CC BY
104
УДК615.214.31
Н.Г. Николаева1, Л.Д. Дымшеева2
разработка средства, обладающего ноотроПной Активностью
1Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН (Улан-Удэ) 2Бурятский государственный университет (Улан-Удэ)
Разработано комплексное средство растительного происхождения, обладающее ноотропной активностью.
Ключевые слова: растительное ноотропное средство
woRKiNG ouT NooTRopic AcTivE DRuG
I.G. Nikolayeva1, L.D. Dimsheyeva2
Institute of general and experimental biology, Ulan-Ude 2Buryat state university, Ulan-Ude
The article presents the description of worked out complex herbal drug with nootropic activity.
Key words: herbal nootropic drug
Ноотропные средства составляют особую группу веществ, специфический эффект которых определяется способностью их активировать высшую интегративную деятельность мозга, повышать внимание и улучшать процессы памяти. Многие ноотропные средства применяют не только с целью непосредственного воздействия на мнестические функции, а также при снижении общего уровня жизнедеятельности человека, возникающего при многих состояниях, заболеваниях и экстремальных ситуациях: при гипоксии, ишемии, травмах мозга, интоксикациях и др. В практике народной медицины с большим успехом применяются многокомпонентные растительные средства, включающие в среднем от 3 до 5 ингредиентов. Считается, что их высокая фармакотерапевтическая эффективность обусловлена гармоничным сочетанием содержащихся биологически активных веществ в исходных видах растительного сырья. Вместе с этим известно, что лекарственные растения и препараты из них обладают меньшей токсичностью.
Нами разработано комплексное средство растительного происхождения, обладающее ноо-тропной активностью. Компоненты сбора содержат комплекс биологически активных веществ: флавоноиды (гиперозид, кверцетин, кемпферол, изокверцитрин, байкалин, апигенин, лютеолин и др.), дубильные вещества, полисахариды, тритер-пеноиды, органические кислоты, витамин С и др., обеспечивающие широкий диапазон фармакологического воздействия.
При исследовании фармакологической активности в качестве препарата сравнения использовали препарат Пирацетам, который относится к средствам, обладающим ноотропным действием. Данное средство является синтетическим препаратом [6].
Цель настоящей работы: разработка технологии получения средства в виде жидкого экстракта и исследование его ноотропных свойств.
Исследуемое средство включает высушенную измельченную растительную смесь (трава сушеницы топяной, корни шлемника байкальского, побеги пятилистника кустарникового, корневище кровохлебки аптечной, корни пиона уклоняющего, плоды шиповника, трава горца птичьего и др.). Полученный состав характеризуется как средство, обладающее выраженной ноотропной активностью.
При разработке оптимальной технологии получения жидкого экстракта исследовано влияние различных технологических факторов на выход экстрактивных веществ и суммы флавоноидов в пересчете на байкалин из сбора.
Для подбора концентрации экстрагента изучены процессы экстрагирования суммарного сбора 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 и 96%-ми растворами этилового спирта.
Определение выхода экстрактивных веществ во всех указанных экспериментах проводили по однотипной методике, приведенной в ГФ XI (1987 г.). Определение суммы флавоноидов проводили по разработанной нами методике [5].
Установлено, что максимальный выход экстрактивных веществ получен при экстракции сырья 30 — 50 % раствором этанола (оптимальная 40 %). Результаты исследований приведены в таблице 1.
Подобрано оптимальное соотношение сырья и экстрагента, которое соответствует 1 : 10. Дальнейшее увеличение соотношения нецелесообразно ввиду незначительного повышения выхода действующих веществ, а также в связи с увеличением расхода экстрагента. Результаты представлены в таблице 2.
Наиболее оптимальным измельчением растительной композиции является степень измельчения от 1—3 мм.
Исследовано влияние способа экстрагирования на выход суммы флавоноидов и экстрактивных веществ, изучена возможность получения жидкого экстракта методами мацерации, дробной мацера-
Таблица 1
Зависимость выхода суммы экстрактивных веществ от концентрации экстрагента
№ Концентрация экстрагента (%) Выход суммы экстрактивных веществ по предлагаемой заявке (%) Выход суммы флавоноидов по предлагаемой заявке (%)
1 10 15,00 0,60
2 20 15,90 0,65
3 30 20,15 0,68
4 40 22,55 0,78
5 50 22,56 0,74
6 60 21,25 0,80
7 70 21,00 0,67
8 96 18,72 0,64
Таблица 2
Выход суммы флавоноидов и экстрактивных веществ в зависимости от соотношения «сырье : экстрагент»
Соотношение «сырье : экстрагент» Выход суммы флавоноидов в пересчете на байкалин (%) Выход суммы экстрактивных веществ (%)
1:5 0,78 19,67
1:8 0,83 20,11
1:10 0,89 22,55
1:12 0,90 22,58
1:15 0,88 22,60
Таблица 3
Влияние степени измельчения компонентов лекарственного средства на выход суммы флавоноидов и
экстрактивных веществ
Степень измельчения фракций сбора Сумма флавоноидов в пересчете на байкалин (%) Экстрактивные вещества (%)
0,5-1 мм 1,020 37,06
1-3 мм 1,025 37,03
3-6 мм 0,599 35,45
6-10 мм 0,468 35,09
Таблица 4
Влияние способа получения эликсира на выход суммы флавоноидов и экстрактивных веществ
Показатель Способ экстрагирования
Мацерация Ремацерация (дробная мацерация) Перколяция
Выход суммы флавоноидов (%) 0,78 0,87 0,98
Выход экстрактивных веществ (%) 20,31 20,89 22,55
ции и перколяции. Результаты исследований представлены в таблице 4.
Наиболее рациональный метод получения — метод перколяции.
В результате проведенных экспериментов получен жидкий экстракт, представляющий собой жидкость темно-коричневого цвета, с приятным запахом и вяжущим вкусом. Содержание суммы флавоноидов от 0,7 — 0,9 %.
исследование ноотропных свойств ноотропного средства
Согласно экспериментальнофармакологической характеристике ноотропно-
го действия «эталонного» ноотропа пирацетама, его особенностью является улучшение процессов обучения и памяти у животных как в норме, так и при патологии [7, 8, 9]. В соответствии с этим, мы изучали влияние исследуемого экстракта на показатели обучаемости и памяти как у интактных животных, так и при экспериментальных нарушениях когнитивных функций.
Влияние ноотропного средства на выработку условного рефлекса с положительным подкреплением в Т-образном лабиринте у интактных крыс
Модели обучения животных в лабиринтах являются наиболее адекватными для изучения процессов памяти лабораторных крыс [9], так как
создаваемые в этих моделях условия соответствуют условиям естественной среды обитания грызунов. Хорошо развитая пространственная память крыс позволяет исследовать их поведение в лабиринтах различной степени сложности. Данная модель обучения крыс в Т-образном лабиринте с пищевым подкреплением является одной из распространенных моделей лабиринтного обучения [2, 4].
Крыс, подвергшихся 48-часовой пищевой депривации, помещали в стартовый отсек Т-образного лабиринта, в одном из рукавов которого помещали кормушку с пищей. Через 30 с после посадки открывали дверцу стартового отсека. Щелчок открывания дверцы служил условным раздражителем. В 1 день животных помещали на 1 час в лабиринт для угашения ориентировочной реакции. В последующие 4 дня проводили обучение, причем каждое животное помещали в лабиринт 5 раз подряд, в каждый день обучения регистрировали время побежки животного от стартового отсека до кормушки, число правильных и неправильных по-бежек. Критерием выработки рефлекса являлись 8 правильных побежек из 10 предъявляемых. В качестве пищевого подкрепления использовали семена подсолнуха. В опытах фиксировали следующие показатели: латентный период (время от момента посадки до выхода из стартовой камеры); время реакции (время между выходом из стартовой камеры и взятием пищи); число выполненных реакций (число случаев, когда животное находило подкрепление в течение 3 минут тестирования);
число ошибок (число заходов в противоположный требуемому отсек).
Результаты исследований показали, что при обучении в Т-образном лабиринте белых крыс, получавших экстракт «Полиноофит», в объемах 0,1 мл/100 г; 0,3 мл/100 г и 0,5 мл/100 г массы, на 10-й день обучения у них сокращается время достижения от старта до кормушки на 16, 33 и 56 % соответственно по сравнению с данными у животных, получавших дистиллированную воду (рис. 1). Кроме того, при курсовом введении исследуемого экстракта в тех же объемах на 4-й день обучения пищедобыватель-ный навык выработался у 30, 50 и 50 % животных соответственно, а в контрольной группе процент обучившихся животных составил 20 %.
На 10-й день в контрольной группе обучилась половина животных, а у животных, получавших ноотропное средство в объемах 0,1, 0,3 и 0,5 мл/100 г массы количество обучившихся животных составило 50, 80 и 100 % соответственно.
Введение пирацетама вызывало уменьшение времени выполнения реакции на 37 % по сравнению с таковым у животных контрольной группы, выработку рефлекса на 4-й день у 40 % крыс, на 10-й день — у всех животных в группе.
При воспроизведении рефлекса после недельного перерыва сохранность памятного следа в группе животных, получавших экстракт в объеме
0,5 мл/100 г массы, наблюдалась у всех животных, во всех остальных группах этот показатель составил 50 %.
реакции, с
В Контроль
□ "Полиноофит", 0,5 мл/100 г
обучившихся животных на 4-й день эксперимента,%
обучившихся животных на 10 день,%
I "Полиноофит", 0,1 мл/100 г I Пирацетам, 200 мг/кг
животных с сохраненным рефлексом через 7 дней, %
□ "Полиноофит", 0,3 мл/100 г
Рис. 1. Влияние ноотропного средства на выработку у интактных крыс условного рефлекса с положительным подкреплением в Т-образном лабиринте. Примечание: * - значения достоверны по сравнению с контролем при Р < 0,05.
Таким образом, данный экстракт во всех исследуемых объемах оказывает положительное воздействие на процессы обучения и памяти у интактных крыс. При этом наиболее выраженный эффект, сопоставимый с эффектом пирацетама, отмечался при использовании ноотропного средства в объеме 0,5 мл/100 г массы.
Влияние ноотропного средства на процессы обучения и памяти у белых крыс при воздействии факторов, вызывающих амнезию
Влияние ноотропного средства на нарушения когнитивных функций у белых крыс изучали по сохранности условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ) в условиях моделирования разных форм амнезии: после воздействия максимального электросудорожного шока (МЭШ) и нормобарической гипоксии с гиперкапнией.
УРПИ является базисной моделью для оценки влияния веществ на формирование и воспроизведение памятного следа в норме и в условиях его нарушения (амнезии) [2, 9]. Обучение животных проводили в экспериментальной камере, состоящей из двух отсеков: темного и освещенного, соединенных дверцей. В начале тестирования животных помещали в светлый отсек. Так как крысам присущ норковый рефлекс, они быстро переходили в темный отсек, где получали электрокожное раздражение переменным током (20 — 30 мА, 1 с, 50 Гц) через электродный пол. Животные должны были «обучиться» не заходить в темный, «опасный» отсек, тем самым пассивно избегая наказания. Тестирование на воспроизведение рефлекса проводили через различные интервалы времени: 1 час, 24 часа, 7 суток. Для оценки степени обучения регистрировали латентное время первого захода в темный «опасный» отсек и время пребывания в темном отсеке за фиксированный интервал времени 200 с. УРПИ считался сохранившимся, если
время с момента помещения крысы в установку до перехода ее в темный отсек (латентный период) составляло не менее 120 с [1].
Таким образом, нами разработана оптимальная технология получения жидкого экстракта и установлено, что полученное средство обладает ноотропным эффектом.
ЛИТЕРАТУРА
1. Воронина Т.А. Экспериментальная психофармакология ноотропов / / Т.А. Воронина // Фармакология ноотропов. — М., 1989 —С.8-19.
2. Воронина Т.А. Экспериментальное изучение препаратов с ноотропным типом действия / Т.А. Воронина, Р.У. Островская // Ведомости Фармакологического комитета. — 1998. — № 2.
- С. 25-31.
3. Государственная фармакопея СССР: Вып. 1. Общие методы анализа. — 11-е изд., доп. — М., 1987. — 336 с.
4. Ковалев Г.В. Ноотропные средства / Г.В. Ковалев. — Волгоград, 1990. — 368 с.
5. Николаева И.Г. Количественное определение суммы флавоноидов в ноотропном сборе / И.Г. Николаева, Л.Д. Дымшеева // Бюллетень ВСНЦ СО РАН. — 2009. — № 3 (67). — С. 353 — 354.
6. Николаева Н.Б. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России / Н.Б. Николаева, Б.Р. Альперович, В.Н. Созинова. — М., 1996. — С. 529 — 530.
7. Giurgea C. Clinical significance of nootropil / C. Giurgea // Symposium UCB. — Belgium, 1976. — P. 1 — 10.
8. Scondia V. Nootropil / V. Scondia // Symposium UCB. — Belgium, 1977. — P. 5 — 20.
9. Scondia V. Nootropic drugs / V. Scondia // 21 Ann. Chechoslovak Psychopharmacological Meeting.
— Iesenik Spa, 1979. — P. 40 — 54.
Сведения об авторах
Николаева И.Г. - лаборатория экспериментальной фармакологии Института общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ (670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, д. 6.; тел.: 8 (3012) 43-34-63
Дымшеева Лариса Доржиевна - старший преподаватель медицинского факультета Бурятского государственного университета, к.м.н. (670000, г. Улан-Удэ, ул. Смолина, 24а; тел.: 8 (3012) 21-15-80, факс: 8 (3012) 21-05-88; e-mail: univer@ bsu.ru
