РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В ARTEMISIA SUBVISCOSAE HERBA Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Научная статья УДК 615.322

DOI: 10.18101/2306-1995-2021-1-52-57

РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В ARTEMISIA SUBVISCOSAE HERBA

© Преловская Саяна Зориктоевна

старший преподаватель,

Бурятский государственный университет имени Доржи Банзарова Россия, 670002, г. Улан-Удэ, ул. Октябрьская 36а sayana.tsybicova@gmail.com

© Рандалова Туяна Эрдэмовна

кандидат фармацевтических наук, доцент,

Бурятский государственный университет имени Доржи Банзарова Россия 670002, г. Улан-Удэ, ул. Октябрьская 36а soktoevate@gmail.com

© Раднаева Лариса Доржиевна

доктор химических наук, профессор, заведующая лабораторией химии природных систем, Байкальский институт природопользования Россия, 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6

заведующая кафедрой фармации,

Бурятский государственный университет имени Доржи Банзарова Россия 670002, г. Улан-Удэ, ул. Октябрьская 36а radld@mail.ru

Аннотация. В статье представлены результаты исследования по разработке методики количественного определения суммы флавоноидов в надземной части полыни клейковатой методом УФ-спектрофотометрии. Снят полный спектр спиртового извлечения в комплексе с хлоридом алюминия, максимум поглощения при длине волны 400 нм испытуемого раствора соответствует максимуму поглощения спектра лю-теолин-7-гликозида с хлоридом алюминия. Подобраны оптимальные условия экстракции: тип экстрагента — спирт этиловый 40%-ный, степень измельченности сырья — 1 мм, соотношение сырье — экстрагент — 1:50, температура — кипящая водяная баня, время экстракции 30 мин, двукратно. В качестве комплексообразователя использовали 2 мл 2%-ного раствора хлорида алюминия, комплекс образуется в течение 45 мин. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид в A. subviscosa herba составляет 2,03±0,04%. Относительная ошибка предложенной методики не превышает 5%.

Ключевые слова: Asteraceae, Artemisia L., Artemisia subviscosa, фенольные соединения, флавоноиды

Для цитирования

Преловская С. З., Рандалова Т. Э., Раднаева Л. Д. Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в Artemisia Subviscosae Herba // Вестник Бурятского государственного университета. Медицина и фармация. 2021. № 1. С. 52-57.

Введение. Природные соединения, содержащиеся в растениях, обладают широким спектром фармакологической активности, малой токсичностью или отсутствием таковой, а мягкость воздействия определяет возможность их длительного применения. Богатым источником фенольных и терпеновых соединений являются растения рода Artemisia L., широко применяемые в народной и традиционной медицине разных стран в качестве противовоспалительных, капилляроукрепля-ющих, желчегонных, противоопухолевых, и антиоксидантных средств [1]. Artemisia subviscosa Turcz. ex Bess. — ксерофитный полукустарничек, эндемик, произрастает в степях Баргузинской долины и на северо-западном побережье Байкала. Сложная орография местности, сочетание широтной и высотной поясности, влияние озера Байкал, низкая сельскохозяйственная освоенность горных и предгорных территорий позволяют предположить, что в эндемичных видах растений данного региона можно обнаружить уникальные биологически активные вещества [2]. Известны только данные химического состава эфирных масел этого вида [3-5].

Материалы и методы. Материалом для исследования служили образцы надземной части полыни клейковатой, собранные в 2018 г. в Баргузинском районе Республики Бурятия (окрестности с. Улюн и Ярикта) в фазе цветения. Количественное определение флавоноидов проводили методом УФ-спектрофотометрии на спектрофотометре ПЭ-5400 УФ (Экохим) в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм в пяти повторностях. Снят полный спектр водно-спиртового извлечения A. subviscosae herba в комплексе с 2%-ным раствором хлорида алюминия, максимум поглощения отмечен при 400 нм, что соответствует максимуму поглощения ГСО лютеолин-7-гликозида с хлоридом алюминия (рис. 1).

1

0.8 0.6 0.4 0.2 0

0 100 200 300 400 500 60С

Рисунок 1. Спектр поглощения водно-спиртового извлечения A. subviscosae herba и СО лютеолин-7-гликозида

Таким образом, для разработки методики количественного определения суммы флавоноидов в A. subviscosae herba в качестве стандартного образца выбран лютеолин-7-гликозид, также необходимо определить условия выделения: тип экстрагента, размер частиц сырья, температуру нагревания, соотношение сырье — экстрагент, длительность и количество экстракций, объем раствора хлорида алюминия, необходимого для комплексообразования, концентрация раствора хлорида алюминия, время, необходимое для образования комплекса.

Результаты и обсуждение. В ходе разработки методики экспериментально определены условия, обеспечивающие наибольший выход суммы флавоноидов из надземной части полыни клейковатой: экстрагент — спирт этиловый 40%-ный, степень измельчения сырья (1 мм), соотношение сырье — экстрагент (1:50), температура нагрева — кипящая водяная баня (табл. 1).

Таблица 1

Зависимость выхода суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид из Л. subviscosae herba от условий экстракции

Условия экстракции Сумма флавоноидов в пересчете на лютео-лин-7-гликозид, %

Тип экстрагента

10%-ный этанол 1,25

20%-ный этанол 1,40

30%-ный этанол 1,70

40%-ный этанол 2,10

50%-ный этанол 1,57

60%-ный этанол 1,16

70%-ный этанол 1,10

80%-ный этанол 0,98

90%-ный этанол 0,85

95%-ный этанол 0,72

Степень измельчения сырья, мм

0,5 1,96

1 2,32

2 2,10

3 1,81

4 1,50

Температура, °С

20 1,30

40 1,43

60 1,51

80 1,93

100 2,10

Соотношение сырье — экстрагент

1:25 1,65

1:50 2,03

1:75 1,84

1:100 1,50

1:150 1,15

При определении оптимального времени экстрагирования А. subviscosae herba трехкратно экстрагировали в течение 15-90 мин с шагом 15 мин. После каждой экстракции жидкость отфильтровывали, проводили количественное определение суммы флавоноидов, после чего дважды экстрагировали отжатое

сырье в тех же условиях. Двукратная экстракция в течение 30 мин способствует большему выходу суммы флавоноидов из полыни клейковатой травы (табл. 2).

Таблица 2

Зависимость содержания суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид из А. subviscosae herba от времени экстракции

Время экстракции, мин Сумма флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид, %

Кратность экстракции

1 2 3

15 1,55 0,61 0,07

30 2,00 0,97 0,12

45 1,86 0,79 0,07

60 1,80 0,64 0,07

75 1,65 0,53 0,05

90 1,57 0,50 0,04

Для определения оптимальных параметров комплексообразования использовали раствор хлорида алюминия в различных концентрациях (1-5%) и объемах (1-5 мл), исследовали время, за которое образуется комплекс (15-90 мин). Выявлено, что оптимальной концентрацией хлорида алюминия является 2%-ный раствор объемом 2 мл, комплекс образуется в течение 45-60 мин (табл. 3).

Таблица 3

Зависимость содержания суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид в А. subviscosae herba от концентрации и объема хлорида алюминия, времени комплексообразования

Показатель Сумма флавоноидов в пересчете на лютео-лин-7-гликозид, %

Концентрация раствора А1С1з, %

1 1,89

2 1,98

3 1,85

4 1,85

5 1,84

Объем раствора А1С1з, мл

1 1,92

2 2,00

3 1,84

4 1,76

5 1,70

Время комплексообразования, мин

15 1,90

30 1,92

45 1,95

60 1,93

75 1,87

90 1,83

Полученные параметры легли в основу методики количественного определения суммы флавоноидов полыни клейковатой травы. Метрологические характеристики методики количественного определения представлены в таблице 4.

Таблица 4

Метрологические характеристики результатов количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид

n f Х,% S2 S P, % t (P,f) Дх E, %

5 4 2,03 0,001 0,04 95 2,77 0,04 2,18

Установлено, что содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид в надземной части полыни клейковатой составляет 2,03±0,04%. Относительная ошибка методики не превышает 5%.

Выводы. Таким образом, в результате проведенных исследований нами разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид в полыни клейковатой траве.

Литература

1. Асеева Т. А., Блинова К. Ф., Яковлев Г. П. Лекарственные растения тибетской медицины. Новосибирск: Наука, 1985. 160 с. Текст: непосредственный.

2. Анатомо-диагностические признаки и числовые показатели полыни клейковатой травы / С. З. Цыбикова, С. В. Жигжитжапова, Л. Д. Раднаева, И. Р. Балданова // Здоровье и образование в XXI веке. 2018. № 2. С. 107-111. Текст: непосредственный.

3. Бодоев Н. В., Базарова С. В., Намзалов Б. Б. Химический состав эфирного масла полыни клейковатой Artemisia subviscosa Turcz // Химия растительного сырья. 2002. № 1. С. 81-84. Текст: непосредственный.

4. Жигжитжапова С. В., Рандалова Т. Э., Раднаева Л. Д. Эфирное масло полыни клейковатой Artemisia subviscosa (Turcz. ex Bess.) Krasnob // Бюллетень ВСНЦ СО РАН. 2015. № 2 (102). С. 133-135. Текст: непосредственный.

5. Компонентный состав эфирного масла Artemisia subviscosa Turcz. ex Bess. / С. З. Цыбикова, С. В. Жигжитжапова, Т. Э. Рандалова, Л. Д. Раднаева // Химия растительного сырья. 2019. № 4. С. 263-268. Текст: непосредственный.

Статья поступила в редакцию 09.01.2021; одобрена после рецензирования 25.01.2021; принята к публикации 09.04.2021.

DEVELOPMENT OF A METHOD FOR QUANTITATION

OF THE TOTAL FLAVONOIDS CONTENT IN ARTEMISIA SUBVISCOSAE HERBA

Sayana Z. Prelovskaya Senior Lecturer,

Dorzhi Banzarov Buryat State University

36a Oktyabrskaya St., Ulan-Ude 670002, Russia

sayana.tsybicova@gmail.com

Tuyana E. Randalova

Cand. Sci. (Chemistry), A/Prof.,

Dorzhi Banzarov Buryat State University

36a Oktyabrskaya St., Ulan-Ude 670002, Russia

soktoevate@gmail.com

Larisa D. Radnaeva

Dr. Sci. (Chemistry), Prof.,

Head of Laboratory of Natural Systems Chemistry

Baikal Institute of Nature Management

6 Sakhyanovoy St., Ulan-Ude 670047, Russia

Head of Pharmacy Department,

Dorzhi Banzarov Buryat State University

36a Oktyabrskaya St., Ulan-Ude 670002, Russia

radld@mail.ru

Abstract. The article presents a method for quantitation of the total flavonoids content in the aerial part of Artemisia subviscosa by UV-spectrophotometry. We have collected full spectral data on alcoholic extraction in a complex with aluminum chloride; the absorption maximum at a wavelength of 400 nm of the test solution corresponds to the absorption maximum of the spectrum of luteolin-7-glycoside with aluminum chloride. We have determined the optimal extraction conditions: type of extractant — 40% ethyl alcohol, grinding degree of raw materials — 1 mm, ratio of raw materials to extractant — 1:50, temperature — boiling water bath, extraction time — 30 min, twice. Aluminum chloride was used as a com-plexing agent (2 ml of a 2% solution); the complex was formed within 45 minutes. The total flavonoids content equivalent to luteolin-7-glycoside in A. subviscosa herba is 2.03 ± 0.04%. The relative error of the proposed method does not exceed 5%.

Keywords: Asteraceae, Artemisia L., Artemisia subviscosa, phenolic compounds, flavonoids For citation

Prelovskaya S. Z., Randalova T. E., Radnaeva L. D. Development of a Method for Quantitation of the Total Flavonoids Content in Artemisia Subviscosae Herba. Bulletin of Buryat State University. Medicine and Pharmacy. 2021; 1: 52-57 (In Russ.).

The article was submitted 09.01.2021; approved after reviewing 25.01.2021; accepted for publication 09.04.2021.