CC BY
79
mated by DC, TC and MDA content, the efficiency of the antioxidant protection by the catalase activity, SOD (blood, periodontium mucous membrane), by ceruloplasmin content in blood. Animals were observed in 8 weeks after the bilateral gonadectomy. It has been found out that the gonadectomy caused more intensive accumulation of LPO products in the blood in males, despite of greater activity of their antioxidant protective systems. Under such conditions there was diminishing of malic dialdehyde concentration and the decrease in the activity of superoxide dismutase in periodontium mucous membrane, that to a greater extent in is typical for gonadectomized female rats. It proves the different role of androgens and estrogens in the regulation of LPO systems and antioxidant protection in the periodontium of mucous membrane.
УДК 616.833-0.89.85-003.93:|615.31:577.115.3
ЛИП0ФЛАВ0Н ПОВЫШАЕТ РЕГЕНЕРАЦИЮ НЕРВНЫХ ВОЛОКОН В УСЛОВИЯХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛИ ТРАВМЫ ПЕРИФЕРИЧЕСКОГО НЕРВА
Храпай Е.В.
Национальный медицинский университет им. А.А.Богомольца, Киев.
При травмах периферических нервов принято использование микрохирургической техники, что способствует процессам регенерации нервных волокон, но при тяжелых травмах не всегда удается достичь желаемого результата. Фармакологическая коррекция регенерационных процессов в травмированных нервах может способствовать восстановлению регенерирующих волокон и улучшить жизнь больных данной категории. Исходя из этого, целью работы явилось изучение характера процессов де- и регенерации в травматически поврежденном нерве у крыс, а также влияние лекарственного средства Липофлавона на процессы восстановления нервных волокон. Липофлавон - препарат, который представлен липосомальной формой кверцетина. Мы использовали Липофлавон как более эффективную форму доставки лекарственного средства к терапевтическим мишеням при травматическом повреждении нервных волокон. Вопросы применения кверцетина в экспериментальной патологии нервной системы ранее не рассматривались. Разработанная в Украине липосомальная форма кверцетина, используемая при многих заболеваниях и экспериментальных патологических состояниях, оказалась очень эффективной. Исследования проведены на белых крысах самках весом 180-220 г. Липофлавон ("Биолек", Харьков, Украина) вводили параневрально в дозе 0.1 мг/кг в течение первых десяти дней с момента воспроизведения полной невротомии. Спустя 12 недель у животных произвели забор материала для дальнейшего гистологического и ультраструктурного исследования. Срезы изготавливали на крио-томе и импрегнировали в азотнокислом серебре. Для изучения фармакологического эффекта исследуемых препаратов использовали морфометрические показатели: плотность нервных волокон и угол их отклонения от оси травмированного нерва. Исследования показали, что Липофлавон в дозе 0.1 мг/кт имеет выраженный лечебный эффект при травмировании периферического нерва в экспериментальных условиях. Увеличивается количество нервных волокон и активность регенерации. Позитивный эффект Липофлавона можно связывать с тем, что липосомальная форма, как продукт нанотехнологических разработок, имеет высокую тропность к клеточным мембранам. Такая форма препарата ускоряет прорастание и миелинизацию нервных волокон. Это связано с антиоксидантными свойствами, которые демонстрирует кверцетин. Даже при коротких сроках введения Липофлавон дает выраженный эффект.
Ключевые слова: регенерация, периферический нерв, биофлавоноид, липосома, антиоксидант, травма.
Вступление
Известно, что использование микрохирургической техники при травмах периферических нервов способствует процессам регенерации нервных волокон, но при тяжелых травмах не всегда удается достичь желаемого результата. Поэтому фармакологическая коррекция регенерационных процессов в травмированных нервах может способствовать восстановлению регенерирующих волокон и улучшить жизнь больных данной категории. Исходя из этого целью работы явилось изучение характера процессов регенерации в травматически поврежденном нерве крыс, а также влияние лекарственного средства липофлавона на процессы восстановления нер-
вных волокон [1-3]. Липофлавон - препарат, который представлен липосомальной формой кверцетина. Флавоноиды защищают нервные клетки от окислительного стресса, активируют эндогенные антиоксидантные системы защиты, снижают розвитие воспалительного процесса и повышают рост нейритов [4,5]. Разработанная в Украине липосомальная форма кверцетина, используемая при многих заболеваниях и экспериментальных патологических состояниях, оказалась очень эффективной.
Мы использовали липофлавон как более эффективную форму доставки лекарственного средства к терапевтическим мишеням при травматическом повреждении нервных волокон.
Эффективность применения кверцетина ранее были показаны в экспериментальной и клинической патологии нервной системы. Антиоксидант кверцетин является не растворимым поэтому разработана его липосомальная форма. В нашей работе представлены результаты исследования структурно-морфологических изменений, развивающихся в травмированном нерве и терапевтической коррекции этих процессов с помощью лекарственного препарата Липофлаво-на.
Методы и объект исследования
Исследования проведены на 84 белых крысах самках весом 180-220 г. Животные были разделены на пять групп: интактные (п=7), псевдо-оперированные животные (п=6); оперированные животные с невротомией (п=9), оперированные животные с невротомией и использованием Ли-пофлавона (п=31); оперированные животные с невротомией и использованием Липофлавона (п=31). Препараты вводили параневрально в течении десяти дней после травмы. Липофлавон ("Биолек", Харьков) вводили в дозе 0,1 мг/кг, ли-пин ("Биолек", Харьков) - 0,1 мг/кг, корвитин ("Борщаговский химико-фармацевтический завод", Киев) - 0,2 мг/кг. Спустя 12 недель у животных произвели забор материала для дальнейшего гистологического и ультраструктурного исследования. Для гистологического исследования нервы фиксировали в течении суток в 10% нейтральном формалине. Изготавливали срезы на криотоме и импрегнировали в азотнокислом серебре [6]. Для изучения фармакологического эффекта исследуемых препаратов использовали морфометрические показатели: плотность нервных волокон и угол их отклонения от оси травмированного нерва.
Результаты исследования и их обсуждение
Изучили морфологическую организацию травмированного седалищного нерва спустя 12 недель после полной невротомии.
Установлено, что в проксимальном отделе травмированного нерва развиваются структур-но-морфологические изменения организации нерва. Нервные волокна ориентированы группами, которые расположены в нерве неплотно. Между отдельными группами нервных волокон встречаются активные фибробласты и кровеносные сосуды. Плотность нервных волокон при травмировании нерва существенно уменьшается. Так, у интактных животных этот показ составил 10505,05±346,77 а при травме 6699,795±247,68 (р<0,05). При этом увеличивается угол отклонения нервных волокон от оси по-
врежденного нерва (Табл. 1,2). Такие изменения объясняются деформацией проксимального отдела нерва при моделировании патологии, что усугубляет процессы регенерации нервных волокон.
В дистальном отделе нервные волокна расположены более диффузно. Толщина этих волокон визуально кажется меньшей от аналогичных в проксимальном отделе и интактного нерва. Большинство регенерированных нервных волокон расположены небольшими пучками, между которыми встречаются отдельные волокна. Отмечено формированные соединительной ткани в дистальном отделе поврежденного нерва. Плотность волокон уменьшается и составляет 4728,705±237,04 (р<0,05).
Использование Липина с Корвитином увеличивает активность процессов регенерации нервных волокон в проксимальном и дистальном отделах травмированного нерва. В проксимальном отделе нервные волокна более плотно организованы, отмечается незначительное увеличение угла отклонения от оси нерва (Табл. 1,2). Нервные волокна регенерируют в дистальный отдел группами. В области шва были отмечены зоны развития соединительнотканного рубца, что негативно повлияло на процессы регенерации нервных волокон. Так, плотность волокон в дистальном отделе составила 9596,43±267,46 (р<0,05), а в дистальном - 8547,46±361,35 (р<0,05). В дистальном отделе нерва также отмечается развитие соединительной ткани (Рис. 1)-
При использовании Липофлавона в проксимальном отделе нерва нервные волокна располагались группами, между которых встречались колбы роста. Регенерировавшие нервные волокна прорастают дистальный отдел более активно, что связано с снижение формирования соединительнотканных рубцов в области шва нерва. Встречаются нервные волокна на разных стадиях миелинизирующего процесса. В дистальном отделе встречаются группы активных швановских клеток вокруг которых расположены тонкие нервные волокна (Рис. 2). То есть липофлавон имеет стимулирующее действие на активность регенерационных процессов. Возрастает плотность нервных волокон: в проксимальном отделе этот показатель составил 10891,08±445,33 (р<0,05), а в дистальном -10532,71 ±338,37 (р<0,05). Одновременно с этим установлено увеличение угла отклонения нервных волокон от оси поврежденного нерва (Табл. 1,2).
Том 10, Выпуск 1
117
Рис. 1. Дистальный отдел травмированного нерва. Липин с корвитином. Нервные волокна расположены группами. 12 недель после операции. Импрегнация серебром. 06.40, ок. 10.
Рис. 2. Дистальный отдел травмированного нерва. Липофлавон. Нервные волокна расположены более плотными группами.
12 недель после операции. Импрегнация серебром. Об.40, ок. 10.
Таблица1.
Угол отклонения нервных волокон от оси травмированного нерва.
Группа Проксимальный отдел Дистальный отдел
1 Контроль 23,77±1,64°
2 Псевдооперированные 25,56±1,55°
3 Травма 31,65±1,98°а 34,37±2,10°а
4 Корвитин+Липин 33,78±1,65°а 28,39±2,40°а
5 Липофлавон 25,62±1,60°Ь,с 33,37±2,07°а,с
а - достоверно по отношению к группе 1 (р<0,05);
Ь - достоверно по отношению к группе 3 (р<0,05); с - достоверно по отношению к группе 4 (р<0,05).
Таблица 2.
Изменение плотности расположения нервных волокон в травмированном нерве.
Группа Проксимальный отдел Дистальный отдел
1 Контроль 10505,05±346,77
2 Псевдооперированные 10339,87±247,05
3 Травма 6699,795±247,68а 4728,705±237,04а
4 Корвитин+Липин 9596,43±267,46а,Ь 8547,46±361,35а,Ь
5 Липофлавон 10891,08±445,ЗЗЬ,с 10532,71±338,37Ь,с
а - достоверно по отношению к группе 1 (р<0,05);
Ь - достоверно по отношению к группе 3 (р<0,05); с - достоверно по отношению к группе 4 (р<0,05).
вами, которыми владеет кверцетин. Даже при коротких терминах введения (10 дней) Липоф-лавон имеет выраженный эффект.
Литература
1. Перифершний нерв (нейрон-судинно-десмальш взаемовщно-шення в HopMi та патологи) / [С.Б.Геращенко, О.кДельцова, А.К.Коломшцев та ¡н.]. - Терношль : Укрмедкнига, 2005. - 342 с.
2. Coban Y.K. Ischemic preconditioning reduces the severity of ischemia-reperfusion injury of peripheral nerve in rats / Y.K.Coban, H.Ciralik, E.B.Kurutas.// J. Brachial Plexus Per. Nerve Injury. -2006.-V.1, №2. - P.1-5.
3. Сокуренко Jl.M. Регенерата перифершного нерва в умовах нейропластики, проведено!' в pi3Hi термши шсля пошкодження, та стимуляци м1слшогенезу : автореф. дис. на здобуття наук, ступеня канд. мед. наук/ Л.М.Сокуренко,- К., 2003. - 180 с.
4. Maher P. Flavonoids protect retinal ganglion cells from oxidative stress-induced death / P.Maher, A.Hanneken // Invest. Ophthalm. Vis. Sci. - 2005. - V.46. - P.4796-4803.
5. Cho S.Y. Quercetin suppresses proinflammatory cytokines production through MAP kinases and NF-кВ pathway in lipopolysaccharide-stimulated macrophage / S.Y.Cho, S.J.Park, M.J.Kwon [et a I.] II J. Mol. Cell. Biochem. - 2003. - V.243. - P.153-160.
6. Коломийцев А.К. Быстрый метод импрегнации азотнокислым серебром элементов периферической нервной системы, пригодный для парафиновых и целлоидиновых срезов / А.К.Коломийцев, Ю.Б.Чайковский, Т.Л.Терещенко // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1981. - Т.81, № 8. - С.93-96.
Проведенные исследования показывают, Ли-пофлавон в дозе 0,1 мг/кг при параневральном введении позитивно влияет на процессы регенерации нервных волокон при травматическом повреждении нерва. Увеличивается количество нервных волокон и активность регенерации. Терапевтический эффект Липофлавона можно об-ъяснить тем, что липосомальная форма, как продукт нанотехнологических разработок, имеет высокую тропность к клеточным мембранам. з. Компоненты Липофлавона (кверцетин) защищают нервные клетки от окислительного стресса, активируют эндогенные антиоксидантные 4 системы защиты, снижают развитие воспалительного процесса и повышают рост нейритов. 5 Это способствует процессам регенерации нервных волокон и может предотвратить развитие дегенеративных процессов на поздних этапах 6. восстановления. Такая форма препарата ускоряет прорастание и миелинизацию нервных волокон. Это связано с антиоксидантными свойст-
Реферат
Л1ПОФЛАВОН ПЩВИЩУе РЕГЕНЕРАЦ1Ю НЕРВОВИХ ВОЛОКОН В УМОВАХ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОТ МОДЕЛ1 ТРАВМИ ПЕРИФЕРИЧНОГО НЕРВА Храпай Е.В.
Ключов1 слова: регенерацт, перифершний нерв, бюфлавоноТд, лтосома, антиоксидант, травма.
При травмах периферичних нерв1в прийнято використання MiKpoxipypri4HoT техыки, що сприяе про-цесам регенераци нервових волокон, але при важких травмах не завжди вдаеться досягти бажаного результату. Фармаколопчна корекц1я регенерацшних процеав в травмованих нервах може сприяти вщновленню волокон, що регенерують. i полтшити життя хворих ц1еТ категорп. Виходячи з цього, метою роботи стало вивчення характеру процеав де- i регенераци в травматично пошкодженому нерв1 у щур1в, а також вплив лкарського засобу Лтофлавона на процеси вщновлення нервових волокон. Ли-пофлавон - препарат, який представлений лтосомальною формою кверцетину. Ми використовували Лтофлавон як ефектившшу форму доставки лкарського засобу до терапевтичних м1шеней при травматичному ушкоджены нервових волокон. Питания застосування кверцетину в експериментальнш патологи нервовоТ системи рашше не розглядалися. Розроблена в УкраТш лтосомальна форма кверцетину, використовувана при багатьох захворюваннях i експериментальних патолопчних станах, вияви-лася дуже ефективною.
Дослщження проведен! на бтих щурах самицях вагою 180-220 г. Лтофлавон ("Бюлек", Харш, Украина) вводили параневрально в доз1 0.1 мт1грам/кг протягом перших десяти дыв з моменту вщтворення повноТ невротомп. Через 12 тижшв у тварин виробили 3a6ip матер1алу для подальшого пстолопчного i ультраструктурного дослщження. Зр1зи виготовляли на криотом1 i ¡мпрегнували в азотнокислому cpi6-л1. Для вивчення фармаколопчного ефекту дослщжуваних препарат1в використовували морфометри-4Hi показники: щ1льн1сть нервових волокон i кутТх вщхилення вщ oci травмованого нерва.
Дослщження показали, що Лтофлавон в доз1 0.1 мт1грам/кг мае виражений л1кувальний ефект при травмуванш периферичного нерва в експериментальних умовах. Збтьшуеться кшьмсть нервових волокон i активн1сть регенерацП'. Позитивний ефект Лтофлавона можна зв'язувати з тим, що лтосомальна форма, як продукт нанотехнолопчних розробок, мае високу тропность до юптинних мембран. Та-ка форма препарату прискорюе проростання i м1елш1зац1ю нервових волокон. Це пов'язано з антиоксидантными властивостями, яю демонструе кверцетин. Навпъ при коротких термшах вступу Лтофлавон дае виражений ефект.
Summary
LIPOfLAVON PROMOTES REGENERATION OF NERVE FIBERS UNDER DESIGNED TRAUMA OF PERIPHERIC NERVE Khrapay Ye.V.
Key words: regeneration, peripheral nerve, bioflavonoid, liposome, antioxidant, injury.
Under the traumas of peripheric nerves it is common to use microsurgical techniques to promote the regenerative processes of nerve fibers, but in cases of severe traumas this is far from being completely successful. Pharmacological correction of regenerative processes in damaged nerves may contribute to the regeneration of nerve fibers and improve the life quality of patients. So, the work was aimed to study the characteristics of degeneration and regeneration in the traumatized nerve in rats and to find out the effect of Li-
Том 10, Выпуск 1
119
poflavon on the regenerative processes in nerve fibers. Lipoflavon is a medicine presented by the liposomal form of Quercetinum. Lipoflavon has been chosen as more effective form for the transportation of the acting agent into the therapeutic targets in cases of traumatic injuries of nerve fibers. The liposomal form of Quercetinum, which is widely applied used for many diseases and experimental pathologies has been proved to be very effective. Researches were carried out on white female rats weighting 180-220g. Lipoflavon ("Biolek", Kharkiv, Ukraine) was administered by paraneural injections in a dose 0.1 mg/kg for the first ten days since the moment of total neurotomy designed. In 12 weeks the material sampling was produced for further histological and ultrastructural researches. Microscopic sections were made on cryotome and were impregnated by the silver nitrate. To study the pharmacological effect of the medicines the following mor-phometric indices were used: nervous fibre density and the angle of the deviation from the axis of affected nerve. Researches showed that Lipoflavon in a dose of 0.1 mg/kg produced the marked curative effect under injuring of peripheral nerve in the experiment. The amount of nervous fibers and the regenerative activity increases. The positive effect of Lipoflavon may be referred to the liposomal form, as a product of the nanotechnological development, has high tropism to the cellular membranes. Such form of the medicine accelerates the growth and myelinization of nervous fibers. It is related to antioxidant properties which are demonstrated by Quercetin. Lipoflavon demonstrates the pronounced curative effect even during a short period of administration.
УДК 616.833:54.044:546.49]-085-003.93
ВПЛИВ Т10ТРИА30Л1НУ НА РЕГЕНЕРАЦ1Ю ПЕРИФЕР1ЙН0Г0 НЕРВА ЗА УМОВ Д0ВГ0ТРИВАЛ0Г0 М1КР0МЕРКУР1АЛ13МУ
Шамало С.М., Чайковський Ю.Б. Корсак A.B.
Нацюнальний медичний университет ¡меж О.О.Богомольця, м. Кшв
Метою даного досл{дження е вивчення впливу препарату «Тютриазолш» на регенеращю перифе-ршного нерва за умов довготривалого мтромеркур{ал{зму. В досл{дах на бших щурах, ят були розподшет на dei групи, eidmeopunu експерименталъну модель травми Ыдничого нерва за умов довготривалого мтромеркур{ал{зму. У тсляоперацшному nepiodi щурам першог групи фармако-тератю не проводили, в dpyziü zpyni тваринам внутр{шньоочеревинно вводили щоденно, протя-гом 2 тижтв, розчин т{отриазолту в доз{ 100 мг/кг. Досл{джували морфолог1чну оргатзащю та морфометричну характеристику регенерацшног невроми та прилеглих eidpi3Kie (проксимального i дисталъного) с{дничого нерва через 3, 6 та 12 тижтв теля пошкодження за допомогою морфометричних та статистичних Memodie. Проведене досл{дження св{дчитъ, що у групи тварин, яким проводили фармаколог{чну корекц{ю тютриазолтом, активу еться процес регене-рацп нерва за умов довготривалого мтромеркур{ал{зму та його пошкодження.
Ключов1 слова: мкромеркур1ал1зм, ещничний нерв, регенерацт, Вступ
Проблема вивчення процеав регенераци нер-вових волокон залишаеться недостатньо вивче-ною у всьому евт та привертае увагу до себе, осктьки часто призводить до ¡нвалщносп [1, 2]. ОсобливоТ актуальное^ ця проблема набувае з урахуванням еколопчного стану в Укра'Гж, пов'язаного з забрудненням навколишнього се-редовища м1кродозами важких метал1в. Вщомо, що при дм ртут1 на оргажзм, в першу чергу вра-жаеться ЦНС та ПНС [3, 4]. Особливо вразливий до дитоксичних речовин молодий оргажзм [5, 6]. Речовини-протектори з антиоксидантною д1ею здатж захистити мембрани кл1тин та зменшити ендогенну токсемш, яка обумовлена впливом сполук важких метал1в [7]. Тютриазолш - новий орипнальний препарат вп"чизняного виробницт-ва, який в останнш час набув широкого застосу-вання, завдяки його антиоксидантним, мембра-ностабт1зуючим, протшшем1чним та ¡муномоде-люючим властивостям [8].
тютриазолЫ.
Метою даного дослщження е вивчення впливу препарату «Тютриазолш» на регенерацш пери-фершного нерва за умов довготривалого м1кро-меркур1ал1зму.
Матср1али та методи дгкипдженни В процеа роботи було обстежено 20 щур1в лн ни Вютар, вагою 150-200 г. Тварин було розподн лено на 2 групи. В обох трупах моделювали мк-ромеркур1ал1зм шляхом внутршньоочеревинно-го введения хлориду ртут1 в доз1 1/100 ЛД50 про-тягом 10 тижжв, шеля чого тваринам була вщ-творена стандартна травма л1вого ещничого нерва. Травму виконували так: ещничий нерв пе-ретинали в дтянц1 середньоТ третини стегна та фксували центральний \ перифершний вщр1зки на вщетаж 1-2 мм двома епшевральними швами. Пюля чого здшенювали гемостаз, рану зашивали наглухо. В пюляоперацшному перюд1 тваринам першо'Г групи вводили 0,9% ф1зюлопч-ний розчин, а тваринам друго'Г групи вводили препарат «Тютриазолш» в доз1 100 мг/кг внутрн
* Дана публ'жащя мае зв'язок з плановом науково-досл'1дною роботою кафедри «Вивчення нервовоТ, ¡мунноТ систем та сер-ця за умов дпекзогенних та ендогенних фактор1в».
