49Методика вскрытия и извлечения органов лабораторных животных. Сообщение 5: кролик, хорек
К.Е. Коптяева, ветеринарный врач-патоморфолог отдела гистологии и патоморфологии,
Ж.Ю. Устенко, ветеринарный врач-патоморфолог отдела гистологии и патоморфологии,
Е.В. Беляева, ветеринарный врач-патоморфолог отдела гистологии и патоморфологии,
Я.А. Гущин, руководитель отдела гистологии и патоморфологии,
М.Н. Макарова, доктор медицинских наук, директор,
В.Г. Макаров, доктор медицинских наук, профессор, зам. директора
НПО «Дом Фармации»
188663, Россия, Ленинградская обл., Всеволожский р-н, г.п. Кузьмоловский, ул. Заводская, д. 3, корп. 245
Е-таП: [email protected]
Ключевые слова: некропсия, патоморфология
Резюме
Представлено 5-е сообщение из цикла статей по методологии вскрытия и извлечения органов лабораторных животных, в которое подробно описывается и иллюстрируется методика последовательного и полного вскрытия и извлечения органов лабораторных кроликов и хорьков. Кролики подходят для проведения длительно текущих исследований, а также они — единственные лабораторные грызуны, с помощью которых можно получать рекомбинантные фармацевтические белки и исследовать перорально или внутрижелудочно вводимые лекарственные формы без нарушения целостности таблеток. Кроме того, кроликов широко используют для разработки и изучения новых хирургических методов, физиологических тестов и исследования различных видов токсичности для тестирования лекарственных препаратов. На хорьках изучают различные вирусные и бактериальные заболевания, а также патологии органов слуха, органов зрения, рвотный рефлекс из-за сходства многих анатомических, метаболических и физиологических особенностей с человеком.
В статье описана методика некропсии от процедуры внешнего осмотра трупа, последовательного вскрытия и осмотра грудной и брюшной полостей, и до извлечения органов, выделения различных костных препаратов. Описаны и проиллюстрированы возможные методы извлечения органов ротовой полости (в том числе извлечение языка и глотки), всех органов грудной, брюшной и тазовой полостей. Рассмотрен способ извлечения головного мозга, метод выделения препаратов грудной кости для дальнейшего гистологического исследования костного мозга и верхней челюсти для гистологического исследования носовых ходов. Представлена процедура подготовки участка спинного мозга к фиксации в формалине без извлечения его из позвоночного канала. Продемонстрированы
методы извлечения глаз вместе со слезной железой и веками единым органокомплексом, а также извлечения мышц и прилежащих к ним периферических нервов. Способы извлечения органов и последовательность выполняемых действий, представленные в данной статье, обеспечивают минимизацию повреждений извлекаемых органов, предотвращают их загрязнение с целью недопущения возникновения некоторых артефактов, выявляемых при последующем гистологическом исследовании.
Введение
Кролики и хорьки - стандартные биологические модели для изучения свойств лекарственных препаратов (токсичности, фармакокинетики), а также моделирования некоторых патологий человека и других животных, как врожденных, так и приобретенных.
Лабораторные кролики подходят для длительно текущих исследований, например для оценки метаболизма липопротеидов, моделирования и изучения сердечно-сосудистых патологий, в частности атеросклероза, гипертрофической кардиомиопатии. Кролики - единственные лабораторные грызуны, с помощью которых можно получать рекомбинантные фармацевтические белки. Также они являются уникальными моделями для исследования перорально или внутрижелудочно вводимых лекарственных форм, так как только кроликам можно ввести таблетки без нарушения целостности их оболочек. Кроме того, лабораторных кроликов используют для разработки и изучения новых хирургических методов, физиологических тестов и исследования различных видов токсичности для тестирования лекарственных препаратов [8].
Хорьки чаще всего выступают в качестве тест-системы для изучения вирусных заболеваний вследствие их высокой восприимчивости, в частности к вирусу гриппа. Помимо этого, на хорьках нередко проводят исследования органов слуха, зрения, рвотного рефлекса, бактериальных инфекций. В последнее время хорьки все чаще предлагаются в качестве альтернативы более крупным лабораторным животным - собакам и приматам по причине сходства многих анатомических, метаболических и физиологических особенностей с человеком [5].
Цель данной работы - разработка методики вскрытия и извлечения органов лабораторных кроликов и хорьков.
Данная методика разрабатывалась в НПО «Дом Фармации» на самцах и самках кроликов (п=15) и хорьков (п=6). Масса исследованных животных составляла: самцов кроликов - 2,05,0 кг, самок кроликов - 2,0-5,0 кг, самцов хорьков - 0,5-1,0 кг, самок хорьков - 1,0-2,0 кг. Для исследования использовали животных, подлежащих эвтаназии в ходе текущих экспериментов. Специально для отработки методики некропсии животных не эвтаназировали.
Животные были подвергнуты эвтаназии с помощью передозировки анестетиком [7, 9], а именно препаратами «Ксила» и «Золетил», вводя максимальный объем вещества для наркотизации исследуемых животных. После установления факта смерти выполняли некропсию с извлечением органов и тканей.
Методика вскрытия и извлечения органов
1. Провести общий осмотр животного на наличие внешних изменений кожного покрова, слизистых оболочек, обнаружения любого рода повреждений.
2. Положить труп животного на спину и зафиксировать конечности при помощи резинок в устройстве для фиксации (рис. 1, а).
3. Обильно смочить шерстный покров шеи, грудной и брюшной стенки водой.
4. Пинцетом захватить и приподнять кожу с подлежащей подкожной клетчаткой в каудальной части живота, надрезать ее и сделать продольный разрез по белой линии живота от паха до основания нижней челюсти таким образом, чтобы брюшная стенка осталась неповрежденной (рис. 1, б, в).
5. Сделать по 2 разреза кожи в области паха от средней линии к конечностям.
6. Отсепарировать кожу в области брюшной стенки у кроликов - тупым концом ножниц или аккуратно, стараясь не сдавливать брюшную стенку, отделить кожу пальцами; у хорьков -отсепарировать кожу и подкожную клетчатку ножницами или скальпелем (рис.1, г), далее оттянуть и зафиксировать кожные лоскуты резинками (рис. 1, д).
Рис. 1. Общий план вскрытия на примере хорька: а - помещение животного в устройство для фиксации; б, в -продольный разрез по белой линии живота; г - отделение кожи с подкожной клетчаткой при помощи скальпеля; д - фиксация кожных лоскутов
7. Для вскрытия брюшной полости необходимо сделать разрез мышечной стенки от паха вдоль средней линии, приподняв пинцетом участок брюшной стенки (рис. 2, а, б).
8. Грудную полость необходимо вскрыть 2 разрезами (слева и справа) по бокам от грудины (по средне-подмышечной линии) косо краниально, перерезая ребра и мягкие ткани (рис. 2, в,
г).
Рис. 2. Вскрытие брюшной и грудной полостей на примере хорька: а, б - разрез брюшной стенки по белой линии живота; в, г - разрез грудной стенки справа и слева; д - отделение грудной кости; е - общий вид после удаления грудной кости
9. Для исследования костного мозга отобрать грудную кость целиком, отделив от нее мечевидный отросток, ребра и мягкие ткани (рис. 3).
Рис. 3. Извлечение грудины на примере хорька: а, б - отделение ребер и мягких тканей; в - грудная кость после извлечения и отделения ребер и мягких тканей
10. Извлечь грудную долю тимуса, расположенную между листками предсердечного средостенья (рис. 4).
Рис. 4. Извлечение тимуса на примере хорька: а - отделение тимуса; б - тимус после извлечения
11. Извлечь сердце, перерезав удерживающие его сосуды (рис. 5).
Рис. 5. Извлечение сердца на примере хорька: а - перерезка сосудов, удерживающих сердце; б - сердце после извлечения
12. Извлечь нижнечелюстные слюнную железу и лимфатические узлы (рис. 6).
Рис. 6. Нижнечелюстные лимфатические узлы и слюнные железы (хорек): а - топографическое расположение органов: слюнные железы обведены красным пунктиром, лимфатические узлы - синим пунктиром; б -извлечение слюнных желез; в - извлечение лимфатических узлов; г - органы после извлечения и отделения окружающих тканей (сверху лимфатические узлы, снизу - слюнные железы)
13. Удалить мышцы, лежащие над трахеей (рис. 7, а, б) и извлечь гортань с трахеей, щитовидной и паращитовидной железой (рис. 7, в-е)
Рис. 7. Извлечение гортани с трахеей, щитовидной и паращитовидной железой на примере хорька: а, б, в -Удаление лежащих над трахеей мышц; г, д - Захват и перерезка гортани; е - Органокомплекс после извлечения: трахея (красная стрелка), щитовидная и паращитовидная железы (синий пунктир)
14. Для извлечения языка и глотки сделать разрезы дна ротовой полости скальпелем (рис. 8, а, б). После этого захватить отсепарированные мышцы и язык и оттянуть каудально (рис. 8, в). Далее сделать надрез в области твердого неба у входа в глотку, сохранив целостность глотки (рис. 8, г). Отделить язык вместе с глоткой (рис. 8, д, е).
Рис. 8. Извлечение языка и глотки на примере хорька: а, б - разрез дна ротовой полости; в, г - отделение глотки; д - отделение языка и глотки; е - органокомплекс после извлечения
15. Для извлечения легких, участка трахеи и пищевода перерезать зафиксированные пинцетом трахею и пищевод в области шеи (рис. 9, а). Затем отделить пищевод от аорты, аккуратно подтягивая органокомплекс краниально, после чего перерезать трахею и пищевод в области диафрагмы (рис. 9, б) и извлечь органокомплекс (рис. 9, в).
Рис. 9. Извлечение легких на примере хорька: а - перерезка трахеи и пищевода в области шеи; б - перерезка трахеи и пищевода в области диафрагмы; в - извлеченный органокомплекс после удаления пищевода
16. Отделить пищевод от извлеченного ранее органокомплекса (рис. 10).
Рис. 10. Извлечение пищевода на примере хорька: а - отделение пищевода от извлеченного ранее органокомплекса; б - пищевод после извлечения
17. Отделить оставшуюся в грудной полости аорту от позвоночника (рис. 11).
Рис. 11. Извлечение аорты на примере хорька: а - отделение аорты от позвоночника; б - аорта после извлечения
18. Извлечь селезенку, расположенную в области левого подреберья брюшной полости (рис. 12, а, б). Далее отделить селезенку от жировой ткани (рис. 12, в, г).
Рис. 12. Извлечение селезенки на примере примере хорька: а, б, в - извлечение селезенки; г - селезенка после извлечения
19. Извлечь участок поджелудочной железы, лежащий в брыжейке двенадцатиперстной кишки (рис. 13).
Рис. 13. Извлечение поджелудочной железы на примере хорька: а, б - извлечение поджелудочной железы; в -поджелудочная железа после извлечения
20. Извлечь желудок, отделив его в краниальной части от пищевода (рис. 14, а), а в каудальной - от двенадцатиперстной кишки (рис. 14, б, ж). У хорька: сделать разрез желудка по большой кривизне (рис. 14, в, г) и прополоскать в физиологическом растворе (рис. 14, д, е), освободив от содержимого. У кролика: сделать разрез желудка по большой кривизне (рис.
14, з), после чего удалить содержимое (большое количество растительного корма) и прополоскать в физиологическом растворе (рис. 14, и, к), освободив от остатков кормовых масс. Обратите внимание, что после вскрытия желудка нельзя прикасаться к его слизистой оболочке, для промывания захватить его пинцетом с внешней стороны (со стороны серозной оболочки).
Рис. 14. Извлечение желудка на примере хорька: а - отделение желудка от пищевода; б - отделение желудка от двенадцатиперстной кишки; в, г - разрез желудка по большой кривизне; д - полоскание в физиологическом растворе; е - желудок после извлечения и промывания. извлечение желудка на примере кролика: ж - отделение желудка от двенадцатиперстной кишки; з - разрез по большой кривизне, удаление содержимого; и - промывание желудка в физиологическом растворе; к - желудок после извлечения и промывания
21. Извлечь фрагменты тонкой и толстой кишки длиной 3-4 см: тонкую - отступив от желудка около 3 см (рис. 15, а, б); толстую - у хорька извлечь участок, отступив краниально от прямой кишки около 3 см (рис. 15, в, г); у кролика - извлечь часть восходящей ободочной кишки (рис. 15, д, е). После извлечения отделить от окружающих тканей и освободить от содержимого, прополоскав в физиологическом растворе.
Рис. 15. Извлечение фрагментов кишечника на примере хорька: а - иссечение фрагмента тонкой кишки (двенадцатиперстной, отходящей от желудка); б - фрагмент тонкой кишки после удаления окружающих тканей и полоскания в физиологическом растворе; в - иссечение фрагмента толстой кишки (участок перед прямой кишкой); г - фрагмент толстой кишки после удаления окружающих тканей и полоскания в физиологическом растворе. Извлечение участка толстой кишки на примере кролика: д - извлечение участка восходящей ободочной кишки; е - фрагмент толстой кишки после удаления окружающих тканей и полоскания в физиологическом растворе
22. Извлечь печень вместе с желчным пузырем. Для этого перерезать удерживающие орган серозные связки: венечную, прикрепляющуюся к диафрагме, почечно-печеночную, желудочно-печеночную и печеночно-двенадцатиперстную (рис. 16, а-в). У кроликов и хорьков после взвешивания отбирается по кусочку размером около 3х3 см от каждой доли, а также участок, к которому прилежит желчный пузырь.
Рис. 16. Извлечение печени на примере хорька: а, б - иссечение связок, удерживающих печень; в - печень и желчный пузырь (указан стрелкой) после извлечения
23. Извлечь надпочечники (рис. 17, а) и отделить от окружающей жировой ткани (рис. 17, б, в). Извлечь почки (рис. 17, г) и отделить от окружающей жировой ткани (рис. 17, д, е).
Рис. 17. Извлечение надпочечников и почек на примере хорька: а - извлечение надпочечников; б-надпочечники после извлечения и удаления окружающих тканей; в - извлечение почек; г - отделение окружающих тканей; д -почки после извлечения и удаления окружающих тканей
24. При необходимости исследования мочи провести ее отбор при помощи шприца перед иссечением мочевого пузыря (рис. 18, а). Извлечь орган, перерезав шейку пузыря (рис. 18, б).
Рис. 18. Забор мочи пункцией мочевого пузыря и его последующее извлечение на примере хорька: а - пункция мочевого пузыря; б - извлечение мочевого пузыря; в - мочевой пузырь после извлечения
25. У самок: извлечь правый и левый яичники (рис. 19, б); извлечь матку - шейку, тело и рога (рис. 19, в-д).
Рис. 19. Извлечение органов половой системы самок на примере кролика: а - общий вид половых органов (яичники обведены синим пунктиром); б - извлечение яичников; в, г - извлечение рогов матки; д - отделение тела матки; е - яичники и матка после извлечения
26. У самцов: отделить семенники вместе с придатками (рис. 20, а, б), отделить придатки от семенников (рис. 20, в, г). Извлечь предстательную железу (рис. 20, д, е).
Рис. 20. Извлечение органов половой системы самцов на примере кролика: а - топографическое расположение семенников (синий пунктир) и придатков; б - отделение семенников вместе с придатками; в, г - отделение придатков; д - топографическое расположение предстательной железы (синий пунктир); е - иссечение предстательной железы; ж - извлеченные семенники и придатки; з - извлеченная предстательная железа
27. Извлечь глаз вместе с веками, слезной железой и зрительным нервом. Сделать круговой надрез кожи вокруг глаза (рис. 21, а). Далее, удерживая веки пинцетом, постепенно надрезать подлежащие ткани (рис. 22, б, в), извлекая глазное яблоко, зрительный нерв и прилежащую слезную железу (рис. 22, г).
Рис. 21. Извлечение глаза с веками, слезной железой и зрительным нервом на примере хорька: а - круговой разрез кожи; б, в - извлечение органокомплекса из орбиты; г - органокомплекс после извлечения (1 - участок слезной железы, 2 - участок зрительного нерва, 3 - глазное яблоко)
28. Извлечение головного мозга осуществляется следующим образом. Отсепарировать кожу и подлежащие мягкие ткани от затылка до переносицы (рис. 22, а-д). Вскрыть черепную коробку двумя распилами (рис. 22, е), соединив их сзади на большом отверстии затылочной кости, а спереди - как показано на рис. 22, ж (для хорьков) и рис. 22, з (для кроликов). После вскрытия черепа удалить черепную коробку и извлечь головной мозг (рис. 23, и-л).
Рис. 22. Извлечение головного мозга: а-г - удаление кожи и подлежащих мышц у хорька; д - разрез мягких тканей в области большого отверстия затылочной кости у хорька; е, ж - направление распилов черепа у хорька; з - направление распилов черепа у кролика; и - извлечение головного мозга; к - головной мозг хорька после извлечения; л - головной мозг кролика после извлечения
29. Для лучшей фиксации слизистой оболочки носовой полости необходимо предварительно промыть носовые ходы раствором фиксатора (рис. 23, а). Отбор тканей носовых ходов и синусов производится следующим образом: после извлечения головного мозга отделить от черепа кожу и мышцы (рис. 23, б). Осторожно, избегая повреждения рук верхними резцами, выполнить поперечный распил верхней челюсти на уровне глаз (рис. 23, в), тем самым отделяя препарат носовых ходов (рис. 23, г).
Рис. 23. Отделение препарата носовых ходов на примере хорька: а - промывание носовых ходов хорька раствором фиксатора (10% забуференный формалин); б - удаление мягких тканей; в - поперечный распил верхней челюсти на уровне глазных орбит; г - подготовленный к фиксации препарат носовых ходов
30. Гипофиз (рис. 24) фиксируется вместе с черепом после извлечения головного мозга, удаления мягких тканей, нижней челюсти и препарата носовых ходов.
Рис. 24. Череп хорька после извлечения мозга, гипофиз обозначен желтым пунктиром
31. Извлечь необходимые скелетную мышцу и периферический нерв. Для этого сделать глубокий разрез кожи, отпрепарировать кожу и фасции, затем извлечь скелетную мышцу и нерв (рис. 25).
Рис. 25. Извлечение скелетной мышцы и периферического нерва на примере хорька -поверхностная ягодичная мышца, седалищный нерв: а, б - отделение кожи и подкожной клетчатки; в - мышца и нерв; г - отделение мышцы с нервом; д - удаление жировой ткани; е -мышца и прилежащий к ней нерв (желтые стрелки) после извлечения
32. Фиксация отделов спинного мозга производится вместе с позвоночным столбом без извлечения мозга из спинномозгового канала. При необходимости, предусмотренной планом исследования, позвоночник извлечь целиком, перед фиксацией разделив его на соответствующие анатомические отделы; в том случае, если такой необходимости нет -извлечь участок поясничного отдела (3-5 сегментов) (рис. 26, а, б). Для подготовки спинного мозга к фиксации необходимо рассечь вдоль позвоночника мышцы спины, пересечь с обеих сторон поперечные отростки позвонков и ребра, после чего максимально очистить позвоночный столб от мягких тканей (рис. 26, в)
Рис. 26. Извлечение позвоночника на примере хорька: а, б - направление распилов позвоночника; б - участок позвоночника, подготовленный для фиксации
Заключение
Предложена методика, которая позволяет:
• обеспечить полное последовательное вскрытие лабораторных животных для досконального исследования всех полостей, систем органов и различных частей тела животного;
• провести извлечение всех необходимых органов и тканей, в том числе предусмотренных планом исследования;
• минимизировать повреждения структур и избежать загрязнения в процессе некропсии органов и тканей, исключая возникновение некоторых артефактов при последующем гистологическом исследовании.
Список литературы
1. Коптяева К.Е., Мужикян А.А., Гущин Я.А., Беляева Е.В., Макарова М.Н., Макаров В.Г Методика вскрытия и извлечения органов лабораторных животных. Сообщение 1: крыса. Лабораторные животные для научных исследований. 2018; 2: 71-92. [Koptyaeva K.E., Muzhikyan A.A., Guschin Ya.A., Belyaeva E.V., Makarova M.N., Makarov V.G. Technique of dissection and extracting organs of laboratory animals. Massage 1: rat. Laboratornye zhivotnye dlya nauchnykh issledovanii. 2018; 2: 71 -92. (in Russ)]. DOI: 10.29296/ 10.29296/2618723X-2018-02-08.
2. Коптяева К.Е., Мужикян А.А., Гущин Я.А., Беляева Е.В., Макарова М.Н., Макаров В.Г. Методика вскрытия и извлечения органов лабораторных животных. Сообщение 2: мышь. Лабораторные животные для научных исследований. 2018; 4: 50-73. [Koptyaeva K.E., Muzhikyan A.A., Guschin Ya.A., Belyaeva E.V., Makarova M.N., Makarov V.G. Technique of dissection and extracting organs of laboratory animals. Massage 2: mouse. Laboratornye zhivotnye dlya nauchnykh issledovanii. 2018; 4: 50-73 (in Russ)]. DOI: 10.29296/2618723X-2018-04-05.
3. Коптяева К.Е., Мужикян А.А., Гущин Я.А., Беляева Е.В., Макарова М.Н., Макаров В.Г. Методика вскрытия и извлечения органов лабораторных животных. Сообщение 3: хомячок. Лабораторные животные для научных исследований. 2019; 1: 50-73. [Koptyaeva K.E., Muzhikyan A.A., Guschin Ya.A., Belyaeva E.V., Makarova M.N., Makarov V.G. Technique of dissection and extracting organs of laboratory animals. Massage 3: hamster. Laboratornye zhivotnye dlya nauchnykh issledovanii. 2019; 1: 50-73 (in Russ)]. DOI: 10.29296/2618723X-2019-01-02.
4. Коптяева К.Е., Мужикян А.А., Гущин Я.А., Беляева Е.В., Макарова М.Н., Макаров В.Г Методика вскрытия и извлечения органов лабораторных животных. Сообщение 4: морская свинка, песчанка, дегу. Лабораторные животные для научных исследований. 2019; 2: 50-73. [Koptyaeva K.E., Muzhikyan A.A., Guschin Ya.A., Belyaeva E.V., Makarova M.N., Makarov V.G. Technique of dissection and extracting organs of laboratory animals. Massage 4: guinea pig, gerbil, degu. Laboratornye zhivotnye dlya nauchnykh issledovanii. 2019; 2: 50-73 (in Russ)]. DOI: 10.29296/2618723X-2019-02-05.
5. Крышень К.Л., Кательникова А.Е., Макарова М.Н., Макаров В.Г. Особенности экспериментальной работы c хорьками. Лабораторные животные для научных исследований. 2019; 2. [Kryshen K.L., Katelnikova A.E., Makarova M.N., Makarov V.G. Features of experimental work with ferrets. Laboratornye zhivotnye dlya nauchnykh issledovanii. 2019: 2 (in Russ)]. DOI: 10.29296/2618723X-2019-02-10.
6. Мужикян А.А., Макарова М.Н., Гущин Я.А. Особенности патологоанатомического исследования группы экспериментальных животных. Международный вестник ветеринарии. 2014; 1: 75-80. [Muzhikyan A.A., Makarova M.N., Guschin Ya.A. Features of the pathoanatomical study of a group of experimental animals. Mezhdunarodnyi vestnik veterinarii. 2014; 1: 75-80 (in Russ)].
7. Рыбакова А.В., Макарова М.Н. Методы эвтаназии лабораторных животных в соответствии с европейской директивой 2010/63. Международный вестник ветеринарии. 2015; 2: 96-107. [Rybakova A.V., Makarova M.N. Methods of euthanasia for laboratory animals in accordance with European Directive 2010/63. Mezhdunarodnyi vestnik veterinarii. 2015; 2: 96-107 (in Russ)].
8. Рыбакова А.В., Макарова М.Н., Макаров В.Г Использование кроликов в доклинических исследованиях. Международный вестник ветеринарии. 2016; 4: 102-6. [Rybakova A.V., Makarova M.N., Makarov V.G. Use of rabbits in preclinical studies. Mezhdunarodnyi vestnik veterinarii. 2016; 4: 1026 (in Russ)].
9. AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals: 2013 Edition. American Veterinary Medical Association, Schaumburg, IL 2013.
10. Jekl V., Hauptman K. Reproductive Medicine in Ferrets. Vet Clin North Am Exot Anim Pract. 2017. Vol. 20: 629-63. DOI: 10.1016/j.cvex.2016.11.016.
11. Fiette L., Slaoui M. Necropsy and Sampling Procedures in Rodents. Drug Safety Evaluation: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology. 2011. Vol. 691: 39-56. D0I::10.1007/978-1-60761-849-2-3.
12. Fox, J. G., Robert P. Marini. Biology and Diseases of the Ferret. Third edition. Wiley Blackwell. 2014: 23-66.
13. Matchett, C. A. et al. The laboratory ferret. CRC Press. 2012: 3-8.
14. McDonough S.P., Southard T (Ed.). Necropsy Guide for Dogs, Cats, and Small Mammals, First Edition. John Wiley & Sons. 2017: 21-150.
15. McInnes E. (Ed.). Pathology for Toxicologists: Principles and Practices of Laboratory Animal Pathology for Study Personnel. Chichester: John Wiley & Sons. 2017: 25-6.
16. Parkinson C. et al. Diagnostic necropsy and selected tissue and sample collection in rats and mice. Journal of Visualized Experiment. 2011; 54: 2-7. DOI: 10.3791/2966
17. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice - Part 1 // Experimental and Toxicologic Pathology. 2003. Vol. 55: 91 -106. DOI: 10.1078/0940-2993-00311
18. Suckow M.A., Stevens K.A., Wilson R.P. (Eds.). The Laboratory Rabbit, Guinea Pig, Hamster, and Other Rodents. London: Academic Press; Elsevier. 2012: 135-6.
Technique of dissection
and extracting organs of laboratory animals.
Message 5 — rabbit, ferret
K.E. Koptyaeva, veterinarian pathologist of the department of histology and pathomorphology, J.U. Ustenko, veterinarian pathologist of the department of histology and pathomorphology, Ya.A. Guschin, Head of the department of Histology and Pathology,
E.V. Belyaeva, veterinarian pathologist of the department of histology and pathomorphology, M.N. Makarova, Dr. Med. Sci., director,
V.G. Makarov, Dr. Med. Sci., professor, deputy director of «Research-and-manufacturing company Houme of Pharmacy
188663, Russia, Leningrad region, Vsevolozhskiy district, st. Zavodskaya, Kuzmolovskiy, b. 245, 3 E-mail: [email protected]
Keywords: necropsy, pathomorphology
Abstract
The fifth message from a series of articles on the methodology of necropsy and extraction of organs of laboratory animals, describing in detail and illustrating the technique of sequential and complete necropsy and extraction of organs of laboratory rabbits and ferrets, is presented. Rabbits are suitable for long-term ongoing research, and are the only laboratory rodents from which you can get recombinant pharmaceutical proteins and explore the oral or intragastrically forms without destroying the integrity of the tablets. In addition, they are used to develop and study new surgical methods, physiological tests and studies of various types of toxicity for drug testing. Various viral and bacterial diseases were studied on ferrets, as well as pathology of the organs of hearing, vision, the vomiting reflex due to the similarity of many anatomical, metabolic and physiological characteristics to humans. This article describes the method of necropsy from the procedure of external examination of a corpse, sequential dissection and examination of the thoracic and abdominal cavities, and before the extraction of organs, the selection of various bone preparations. Possible methods for the extraction of organs of the oral cavity (including extraction of the tongue, pharynx), all organs of the thoracic, abdominal and pelvic cavities are described and illustrated. Describes the method of extraction of the brain, the method of selection of the chest bone for histological examination of the bone marrow and upper jaw for histological examination of the nasal passages. A procedure for preparing a spinal cord site for fixation in formalin without removing it from the spinal canal is described. Demonstrated methods for extracting the eyes, together with the lacrimal gland and eyelids by a single organocomplex, extracting the muscles and adjacent peripheral nerves. The methods of extraction and the sequence of actions performed, described in this article, minimize the damage to the organs being removed and prevent their contamination in order to prevent the occurrence of certain artifacts detected by subsequent histological examination.
Full text available only in Russian
Conflict of interest
The authors declare no conflict of interest.
References
Коптяева К.Е., Мужикян А.А., Гущин Я.А., Беляева Е.В., Макарова М.Н., Макаров В.Г Методика вскрытия и извлечения органов лабораторных животных. Сообщение 1: крыса. Лабораторные животные для научных исследований. 2018; 2: 71-92. [Koptyaeva K.E., Muzhikyan A.A., Guschin Ya.A., Belyaeva E.V., Makarova M.N., Makarov V.G. Technique of dissection and extracting organs of laboratory animals. Massage 1 : rat. Laboratornye zhivotnye dlya nauchnykh issledovanii. 2018; 2: 71 -92. (in Russ)]. DOI: 10.29296/ 10.29296/2618723X-2018-02-08.
Коптяева К.Е., Мужикян А.А., Гущин Я.А., Беляева Е.В., Макарова М.Н., Макаров В.Г. Методика вскрытия и извлечения органов лабораторных животных. Сообщение 2: мышь. Лабораторные животные для научных исследований. 2018; 4: 50-73. [Koptyaeva K.E., Muzhikyan A.A., Guschin Ya.A., Belyaeva E.V., Makarova M.N., Makarov V.G. Technique of dissection and extracting organs of laboratory animals. Massage 2: mouse. Laboratornye zhivotnye dlya nauchnykh issledovanii. 2018; 4: 50-73 (in Russ)]. DOI: 10.29296/2618723X-2018-04-05.
Коптяева К.Е., Мужикян А.А., Гущин Я.А., Беляева Е.В., Макарова М.Н., Макаров В.Г. Методика вскрытия и извлечения органов лабораторных животных. Сообщение 3: хомячок. Лабораторные животные для научных исследований. 2019; 1: 50-73. [Koptyaeva K.E., Muzhikyan A.A., Guschin Ya.A., Belyaeva E.V., Makarova M.N., Makarov V.G. Technique of dissection and extracting organs of laboratory animals. Massage 3: hamster. Laboratornye zhivotnye dlya nauchnykh issledovanii. 2019; 1: 50-73 (in Russ)]. DOI: 10.29296/2618723X-2019-01-02.
Коптяева К.Е., Мужикян А.А., Гущин Я.А., Беляева Е.В., Макарова М.Н., Макаров В.Г. Методика вскрытия и извлечения органов лабораторных животных. Сообщение 4: морская свинка, песчанка, дегу. Лабораторные животные для научных исследований. 2019; 2: 50-73. [Koptyaeva K.E., Muzhikyan A.A., Guschin Ya.A., Belyaeva E.V., Makarova M.N., Makarov V.G. Technique of dissection and extracting organs of laboratory animals. Massage 4: guinea pig, gerbil, degu. Laboratornye zhivotnye dlya nauchnykh issledovanii. 2019; 2: 50-73 (in Russ)]. DOI: 10.29296/2618723X-2019-02-05. Крышень К.Л., Кательникова А.Е., Макарова М.Н., Макаров В.Г. Особенности экспериментальной работы c хорьками. Лабораторные животные для научных исследований. 2019; 2. [Kryshen K.L., Katelnikova A.E., Makarova M.N., Makarov V.G. Features of experimental work with ferrets. Laboratornye zhivotnye dlya nauchnykh issledovanii. 2019: 2 (in Russ)]. DOI: 10.29296/2618723X-2019-02-10. Мужикян А.А., Макарова М.Н., Гущин Я.А. Особенности патологоанатомического исследования группы экспериментальных животных. Международный вестник ветеринарии. 2014; 1: 75-80. [Muzhikyan A.A., Makarova M.N., Guschin Ya.A. Features of the pathoanatomical study of a group of experimental animals. Mezhdunarodnyi vestnik veterinarii. 2014; 1: 75-80 (in Russ)]. Рыбакова А.В., Макарова М.Н. Методы эвтаназии лабораторных животных в соответствии с европейской директивой 2010/63. Международный вестник ветеринарии. 2015; 2: 96-107. [Rybakova A.V., Makarova M.N. Methods of euthanasia for laboratory animals in accordance with European Directive 2010/63. Mezhdunarodnyi vestnik veterinarii. 2015; 2: 96-107 (in Russ)]. Рыбакова А.В., Макарова М.Н., Макаров В.Г Использование кроликов в доклинических исследованиях. Международный вестник ветеринарии. 2016; 4: 102-6. [Rybakova A.V., Makarova M.N., Makarov V.G. Use of rabbits in preclinical studies. Mezhdunarodnyi vestnik veterinarii. 2016; 4: 1026 (in Russ)].
AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals: 2013 Edition. American Veterinary Medical Association, Schaumburg, IL 2013.
10. Jekl V., Hauptman K. Reproductive Medicine in Ferrets. Vet Clin North Am Exot Anim Pract. 2017. Vol. 20: 629-63. DOI: 10.1016/j.cvex.2016.11.016.
11. Fiette L., Slaoui M. Necropsy and Sampling Procedures in Rodents. Drug Safety Evaluation: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology. 2011. Vol. 691: 39-56. D0I::10.1007/978-1-60761-849-2-3.
12. Fox, J. G., Robert P. Marini. Biology and Diseases of the Ferret. Third edition. Wiley Blackwell. 2014: 23-66.
13. Matchett, C. A. et al. The laboratory ferret. CRC Press. 2012: 3-8.
14. McDonough S.P., Southard T (Ed.). Necropsy Guide for Dogs, Cats, and Small Mammals, First Edition. John Wiley & Sons. 2017: 21-150.
15. Mclnnes E. (Ed.). Pathology for Toxicologists: Principles and Practices of Laboratory Animal Pathology for Study Personnel. Chichester: John Wiley & Sons. 2017: 25-6.
16. Parkinson C. et al. Diagnostic necropsy and selected tissue and sample collection in rats and mice. Journal of Visualized Experiment. 2011; 54: 2-7. DOI: 10.3791/2966
17. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice - Part 1 // Experimental and Toxicologic Pathology. 2003. Vol. 55: 91 -106. DOI: 10.1078/0940-2993-00311
18. Suckow M.A., Stevens K.A., Wilson R.P. (Eds.). The Laboratory Rabbit, Guinea Pig, Hamster, and Other Rodents. London: Academic Press; Elsevier. 2012: 135-6.
