
В. С. ПОЛЯКОВА, В. А. МИХАНОВ, Р. А. АБЗЕМЕЛЕВА, Е. И. ШУРЫГИНА
РЕПАРАТИВНАЯ РЕГЕНЕРАЦИЯ КОЖИ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ АУТОДЕРМОПЛА-СТИКИ И АППЛИКАЦИЙ ПРЕПАРАТА «ВИНФАР» НА ГРАНУЛИРУЮЩИЕ ПО-СЛЕОЖОГОВЫЕ РАНЫ
ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия», Оренбург V. S. POLYAKOVA, V. A. MIKHANOV, R. A. ABZEMELEVA, E. I. SHURYGINA
REPARATIVE REGENERATION OF THE SKIN DURING THE AUTODERMOPLASTIC AND APPLICATIONS OF THE DRUG «VINFAR» ON GRANULATING POST-BURN WOUNDS
SВEIHPE «The Orenburg State Medical Academy», Orenburg
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: ОЖОГИ КОЖИ, АУТОДЕРМОПЛАСТИКА, ФАКТОР РОСТА ФИБРОБЛАСТОВ, «ВИНФАР».
РЕЗЮМЕ
Аутодермопластика является необходимым методом лечения глубоких распространённых ожогов кожи. При этом частота отторжения аутодермо-трансплантата на практике остается высокой. В экспериментальной работе показано, что использование нового препарата «Винфар», содержащего фактор роста фибробластов, существенно ускоряет адгезию трансплантата, снижает частоту его лизиса, а также значительно улучшает процессы репарации в области раны.
KEY WORDS: SKIN BURNS, AUTODERMOPLASTIC, FIBROBLAST GROWTH FACTOR, «VINFAR».
SUMMARY
Autodermoplastic is a necessary treatment for common skin burns deep. The frequency of rejection autodermotrans-plant in practice, remains high. In the experimental work shows that the use of a new drug «Vinfar» containing fibroblast growth factor significantly accelerates the adhesion of the graft reduces the frequency of its lysis, and dramatically improves the process of wound repair.
Полякова Валентина Сергеевна - д. м. н., проф., заведующая кафедрой патологической анатомии; profpolyakova@yandex.ru; 8 (3532) 776222;
Миханов Василий Александрович - к. м. н., асс. кафедры патологической анатомии; 8 (3532) 776222; vmikhanov@gmail.com; Абземелева Регина Ашраровна - заочный аспирант кафедры патологической анатомии; 8 (3532) 776266;
Шурыгина Елена Ивановна - студентка лечебного факультета; 8(3532) 776222
ВВЕДЕНИЕ
Аутодермопластика является самым распространённым и необходимым способом закрытия глубоких распространённых дефектов кожного покрова, возникающих, как правило, в результате термических ожогов. Но приживление кожных лоскутов нередко сопровождается в последующем их лизисом, частота которых достигает 20-40% [1]. Основная причина неудовлетворительных исходов - несостоятельность механизмов репаративного гистогенеза. Ключевую роль в пролиферации и дифференци-ровке различных клеток кожи и других тканей играет группа пептидов, относящихся к фактору роста фибробластов (ФРФ) [5]. В настоящее время проводятся экспериментальные исследования для определения возможностей применения ФРФ в медицине [3, 4, 6]. В 2009 году в эксперименте сотрудниками кафедры травматологии и ортопедии ОрГМА под руководством профессора В. И. Никитенко были получены продукты жизнедеятельности бактерий штамма Bacillus subtilis 804, стимулирующие рост фибробластов человека в культуре. После проведенных экспертиз в институте им. Склифосовского было подтверждено наличие в данных метаболитах ФРФ (патент № 2427644 от 27.08.2011 г.). На основе данных метаболитов в 2011 году В. И. Никитенко разработан и зарегистрирован препарат «Винфар» (свидетельство на товарный знак № 433087 от 23.03.2011 г.), выпускаемый в настоящее время ООО «Бакорен». Таким образом, несомненный интерес представляет изучение структурно-функциональных аспектов биостимулирующего влияния препарата «Винфар» на процессы репаративной регенерации, что до сих пор не проводилось.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ - изучение влияния препарата «Винфар» на процессы заживления глубоких ожоговых ран кожи при проведении аутодермопластики.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Экспериментальные исследования проводили на 20 крысах-самцах линии «Вистар» массой 180,0±10,0 г. Была использована модель ожоговой раны кожи (термический ожог III Б степени). Сорока крысам под фторотановым наркозом на предварительно выбритые участки в межлопаточной области спины были нанесены глубокие контактные ожоги площадью 3,14 см2 (аппликация на кожу в течение 35 c плоского дна стеклянного пузырька из-под пенициллина с водой, нагретой до 100° C). После формирования струпа на 8 сутки была выполнена некрэктомия. После очищения ран и формирования грануляционной ткани на 14 сутки эксперимента выполнялась аутодермопласти-ка. Аутодермотрансплантат (АДТ) забирали с выбритого участка спины марочным способом. Животные были разделены на 2 группы по 20 крыс: 1-я - опытная, крысам которой зону раневого дефекта кожи непосредственно перед укладкой АДТ орошали 1,0 мл препарата «Винфар»; 2-я - контрольная, в которой на рану наносили 1,0 мл физиологического раствора. Производилось измерение времени адгезии АДТ. Ежедневно наблюдали за состоянием ран, степенью приживления АДТ. Животных выводили из опыта на 7 и 11 сутки после пересадки кожи. Забой и взятие материала осуществлялись согласно «Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приказ Минвуза от 13.11.1984 г. № 724). У опытных и контрольных животных иссекали участки кожи с послеоперационными ранами и подлежащими тканями. Кусочки тканей фиксировали в 10% растворе формалина, забуференного по Лилли, затем обезвоживали в этаноле возрастающей крепости и заливали в целлоидин-парафин по общепринятой методике. Гистосрезы толщиной 5-6 мкм после депарафини-зации исследовали при помощи световой микроскопии с применением гистологического (окраска гематоксилином Майера и эозином), гистохимического (окраска по Маллори, по Ван-Гизону, толуидиновым синим), иммуногистохимического (выявление экспрессии белка Ki-67, коллагена I-IV типа) методов исследования и морфометрии. В ходе иммуногистохимического исследования использовали моноклональные антитела и систему визуализации фирмы BioGenex, США.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
У животных группы контроля, которым наносился физиологический раствор, адгезия произошла через 55,7±4,6 минуты. В опытной группе адгезия АДТ наступила через 3,4±0,5 минуты, р<0,001. В группе контроля у трех животных произошел лизис АДТ - на вторые, на третьи и четвертые сутки (по одной крысе) после кожной пластики. У всех крыс опытной группы АДТ находились на месте пе-
ресадки, признаки некроза отсутствовали. Таким образом, заживление ран с приживлением АДТ в опытной группе произошло у 100% животных, в контрольной группе - лишь у 7 (70%) крыс.
В процессе приживления АДТ на месте глубоких послеожоговых гранулирующих раневых дефектов кожи в контрольной группе животных на 7 сутки после пересадки выражены дистрофические изменения эпидермиса, клеток фибробластического дифферона и межуточного вещества дермы пересаженного участка кожи. В эпителии наблюдается ги-дропическая дистрофия, в дерме отёк и выраженная лейкоцитарная инфильтрация, проникающая из подлежащего ложа в эпидермис и собственные дериваты АДТ (рис. 1). Трансплантат с подлежащим ложем связан рыхлой прослойкой отёчной грануляционной ткани. Краевая эпителизация с АДТ отсутствует. Пересаженный лоскут кожи окружён зрелой грануляционной тканью с признаками выраженной лимфо-лейкоцитарной инфильтрацией.
В опытной группе животных на 7 сутки ткань АДТ большей частью интактна, эпидермис многослойный с признаками нормальной кератинизации, кровеносные сосуды полнокровны (рис. 2). Местами в глубоких отделах преимущественного сетчатого слоя дермы, на фоне слабо выраженного очагового отёка наблюдаются единичные лимфоциты и эозинофилы. Эпителиальные клетки дериватов пролиферируют, восстанавливая органотипичность ткани пересаженного участка кожи. Выражена краевая эпителизация с АДТ на предобразованную зрелую грануляционную ткань, в которой наблюдается незначительная лимфо-макрофагальная инфильтрация с примесью эозино-филов. В результате значительной редукции сосудов и разрастания толстых волокон фибриллярного матрик-са на месте грануляций формируется плотная волокнистая неоформленная соединительная ткань, уже отчасти напоминающая дерму. Пересаженный участок кожи на всём протяжении хорошо прикреплён к подлежащему ложу, представленному редуцирующейся грануляционной тканью, с резко уменьшенным плотным фибриллярным матриксом и уже напоминающей рыхлую неоформленную соединительную ткань гиподермы, что является органотипичным для данного слоя кожи. Воспалительный процесс на границе АДТ и раневой поверхности почти отсутствует, остаётся только слабо выраженный полиморфно-клеточный инфильтрат, включающий лимфоциты, макрофаги и эозинофилы, при полном отсутствии нейтрофилов.
Таким образом, уже на 7 сутки в опытной группе наблюдается полноценное приживление АДТ к подлежащему раневому ложу, из которого произошла адекватная реваскуляризация дермы. В результате реактивные изменения переживающего АДТ
Рис. 1. Аутодермотрансплантат. Крыса. 7-е сутки после пересадки на гранулирующую раневую поверхность. Контрольная группа. Гистологический срез. Окраска: гематоксилин Майера и эозин. Ув.: х300.
Рис. 2. Аутодермотрансплантат. Крыса. 7-е сутки после пересадки на гранулирующую раневую поверхность. Опытная группа. Гистологический срез. Окраска: гематоксилин Майера и эозин. Ув.: х150.
(отёк, выраженная десквамация эпидермиса и прогрессирующее уменьшение его слоёв, а также воспалительная инфильтрация), в отличие от контроля на этом же сроке, не выражены или отсутствуют.
На 11 сутки после пересадки кожи в толще АДТ контрольной группы животных сохраняется сла-бовыраженная, но диффузная лимфогистиоцитар-ная инфильтрация с примесью эозинофилов, проникающая из подлежащего раневого ложа. В краевых участках АДТ митотическая активность клеток ба-зального и шиповатого слоев выросла до 45,8±0,5%о по сравнению с участками, удаленными от этой зоны (18,3±0,4% ). В почти редуцированной грануляционной ткани под АДТ иногда встречаются очаги расширенных полнокровных сосудов, питающих пересаженный участок кожи. В результате эпителизации с краёв АДТ образуется немногослойный эпидермис, который рыхло связан с подлежащей тканью, а многослойное строение с признаками ороговения отмечается только в проксимальных отделах. Под эпидермисом располагается незрелая неоформленная рыхлая соединительная ткань с большим количеством фибробластов, внеклеточного матрикса, многочисленными полнокровными сосудами и сохраняющейся лимфо-лейкоцитарной инфильтрацией. Всё еще продолжается фибриллогенез тонких волокон незрелого коллагена III типа, волокна которого беспорядочно расположены в толще фибриллярного матрикса.
Таким образом, морфологические изменения АДТ и подлежащего к нему раневого ложа в контроле на 11 сутки после пересадки напоминают изменения в пересаженном лоскуте кожи опытной группы, но уже на 7 сутки после АДТ, а процесс созревания грануляционной ткани в окружающем АДТ раневом дефекте даже отстаёт, несмотря на разницу в 4 суток, что, в свою очередь, говорит о ещё меньшей интенсификации репара-тивных процессов в контрольной группе животных.
В толще АДТ опытной группы на 11 сутки после пересадки сохраняется лишь очаговая лимфогисти-оцитарная инфильтрация только в краевых отделах на границе с участками реэпителизации. В остальном строение АДТ напоминает строение интактной кожи краёв раны. Краевая эпителизация завершена, многослойный эпидермис приобретает все функциональные слои (5-6 слоёв) и признаки поверхностной ке-ратинизации. Что соответствует общепризнанным представлениям о нормальном строении эпидермиса кожи крыс [2]. Подлежащая соединительная ткань с небольшим количеством сосудов, волокнистый ма-трикс преобладает над аморфным, волокна расположены с заметным выравниванием параллельно фи-бробластам и базальной мембране эпидермиса, что определяется функциональной нагрузкой на вновь образованную ткань. Выражен синтез зрелого коллагена I типа, почти отсутствующий у животных контрольной группы на этом же сроке эксперимента. Сохраняется
незначительный диффузный лимфогистиоцитарный инфильтрат. Среди многочисленных фибробластов начинают появляться единичные фиброциты. В связи с завершением формирования эпителиального пласта, дифференцирующегося на все функциональные слои, показатель митотической активности краевых участков АДТ снижается по сравнению с контролем до 32,3±0,4%о и остается одинаковым по всей площади пересаженного участка кожи.
ВЫВОДЫ
1. Местное однократное применение при кожной пластике на гранулирующие послеожоговые раны препарата «Винфар» существенно ускоряет адгезию АДТ и снижает частоту его лизиса.
2. У животных, получавших «Винфар», происходит ускоренное восстановление функций клеток-эффекторов репаративного процесса, что обеспечивает благоприятные условия микроокружения для более эффективного и неосложнённого приживления АДТ.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Шапкин, Ю. Г. Способ повышения эффективности пластического закрытия ран после от-
морожения / Ю. Г. Шапкин // Анналы хирургии. -2010. - № 5. - C. 72-74.
2. Шаповалов, Д. А. Особенности строения кожи крыс в норме и при действии пирогенала / Д. А. Шаповалов, А. П. Голуб // Морфология. - 2008. -Т. II. - № 2. - С. 71-74.
3. Akita, S. Basic fibroblast growth factor accelerates and improves second-degree burn wound healing/ S. Akita, K. Akino, T. Imaizumi // Wound Repair Regen. - 2008. -Vol. 16. - № 5. - P. 635-641.
4. Bendfeldt, K. Basic fibroblast growth factor modulates density of blood vessels and preserves tight junctions in organotypic cortical cultures of mice: a new in vitro model of the blood-brain barrier / К. Bendfeldt, V. Radojevic, J. Kapfhammer // J. Neurosci. - 2007. - Vol. 27. - № 12. - P. 3260-3267.
5. Böttcher, R. T. Fibroblast growth factor signaling during early vertebrate development / R. T. Böttcher, C. Niehrs // Endocr. - Rev. 2005. - Vol. 26. - № 1. - P. 63-77.
6. Yao, C. H. Acceleration of wound healing in traumatic ulcers by absorbable collagen sponge containing recombinant basic fibroblast growth factor / С. Yao, Р. Yao, Н. Wu, Z. Zha // Biomed. Mater. - 2006. - Vol. 1. - № 1. -P. 33-37.
ПЕДИАТРИЯ
УДК 616.314-007.1(053.2) Е. С. НЕФЕДОВА
АНОМАЛИИ ЗУБОЧЕЛЮСТНОЙ СИСТЕМЫ У ДЕТЕЙ
ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия», Оренбург
E. S. NEFEDOVA
DENTAL ANOMALIES OF CHILDHOOD
SBEIHPE «The Orenburg State Medical Academy», Orenburg
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: ЗУБОЧЕЛЮСТНЫЕ АНОМАЛИИ, ДЕТИ, ЭКОЛОГИЧЕСКОЕ ЗАГРЯЗНЕНИЕ.
РЕЗЮМЕ
В статье проведена оценка частоты и структуры аномалий зубочелюстной системы у детей в возрасте 12 лет в г. Оренбурге в зависимости от уровня антропогенного загрязнения среды в районах их проживания.
KEY WORDS: DENTAL ANOMALIES, CHILDREN, ENVIRONMENTAL CONTAMINATION.
Нефедова Екатерина Сергеевна - ассистент кафедры стоматологии и челюстно-лицевой хирургии ОрГМА
SUMMARY
The article provides an assessment of prevalence and structure of dental anomalies in 12 years old children in Orenburg city (Russia) depending on the levels of anthropogenic environmental contamination in their residential areas.
АКТУАЛЬНОСТЬ изучения частоты и структуры аномалий зубочелюстной системы обусловлена широкой распространенностью данной патологии среди детей всех возрастных групп. Анализ публикаций отечественных авторов по вопросам эпидемиологии стоматологических заболеваний за последние 30 лет свидетельствуют о высоком уровне патологий развития зубочелюстной системы.
