CC BY
28
о ° BY This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License ^ https://creativecommons.Org/licenses/by/4.0/
RESEARCH ARTICLE | НАУЧНАЯ СТАТЬЯ " ©Blinova O.L., Gileva A.A., Hlebnikov A.V., Belonogova V.D., Turyshev A.Y., 2021
45 http://dx.doi.org/10.26787/nydha-2686-6838-2021-23-6-157-166
к ЩГ Y / Ч Принята 20.06.2021 | Accepted 20.06.2021
УДК 615.322
DEVELOPMENT OF A METHOD FOR QUANTITATIVE DETERMINATION OF THE AMOUNT OF FLAVONOIDS IN TRIPLEUROSPERMUM INODORUM'S FLOWERS
Blinova O.L., Gileva A.A., Hlebnikov A.V., Belonogova V.D., Turyshev A.Y.
Perm State Pharmaceutical Academy, Perm, Russian Federation
РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В ТРЕХРЕБЕРНИКЕ НЕПАХУЧЕМ ЦВЕТКАХ
Блинова О.Л., Гилева А.А., Хлебников А.В., Белоногова В.Д., Турышев А.Ю.
ФГБОУВО «Пермская государственная фармацевтическая академия» МЗРФ, г. Пермь, Российская Федерация
Abstract. Chamomilla recutita is used in scientific medicine. Tripleurospermum inodorum (L.) Sch. Bip. is widely spread among possible impurities of Chamomilla recutita (L.) Rauschert. This plant is perspective for establishment into scientific medicine but it can't change Chamomilla recutita (L.) Rauschert.
Purpose of research: development of a method for the quantitative determination of the amount of flavonoids in terms of rutin in Tripleurospermum inodorum's flowers using differential spectrophotometry. Materials and methods. The samples prepared in different parts of Russia were used as objects of research. (2017 -2020). Spectral studies were carried out in the wavelength range of 350-430 nm with a step of 1 nm using a spectrophotometer SF-2000.
Results. To determine the analytical wavelength, the UV spectra of alcohol extraction of Tripleurospermum inodorum's flowers were studied. Maximum of absorption was noticed at wavelength 370 nm. The differential spectrum of the same extraction with an aluminum chloride solution of 2% in 96% alcohol has a maximum at a length of 410±2 nm, which coincides with the maximum of the Standard Sample (SS) of rutin. The largest number of flavonoids is extracted by 70% alcohol. The maximum optical density and the highest output of the number of
Аннотация. В научной медицине применяется Chamomilla recutita (L.) Rauschert., семейства Астровых - Asteraceae. Из возможных примесей к ромашке аптечной наиболее широко распространен трехреберник непахучий Tripleurospermum inodorum (L.) Sch. Bip. Растение является перспективным для введения в научную медицину, но не заменяющим ромашку аптечную.
Цель исследования: разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в трехребернике непахучем цветках с использованием дифференциальной спектрофотометрии.
Материалы и методы. Объектами исследования служили образцы, заготовленные в разных регионах России (2017 - 2020 гг.). Спектральные исследования проводили в диапазоне длин волн 350-430 нм с шагом 1 нм с помощью спектрофотометра СФ-2000. Результаты. Для определения аналитической длины волны изучали УФ-спектры спиртового извлечения трехреберника непахучего цветков. Максимум поглощения наблюдали при длине волны 370 нм. Дифференциальный спектр того же извлечения с алюминия хлорида раствором 2% в спирте 96% имеет максимум при длине 410±2 нм, который
flavonoids from the raw material is observed at a degree of grinding of 2 mm with a single extraction for 60 minutes. In the conditions of complexation, the optimal ratio of the volume of the test solution and aluminum chloride with a solution of 2% in 96% alcohol is the ratio of 1:1. The stability of the complex with an aluminum chloride solution of 2% in 96% alcohol is observed in 40 minutes after the start of the reaction and retains it for 30 minutes. Findings. The method is developed and the parameters of the quantitative determination of the amount of flavonoids in Tripleurospermum inodorum flores are determined in terms of rutin using differential spectrophotometry.
Keywords: Tripleurospermum inodorum, medicinal plant raw materials, flowers, flavonoids, spectrophotometry.
REFERENCES
[1] Atlas of areas and resources of medicinal plants USSR. - M: all-USSR SRU of medical plants 1980. -^292-293.
[2] Afanasyev K. S. Flora of the USSR/ K. S. Afanasyev, V. P. Bochantsev, I. T. Vasilchenko. - M.: Publishing House of the Academy of Sciences, 1961. vol. 26. -pp. 147-149.
[3] Velihanova Z. R. the Content of biologically active substances in the flowers of treherbert perforatum/ Z. R. Velikhanova, A. I. Marakhova, A. A. Sorokina // Pharmacy, 2017; vol. 66 (8). - p. 9-12.
[4] State Pharmacopoeia of the Russian Federation XIV publishing house CFA 1.2.1.1.0003.15. Spectrophotometry in the ultraviolet and visible spectrum. [Electronic edition] Access mode: http://resource.rucml.ru/feml/pharmacopia/14_1 /HTML/752/index.html#zoom=z.
[5] State Pharmacopoeia of the Russian Federation XIV publishing house CFA1.1.0013.15. Spectrophotometry in the ultraviolet and visible spectrum. [Electronic edition] Access mode: http://resource.rucml.ru/feml/pharmacopia/14_1 /HTML/289/index.html#zoom=z.
[6] State Pharmacopoeia of the Russian Federation XIV publishing house FA2.5.0037.15. Chamomillae recutitae flores . Spectrophotometry in the ultraviolet and visible spectrum. [Electronic edition] Access mode: http://resource.rucml.ru/feml/pharmacopia /14_4/HTML/1211/index.html
[7] Plants for us. Reference edition edited by G. P. Yakovlev and K. F. Blinova. - Saint-Petersburg: educational book 1996. - p. 167-171._
совпадает с максимумом Стандартного образца (СО) рутина. Наибольшее количество флавоноидов экстрагируется 70% спиртом. Максимальная оптическая плотность и наибольший выход суммы флавоноидов из сырья наблюдается при степени измельченности 2 мм при однократной экстракции в течение 60 минут. В условиях комплексообразования оптимальным соотношением объема исследуемого раствора и алюминия хлорида раствором 2% в спирте 96% является соотношение 1:1. Стабильность комплекса с алюминия хлорида раствором 2% в спирте 96% наблюдается через 40 минут после начала реакции и сохраняет ее в течение 30 минут.
Выводы. Разработана методика и определены параметры количественного определения суммы флавоноидов в Tripleurospermum inodorum flores в пересчете на рутин с использованием дифференциальной спектрофотометрии.
Ключевые слова: Tripleurospermum inodorum (L.) Sch. Bip., лекарственное растительное сырье, цветки, флавоноиды, спектрофотометрия.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИМ СПИСОК
[1] Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР.-М.: Всесоюзный НИИ лекарственных растений, 1980. - с.292-293.
[2] Афанасьев, К.С. Флора СССР / К.С.Афанасьев, В.П. Бочанцев, И.Т. Васильченко. - М.: Издательство академии наук, 1961. т.26. - с. 147149.
[3] Велиханова З.Р. Содержание биологически активных веществ в цветках трехреберника продырявленного / З.Р. Велиханова, А.И. Марахова, А.А. Сорокина // Фармация, 2017; т. 66 (8). - С. 9 - 12.
[4] Государственная фармакопея Российской Федерации XIV изд. ОФС.1.2.1.1.0003.15. Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях. [Электронное издание] Режим доступа:
http://resource. rucml. ru/feml/pharmacopia/14_1 /HTML/752/index.html#zoom=z.
[5] Государственная фармакопея Российской Федерации XIV изд. ОФС.1.1.0013.15. Статистическая обработка результатов химического эксперимента [Электронный ресурс]. Режим доступа:
http://resource. rucml. ru/feml/pharmacopia/14_1 /HTML/289/index.html#zoom=z.
[6] Государственная фармакопея Российской Федерации XIV изд. ФС.2.5.0037.15. Ромашки аптечной цветки Chamomillae recutitae flores [Электронное издание] Режим доступа: http://resource. rucml. ru/feml/pharmacopia/14_4 /HTML/1211/index.html
[8] Plant resources of the USSR. Flowering plants, their chemical composition, use. Volume 7-The Asteraceae family. - St. Petersburg: Nauka, 1993. - pp. 145-200
[7] Растения для нас. Справочное издание. Под ред. Г.П. Яковлева и К.Ф. Блиновой. - Санкт-Петербург: Учебная книга, 1996. - с. 167-171.
[8] Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их химический состав, использование. Том 7 - семейство Asteraceae. - Санкт-Петербург: Наука, 1993. - с. 145-200._
Author Contributions. Blinova O.L. - collection and processing of materials, selection of literature, concept and design of the study, text writing, statistical data processing; A.A. Gileva - processing of materials, selection of literature, concept and design of the study, text writing, statistical data processing; Khlebnikov A.V. - collection of materials; Belonogova V.D. - text editing, Turyshev A.Yu. - text editing.
Conflict of Interest Statement. The authors declare that they have no conflicts of interest. Blinova O.L. - SPIN ID: 3450-6951; ORCID ID: 0000-0003-1645-9169
Research interests, number of main publications: pharmacognostic study and standardization of medicinal plant materials with closely related species, 27 publications were published, 1 of them in SCOPUS, 6 in VAK and 21 in conference proceedings.
Gileva A.A. - SPIN ID: 3602-7190; ORCID ID: 0000-0002-0038-6236
Research interests, number of main publications: pharmacognostic study and standardization of medicinal plant materials, 30 publications were published, 2 of them in SCOPUS, 10 in VAK and 18 in conference proceedings.
Khlebnikov A.V. - SPIN ID: 3381-9439; ORCID ID: 0000-0003-2356-4442
Research interests, number of main publications: pharmacognostic study and standardization of medicinal plant raw materials, medicinal resource science, more than 30 publications have been published.
Belonogova V.D. - SPIN ID: 7795-5610; ORCID ID: 0000-0001-8414-4367
Research interests, number of main publications: pharmacognostic study and standardization of medicinal plant raw materials, medicinal resource science, more than 100 publications were published, 1 of them in SCOPUS, 20 in VAK and 65 in conference proceedings.
Turyshev A.Yu. - SPIN ID: 6043-6140; ORCID ID: 0000-0003-3867-5305
Research interests, number of main publications: pharmacognostic study and standardization of medicinal plant raw materials, medicinal resource science, more than 30 publications have been published.
Вклад авторов. Блинова О.Л. - сбор и обработка материалов, подбор литературы, концепция и дизайн исследования, написание текста, статистическая обработка данных; Гилева А.А. - обработка материалов, подбор литературы, концепция и дизайн исследования, написание текста, статистическая обработка данных; Хлебников А.В. - сбор материалов; Белоногова В.Д. - редактирование текста, Турышев А.Ю. - редактирование текста.
Заявление о конфликте интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Блинова О.Л. - SPIN ID: 3450-6951; ORCID ID: 0000-0003-1645-9169
Сфера научных интересов, количество основных публикаций: фармакогностическое изучение и стандартизация лекарственного растительного сырья, имеющего близкородственные виды, опубликованы 27 публикаций из них 1 в СКОПУС, 6 в ВАК и 21 в материалах конференций.
Гилева А.А. - SPIN ID: 3602-7190; ORCID ID: 0000-0002-0038-6236
Сфера научных интересов, количество основных публикаций: фармакогностическое изучение и стандартизация лекарственного растительного сырья, опубликованы 30 публикаций из них 2 в СКОПУС, 10 в ВАК и 18 в материалах конференций.
Хлебников А.В. - SPIN ID: 3381-9439; ORCID ID: 0000-0003-2356-4442
Сфера научных интересов, количество основных публикаций: фармакогностическое изучение и стандартизация лекарственного растительного сырья, лекарственное ресурсоведение, опубликованы более 30 публикаций.
Белоногова В.Д. - SPIN ID: 7795-5610; ORCID ID: 0000-0001-8414-4367
Сфера научных интересов, количество основных публикаций: фармакогностическое изучение и стандартизация лекарственного растительного сырья, лекарственное ресурсоведение, опубликованы более 100 публикаций из них 1 в СКОПУС, 20 в ВАК и 65 в материалах конференций.
Турышев А.Ю. - SPIN ID: 6043-6140; ORCID ID: 0000-0003-3867-5305
Сфера научных интересов, количество основных публикаций: фармакогностическое изучение и стандартизация лекарственного растительного сырья, лекарственное ресурсоведение, опубликованы более 30 публикаций.
For citation: Blinova O.L., Gileva A.A., Hlebnikov A.V., Belonogova V.D., Turyshev A.Y. DEVELOPMENT OF A METHOD FOR QUANTITATIVE DETERMINATION OF THE AMOUNT OF FLAVONOIDS IN TRIPLEUROSPERMUM INODORUM'S FLOWERS // Medical & pharmaceutical journal "Pulse". - 2021. - Vol. 23. -№6. - С. 157-166. doi: 10.26787/nydha-2686-6838-2021-23-6-157-166.
Для цитирования: Блинова О.Л., Гилева А.А., Хлебников А.В., Белоногова В.Д., Турышев А.Ю. РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В ТРЕХРЕБЕРНИКЕ НЕПАХУЧЕМ ЦВЕТКАХ // Медико-фармацевтический журнал "Пульс". - 2021. - Т. 23. - №6. - С. 157-166. doi: 10.26787/nydha-2686-6838-2021-23-6-157-166.
Введение. В научной медицине применяется ромашка аптечная (ромашка ободранная) Chamomilla recutita (L.) Rauschert., семейства Астровых - Asteraceae [6]. Из возможных примесей к ромашке аптечной наиболее широко распространен трехреберник непахучий Tripleurospermum inodorum (L.) Sch. Bip., семейства Астровых - Asteraceae [8]. Трехреберник непахучий встречается в Европейской части России, кроме Арктики, на Кавказе, в Дагестане, Восточном Закавказье; Средней Азии (Арало - Каспийский, Прибалхашский, Сыр - Дарьенский районы), Западной Сибири (Верхне - Тобольский и Иртышский районы), Дальнем Востоке - заносное растение. Обитает по берегам рек и прудов, по канавам, вдоль дорог, в огородах, садах и полях, на лугах, по горным склонам, распространен повсеместно [1].
Трехреберник непахучий содержит эфирное масло - 0,35 - 0,85%, флавоноиды -цинарозид и космосиин, пиретрины - 0,08 - 0,29%, дубильные вещества и органические кислоты [3,8].
Tripleurospermum inodorum (L.) Sch. Bip. используется в народной медицине при заболеваниях дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта, репродуктивной системы, опорно-двигательного аппарата. Обладает антикоагулянтными свойствами, оказывает мягчительное, анальгезирующее,
спазмолитическое действие. Экстракт и эфирное масло проявляют антибактериальную активность. За счет содержащихся в цветках пиретринов проявляет инсектицидную, акарицидную и репеллентную активность [2,7].
Растение является перспективным для введения в научную медицину, но не заменяющим ромашку аптечную.
Цель исследования. Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в трехребернике непахучем цветках с использованием дифференциальной
спектрофотометрии.
Материалы и методы. Объектами исследования служили образцы, собранные в Пермском крае, Свердловской области, окрестностях г. Курган, Удмуртской и Чувашской Республиках в течение 2017 - 2020 гг.
Спектральные исследования проводили в диапазоне длин волн 350-430 нм с шагом 1 нм с помощью спектрофотометра СФ-2000.
Результаты и обсуждение. Для количественного определения суммы флавоноидов в трехребернике непахучем цветках применили спектрофотометрический метод [4], так как он является экспрессным, высокочувствительным и точным (ошибка 2,5-5%).
Спектрофотометрический метод анализа используется для количественного определения многих групп исследуемых соединений, в том числе флавоноидов.
Для определения аналитической длины волны изучали УФ-спектры спиртового извлечения трехреберника непахучего цветков. Максимум поглощения наблюдали при длине волны 370 нм. Дифференциальный спектр того же извлечения с алюминия хлорида раствором 2% в спирте 96% имеет максимум при длине 410±2 нм (рис. 1), который совпадает с максимумом Стандартного образца (СО) рутина (рис. 2).
Рис.1. УФ - спектр извлечения комплекса суммы флавоноидов из трехреберника непахучего цветков с алюминия хлорида раствором 2% в спирте 96%.
Fig.1. UV - spectrum of the extraction of a complex of the sum of flavonoids from Tripleurospermum inodorum flores with aluminum chloride solution of 2% in alcohol 96%.
Рис.2. УФ - спектр комплекса раствора стандартного образца рутина с алюминия хлорида раствором 2% в спирте 96%.
Fig.2. UV - spectrum of a complex of a solution of a standard sample of rutin with aluminum chloride with a solution of 2% in alcohol 96%.
Для выбора оптимального экстрагента использовали воду и спирт 50, 70, и 90%-ной концентрации (табл. 1).
Таблица 1
Содержание суммы флавоноидов в трехребернике непахучем цветках в зависимости от
экстрагента
№ Экстрагент Оптическая плотность, А (среднее значение) Содержание суммы флавоноидов, %
1 Вода 0,2234 2,77±0,03
Концентрация спирта, %
2 50 0,3212 3,82±0,03
3 70 0,3945 4,89±0,04
4 90 0,3908 4,75±0,02
Table 1
The content of the sum of flavonoids in the Tripleurospermum inodorum flores, depending on the
extractant
№ Extractant Optical density, A (average value) Content of the sum of flavonoids, %
I Water 0,2234 2,77±0,03
Alcohol concentration, %
2 50 0,3212 3,82±0,03
3 70 0,3945 4,89±0,04
4 90 0,3908 4,75±0,02
Установлено, что наибольшее количество флавоноидов экстрагируется 70% спиртом, поэтому он был выбран в качестве экстрагента для исследований. Изучено влияние степени измельченности сырья на максимальный выход
флавоноидов из трехреберника непахучего цветков. Максимальная оптическая плотность и наибольший выход суммы флавоноидов из сырья наблюдается при степени измельченности 2 мм (табл. 2).
Таблица 2
Зависимость содержания суммы флавоноидов в трехребернике непахучем цветках от степени
измельченности сырья
№ Степень измельченности, мм Оптическая плотность, А (среднее значение) Содержание суммы флавоноидов, %
I 0,5 0,1785 2,17±0,03
2 I 0,2040 2,48±0,04
3 2 0,4326 5,37±0,04
4 3 0,3533 4,38±0,03
5 5 0,2325 2,83±0,04
Table 2
Dependence of the content of the sum of flavonoids in the Tripleurospermum inodorum flores on the
degree of grinding of the raw material
№ Grinding degree, mm Optical density, A (average value) Content of the sum of flavonoids, %
I 0,5 0,1785 2,17±0,03
2 I 0,2040 2,48±0,04
3 2 0,4326 5,37±0,04
4 3 0,3533 4,38±0,03
5 5 0,2325 2,83±0,04
С целью определения оптимального времени и кратности экстракции было проведено экстрагирование: однократное в течение 30, 45 и
60 минут, двухкратное и трехкратное по 30 минут. Максимальное содержание суммы флавоноидов определено при однократной экстракции в течение 60 минут (табл. 3).
Таблица 3
Зависимость содержания суммы флавоноидов в трехребернике непахучем цветках от режима и
времени экстракции
№ Режим Время Оптическая плотность, А Содержание суммы
экстракции экстракции, мин (среднее значение) флавоноидов, %
30 0,2370 2,94±0,04
l Однократная 45 0,3421 4,21±0,03
60 0,4132 5,13±0,04
2 Двухкратная 30 минут 0,2373 2,94±0,05
3 Трехкратная 30 минут 0,3659 4,54±0,06
Table 3
Dependence of the content of the sum of flavonoids in the Tripleurospermum inodorum flores on the
mode and time of extraction
№ Extraction mode Extraction time, min Optical density, A (average value) Content of the sum of flavonoids, %
l Single entry 30 0,2370 2,94±0,04
45 0,3421 4,21±0,03
60 0,4132 5,13±0,04
2 Double 30 minutes 0,2373 2,94±0,05
3 Threefold 30 minutes 0,3659 4,54±0,06
Для определения полноты протекания реакции и устойчивости комплекса флавоноидов с алюминия хлорида раствором 2% в спирте 96% проведен анализ спиртовых извлечений с различными вариантами соотношений: извлечение - хромогенный реактив.
Оптимальным соотношением объема
исследуемого раствора и алюминия хлорида раствором 2% в спирте 96% является соотношение 1:1, при котором наблюдается максимальная плотность и наибольшее содержание суммы флавоноидов (табл. 4).
Таблица 4
Соотношение исследуемого раствора и алюминия хлорида раствором 2% в спирте 96%
№ Соотношение извлечения и реактива Оптическая плотность, А (среднее значение) Содержание суммы флавоноидов, %
1. l:l 0,4637 5,75±0,02
2. 1:2 0,4557 5,65±0,04
3. 1:3 0,4176 5,18±0,03
Table 4
The ratio of the test solution and aluminum chloride solution 2% in alcohol 96%
№ Recovery to reagent ratio Optical density, A (average value) Content of the sum of flavonoids, %
1. l:l 0,4637 5,75±0,02
2. 1:2 0,4557 5,65±0,04
3. 1:3 0,4176 5,18±0,03
Практическое значение при проведении спектрофотометрического измерения имеет время образования хелатного комплекса флавоноидов с алюминия хлорида раствором 2% в спирте 96%. Для проведения этого анализа измеряли величину оптической плотности
фотометрируемого раствора через каждые 10 минут в течение 2 часов с момента получения комплекса. Установлено, что стабильность комплекса с алюминия хлорида раствором 2% в спирте 96% наблюдается через 40 минут после начала реакции и сохраняет ее в течение 30 минут (рис. 3).
Рис.3. Устойчивость комплекса суммы флавоноидов с алюминия хлорида раствором 2% в спирте 96% во времени.
Fig.3. Stability of the complex of the sum of flavonoids with aluminum chloride solution of 2% in alcohol 96% over time.
Методика количественного определения суммы флавоноидов в трехребернике непахучем цветках в пересчете на рутин
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих через сито 2 мм. Около 0,5 г (точная навеска) измельчённого сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 150 мл, добавляют 50 мл спирта 70%. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане 60 мин, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Горячее извлечение охлаждают, фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу на 50 мл, доводят до метки спиртом 70% (раствор А).
В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мл раствора А, 1 мл алюминия хлорида раствора 2% в спирте 96%, 1 каплю уксусной кислоты 5% и доводят до метки 96% спиртом. Через 40 мин измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм (раствор Б).
Раствор сравнения: в мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мл раствора А, 1 каплю уксусной кислоты 5% и доводят до метки 96% спиртом.
Приготовление СО рутина: около 0,05 г (точная навеска) СО рутина, предварительно высушенного при температуре 130-135 °С в течение 3 ч, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и растворяют при нагревании на водяной бане в 85 мл 96% спирта, охлаждают, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают (раствор А - СО рутина).
1 мл раствора А СО рутина, 1 капля уксусной кислоты 5%, 1 мл алюминия хлорида раствора 2% в спирте 96%, помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят 96% спиртом до метки (раствор Б - СО рутина).
Содержание суммы флавоноидов в трехребернике непахучем цветках в пересчёте на рутин на абсолютно сухое сырьё, в % вычисляют по формуле: A * a0 * 100 * 50
X =_0_
A0 * a * (100 - W) А - оптическая плотность (раствор Б) испытуемого раствора;
Ао - оптическая плотность (раствор Б) СО рутина;
ао - навеска СО рутина в граммах; а - навеска сырья в граммах; W - потеря в массе при высушивании в %.
Для расчета ошибки метода результаты исследования обрабатывали статистически по методикам ГФ XIV [5]. Относительная ошибка метода не должна превышать 3-5%.
Результаты показали, что ошибка анализа находится в пределах ошибки
единичного определения (1,93 %) при доверительной вероятности 95%. Это свидетельствует об отсутствии
систематической ошибки разработанной методики (табл. 5).
Таблица 5
Метрологическая характеристика метода
n / X S2 S P,% t(p,f) ДХ £ 5,%
5 4 4,6466 0,0052 0,0722 95 2,57 0,0896 0,032 1,93
где:
n - количество повторностей / - число степеней свободы (п - 1)
х - среднее арифметическое S2 - дисперсия S - стандартное отклонение P,% - доверительная вероятность t (p,f) - критерий Стьюдента (табличное значение)
Д V
— - ошибка среднего арифметического s - относительная ошибка результата отдельного определения 8 - относительная величина систематической ошибки
Table 5
Metrological characteristics of the method
n / X S2 S P,% t(p,f) AX £ 5,%
5 4 4,6466 0,0052 0,0722 95 2,57 0,0896 0,032 1,93
where:
n - number of replicates / - number of degrees of freedom (n - 1)
x - average
S2 - dispersion
S - standard deviation
P,% - confidence level
t (p,f) - Student's test (tabular value)
— ^ - arithmetic mean error s - relative error in the result of a single definition 8 - relative bias
Выводы. Разработана методика и определены параметры количественного определения суммы флавоноидов в трехребернике непахучем цветках в пересчете на рутин с использованием дифференциальной спектрофотометрии: длина волны - 410 нм, экстрагент - 70% спирт, время
экстракции - 60 минут, кратность экстракции -однократная, измельченность сырья - 2 мм, оптимальное соотношение объема извлечения и алюминия хлорида раствора 2% в спирте 96% -1:1, время образования устойчивого комплекса -40 минут.
Corresponding Author: Blinova Olga Leonidovna, Ph. Din pharmaceutical sciences, docent of the pharmacognosy with a course of botany in Perm State Pharmaceutical Academy, Perm,
Russian Federation
E-mail: oblinova(a)mail.ru
Ответственный за переписку: Блинова Ольга Леонидовна -кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры фармакогнозии с курсом ботаники, ФГБОУ ВО «Пермская государственная фармацевтическая академия», г.Пермь,
Российская Федерация
E-mail: oblinova@mail.ru
