CC BY
20
liiC. I II ¡Ii' ВДНЗУ «Украгнсъка жедична стожатологЬчна акадежШ»
Summary
EFFECT OF PSYCHOEMOTIONAL STRESS ON ACTIVITY OF ALPHA AMYLASE AND CONCENTRATION OF TOTAL PROTEIN IN WHOLE SALIVA OF YOUNG ADULTS Tsuber V.Y.
Key words: psychoemotional stress, alpha amylase, total protein.
The aim of the research was to investigate the effects of psychoemotional stress on the changes of alpha-amylase activity and concentration of total protein in whole saliva of young adults and relation of the changes to state and trait anxiety and personality reaction type. 36 young adults, both males and females, were subjected to a stressor (academic examination) and to a control condition. Levels of total protein, alpha-amylase and oxidatively modified proteins were measured in the whole saliva. State and trait anxiety as well as personality reaction type were assessed. It was found that activity of alpha-amylase increased significantly at psychoemotional stress compared to the control condition, concentration of total protein showed no significant increase. A certain relationship was found between alterations of the parameters and a personality type. The increase of activity of salivary alpha-amylase in whole saliva at psychoemotional stress indicates relation of secretion of the enzyme to activation of the stress-realizing systems.
УДК 616.833-0.89.85-003.93:|615.31:577.115.3 Чайковский Ю.Б., Храпай Е. В.
РЕГЕНЕРАЦИЯ ТРАВМИРОВАННОГО ПЕРИФЕРИЧЕСКОГО НЕРВА ПОД ДЕЙСТВИЕМ БИ0ФЛАВ0Н0ИД0В НА РАННИХ ЭТАПАХ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Национальный медицинский университет им. A.A. Богомольца, Киев, Украина
Несмотря на разработанные хирургические и терапевтические методы лечения травм периферических нервов, функциональные результаты их регенерации не всегда удовлетворительны. В большей степени неудовлетворительные результаты обусловлены фиброзом в зоне травмы. В работе проведена морфологическая оценка действия Липина с Корвитином и Липофлавона на ранних этапах посттравматического восстановления (3 и 6 недель) периферического нерва в эксперименте. Исследования проведены на 47 крысах, которым предварительно был пересечен седалищный нерв и размозжен проксимальный отдел. Морфологические изменения оценивались в регенерирующих периферических нервах через 3 и 6 недель. На обоих этапах восстановления отмечено большую плотность нервных волокон в периферическом нерве экспериментальных животных. Липофлавон оказал более выраженное действие на регенерацию и ангиогенез в зоне травмы и снижение фиброза.
Ключевые слова: седалищный нерв, травма, липин, корвитин, липофлавон.
Введение не травмы). Для более детального изучения
Поиск новых эффективных методов лечения Действия этих препаратов проведены опыты на травм периферических нервов, несмотря на ¡^недел^ П0сттравматическ0г° пери0ДЭ (3
многолетние исследования, остается актуальным [1,2,3,4]. Несмотря на разработанные хирургические и терапевтические методы лечения данной патологии, функциональные результаты регенерации периферических нервов далеко не всегда удовлетворительны [5,6].
Ранее нами были изучены особенности фармакологической коррекции структурных нарушений, развивающихся в травмированном седалищном нерве в эксперименте [7]. Было показано, что лекарственные средства Липофлавон и Корвитин с Липином имели положительный эффект на отдельных этапах восстановления (12 недель). Терапия этими препаратами улучшала эффективность регенерации нервных волокон и кровеносных сосудов во всех отделах поврежденного нерва (проксимальном, дистальном, зо-
Липин представляет собой фосфатидилхо-лин, а Корвитин - кверцетин, предотвращающий разрушение клеточных мембран. Препарат Липофлавон, будучи липосомальной формой кверцетина, является более эффективной формой доставки лекарственного средства к терапевтическим мишеням.
Целью исследования стало сравнительное изучение этих препаратов на ранних этапах восстановления 3 и 6 недель.
Материалы и методы исследования Работа выполнена на 47 белых крысах (самках) массой тела 180-250 г. Опытные животные были разделены на 5 групп. Описание групп приведено в таблице 1.
Лктуи.п.н i проблемы сучасно!' медицины
Таблица 1.
Распределение животных по группам в зависимости от периода содержания.
Группа Препарат Период восстановления
1 Контроль (п=7) -
2 Корвитин+Липин (п=10) 3 недели
3 Корвитин+Липин (п=10) 6 недель
4 Липофлавон (п=10) 3 недели
5 Липофлавон (п=10) 6 недель
Полную аксотомию седалищного нерва экспериментальных животных воспроизводили в следующем порядке: производили оперативный доступ к правому седалищному нерву, последний мобилизовали и перерезали на уровне середины бедренной кости крыс. Проксимальный и дистальный концы нерва сшивали эпинев-ральным швом ниткой "Ethicon" (Шотландия) 10/0 на атравматической иголке, оставляя диастаз размером 1 мм. Проксимальный отдел нерва на расстоянии 3-5 мм от области травмирования размозжали с помощью пинцета. Рану зашивали наглухо. Препараты вводили пара-неврально в течение десяти дней после травмы. Липофлавон ("Биолек", Харьков) вводили в дозе 0,1 мг/кг, Липин ("Биолек", Харьков) - 0,1 мг/кг, Корвитин ("Борщаговский химико-
фармацевтический завод", Киев) - 0,2 мг/кг. Спустя 3 и 6 недель у животных произвели забор материала для дальнейшего ультраструктурного исследования. Для гистологического исследования нервы фиксировали в течение суток в 10% нейтральном формалине. Изготавливали срезы на криотоме и импрегнировали в азотнокислом серебре [8]. Для изучения фармакологического эффекта исследуемых препаратов использовали морфометрические показатели: плотность нервных волокон и угол их отклонения от оси травмированного нерва. Экспериментальные исследования на животных проводили с учетом требований Guide of the саге and use of laboratory animals (1996).
Результаты и их обсуждение
Влияние комбинированного действия Липина с Корвитином на посттравматическое восстановление нерва.
Через 3 недели после операции наблюдали полиморфный характер процессов регенерации структурных элементов поврежденного нерва. Во всех отделах установлено наличие нервных волокон, но их количество и особенности расположения в отдельных зонах существенно отличались. В проксимальном отделе характер распределения нервных волокон существенно не отличался от контрольных. Но нервные волокна были гиперимпрегнированы, отмечено пролиферацию шванновских клеток и формирование новых аксонов. Плотность нервных волокон при травмировании нерва уменьшается, при этом увеличивается их угол отклонения от оси поврежденного нерва (Табл. 2,3). Нервные волокна вблизи эпиневрия часто имели ампульнопо-добные расширения аксонов, встречались спи-
рали Перрончито. В зоне шва волокна были расположены вблизи поверхности регенераци-онной невромы, формируя отдельные кластеры, огибая зону шва. У большинства животных в зоне шва формируется соединительнотканный рубец, в котором также присутствовали спирали Перрончито. В дистальном отделе нервные волокна имеют извилистый вид и ориентированы диффузно. Вокруг волокон отмечено активную пролиферацию шванновских клеток и фиброб-ластов. Встречали рекуррентные нервные волокна. Таким образом, на ранних этапах (3 недели) после травмы Липин с Корвитином способствуют регенерации нервных волокон в дистальный отдел. Формирование соединительнотканных рубцов затрудняет эти процессы, о чем свидетельствует образование спиралей Перрончито и рекуррентных волокон. Также отмечены признаки развития воспалительного процесса.
Через 6 недель после травмы наблюдали полиморфный характер процессов регенерации структурных элементов поврежденного нерва. В проксимальном отделе встречаются дополнительные группы нервных волокон, которые имеют тонкий и часто извилистый вид. Плотность их расположения восстанавливается до контрольных значений, но угол отклонения нервных волокон от оси нерва увеличен (Табл. 2,3). У большинства нервных волокон присутствует шванновская оболочка, но ее толщина не равномерна. Также отмечено пролиферацию фибробластов и образование кровеносных сосудов. В зоне шва нервные волокна имеют разнонаправленную ориентацию, что обусловлено наличием групп соединительнотканных рубцов. Нервные волокна в таких зонах останавливаются в регенерации, о чем свидетельствует их ги-перимпренация и формирование спиралей Перрончито с ампульноподобными расширениями аксонов. Вблизи эпиневрия отмечено множество кровеносных сосудов разного диаметра. Дистальный отдел на 6-й неделе после травмирования представлен несколькими тяжами нервных волокон, которые гипоимпрегнированы и ориентированы диффузно. Плотность волокон на 6-й неделе восстановления существенно возросла по сравнению с предыдущим периодом. При этом угол отклонения нервных волокон от оси нерва не изменился (Табл. 2,3). Между ними по-прежнему продолжается пролиферация шванновских клеток. Встречаются единичные дегранулированные тканевые базофилы.
Таким образом, на 6 неделе восстановитель-
Том 10, Выпуск 4
169
В1СНИК ВДНЗУ «Украгнсъка жедична стожатологЬчна акадежШ»
ного периода продолжаются регенерационные процессы в трамированном нерве. В проксимальном отделе завершается миелинизация новообразованных нервных волокон, а в дис-тальном - волокна формируют отдельные крупные тяжи. При этом формирование соединительнотканных рубцов и воспалительные реакции продолжаются.
Влияние Липофлавона на посттравматическое восстановление нерва.
Под влиянием Липофлавона особенности морфологических изменений на 3 неделе после травмы имели немного иной характер. Макроскопически все отделы травмированного нерва, как и предыдущих групп, четко различались. В проксимальном отделе нервные волокна существенно не отличались от контрольных, и характеризовались разной толщиной миелиновых оболочек. Нервные волокна были гиперимпрег-нированы, вокруг них встречаются активные шванновские клетки и колбы роста. Плотность их расположения не отличается от контрольных значений. Но угол отклонения нервных волокон значительно увеличился (Табл. 2,3). Встречались группы кровеносных сосудов. Они часто формируют сплетения и анастомозы, множество сосудов прорастает в зоне травмы. Ампульно-подобные расширения аксонов встречаются лишь у некоторых нервных волокон, расположенных вблизи эпиневрия. В зоне шва нервные волокна были расположены как на поверхности регенерационной невромы, так и в ее толще, просекая ее насквозь. Такой характер регенерации в области шва обусловлен снижением развития соединительнотканных рубцов. В результате этого количество регенерировавших волокон в дистальном отделе увеличилось. Плотность волокон достоверно увеличилась в сравнении с группой животных, получавших Липин с Корвитином. При этом характеристика отклонения нервных волокон имела другой характер.
Изменение плотности расположения нервных
Угол волокон значительно снизился, что может свидетельствовать о беспрепятственном прорастании нервных волокон в дистальный нерв. Таким образом, на ранних этапах (3 недели) после травмы, Липофлавон в большей мере способствовал регенерации нервных волокон в травмированном нерве. В основе этого снижение развития фиброза и активный ангиогенез.
Через 6 недель после травмы большинство нервных волокон в проксимальном отделе были миелинизированными. Отмечено незначительное уменьшение плотности нервных волокон. Но угол отклонения нервных волокон соответствует контрольным значениям (Табл. 2,3). Пролиферация фибробластов и шванновских клеток отмечена лишь в отдельных зонах перехода проксимального отдела в зону шва. В зоне шва нервные волокна формируют группы крупных кластеров. Вблизи эпиневрия отмечено множество кровеносных сосудов разного диаметра. Дистальный отдел на 6 неделе после травмирования представлен несколькими тяжами, в которых нервные волокна гипо- и гиперимпрегниро-ваны и ориентированы вдоль оси нерва. Между ними присутствуют активные шванновские клетки. Плотность волокон на 6 неделе восстановления достоверно увеличился в сравнении с Корвитином и Липином, а угол отклонения нервных волокон имел подобную тенденцию.
Таким образом, на 6-й неделе восстановительного периода под действием Липофлавона продолжают развиваться процессы, описанные на ранних этапах восстановления. Нервные волокна активнее регенерируют в дистальный отдел нерва вдоль сосудов, которые восстанавливаются после травмы. В дистальном отделе нервные волокна формируют отдельные крупные тяжи. При этом существенного формирования соединительнотканных рубцов и развития воспалительных реакций не отмечено.
Таблица 2.
покон в норме и при фармакокорекции на ранних
этапах восстановления.
Группа Проксимальный отдел Зона травмы Дистальный отдел
Контроль 10505,05±346,77
Корвитин+ 9250,68± 8516,64± 6024,43±
Липин (3 нед.) 385,365а 333,01 200,67а
Корвитин+ 10132,59± 9669,64± 8188,80±
Липин (6 нед.) 385,38 671,68 184,71а
Липофлавон 10450,17± 8693,92± 6948,04±
(3 нед.) 258,63Ь 590,38 460,74а,Ь
Липофлавон 9471,04± 9175,56± 9071,29±
(6 нед.) 211,51а 485,13 287,04а,Ь
а- достоверно по отношению к контролю (р<0,05); Ь- достоверно по отношению к травме с введением Липина с Корвитином (р<0,05).
Это обусловлено тем, что Липофлавон, который представлен липосомальной формой квер-цетина (препарат Корвитин), защищает нервные клетки от окислительного стресса, активирует эндогенные антиоксидантные системы защиты, снижает розвитие воспалительного процесса и повышает рост нейритов [7]. Разработанная в
Украине липосомальная форма кверцетина, используемая при многих заболеваниях и экспериментальных патологических состояниях, оказалась очень эффективной. Липофлавон может быть рассмотрен как альтернативный препарат в лекарственной терапии острого периода травмы периферических нервов.
Лктуи.п.н i проблеми сучасно!" медицини
Таблица 3.
Изменение угла отклонения нервных волокон от оси травмированного нерва.
Группа Проксимальный отдел Зона травмы Дистальный отдел
Контроль 23,77±1,64°
Корвитин+ Липин (3 нед.) 28,55±1,40°а 30,98±1,33° 27,81 ±1,75°а
Корвитин+ Липин (6 нед.) 29,71 ±1,40°а 30,45±1,78° 30,75±1,46°а
Липофлавон (3 нед.) 30,83±1,82°а 22,15±1,78° Ь 15,35±0,850а,Ь
Липофлавон (6 нед.) 25,25±1,80° 23,82±1,86° Ь 27,14± 1,63°Ь
а- достоверно по отношению к контролю (р<0,05); Ь- достоверно по отношению к травме с введением Липина с Корвити-ном (р<0,05). В нашей работе на обоих этапах восстановления (3 и 6 недель) отмечалось более выраженное действие Липофлавона, чем Липина с Корвитином. При этом улучшается регенерация нервных волокон и кровеносных сосудов. Также отмечено снижение развития фиброза.
Выводы
1. Липофлавон влияет на морфологию реге-нерационной невромы в виде снижения фиброзного компонента в ее составе, усиленной васкуляризации, а, следовательно, способствует прорастанию аксонов в дистальный участок.
2. Липофлавон в большей степени, чем Липин с Корвитином способствовал регенерации нервных волокон в травмированном нерве.
Литература
1. Геращенко С.Б. Перифершний нерв (нейрон-судинно-десмальш взасмовщношення в норки та патологи) / С.Б. Геращенко, О.1. Дельцова, А.К. Коломшцев, Ю.Б. Чайковський. -Терношль: Укрмедкнига, 2005. - 342 с.
2. Цымбалюк В.И. Повышение эффективности микрохирургических операций у больных с последствием травм срединного и локтевого нервов области предплечья / В.И. Цымбалюк, Ю.Б. Чайковский, Л.А. Ломако, Л.И. Фисенко. - К.: АТЗТ "Компания "РАДА", 1998.-118 с.
Сокуренко Л.М. Регенерац1я перифершного нерва в умовах нейропластики, проведено!' в pi3Hi термши шсля пошкодження, та стимуляцп м1елшогенезу: автореф. дис. на здобуття наук, ступеня канд. мед. наук: спец. 14.03.09 "Пстолопя, цитолопя, ембрюлопя" / Л.М. Сокуренко. - К., 2003. - 20 с. Корсак A.B. Морфолопчна характеристика регенерацшноТ не-вроми перифершного нерва за умов його пошкодження та за-стосування омега-З-полшенасичених кислот / A.B. Корсак, Ю.Б. Чайковський, О.М. Грабовий [та ¡н.] // Морфолопя. - 2007. -Т.1,№3.-С. 50-53.
Siemionow М. Current techniques and concepts in peripheral nerve repair / M. Siemionow, G. Brzezicki // Int. Rev. Neurobiol. - 2009. -V. 87- P. 141-172.
Domseyfer U. Surgical therapy of peripheral nerve lesions: current status and new perspectives / U. Domseyfer, K. Matiasek, M. A. Fichter [et al.] // Zentralbl. Neurochir. - 2007. - V. 68. - P. 101-110. Храпай E.B. Липофлавон повышает регенерацию нервных волокон в условия экспериментальной модели травмы периферического нерва / E.B. Храпай // 1нновацшш технологи у експе-риментальнш медицин! та бюлогм: Актуальш проблеми сучас-ноТ медицини. - Полтава, 2010. - С. 116.
Коломийцев А.К. Быстрый метод импрегнации азотнокислым серебром элементов периферической нервной системы, пригодный для парафиновых и целлоидиновых срезов / А.К. Коломийцев, Ю.Б. Чайковский, Т.Л. Терещенко // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1981. - Т. 81, № 8. - С. 93-96.
Реферат
РЕГЕНЕРАЦ1Я ТРАВМОВАНОГО ПЕРИФЕР1ЙНОГО НЕРВА П1Д ВПЛИВОМ БЮФЛАВОНОЩ1В НА PAHHIX ЕТАПАХ В ЕКСПЕРИМЕНТ1 Чайковський Ю.Б., Храпай О.В.
Ключов1 слова: сщничий нерв, травма, лтш, корв1тин, лтофлавон.
Незважаючи на розроблеш xipypriHHi та терапевтичш методи лкування травм перифершних нерв1в, функцюнальы результати Тх регенераци не завжди задовтьнк В бшьшш Mipi незадовтьы результати обумовлеш ф1брозом в зон1 травми. В робот1 проведено морфолопчна оцшка дП' JliniHy з Корв1тином та Л1пофлавону на раншх етапах посттравматичного вщновлення (3 i 6 тижн1в) перифер1йного нерва в експериментк Дослщження проведен! на 47 щурах, яким попередньо був переачений сщничний нерв та розчавлений проксимальний вщдт. Морфолопчн1 зм1ни оц1нювали в регенеруючих перифер1йних нервах через 3 i 6 тижн1в. На обох етапах вщновлення вщм1чено бтьшу щтьнють нервових волокон в перифер1йному нерв1 експериментальних тварин. Л1пофлавон мав б1льш вираженудш на регенерац1ю i анпогенез в зош травми та зниження ф1брозу.
Summary
REGENERATION OF TRAUMATIZED PERIPHERAL NERVE TREATED WITH BIOFLAVONOIDS AT
EARLY STAGES (EXPERIMENT)
Tchaikovskiy Yu.B., Khrapay O.V.
Key words: sciatic nerve, trauma, lipin, corvitin, lipoflavon.
In spite of existing surgical and therapeutic methods for the treatment of peripheral nerve traumas, functional results of their regeneration are far from being completely satisfactory. Unsatisfactory results are to a great extent conditioned by fibrosis in the injured area. We have performed experiments aimed to carry out morphological assessment of lipin, korvitin and lipoflavon action on early stages of the peripheral nerve posttraumatic recovery (3 and 6 weeks). Our studies have been conducted on 47 rats with prior sciatic nerve transaction and crushing of a proximal fragment. Morphological changes in regenerating peripheral nerves have been evaluated in 3 and 6 weeks. During the both periods there has been found out increased density of nerve fibers in the peripheral nerve of test animal. Lipoflavon has shown more marked effect on regeneration and angiogenesis in the injured area and the reduction of fibrosis.
Tom 10, Выпуск 4
171
