РЕФЕРЕНСНЫЕ ИНТЕРВАЛЫ ПО МАССОВЫМ КОЭФФИЦИЕНТАМ ОРГАНОВ КРОЛИКОВ И ИХ АБСОЛЮТНЫМ ЗНАЧЕНИЯМ Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

2022

№1

https://doi.org/10.29296/2618723X-2022-01-05

РЕФЕРЕНСНЫЕ ИНТЕРВАЛЫ ПО МАССОВЫМ КОЭФФИЦИЕНТАМ ОРГАНОВ КРОЛИКОВ И ИХ АБСОЛЮТНЫМ ЗНАЧЕНИЯМ

Е.А. Рощина, научный сотрудник отдела специфической токсикологии и фармакодинамики,

ОРСЮ: 0000-0002-9257-4241

АО НПО «Дом Фармации»,

188663, Россия, Ленинградская обл., Всеволожский район, г.п. Кузьмоловский, ул. Заводская, д. 3, к. 245

Е-таИ: [email protected]

Резюме. Оценка массы органов в токсикологических исследованиях является неотъемлемой частью изучения фармацевтических препаратов, химических веществ и медицинских устройств. Референсные интервалы в научных статьях часто основываются на данных 10-летней давности или результатах, собранных из нескольких центров, с возможной вариабельностью в измерениях. Поэтому доклиническим центрам для корректной интерпретации данных следует устанавливать внутренние референсные интервалы по массовым коэффициентам и абсолютным значениям внутренних органов экспериментальных животных.

В настоящей статье определены референсные интервалы для массовых коэффициентов органов кроликов породы белый великан, а также их абсолютных значений. Данные по массе органов кроликов получены на основании токсикологических исследований, проведенных в НПО «Дом Фармации» за период 2018-2021 гг. Возраст животных на момент некропсии составлял 16-22 нед. Исследования были выполнены с соблюдением принципов Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов и других научных целей и в соответствии с Правилами надлежащей лабораторной практики.

На основании рекомендаций Общества токсикологической патологии (БТР) у экспериментальных кроликов регистрировали массу следующих органов: печень, сердце, почки, мозг, селезенка, тимус, семенники/яичники, надпочечники. Дополнительно анализировали массу легких. При потере массы тела животными на фоне тестируемого объекта возможно увеличение массовых коэффициентов органов. Поэтому анализ данных по массе органов относительно массы головного мозга может исключить ложное влияние объекта на органы, поскольку масса мозга не изменяется с увеличением или снижением массы тела. Также для исключения подобных ошибок можно выполнять анализ абсолютных значений массы органов.

Данные разделены по диапазонам массы тела кроликов, поэтому в каждой выборке представлено <200 значений, что не позволяет использовать параметрический метод определения референсных интервалов. Таким образом, расчет выполняли непараметрическим методом.

По соотношению выбросов (массовых коэффициентов относительно массы тела животных и массы головного мозга и абсолютных значений массы органов) у самцов кроликов различий не выявлено, но у самок наименьшее количество выбросов установлено при расчете массовых коэффициентов органов относительно массы тела животных. Поэтому в зависимости от влияния исследуемых объектов на массу тела животных можно использовать разные методы расчета массовых коэффициентов или абсолютные значения массы органов.

Ключевые слова: доклинические исследования, непараметрическое определение референсных интервалов, белый великан, масса органов.

Для цитирования: Рощина Е.А. Референсные интервалы по массовым коэффициентам органов кроликов и их абсолютным значениям. Лабораторные животные для научных исследований. 2022; 01: 34-42. https://doi.org/10.29296/2618723X-2022-01-05

REFERENCE INTERVALS OF RABBITS ORGANS MASS COEFFICIENTS AND ABSOLUTE WEIGHT

E.A. Roshchina, ORCID: 0000-0002-9257-4241

Research and manufacturing company «Home оf Pharmacy», 188663, Russia, Leningrad oblast, Vsevolozhskiy district, Kuzmolovskiy t.s., Zavodskaya st. 3-245

Е-mail: [email protected]

2022 LABORATORY ANIMALS FOR SCIENCE №1

2022

№ 1

Abstract. Assessing organs mass in toxicology studies is an integral part of the study of pharmaceuticals, chemicals, and medical devices. Reference intervals in scientific papers are often based on data from a decade ago or data collected from multiple centers, with possible measurement variability. Therefore, for correct interpretation of data, preclinical centers should establish internal reference intervals for mass coefficients and absolute values of internal organs of experimental animals.

This article defines the reference intervals for the organs mass coefficients of the White Giant rabbits, as well as their absolute values. Data on the mass of rabbits' organs were obtained on the basis of toxicological studies carried out at the Research and manufacturing company «Home оf Pharmacy» for the period 2018 - 2021. The animals were 16 - 22 weeks old at the time of necropsy. The studies were carried out in compliance with the principles of the European Convention for the Protection of Vertebrate Animals used for Experimental and Other Scientific Purposes and in accordance with the rules of good laboratory practice.

In accordance with the recommendations of the Society of Toxicological Pathology (STP), the weights of the following organs were recorded in experimental rabbits: liver, heart, kidneys, brain, spleen, thymus, testes / ovaries, adrenal glands. Additionally, the lung mass was analyzed. With a loss of body weight by animals, against the background of the test object, an increase in the mass coefficients of organs is possible. Therefore, the analysis of data on the mass of organs relative to the mass of the brain can exclude the false influence of the object on the organs, since the mass of the brain does not change with increasing or decreasing body mass. Also, to eliminate such errors, you can analyze the absolute values of the masses of organs.

The data are divided according to the ranges of body weight of rabbits, therefore, each sample contains less than 200 values, which does not allow the use of a parametric method for determining the reference intervals. Thus, the calculation was performed by a nonparametric method.

There were no differences in the ratio of emissions (mass coefficients relative to animal body weight and brain mass and absolute values of organ masses) in male rabbits, but in females the smallest amount of emissions was found when calculating the mass coefficients of organs relative to animal body weight. Therefore, depending on the influence of the studied objects on the body weight of animals, you can use different methods for calculating mass coefficients or absolute values of the mass of organs.

Key words: preclinical studies, nonparametric determination of reference intervals, White Giant, organs weight.

For citation: Roshchina E.A. Reference intervals of rabbits organs mass coefficients and absolute weight. Laboratory Animals for Science. 2022; 01: 34-42. https://doi.org/10.29296/2618723X-2022-01-05

Введение

В доклинических исследованиях изменения массы органов могут быть связаны с эффектами, вызванными тестируемыми объектами. Поэтому выбор соответствующих органов для регистрации массы в токсикологических исследованиях включает:

• понимание механизма действия, метаболизма и токсикокинетики исследуемого объекта;

• физиологию подопытных животных;

• совокупный набор данных из предыдущих исследований тех же или подобных соединений (объектов исследования).

Общество токсикологической патологии (БТР) рекомендует регистрировать массу печени, сердца, почек, головного мозга, селезенки, тимуса, семенников/яичников и надпочечников у всех видов животных, задействованных в токсикологических исследованиях [1].

Например, изменение массы печени может указывать на влияние тестируемого объекта, вызывая гепатоцеллюлярную гипертрофию (например, ин-

дукцию ферментов или пролиферацию перок-сисом). Масса печени может быть увеличена в исследованиях продолжительностью <7 дней в случае сильнодействующих соединений, индуцирующих печеночные ферменты. Повышенная масса сердца может быть единственным свидетельством гипертрофии миокарда, которое часто трудно распознать макроскопически и микроскопически. Изменения массы почек могут отражать различную патологию почек. Вариации массы надпочечников могут указывать на гипертрофию, гиперплазию или атрофию, связанную со стрессом или эндокри-нопатией [2].

Изменения массы головного мозга редко связаны с нейротоксичностью. Практическое использование этого показателя заключается в возможности вычислять соотношение массы органа к массе головного мозга. Данное соотношение полезно, когда тестируемый объект влияет на конечную массу тела. БТР рекомендует регистрировать массу головного мозга, чтобы при необходимости можно было рассчитать массу органа относительно головного мозга [1].

Цель настоящей работы - определение рефе-ренсных интервалов массовых коэффициентов органов, рассчитанные относительно массы тела и головного мозга, и абсолютных значений массы органов кроликов породы белый великан.

Кроликов нечасто используют в качестве модельных объектов, поэтому источников литературы, включающих информацию о массе органов, недостаточно. Преимущества данной тест-системы следующие:

• этический и экономический аспекты вопроса проведения исследований хронической токсичности - кролики являются предпочтительным видом животных, так как относятся к «не грызунам» [3];

• в рамках хронической токсичности данная тест-система позволяет проводить токсико-кинетические исследования [4];

• тестируемые объекты в виде капсул и таблеток можно вводить без разрушения лекарственной формы.

Материал и методы

Для расчета референсных интервалов были использованы данные, полученные от контрольных / интактных групп токсикологических экспериментов в период с 2018 по 2021 г. Все исследования были проведены в соответствии принципами Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов и других научных целей (Страсбург, 1986) [5], и Правилами надлежащей лабораторной практики.

Во всех экспериментах модельным объектом были кролики породы белый великан в возрасте 16-22 нед (242 самца и 253 самки), поставленные из крестьянско-фермерского хозяйства (КФХ) «Нера». Были использованы небеременные и нерожавшие самки.

Животных содержали в стандартных условиях:

• температура 15-22°C;

• относительная влажность воздуха 45-65%;

• 12-часовой световой день;

• группами (боксы с решетчатым полом без подстила) или индивидуально (клетки с подстилом);

• площадь пола клетки содержания на 1 животное соответствовала регламентирующим стандартам [6].

Всех животных подвергали эвтаназии путем передозировки смеси ветеринарных препаратов Золетил 100 (Virbac Sante Animale, Франция) + Ксилазин 2% (Interchemie werken «De Adelaar» B.V, Нидерланды) и Пропофол-Каби 20 мг/мл

(Фрезениус Каби Дойчланд ГмбХ, Германия), затем удаляли жизненно важные органы (легкие, сердце, головной мозг). В течение эксперимента доступ к корму и воде не был ограничен, за исключением 4 ч до эвтаназии. Массу тела определяли непосредственно перед некропсией.

Полученные данные были разделены на 2 группы в зависимости от массы тела животных (самцы - 2310-3770 и 3775-5586 г, самки - 23103810 и 3815-5650 г).

Статистическую обработку результатов осуществляли в программе Statistica 10 (StatSoft, США). Статистические выбросы оценивали при помощи метода Тьюки. Референсные интервалы были определены непараметрическим методом.

Результаты и обсуждение

Из массива данных были исключены статистические выбросы. Их определяли отдельно по каждому значению органа в группах с учетом диапазона массы. Исключали данные, лежащие за пределами интервала (Q1-1,5.IQR) - (Q3+1,5.IQR), где Q1 и Q3 - границы 1-го и 3-го квартилей, а IQR - меж-квартильный интервал (Q3-Q1) [7] (табл. 1, 2).

Референсные интервалы для полученных результатов были определены в промежутке 2,597,5 процентиля, представленные в табл. 3 и 4 [8].

Представленные значения массовых коэффициентов органов у самцов и самок кроликов в большинстве случаев незначительно уменьшаются с увеличением массы тела животных за счет роста мышечной и жировой тканей.

Ввиду возможного влияния тестируемых объектов на массу тела животных (в сторону снижения) при анализе полученных данных массовые коэффициенты органов, рассчитанные относительно массы тела, увеличиваются. В таких случаях можно выполнить анализ данных по массе органов относительно массы головного мозга, поскольку масса мозга не изменяется с увеличением или снижением массы тела. Также для исключения подобных ошибок можно выполнить анализ абсолютных значений массы органов.

Статистические выбросы, определенные методом Тьюки, при расчете массовых коэффициентов органов самцов и самок кроликов относительно головного мозга и представлении абсолютных значений были исключены из массива данных. Общее количество выбросов представлено в табл. 5-8.

Соотношение выбросов, полученных при анализе массовых коэффициентов органов (относительно массы тела животных и массы головного мозга) и абсолютных значений масс органов, у самцов кроликов не различалось. У самок кро-

Таблица 1. Доля статистических выбросов при расчете массовых коэффициентов органов самцов кроликов относительно массы тела

Органы Диапазон массы тела, г

2310-3770 (п = 121) 3775-5586 (п = 121)

Общее количество выбросов, %

Сердце 1,7 5,0

Легкие 0 1,7

Тимус 0,8 1,7

Печень 1,7 3,3

Селезенка 3,3 7,4

Почки 5,0 0,8

Надпочечники 0,8 1,7

Головной мозг 1,7 0

Семенники 2,5 0,8

Примечание. Здесь и в табл. 2-4 и 9-12: п - число особей после удаления из выборки выявленного количества выбросов.

Таблица 2. Доля статистических выбросов при расчете массовых коэффициентов органов самок кроликов относительно массы тела

Органы Диапазон массы тела, г

2310-3810 (п = 127) 3815-5650 (п = 126)

Общее количество выбросов, %

Сердце 0,8 0

Легкие 3,2 0

Тимус 1,6 0

Печень 0 3,2

Селезенка 3,2 2,4

Почки 3,2 0

Надпочечники 3,9 4,0

Головной мозг 0,8 0

Яичники 6,3 0

ликов меньшее количество выбросов выявлено при расчете массовых коэффициентов органов относительно массы тела животных.

В табл. 9-12 представлены референсные интервалы по массовым коэффициентам органов, рассчитанных как отношение массы органа к массе головного мозга, и абсолютной массы каждого органа.

При поиске источников литературы были найдены значения только по абсолютным массам органов самцов кроликов, средняя масса тела жи-

вотных составляла 2240 г [9]. Поэтому для сравнения данных, полученных на основании токсикологических исследований в НПО «Дом Фармации» и приведенных в табл. 13, использовали значения по абсолютной массе каждого из органов, соответствующие диапазону массы тела самцов кроликов 2310-3770 г.

При сравнении референсных интервалов, полученных в нашей работе и согласно Brown, Pearce, Van Allen (1925), установлено, что данные сопоставимы.

Таблица 3. Референсные интервалы по массовым коэффициентам органов самцов кроликов, рассчитанные как отношение массы органа к массе тела

Органы Диапазон массы тела, г

2310-3770 3775-5586

Сердце 0,201-0,418 (л = 119) 0,166-0,403 (л = 115)

Легкие 0,311-0,620 (л = 121) 0,285-0,559 (л = 119)

Тимус 0,062-0,229 (л = 120) 0,050-0,210 (л = 119)

Печень 2,094-4,280 (л = 119) 1,854-4,282 (л = 117)

Селезенка 0,027-0,090 (л = 117) 0,026-0,071 (л = 112)

Почки 0,448-0,734 (л = 115) 0,392-0,704 (л = 120)

Надпочечники 0,007-0,020 (л = 120) 0,006-0,017 (л = 119)

Головной мозг 0,223-0,392 (л = 119) 0,198-0,293 (л = 121)

Семенники 0,097-0,231 (л = 118) 0,101-0,234 (л = 120)

Таблица 4. Референсные интервалы по массовым коэффициентам органов самок кроликов, рассчитанные как отношение массы органа к массе тела

Органы Диапазон массы тела, г

2310-3810 3815-5650

Сердце 0,175-0,423 (л = 126) 0,189-0,417 (л = 126)

Легкие 0,364-0,633 (л = 123) 0,290-0,541 (л =126)

Тимус 0,058-0,224 (л = 125) 0,059-0,221 (л = 126)

Печень 1,989-4,382 (л = 127) 2,065-3,999 (л =122)

Селезенка 0,028-0,101 (л = 123) 0,027-0,080 (л = 123)

Почки 0,400-0,786 (л = 123) 0,380-0,622 (л = 126)

Надпочечники 0,007-0,016 (л = 122) 0,006-0,014 (л = 121)

Головной мозг 0,228-0,374 (л =126) 0,174-0,288 (л =126)

Яичники 0,005-0,020 (л = 119) 0,005-0,023 (л = 126)

Таблица 5. Доля статистических выбросов при расчете массовых коэффициентов органов самцов кроликов относительно головного мозга

Органы Диапазон массы тела, г

2310-3770 (п = 121) 3775-5586 (п = 121)

Общее количество выбросов, %

Сердце 5,0 3,3

Легкие 3,3 0,8

Тимус 0 1,7

Печень 0 2,5

Селезенка 4,1 6,6

Почки 0,8 3,3

Надпочечники 2,5 0,8

Семенники 1,7 2,5

2022 LABORATORY ANIMALS FOR SCIENCE №1

Таблица 6. Доля статистических выбросов при расчете массовых коэффициентов органов самок кроликов относительно головного мозга

Органы Диапазон массы тела, г

2310-3810 (и = 127) 3815-5650 (п = 126)

Общее количество выбросов, %

Сердце 0,8 4,0

Легкие 4,7 4,0

Тимус 2,4 0,8

Печень 1,6 3,2

Селезенка 4,7 5,0

Почки 6,3 4,0

Надпочечники 4,7 4,0

Яичники 8,7 0,8

Таблица 7. Доля статистических выбросов при анализе абсолютной массы органов самцов кроликов

Органы Диапазон массы тела, г

2310-3770 (п = 121) 3775-5586 (п = 121)

Общее количество выбросов, %

Сердце 3,3 4,1

Легкие 0,8 2,5

Тимус 0 0

Печень 0 1,7

Селезенка 4,1 7,4

Почки 0 0,8

Надпочечники 3,3 1,7

Головной мозг 0,8 0,8

Семенники 0 1,7

Таблица 8. Доля статистических выбросов при анализе абсолютной массы органов самок кроликов

Органы Диапазон массы тела, г

2310-3810 (п = 127) 3815-5650 (п = 126)

Общее количество выбросов, %

Сердце 3,9 2,4

Легкие 5,5 0

Тимус 1,6 0,8

Печень 0 4,0

Селезенка 4,7 3,2

Почки 3,9 1,6

Надпочечники 3,2 1,6

Головной мозг 2,4 7,1

Яичники 7,9 0

2022 LABORATORY ANIMALS FOR SCIENCE №1

Таблица 9. Референсные интервалы по массовым коэффициентам органов самцов кроликов, рассчитанные как отношение массы органа к массе головного мозга

Органы Диапазон массы тела, г

2310-3770 3775-5586

Сердце 69-132 (л = 115) 74-171 (л = 117)

Легкие 114-198 (л = 117) 132-223 (л = 120)

Тимус 19-76 (л = 121) 19-86 (л = 119)

Печень 676-1591 (п = 121) 802-1850 (п = 119)

Селезенка 9-30 (л = 116) 11-34 (л = 113)

Почки 153-253 (л = 120) 154-306 (п = 114)

Надпочечники 2-6 (л = 118) 2-7 (л = 120)

Семенники 33-79 (л = 119) 41-96 (л = 118)

Таблица 10. Референсные интервалы по массовым коэффициентам органов самок кроликов, рассчитанные как отношение массы органа к массе головного мозга

Органы Диапазон массы тела, г

2310-3810 3815-5650

Сердце 60-147 (л = 126) 81-175 (л = 121)

Легкие 115-207 (л = 121) 126-218 (л = 121)

Тимус 19-74 (л = 124) 23-88 (п = 125)

Печень 695-1497 (л = 125) 850-1807 (п = 122)

Селезенка 10-32 (л = 121) 11-33 (л = 121)

Почки 135-243 (л = 119) 160-280 (л = 126)

Надпочечники 2-6 (л = 121) 3-6 (л = 121)

Яичники 2-7 (л = 116) 2-10 (л = 125)

Таблица 11. Референсные интервалы по абсолютным массам органов самцов кроликов

Органы Диапазон массы тела, г

2310-3770 3775-5586

Сердце 7-13 (л = 117) 7-16 (л = 116)

Легкие 11-20 (л = 120) 13-23 (л = 118)

Тимус 2-7 (л = 121) 2-9 (л = 121)

Печень 72-152 (л = 121) 85-185 (л = 119)

Селезенка 1-3 (л = 116) 1-3 (л = 112)

Почки 15-25 (л = 121) 16-31 (л = 120)

Надпочечники 0,2-0,6 (л = 117) 0,3-0,7 (л = 119)

Головной мозг 8-12 (л = 120) 9-12 (л = 120)

Семенники 3-8 (л = 121) 4-10 (л = 119)

2022 LABORATORY ANIMALS FOR SCIENCE №1

Таблица 12. Референсные интервалы по абсолютным массам органов самок кроликов

Органы Диапазон массы тела, г

2310-3810 3815-5650

Сердце 6-14 (л = 122) 8-17 (л = 123)

Легкие 12-20 (л = 120) 13-22 (л = 126)

Тимус 2-7 (л = 125) 2-9 (л = 125)

Печень 72-150 (л = 127) 92-179 (л = 121)

Селезенка 1-3 (л = 121) 1-3 (л = 122)

Почки 14-23 (л = 122) 17-26 (л = 126)

Надпочечники 0,2-0,6 (л = 123) 0,3-0,7 (л = 124)

Головной мозг 8-11 (л = 124) 9-12 (л = 114)

Яичники 0,2-0,6 (л = 117) 0,2-1,0 (л = 126)

Таблица 13. Референсные интервалы по абсолютной массе (г) каждого из органов самцов кроликов

Органы Референсный интервал

приведенный в данной статье по Brown, Pearce, Van Allen [9]

Сердце 7-13 (л = 117) 3-10 (л = 348)

Тимус 2-7 (л = 121) 1-6 (п = 350)

Печень 72-152 (л = 121) 50-150 (л = 348)

Селезенка 1-3 (л = 116) 1-3 (п = 347)

Почки 15-25 (л = 121) 7-23 (л = 349)

Надпочечники 0,2-0,6 (л = 117) 0,1-1,0 (л = 290)

Головной мозг 8-12 (л = 120) 7-12 (л = 150)

Семенники 3-8 (л = 121) 1-9 (л = 349)

Заключение

Определение референсных интервалов по массовым коэффициентам органов относительно массы тела и головного мозга, а также абсолютных значений массы органов позволяет доклиническим центрам создавать собственные внутрилабора-торные нормы, на основании которых можно выявить влияние (или его отсутствие) тестируемого объекта на органы животных.

В соответствии с полученными данными можно сделать вывод, что при исследовании токсичности следует основываться на значения массовых коэффициентов органов относительно массы тела животных. Однако при установлении влияния исследуемых объектов на массу тела животных можно использовать абсолютные значения массы органов или массовые коэффициенты органов относительно массы головного мозга.

При сравнении полученных показателей по абсолютным значениям массы органов самцов с данными литературы [9] можно заключить, что референсные интервалы сопоставимы, что подтверждает корректность проведенного исследования.

Необходимо учитывать, что изменение массы органов должны оцениваться в контексте класса соединения, механизма действия и всего набора данных для конкретного исследования.

Благодарности

Работа выполнена без спонсорской поддержки.

Конфликт интересов

Автор заявляет об отсутствии конфликта интересов, требующего раскрытия в данной статье.

ЛАБОРАТОРНЫЕ ЖИВОТНЫЕ ДЛЯ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Acknowledgements

The study was performed without external funding. Conflict of interest

The author declares no conflict of interest requiring disclosure in this article.

Литература

1. Sellers R.S., Mortan D., Michael B., et al. Society of Toxicologic Pathology Position Paper: Organ Weight Recommendations for Toxicology Studies // Toxicologic Pathology. - 2007; 35(5): 751-755. DOI: 10.1080/01926230701595300.

2. Greaves P. Histopathology of Preclinical Toxicity Studies: Interpretation and Relevance in Drug Safety Studies (Fourth Edition). - Academic Press, 2012. - 886 p. DOI: 10.1016/C2010-0-67226-9.

3. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. / Миронов А. Н. - М.: Гриф и К, 2012. 944 с. [Rukovodstvo po provedeniyu doklinicheskikh issledovanii lekarstvennykh sredstv. Chast' pervaya. / Mironov A. N. M.: Grif i K, 2012. 944 s. (In Russ.)]

4. Decision of board of the Eurasian economic commission of November 26, 2019 No. 202 «About approval of the Management on preclinical trials of safety for the purpose of conduct of clinical trials and registration of medicines»

5. European Convention for the Protection of Vertebrate Animals used for Experimental and Other

Scientific Purposes, Strasbourg, 1986.

6. Руководство по содержанию и использованию лабораторных животных. Восьмое издание / пер. с англ. Под ред. И.В. Белозерцевой, Д.В. Блинова, М.С. Красильщиковой. - М.: ИРБИС, 2017. - 336 с.[Rukovodstvo po soderzhaniyu I ispolsovaniyu laboratornykh zhivotnykh. Vos'moe izdanie / per. C angl. Pod red. I.V. Belozercevoi, D.V. Blinova, M.S. Krasil'shikovoi. - M.: IRBIS, 2017. - 336 s. (In Russ.)]

7. Луговик И.А., Макарова М.Н. Токсикологические исследования. Референтные интервалы массовых коэффициентов внутренних органов на выборке в 1000 аутбредных крыс // Лабораторные животные для научных исследований. - 2021; 1: 3-11. [Lugovic I.A., Makarova M.N. Toksicologicheskie issledovaniya. Referentnye intervaly massovykh koefficientov vnutrennykh organov na vyborke v 1000 autbrednykh krys // Laboratory animals for scientific research. - 2021; 1: 3-11.(In Russ.)] DOI: 10.29296/2618723X-2021-01-01.

8. Евгина С.А., Савельев Л.И. Современные теория и практика референтных интервалов // Лабораторная служба. - 2019; 8(2): 36-44. DOI 10.17116/labs2019802136 [Evgina S.A., Savel'ev L.I. Sovremennye teoriya i praktika referentnykh intervalov //Laboratornaya sluzhba. - 2019; 8(2): 36-44. (In Russ.)]

9. Brown W.H., Pearce L., Van Allen C.M. Organ weights of normal rabbits // Journal of experimental medicine. -1925; 42(1): 69-82.