CC BY
0Ветеринарный врач. 2024. № 5. С. 28 - 34
The Veterinarian. 2024; (5): 28 - 34
Научная статья
УДК 619:614.91:57.083.3
DOI: 10.33632/1998-698Х 20245 28
РЕФЕРЕНС-СЫВОРОТКА ИЗ КРОВИ ВАКЦИНИРОВАННЫХ СОБАК ДЛЯ КОНТРОЛЯ БЕШЕНСТВА
Ольга Владимировна Анисина, кандидат биологических наук, anisina-olga@mail.ru Софья Владимировна Конкина, sofi.konkina@yandex.ru
Александр Леонидович Елаков, кандидат биологических наук, alelakov@mail.ru
Нина Михайловна Пухова, кандидат биологических наук, pnm45@bk.ru
Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности, г.о. Лосино-Петровский, Российская Федерация
Автор, ответственный за переписку: Ольга Владимировна Анисина.
Аннотация. Бешенство продолжают регистрировать на территориях многих стран мира, в основном Азии и Африки и, несмотря на большие усилия по его ликвидации, продолжает уносить жизни людей и наносить большой ущерб животноводству. Сегодня Международные организации ВОЗ, МЭБ. ФАО вместе с Альянсом по борьбе с бешенством объединились с целью глобального искоренения инфекции. Разработанный стратегический план, концепция и программы ликвидации бешенства уже показали свою эффективность. Многие страны Европы, Северная Америка, Япония и другие успешно ликвидировали этот смертельно опасный зооноз, путем вакцинации собак, основного резервуара и вектора передач инфекции. Собаки являются источником более 99% случаев заражения людей вирусом бешенства в эндемичных регионах. Борьба с бешенством, особенно среди собак, находящихся на свободном выгуле, является первоочередной задачей для снижения бремени болезней человека. Для борьбы с бешенством необходимы эффективные антирабические вакцины, чувствительные диагностические методы и препараты, качество которых должно соответствовать требования МЭБ. Известный рабиолог F.X.Meslin отмечает, что для снижения заболеваемости людей бешенством, опосредованным собаками, следует сделать контроль и профилактику бешенства собак приоритетом общественного здравоохранения и ветеринарных служб. Общая национальная стратегия должна включить улучшение эпиднадзора за собаками посредством лабораторной диагностики. По мере того, как научно-технические достижения делают диагностику более быстрой, точной и рентабельной, станет проще инициировать такие программы. В данной статье представлены результаты создания и аттестации отраслевых стандартных антирабических препаратов для профилактики и диагностики бешенства, использование которых позволяет получать результаты, сопоставимые с международными требованиями.
Ключевые слова: бешенство, антирабическая вакцина, диагностика, антитела, референссыворотка
Для цитирования: Анисина О. В., Конкина С. В., Елаков А. Л., Пухова Н.М. Референс-сыворотка из крови вакцинированных собак для контроля бешенства // Ветеринарный врач. 2024. № 5. С. 28 - 34. DOI: 10.33632/1998-698Х 20245 28
REFERENCE SERUM FROM THE BLOOD OF VACCINATED DOGS FOR CONTROL OF RABIES
Olga V. Anisina, candidate of biological sciences, anisina-olga@mail.ru Sophia V. Konkina, sofi.konkina@yandex.ru
Alexander L. Elakov, candidate of biological sciences, alelakov@mail.ru
Nina M. Pukhova, candidate of biological sciences, pnm45@bk.ru
All-Russian Scientific Research and Technological Institute of Biological Industry, Losino-Petrovsky, Russian Federation
29
Corresponding author: Olga VladimirovnaAnisina.
Abstract. Rabies continues to be registered in many countries of the world, mainly in Asia and Africa, and despite great efforts to eliminate it, it continues to claim human lives and cause great damage to livestock. Today, the International Organizations WHO, OIE, FAO and the Alliance for Rabies Control have united to eradicate the infection globally. The developed strategic plan, concept and programs for the elimination of rabies have already proven their effectiveness. Many countries in Europe, North America, Japan and others have successfully eliminated this deadly zoonosis by vaccinating dogs, the main reservoir and vector of infection. Dogs are the source of more than 99% of human cases of rabies virus infection in endemic regions. The fight against rabies, especially among free-ranging dogs, is a priority task to reduce the burden of human diseases. Effective anti-rabies vaccines, sensitive diagnostic methods and drugs, the quality of which must meet OIE requirements, are needed to combat rabies. Renowned rabologist F.X.Meslin notes that in order to reduce the incidence of dog-mediated rabies in humans, control and prevention of dog rabies should be made a priority for public health and veterinary services. The overall national strategy should include improving dog surveillance through laboratory diagnostics. As scientific and technological advances make diagnostics faster, more accurate, and more cost-effective, it will become easier to initiate such programs. This article presents the results of the development and validation of industry standard antirabies drugs for the prevention and diagnosis of rabies, the use of which allows obtaining results comparable to international requirements.
Keywords: rabies, antirabies vaccine, diagnostics, antibodies, reference-serum
Введение. Бешенство - один из самых смертоносных зоонозов. На протяжении более 4000 лет случаи заражения вирусом бешенства (ВБ) регистрировались почти во всем мире, и прикладывалось много усилий для его ликвидации. Но заболевание продолжает регистрироваться в странах Африки и Азии и остается глобальной угрозой, ежегодно убивая десятки тысяч человек, причем 4 из 10 случаев - дети, более 1 млн животных [1]. В 99% случаев заболевания людей бешенством возникают в результате укуса инфицированными собаками [2].
В отличие от многих других инфекционных заболеваний, инструменты, необходимые для ликвидации «собачьего бешенства" уже существуют. Международные организации ВОЗ, МЭБ. ФАО вместе с Альянсом по борьбе с бешенством объединились с целью глобального искоренения инфекции и разработали стратегический план, концепцию и пилотные программы ликвидации бешенства. Многие страны Европы, Северная Америка, Япония и другие успешно ликвидировали этот смертельно опасный зооноз, путем вакцинации собак, основного резервуара и вектора передачи инфекции. Современные вакцины против бешенства могут эффективно устранить заболевание у собак - источника вируса, а своевременная постконтактная профилактика людей, покусанных зараженными вирусом бешенства домашними или дикими животными, на 100% предотвратить их смерть [3, 4].
Наиболее эффективными средствами контроля бешенства среди домашних и диких животных являются своевременная диагностика и эффективная иммунопрофилактика. В большинстве районов мирового нозоареала, независимо от типа эпидемического образца, преобладающим мероприятием в борьбе с бешенством считается вакцинация собак, т.к. они являются не только основным резервуаром бешенства городского типа, но и основной мишенью бешенства лесного типа и вектором передачи инфекции человеку [5]. Например, опыт борьбы с бешенством в странах западной Европы (Англия, Германия, Швеция и другие) показал, что вакцинация 70% популяции домашних животных и бродячих собак и кошек приводит к полному прекращению случаев заболевания людей. Однако, учитывая растущую тенденцию некоммерческих перемещений животных по всему миру, существует постоянная угроза повторного заноса ВБ через импорт животных, инкубирующих болезнь, особенно из стран, эндемичных по бешенству, В Европейском союзе (ЕС) многие страны свободные от бешенства продолжают прилагать огромные усилия для контроля и защиты от этого заболевания. Чтобы избежать распространения бешенства и повторного заноса болезни через домашних животных, были разработаны правила (ЕС) 998/2003 перемещения домашних животных внутри Евросоюза, в 2013 г. правила переработаны в Регламент (ЕС) 576/2013 по некоммерческому перемещению собак, кошек и хорьков между странами ЕС или из указанных стран, не входящих в ЕС, что вакцинация против бешенства, задокументированная в паспорте домашнего животного, или ветеринарном сертификате, является единственным требованием при пересечении границ ЕС [6]. С 16 сентября 2024 года для ввоза из России и Беларуси собак, кошек и хорьков в Евросоюз, добавляется ещё одно требование - анализ на титры антител к вирусу бешенства, выдержанный не менее трех месяцев.
Международный сертификат о вакцинации собак и кошек против бешенства выдается при условии, если животное было привито лицензированной инактивированной антирабической вакциной и имеет титр антител к вирусу бешенства до отправки не ниже 0,5 МЕ/мл. Уровень антирабических
30
антител у привитых животных оценивают в реакции нейтрализации (РН) или иммуноферментным анализом (ИФА) в соответствии с руководством МЭБ по диагностическим тестам и вакцинам для сухопутных животных [7]. Независимо от выбранного метода в реакцию обязательно включается контроль с положительной и отрицательной сывороткой крови. В качестве положительного контроля используется международный стандарт антирабического иммуноглобулина человека или стандартная сыворотка крови. Поскольку международные стандарты рассылаются в очень ограниченном количестве, то на практике в качестве положительной сыворотки, МЭБ рекомендует использовать сыворотку крови животных с известным титром антирабических антител, откалиброванную по международному стандарту иммуноглобулина человека или стандарту МЭБ.
С 1972 года во ВНИТИБП начались научно-исследовательские работы по Государственному заданию ГКНТ 11.03 «Разработать технологию изготовления, методы контроля, стандартизации и внедрить в промышленное производство и ветеринарную практику более эффективные безвредные антирабические вакцины». Создание, контроль и внедрение новых вакцин на производство потребовали создания национальных антирабических референс-препаратов. С этой целью были получены и откалиброваны по международным стандартам референс-сыворотка и референс-вакцина. Оба препарата прошли сертификацию и использовались как национальные антирабические отраслевые стандарты [8, 9].
Разработкой, изготовлением и аттестацией референс-сыворотки из крови крупного рогатого скота занимались сотрудники Отдела разработки промышленной технологии изготовления противовирусных препаратов во главе с заведующим отдела В.С. Ивановым. была изготовлена антирабическая сухая сыворотка крупного рогатого скота, иммунизированного инактивированной антирабической вакциной из вируса бешенства, штамм Щелково-51». После прогревания в течение 30 мин при 56 оС и сублимационного высушивания ее исследовали в РН относительно сухой антирабической сыворотки с известной активностью (8 МЕ). Среднее значение вируснейтрализующей активности испытуемой сыворотки КРС составил 19,7 МЕ/мл (разброс показаний не превышал 12%), что соответствовало требованиям к биологическим стандартам (не ниже 10 МЕ/мл). Было принято решение аттестовать эту сыворотку в качестве национального стандарта. Для этого провели сличительные испытания данного образца с Международным стандартом антирабического иммуноглобулина человека (Институт биологических стандартов и контролей Великобритании, активность 30 МЕ/мл). Полученные результаты позволили рекомендовать испытуемую сухую антирабическую сыворотку КРС в качестве национального стандарта, зарегистрировать в Российской Федерации (рег.№ПВР-1-1.7/2044) и применять в качестве контрольного препарата при постановке реакции нейтрализации. Референс-сыворотка была рекомендована для определения антирабической активности сывороток крови животных и выражалась в международных единицах (МЕ/мл) [10].
В 2017 г. в институте была изготовлена сухая антирабическая сыворотка из крови баранов, ги-периммунизированных инактивированным вирусом бешенства, штамм «Овечий. ВГНКИ). На способ получения сыворотки был получен патент RU №2609766, 02.02.2017, активность сыворотки установили по национальному стандарту Референс-сыворотка из крови КРС (производство ВНИТИБП) [11].
С целью имитации (адекватная вакцинация с доказанной сероконверсией и биологической характеристикой) МЭБ рекомендует при определении титров антител к вирусу бешенства в реакции нейтрализации на культуре клеток (FAVN) использовать в качестве контрольной эталонную сыворотку МЭБ собачьего происхождения.
Нами была поставлена задача - разработать способ получения отечественного стандарта - сухой антирабической референс-сыворотки на основе сыворотки крови вакцинированных собак и для гармонизации отечественного стандарта с международными требованиями провести сличительные исследования с международным референс -препаратом.
Материалы и методы. Антирабические сыворотки получали иммунизацией клинически здоровых 1-3-летних собак породы Бигль (n=12) антирабической инактивированной вакциной для собак и кошек «Рабикан» из штамма «Щелково-51» (производства ФКП «Щелковский биокомбинат») с применением иммуномодуляторов. Для постановки реакции диффузионной преципитации (РДП) использовали «Набор компонентов для диагностики бешенства в РДП» (СТО 00497963-0003-2023), проведения иммуноферментного анализа ИФА) - набор ИФА, производства Muhan Huawei Biotech Co., LTD, Китай. Для проведения реакции нейтрализации использовали культуры клеток ВНК-21/13. Специфическую активность антирабической сыворотки определяли параллельно тремя тестами РДП, FAVN и ИФА.
31
Для оптимизации режима лиофильного высушивания антирабической сыворотки предварительно определяли оптимальное количество декстрана Т-70 (Dextran 70, «AppliChem») в среде высушивания и режим высушивания. Для этого готовили 1%, 2%, 3%, 4%, и 5% растворы декстрана в 10 мМ фосфатно-солевом растворе с рН 7,4±0,2. Лиофильную сушку сыворотки проводили на установке TG-50 с выполнением дифференциально-термического анализа (ДТА) каждой пробы при замораживании и последующим нагреванием замороженных образцов. Эффективность лиофилизации оценивали по внешнему виду, наличию конгломератов в референс-сыворотки методом гель-хроматографии на сефадексе G-100. Специфическую активность сыворотки после лиофилизации оценивали в FAVN, для оценки активности сыворотки в международных единицах использовали национальный стандарт референс-сыворотку из крови КРС (производства ВНИТИБП). Все работы с животными проводили в соответствии с ГОСТ 33215-2014 [12].
Результаты исследований и их обсуждение. Для иммунизации было отобрано две группы собак по пять особей в каждой. Две собаки, ранее не вакцинированные от бешенства, составили контрольную группу, которая оставалась не иммунизированной в ходе всего испытания.
Первую группу животных иммунизировали двукратно - 0 и 14 день, вторую трехкратно - 0, 14, 34 день. Для иммунизации собак использовали антирабическую вакцину «Рабикан» из штамма «Щелково-51», которую вводили подкожно в объеме 1 мл. На 30-ый (1-я группа) и 56-ой (2-я группа) дни после первой иммунизации у животных брали кровь, отделяли сыворотку и определяли уровень антирабических антител в реакциях РДП, FAVN и ИФА. Титры антирабических антител в сыворотках крови иммунизированных и контрольных собак представлены в таблице 1.
Таблица 1 - Титры антирабических антител в сыворотках крови иммунизированных собак
№ собаки
Титры антирабических антител
РДП
ИФА
FAVN МЕ/мл
1 группа
38240
38238
38223
38222
38229
1:8 1:32 1:64
1:1 1:32
1:1280 1:2560 1:10240 1:80
1:5120
4,56 13,77 41,59 0,87 18,15
2 группа
38233
38227
38232
38226
38228
1:4 1:32 1:2 1:2 1:16
1:640 1:2560
1:160 1:160 1:2560
2,62 13,77 1,51 1,51 7,92
Контроль
ББ-1
ББ-2
0
0
0
0
0,04
0,04
Как видно из результатов, представленных в таблице 1, все животные имели антитела к вирусу бешенства после иммунизации антирабической вакциной выше 0,5 МЕ/мл в реакции нейтрализации, что свидетельствует о высоком качестве применяемой вакцины. В то же время, титры антител существенно варьировали у отдельных животных: в первой группе титры составили от 0,87 до 41,59 МЕ/мл в FAVN, тогда как во второй группе от 1,51 до 13,77 МЕ/мл, что объясняется индивидуальными особенностями иммунного ответа животных на вакцинацию. Для дальнейшей работы были выбраны сыворотки с активностью не менее 10 МЕ/мл (№№ животных 38238, 38229 и 38227). Полученную сыворотку от этих собак объединили для дальнейшего исследования.
С целью определения оптимальной концентрации Декстрана Т-70 в среде высушивания готовили 5 серий препарата с содержанием декстрана от 1% до 5 % и расфасовали по 0,5 мл в ампулы (объемом по 5 мл) для дальнейшей отработки режима высушивания. После замораживания при минус 70 °C в течение 18 ч, проводили вакуумную сушку препарата при температуре полки минус 40 °C. Скорость нагревания на этапе досушивания составляла (4-6) °С/ч.
В результате исследования установлено, что конечная температура образцов не должна превышать 25 °C при общем времени вакуумного обезвоживания 20 ч. Оптимальная концентрация декстрана
32
Т-70 составила 3%. Характеристика экспериментальной сыворотки, полученной при заданных оптимальных условиях сушки, приведена в таблице 2.
Таблица 2 - Характеристика сухой сыворотки из крови вакцинированных собак
Препарат
Испытуемая сыворотка антирабическая
Контрольная сыворотка (отрицательный контроль)
Характеристика сыворотки антирабической
Внешний вид
Сухая пористая масса
Сухая пористая масса
Наличие конгломератов
нет
нет
Специфичность, титр в FAVN, МЕ/мл
До сушки
После сушки
Остаточная влажность (%)
18,15
18,15
1,8±0,2
0,04
0,04
1,6±0,2
Специфический титр полученной сыворотки собак, установленной в сличительном исследовании с референс-сывороткой КРС после сушки определялся в 18,15 МЕ/мл., что позволяет рекомендовать ее для аттестации в качестве референс-сыворотки.
Заключение. Собаки являются источником более 99% случаев заражения людей вирусом бешенства в эндемичных регионах. Без постконтактной профилактики почти все случаи заканчиваются летальным исходом, что делает бешенство самым смертоносным инфекционным заболеванием. Ежегодно сообщается о десятках тысяч случаев смерти, но официальные данные, как полагают, сильно занижены. Борьба с бешенством, особенно среди собак, находящихся на свободном выгуле, является первоочередной задачей для снижения бремени болезней человека. Но успешные стратегии профилактики бешенства собак, подтверждающие отсутствие заболевания, зависят от лабораторного эпиднадзора, оперативного представления данных и адекватной системы оценки риска. Чувствительность диагностических методов индикации вируса бешенства напрямую зависит от активности и специфичности антител, направленных к штаммо- и специфическим антигенным детерминантам нуклеопротеина (N-белок), выделенных из антирабических сывороток различных видов животных (лошадей, КРС, овец, кроликов, собак и других).
Известный рабиолог F.X. Меslin отмечает, что для снижения заболеваемости людей бешенством, опосредованным собаками, следует сделать контроль и профилактику бешенства собак приоритетом общественного здравоохранения и ветеринарных служб. Общая национальная стратегия должна включить улучшение эпиднадзора за собаками посредством лабораторной диагностики. По мере того, как научно-технические достижения делают диагностику более быстрой, точной и рентабельной, станет проще инициировать такие программы [14].
В результате проведенных исследований нами оптимизирована технология изготовления антирабической сухой сыворотки из крови собак с сохранением специфической активности и стабильности препарата после лиофильного высушивания. Полученная сыворотка пригодна для определения антирабических антител у вакцинированных собак и может применяться для контроля эффективности вакцинации и степени защиты животных.
Финансирование исследования. Работа выполнена в соответствии с Государственным заданием по теме: Тема FGGS-2022-0005 «Провести проблемно-ориентированные исследования и разработать высокоиммуногенные безвредные и экологически безопасные антирабические вакцины для массовой иммунизации диких, домашних и безнадзорных животных; разработать методы контроля эффективности вакцинации животных против бешенства»
Список источников
1. Zinsstag J., Vaccination of dogs in an African city interrupts rabies transmission and reduces human exposure / J. Zinsstag, M.Lechenne, M.Laager [et al.] // Home Science Translational Medicine. - 2017. -Vol. 9, No. 421.
33
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Макаров, В.В. БЕШЕНСТВО: "ZERO DEATHS BY 30" / В.В. Макаров, О.Ю. Барсуков, Ю.И. Барсуков // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. - 2023. - №3 (33). - С.23-31.
Пухова, Н.М. Профилактика и меры борьбы с бешенством животных / Н.М. Пухова, А.Я. Самуй-ленко, В.И. Еремец., А.Л. Елаков // Современные проблемы природопользования, охотоведения и звероводства. - 2012. - С.365-366.
Гребенча, С.В. Получение моноклональных антител к нуклеопротеину вируса бешенства/ С.В. Гребенча, А.Ю. Козлов, Л.В. Костина, А.Л. Елаков [и др.] // Вопросы вирусологии. - 2013. -Т. 58. - №5. - С.38-43.
Пухова, Н.М. Способы борьбы с бешенством плотоядных животных / Н.М Пухова, А.Я. Самуй-ленко, Н.К. Еремец, Ю.И. Барсуков, О.А. Захарченко // Ж. Ветеринария и кормление. - 2014. - №4. - С.48-50.
Регламент Европейского Парламента и Совета № 576/2013 от 12 июня 2013 «Регламент по неко-мерческому перемещению домашних питомцев». Дата принятия 12.06.2013.
Руководство по диагностическим тестам и вакцинам для сухопутных животных (млекопитающих, птиц и пчел) / МЭБ, Глава 2.2.5. Бешенство.. 5-е изд., 2004.
Гринь, С.А. Основные направления развития производства биопрепаратов для профилактики бешенства животных / С.А. Гринь, А.Я. Самуйленко, Н.М. Пухова // Ветеринария и кормление. - 2018. - №2. - С.29-32.
Пухова, Н.М. Биологические стандарты для оценки качества антирабических вакцин, используемых в ветеринарной практике / Н.М. Пухова, А.Я. Самуйленко, А.Л. Елаков [и др.] // Стандартные образцы в измерениях и технологиях: Сб.трудов Ш Всероссийской научно-технической конференции с международным участием. - Екатеринбур. - 2011. - С.138-139.
10. Гринь, С.А. Разработка антирабической референс - вакцины из вируса бешенства, штамм «Щелково-51» / С.А. Гринь, Н.М. Пухова, А.Я. Самуйленко [и др.]// Вестник российской сельскохозяйственной науки. - 2018. - 3. - С. 49-52.
11. RU 2 609 766 (13) C1. Способ получения антирабической диагностической сыворотки, опубл: 2017.02.02.
12. ГОСТ 33215-2014 Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила оборудования помещений и организации процедур. - Изд. официальное. - Москва: Стандартин-форм, 2019. - 20 с.
13. OIE Manual of diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals (mammals, birds and bees), 2018.
14. Меslin F.X., Briggs D.J. Elimating canine rabies, the principal source of human infection: What will it take? Antiviral Res., 2013, 98 (2), pp. 291-296.
15. Banyarda A. C., Horton D.L., Freuling C. et al. Control and prevention of canine rabies: The need for building laboratory-based surveillance capacity. Antiviral Research, 2013, vol 98. Issue 3, pp. 357-364.
References
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Zinsstag J., Vaccination of dogs in an African city interrupts rabies transmission and reduces human exposure / J. Zinsstag, M.Lechenne, M.Laager [et al.] // Home Science Translational Medicine. - 2017. -Vol. 9, No. 421.
Makarov, V.V. RABIES: "ZERO DEATHS BY 30" / V.V. Makarov, O.Yu. Barsukov, Yu.I. Barsukov // Actual issues of veterinary biology. - 2023. - No. 3 (33). - P.23-31.
Pukhova, N.M. Prevention and measures to combat rabies in animals / N.M. Pukhova, A.Ya. Samoylenko, V.I. Eremets., A.L., Elakov // Modern problems of nature management, hunting and animal husbandry. -2012. - P.365-366.
Grebencha, S.V. Obtaining monoclonal antibodies to the rabies virus nucleoprotein / S.V. Grebencha, A.Yu. Kozlov, L.V. Kostina, A.L. Elakov [et al.] // Issues of Virology. - 2013. - T. 58. - No. 5. - P.38-43. Pukhova, N.M. Methods of combating rabies in carnivores / N.M. Pukhova, A.Ya. Samoylenko, N.K. Eremets, Yu.I. Barsukov, O.A. Zakharchenko // J. Veterinary Science and Feeding. - 2014. - No. 4. - P.4850.
Regulation (EC) No. 576/2013 of the European Parliament and of the Council of 12 June 2013 "Regulation on the non-commercial movement of pet animals". Date of adoption: 12.06.2013.
Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals (mammals, birds and bees) / OIE, Chapter 2.2.5. Rabies. 5th ed., 2004.
34
8.
9.
10.
11.
12.
13.
Grin, S.A. Main directions of development of production of biological products for the prevention of rabies in animals / S.A. Grin, A.Ya. Samoylenko, N.M. Pukhova // Veterinary science and feeding. - 2018. - No. 2. - P. 29-32.
Pukhova, N.M. Biological standards for assessing the quality of rabies vaccines used in veterinary practice / N.M. Pukhova, A.Ya. Samoylenko, A.L. Elakov [et al.] // Standard samples in measurements and technologies: Proceedings of the III All-Russian scientific and technical conference with international participation. - Ekaterinburg. - 2011. - P.138-139.
Grin, S.A. Development of an anti-rabies reference vaccine from the rabies virus, strain "Shchelkovo-51" / S.A. Grin, N.M. Pukhova, A.Ya. Samoylenko [et al.] // Bulletin of Russian agricultural science. - 2018. - 3. - P. 49-52.
RU 2 609 766 (13) C1. Method for obtaining antirabies diagnostic serum, publ: 2017.02.02.
GOST 33215-2014 Guidelines for the maintenance and care of laboratory animals. Rules for equipping premises and organizing procedures. - Official ed. - Moscow: Standartinform, 2019. - 20 p.
OIE Manual of diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals (mammals, birds and bees), 2018.
14. Meslin F.X., Briggs D.J. Elimating canine rabies, the principal source of human infection: What will it take? Antiviral Res., 2013, 98 (2), pp. 291-296.
15. Banyarda A. C., Horton D.L., Freuling C. et al. Control and prevention of canine rabies: The need for building laboratory-based surveillance capacity. Antiviral Research, 2013, vol 98. Issue 3, pp. 357-364.
Все авторы сделали эквивалентный вклад в подготовку публикации.
Авторы подтверждают отсутствие конфликта финансовых/нефинансовых интересов, связанных с написанием статьи.
All authors have made an equivalent contribution to the preparation of the publication. The authors declare that there is no conflict of interest.
Принята к публикации / Accepted for publication 16.09.2024;
© Анисина О.В., Конкина С.В., Елаков А.Л., Пухова Н.М. 2024
