CC BY
46
Экология и биология паразитов
УДК 619:616.995.122.21
РАЗВИТИЕ МЕТАЦЕРКАРИЕВ Opisthorchis felineus В РАЗНЫХ СРЕДАХ in vitro И В МОРСКИХ СВИНКАХ ПРИ РАЗНЫХ МЕТОДАХ
ВВЕДЕНИЯ in vivo
С.К. ШИБИТОВ аспирант
Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина, г. Москва, Б. Черемушкинская, 28, e-mail: samshib@yandex.ru
Метацеркарии (МЦ) Ор1$(когсМ8 /вИнвт в изотоническом растворе ^С1 и растворе Рингер-Локка способны разрывать оболочку головным концом. Приживаемость МЦ О. felineus в желчных протоках печени морских свинок при пероральном заражении составила 33 %, в верхнем отделе тонкого кишечника
- 57%. При внутрибрюшинном заражении и введении МЦ в кровяное русло заражения не происходило.
Ключевые слова: метацеркарии, Ор1з№огсЬ1з
felineus, морские свинки, экспериментальное заражение, приживаемость.
Заражение дефинитивных хозяев описторхами происходит при поедании сырой рыбы, инвазированной метацеркариями этого паразита. Проглоченные вместе с рыбой МЦ освобождаются из цист и проникают в желчные ходы печени не гематогенным путем, а через желчный проток. Уже через 5 ч после заражения МЦ можно обнаружить в желчных ходах печени дефинитивных хозяев. Здесь описторхи через 3-4 нед достигают половой зрелости [1, 6]. У 20-40 % заболевших людей описторхи обнаружены в протоках поджелудочной железы и в желчном пузыре [2, 3].
МЦ Opisthorchis felineus заражаются домашние плотоядные и всеядные животные (кошка, собака, свинья), дикие плотоядные и некоторые гидрофильные грызуны (ондатра, водяная полевка и др.), а также человек. В кислом содержимом желудка окончательного хозяина разрушается внешняя оболочка МЦ, а в щелочном содержимом - внутренняя [4].
По данным Коваленко, Черниковой, Михеева и др. [5], основной путь миграции МЦ при заражении окончательного хозяина включает следующие этапы: в различных участках внутренней поверхности 12-перстной кишки МЦ активно проникают через слизистую оболочку, внедряясь в сосуды ее венозной сети, и током крови пассивно заносятся через систему воротной вены в междольковые вены печени; затем МЦ активно перфорируют стенку междольковых вен; внедряются в прилежащие междольковые желчные кана-лы и с током желчи мигрируют в желчные пути хозяина.
Исходя из этого, целью работы было изучение развития МЦ O. felineus в разных средах in vitro и на морских свинках при разных методах введения in vivo.
Материалы и методы МЦ O. felineus (рис. 1, 2) выделяли из мышц язей, выловленных в реке Обь близ п. Приобье Ханты-Мансийского автономного округа. Рыбу взвешивали и определяли возраст по наличию годовых колец на чешуйках. С помо-
39
щью пинцета и ножниц снимали подкожную клетчатку и мышцы на глубине 2±1 мм со всей поверхности рыбы, измельчали ножницами в чашке Петри, полученный материал массой по 50 г помещали в стакан с сетчатым дном реактора АВТЛ-б, заливали 500 мл искусственного желудочного сока. Через 25 мин работы аппарата пробы отстаивали в течение 10 мин. В смотровую кювету из сливного крана проводили отбор осадочной жидкости объемом 1,5-2 мл, после чего отбирали по 100 МЦ для дальнейших опытов.
Рис. 1. Выделенные из мышц язя МЦ Рис. 2. Эксцистированные МЦ Opisthorchis felineus (ув. в 80 раз) Opisthorchis felineus:
Сроки выхода МЦ из соединительнотканной капсулы, их подвижность и выживаемость при разных температурных режимах определяли путем закладки по 100 МЦ в три пробирки с 0,9%-ным раствором №С1, в четвертую пробирку - с раствором Рингера-Локка (хлорида натрия 9 г, гидрокарбоната натрия, хлорида кальция и хлорида калия по 0,2 г, глюкозы 1 г, воды для инъекций до 1 л.). Затем первую пробирку помещали в термостат с температурой 38 °С, вторую оставляли в помещение с температурой 20 °С, третью и четвертую помещали в бытовой холодильник с температурой 3 °С. Учет результатов проводили в первой пробирке каждые 3 чв первые сутки, далее через 12 ч; во второй - каждые 5 сут; в третьей -1 раз в 20 сут; в четвертой пробирке - на 20, 40, 60 и 100-е сутки.
С целью выяснения возможности заражения гематогенным и парентеральным путями и влияния на выживаемость МЦ при прохождении через желудок и при энтеральном заражении морских свинок 3-месячного возраста разделили на 4 группы по 2 головы в каждой. Первую группу свинок заражали описторхами путем выпаивания физраствора, содержащего МЦ. Второй группе свинок вводили МЦ в 12-перстную кишку при полостной операции под общей анестезией. Третью группу свинок заражали путем внутрибрюшинной инъекции МЦ шприцем. Морским свинкам четвертой группы МЦ вводили шприцем в кровяное русло. Доза заражения во всех случаях составляла 100 МЦ на свинку.
Контролем служили морские свинки первой группы, т. к. оральный путь является естественным путем заражения описторхами. Учет результатов проводили через 21 сут (после эвтаназии всех морских свинок введением больших доз препарата для общей анестезии) методом неполного гельминтологического вскрытия (печень, поджелудочная железа).
В первой пробирке, находящейся в термостате, через 3 ч был зафиксирован выход 12 % МЦ, через 6 ч - 29, через 9 ч - 74, через 12 ч - 88 %. При этом 12 % МЦ были инцистированы и нежизнеспособны. Через 24 ч из эксцистированных МЦ жизнеспособными были 40 %, еще через 24 ч все МЦ были нежизнеспособными.
Во второй пробирке через сут наблюдали выход 15 % МЦ, через 10 сут -70 %, 10 % из которых были нежизнеспособными и 8 % - инцистированы и
1 - мертвые МЦ; 2 - живые МЦ; 3 -СТ оболочка (ув. в 30 раз)
Результаты и обсуждение
нежизнеспособны. Через 15 сут наблюдали выход оставшихся МЦ: 60 % из них были нежизнеспособными. Через 20 сут наблюдения все МЦ были нежизнеспособными .
В третьей пробирке через 20 сут наблюдения отмечали выход 90 % МЦ, из которых 30 % были нежизнеспособны, 5 % - инцистированы и нежизнеспособны. Через 40 сут живых МЦ не наблюдали.
В четвертой пробирке через 20 и 40 сут эксцистированных МЦ не наблюдали, при этом 5 % МЦ были не жизнеспособны. Через 60 сут эксцистированных МЦ было 5 %, из них 1 экз. был нежизнеспособен, инцистирован-ных нежизнеспособных было 6 %. Через 100 сут эксцистированных МЦ было 9 %, инцистированных нежизнеспособных - 9, эксцистированных нежизнеспособных - 36, инцистированных живых - 54 %.
В опыте in vivo на морских свинках были получены следующие результаты:
В первой группе морских свинок в желчных ходах печени обнаружено 32 и 34 мариты O. felineus, что свидетельствует о 33%-ной приживаемости, в поджелудочной железе марит O. felineus не обнаружено.
Во второй группе морских свинок в желчных ходах печени обнаружено 56 и 58 марит O. felineus, что свидетельствует о 57%-ной приживаемости, в поджелудочной железе марит O. felineus также не обнаружено.
В третьей и четвертой группах марит O. felineus в печени и поджелудочной железе не обнаружено.
Таким образом, можно сделать следующие выводы:
- при температуре 38 °С выход МЦ из оболочки наступал через 1-12 ч, а продолжительность жизни эксцистированных МЦ составила 12-48 ч;
- при комнатной температуре выход МЦ из оболочки наступал на 1-15 сут, а продолжительность жизни эксцистированных МЦ в среднем составила 10 сут;
- при температуре 3 °С выход МЦ из оболочки наступал в течение первых 20 сут, а продолжительность жизни эксцистированных МЦ в среднем составила 20 сут;
- в растворе Рингера-Локка при температуре 3 °С выход МЦ наступал только к 60-м суткам и составил всего 5 %.
Установлено, что МЦ, помешенные в физраствор, могут разрывать соединительнотканную оболочку (рис. 3). Температура физраствора влияет на сроки выхода и выживаемость МЦ: чем выше температура, тем быстрее происходит выход МЦ и снижается продолжительность жизни. В растворе Рингера -Локка при температуре 3 °С выход МЦ замедляется и продолжительность жизни МЦ увеличивается до нескольких месяцев. Это можно объяснить наличием в растворе, кроме хлорида натрия, еще и гидрокарбоната натрия, хлорида кальция и хлорида калия, глюкозы, что обеспечивает питание для МЦ. В физрастворе из-за дефицита питательных веществ наблюдали так называемую межгельминтную адгезию (рис. 4), тогда как в растворе Ринге-ра-Локка этого явления не отмечали.
В опыте in vivo приживаемость МЦ отмечали в первой (контрольной) и второй группах, причем при введении МЦ энтерально приживаемость была на 24 % выше, чем в контрольной группе. Это можно объяснить негативным влиянием кислой среды желудка на жизнеспособность МЦ, а также анатомической близостью общего желчного протока к верхнему отделу кишечника. Все обнаруженные описторхи локализовались в крупных желчных протоках печени. При введении МЦ в брюшную полость и кровяное русло заражения морских свинок не наступало, что свидетельствует о энтеро-гепатобилиарной миграции эксцистированных МЦ в организме морских свинок. Вместе с тем, данные этого опыта не могут быть экстраполированы на других теплокровных животных в связи с разным строением пищеварительной системы и требуют дальнейшего изучения.
Рис. 3. Разрыв соединительнотканной Рис. 4. Межгельминтная адгезия не ин-
оболочки головным концом МЦ Opis- вазионных личинок Opisthorchis felineus
thorchis felineus in vitro (ув. в 250 раз) in vitro (ув. в 150 раз)
Литература
1. Акбаев М.Ш., Василевич Ф.И., Акбаев P.M. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. - М.: КолосС, 2008. - 778 с.
2. Борзунов В.М., Веревщиков В.К., Донцов Г.И. и др. Протозойные инвазии и гельминтозы человека. - Екатеринбург: Уральская государственная медицинская академия, 2004. -175 с.
3. Бронштейн А.М., Лучшее В.И.Трематодозы печени: описторхоз и кло-норхоз // Русский медицинский журнал. - 1998. - Т. 6, № 3. - С. 140-148.
4. Беэр С.А. Биология возбудителя описторхоза. - М., 2005. - 336 с.
5. Коваленко Ф.П., Черникова Е.А., Михеев В.Ю., Шатаверян Г.А. Экспериментальное обоснование новой концепции становления инвазии Opisthorchis felineus у окончательного хозяина // РАН Паразитология. - 2005. - Т. 39.
- С. 257-260.
6. Скрябин К.И. Трематоды животных и человека. - 1950. - Т. IV. - C. 95.
Development of metacercaria of Opisthorchis felineus in different environments in vitro and in guinea pigs at different methods of introduction in vivo
S.K. Shibitov
Metacercaria (MC) of Opisthorchis felineus in isotonic solution NaCl and Ringer-lokk solution are capable to break the membrane by the head end. MC survival of O. felineus in bilious channels of liver of guinea pigs at per os infection has made 33 %, in the top department of thin intestines - 57 %. The infection did not occur at intra-abdominal injection and introduction of MC in bloodstream.
Keywords: metacercaria, Opisthorchis felineus, porpoises, experimental infection, survival.
