CC BY
45
DOI: 10.14258/jcprm.2019034683
УДК 615.322:582.929:547.588: 543.062
РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЕНОЛОКИСЛОТ В НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ ЗИЗИФОРЫ КЛИНОПОДИЕВИДНОЙ (ZIZIPHORA CLINOPODIOIDES LAM.)
© В.Ю. Андреева , Г.И. Калинкина, В.В. Ли
Сибирский государственный медицинский университет, Московский тракт, 2, Томск, 634050 (Россия), e-mail: [email protected]
Цель исследования: разработать и провести валидациоиную оценку методики определения содержания суммы фенолокислот в надземной части Ziziphom clinopodioides Lam.
При использовании эфирномасличного растения в виде водно-спиртовых экстрактов оценку качества лекарственного сырья и его препаратов проводят, как правило, по содержанию сопутствующих эфирному маслу биологически активных веществ. К таковым в надземной части Z. clinopodioides относятся фенольные соединения. Наиболее рациональным для оценки качества предлагаемого лекарственного сырья является сумма фенолокислот, так как ультрафиолетовый спектр экстракта Z. clinopodioides имеет наиболее характерный для фенолокислот максимум поглощения в УФ-области электронного спектра (325-330 нм) и совпадает с максимумом индивидуального известного образца хлорогеновой кислоты.
На основании исследования спектра поглощения водно-спиртового экстракта разработана методика количественного определения суммы фенолокислот в надземной части Ziziphora clinopodioides методом прямой спектрофото-метрии в пересчете на хлорогеновую кислоту. При разработке методики было изучено влияние на выход фенолокислот следующих факторов: природа экстрагента, соотношение сырье : экстрагент, длительность экстракции, степень измель-ченности сырья, кратность экстракции, температура экстракции; установлены их оптимальные значения.
Проведена валидация методики количественного определения суммы фенолокислот в надземной части Ziziphora clinopodioides; на основании полученных данных установлено, что предложенная методика является высокочувствительной, правильной, воспроизводимой и пригодна для использования в аналитической лаборатории.
Ключевые слова: Ziziphora clinopodioides, фенолокислоты, спектрофотометрия, валидация.
Введение
Род Ziziphora L. включает в себя около 30 видов, распространенных в Передней, Средней Азии и в Средиземноморье. На территории Российской Федерации произрастает 6 видов этого рода. Во Флоре Сибири описан только один вид Ziziphora clinopodioides, произрастающий на территории Сибири [1, 2].
Зизифора клиноподиевидная (син.: з. пахучко видная) - Ziziphora clinopodioides Lam. (сем Lamiaceae) -многолетнее травянистое сильно пахучее растение с деревянистым корневищем, несколькими стеблями 840 см высотой, покрытыми короткими волосками. Z. clinopodioides - горный вид, произрастающий на каменистых и скалистых берегах рек, щебнистых склонах холмов и гор Алтая, Кузнецкого Алатау, Горной Шории, Саянах, Средней Азии; занимает обширные территории [2].
Растения рода Ziziphora L. применяются в народной медицине при гипертонической болезни, неврозах, ревмокардитах [3]. Экспериментальные исследования видов зизифоры показали ее эффективность при ишеми-ческой болезни сердца и коронарного атеросклероза, а также в качестве гемостатического, антигипоксического и кардиотонического средств [4-6].
Андреева Валерия Юрьевна - доцент кафедры фармакогнозии с курсами ботаники и экологии, e-mail: [email protected]
Калинкина Галина Ильинична - заведующий кафедрой фармакогнозии с курсами ботаники и экологии, e-mail: [email protected] JIu Валерия Владимировна - студентка
Z. clinopodioides содержит значительное количество эфирного масла, которое имеет своеобразный приятный запах и используется для отдушки мыла, зубных паст. Настой и эфирное масло зизифоры обладают антимикробным, спазмолитическим и желчегонным действием [3, 4].
* Автор, с которым следует вести переписку.
В составе эфирного масла Z. clinopodioides, произрастающей на Алтае, содержится не менее 48 компонентов: преобладает пулегон (45-50%), тимол, ментон, изоментон (23-26%), карвон, ментол и его изомеры [7, 8]. С содержанием пулегона и тимола связывают антибактериальную активность эфирного масла Z. clinopodioides [9, 10]. Кроме того, пулегон проявил выраженный фунгистатический эффект в отношении поверхностных дермато-фитов и может быть рекомендован в качестве противогрибкового средства [11-13]. Также было исследовано влияние отдельных компонентов эфирного масла Z. clinopodioides на сердечно-сосудистую систему и выявлена активность у тимола, карвакрола, линалоола и других компонентов, что подтверждает возможность использования препаратов Z. clinopodioides в качестве кардиотонического средства [14].
Другой важной группой биологически активных веществ Z. clinopodioides являются фенольные соединения. В их составе идентифицированы лютеолин, акацетин, хризин, диосметин и другие, а также фенолокис-лоты кофейная и салициловая [15, 16]. Фенольные соединения надземной части Z. clinopodioides проявляют антиоксидантную, антибактериальную, сосудорасширяющую и противоопухолевую активность [17, 18].
Таким образом, надземная часть Z. clinopodioides, несомненно, представляет интерес для медицинской практики. Одним из разделов внедрения нового лекарственного сырья в медицинскую практику является его химико-фармакологическое изучение, и разработка методик оценки качества (стандартизации) лекарственного сырья данного вида является актуальной.
При использовании эфирномасличного растения в таких лекарственных формах, как водные настои, водно-спиртовые настойки и экстракты, сквозную стандартизацию лекарственного сырья и его препаратов проводят, как правило, по содержанию сопутствующих эфирному маслу биологически активных веществ [19]. К таковым в надземной части Z. clinopodioides относятся фенольные соединения (флавоноиды и фенолокис-лоты). Наиболее рациональным для оценки качества предлагаемого лекарственного сырья, на наш взгляд, является сумма фенолокислот, так как ультрафиолетовый спектр экстракта Z. clinopodioides имеет наиболее характерный для фенолокислот максимум поглощения в УФ-области электронного спектра (325-330 нм) и совпадает с максимумом индивидуального известного образца хлорогеновой кислоты.
Цель данного исследования - разработать и провести валидационную оценку методики определения содержания суммы фенолокислот в надземной части Z. clinopodioides.
Экспериментальная часть
Объектом исследования служили образцы надземной части Ziziphora clinopodioides Lam., сем. Lamiaceae, заготовленные в окрестностях села Камлак Шебалинского района Республики Алтай в 20162017 г. в фазе массового цветения и высушенные воздушно-теневой сушкой до воздушно-сухого состояния. При разработке методики водно-спиртовые извлечения из надземной части Z. clinopodioides получали методом экстракции на водяной бане с изменением параметров процесса.
Электронные спектры поглощения водно-спиртовых извлечений измеряли на спектрофотометре СФ-2000 в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм в диапазоне волн 200-400 нм. В качестве стандартного образца (СО) использовали хлорогеновую кислоту фирмы «Sigma».
Валидационные испытания методики проводили методами математической статистики по следующим показателям: прецизионность (повторяемость), правильность, воспроизводимость (лабораторная и межлабораторная), и линейность [20]. Для статистической обработки результатов использовали пакет прикладных программ «Microsoft Excel 2007».
Обсуждение результатов
При изучении спектральных характеристик извлечений из надземной части 3. клиноподиевидной, полученных различными экстрагентами (водно-спиртовые смеси различной концентрации) наблюдали основной максимум поглощения в области 328±2 нм, характерный для фенолокислот [19]. При этом установлено, что максимум поглощения экстракта из надземной части 3. клиноподиевидной, полученного 70% спиртом этиловым совпадает с максимумом поглощения СО хлорогеновой кислоты (328±2 нм) [20] (рис. 1), что дает возможность использовать данное вещество в качестве стандартного и проводить пересчет суммы фенолокислот на хлорогеновую кислоту. Содержание хлорогеновой кислоты в надземной части Z. clinopodioides было подтверждено методом хроматографии на бумаге в системе растворителей: 2% кислота уксусная (Rf-0.64) и тонкослойной хроматографии (ТСХ) в системе растворителей: н-бутанол - кислота уксусная ледяная -вода(4 : 1 : 2) (Rf-0,5).
Для расчета суммы фенолокислот в надземной части Z. clinopodioides использовали удельный показатель поглощения (Ер/01см) хлорогеновой кислоты при длине волны 328±2 нм, равный 507 [20, 21].
Рис. 1. Электронный спектр извлечения из надземной части 2;г;/)/7ога сИпоройтйез (1) и стандартного образца хлорогеновой кислоты (2)
При разработке методики было изучено влияние на выход фенолокислот следующих факторов: степень измельченности сырья, природа экстрагента, соотношение сырье: экстрагент, длительность кратность и температура экстракции (табл. 1).
Данные, представленные в таблице 1, показывают, что оптимальными условиями для извлечения фенолокислот из надземной части 3. клиноподиевидной являются: степень измельченности сырья - 1 мм, экстрагент - 70% спирт этиловый, соотношение сырья и экстрагента - 1 : 200, температура экстракции - 100 °С. Для наиболее полного извлечения фенолокислот целесообразно проводить двухкратную экстракцию по 20 мин, дальнейшее увеличение времени и кратности экстракции не приводит к существенному повышению содержания фенолокислот в извлечении.
Методика определения фенолокислот. Аналитическую пробу измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями 1 мм. Около 0.5 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл 70% спирта этилового. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 20 мин. После охлаждения до комнатной температуры содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию повторяют еще раз указанным выше способом 35 мл 70% спирта этилового. Извлечения фильтруют через бумажный фильтр в ту же мерную колбу. Объединенные извлечения в мерной колбе доводят до метки 70% спиртом этиловым (раствор А).
Таблица 1. Влияние различных факторов на полноту извлечения фенолокислот из надземной части
2;г;/)/7ога сИпоройШйез
Водно-спиртовые извлечения, % спирта этилового Длительность экстракции, мин Соотношение сырье : экстрагент Кратность экстракции Измель-ченность сырья, мм Температура экстакции, °С Содержание фенолокислот, % на а.с.м. сырья
Вода 40 70 95 20 1 : 200 2 1 100 2.97±0.09 3.28±0.10 4.2Ш.02 2.10±0.06
70 20 1 : 200 1 : 100 1 : 50 2 1 100 4.19±0.08 2.58±0.08 2.43±0.07
70 15 20 30 1 : 200 1 1 100 2.85±0.04 3.94±0.11 3.87±0.09
70 20 1 : 200 1 2 3 1 100 3.94±0.11 4.94±0.08 4.95±0.05
70 20 1 : 200 2 1 3 5 100 4.95±0.05 4.08±0.09 0.86±0.03
70 20 1 : 200 2 1 60 80 100 2.80±0.08 2.90±0.09 4.93±0.04
1 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора до метки 70% спиртом этиловым (раствор Б). Оптическую плотность раствора Б измеряют на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 328±2 нм. В качестве раствора сравнения используют 70% спирт этиловый. Содержание суммы фенолокислот в процентах (X) в пересчете на хлорогеновую кислоту и абсолютно-сухую массу сырья вычисляют по формуле:
^ _ лх^х^хюо ~~ тх507хк2х(100-и0'
где А - оптическая плотность исследуемого раствора; I'/ - объем раствора^; Iобъем аликвоты раствора А; ш - объем раствора Б; т - масса сырья в граммах; 507 - удельный показатель поглощения хлорогеновой кислоты при длине волны 328±2 нм; II - влажность сырья, %.
Валидация методики. Для оценки повторяемости методики получали шесть независимых результатов измерений одним методом, в одной лаборатории, одним лаборантом-исследователем, с использованием одного спектрофотометра, в пределах короткого промежутка времени. Статистическая обработка полученных результатов показала, что они достоверны при доверительной вероятности 95%, вычисленные значения величины относительного стандартного отклонения (Р^Б) - 0.04% и относительного доверительного интервала среднего значения - 0.44% не превышают критериев приемлемости - 5%, что свидетельствует о прецизионности методики в условиях повторяемости (табл. 2).
Воспроизводимость методики определяли в двух различных лабораториях СибГМУ разными лаборантами-исследователями, по 3 испытания образца на 3 разных уровнях концентраций в интервале 80-120% от принятого опорного значения на идентичных образцах сырья (табл. 3).
Статистическое тестирование выбросов проводили с использованием критерия Кохрена, дисперсии и стандартного отклонения для каждого уровня и рассчитывали по ГОСТ Р ИСО [22]. При рассмотрении данных, не обнаружив, какой-либо зависимости, в качестве показателей прецизионности, нами были выбраны средние значения стандартных отклонений. Данные значения стандартных отклонений могут быть применены в диапазоне содержания суммы ФК от 3.68% до 6.49%. Меры прецизионности для данного метода измерений не превышают критериев приемлемости, как для внутрилабораторной прецизионности 3.28%<10%, так и для межлабораторной прецизионности 6.25%<15%, что указывает на хорошую воспроизводимость методики.
Линейность аналитической методики определяли на 5 уровнях концентрации. Образцы готовили путем изменения аликвоты (табл. 4). В ходе определения линейности установлено, что график зависимости имеет линейный характер в области концентрации суммы ФК и описывается уравнением: у=4.792х - 0.092.
Коэффициент корреляции близок к единице - 0.9944, что свидетельствует об удовлетворительной линейной зависимости значения оптической плотности от содержания действующих веществ. График зависимости представлен на рисунке 2.
Правильность методики устанавливали методом добавок на идентичных образцах 2. сИпороёШёез с добавлением известного количества СО хлорогеновой кислоты по 3 испытания образца на 3 уровнях концентраций (табл. 5).
Критерий приемлемости - средний процент восстановления при использовании растворов заданных концентраций, скорректированный на 100%, средняя величина которого должна находиться в пределах 100±5%. В разработанной методике процент восстановления находился в пределах от 97.74% до 101.74%, его средняя величина составила 99.94%.
Таблица 2. Результаты оценки повторяемости методики
№ опыта 1 2 3 4 5 6
Содержание ФК в пересчете на ХГК, % 4.98 4.92 4.94 4.95 4.93 4.94
Метрологические характеристики
Хер Б2 Б Эх & Р (о/о) Ахср е,%
4.94 0.0004 0.02 0.008 0.004 95 2.57 0.04 0.44
Таблица 3. Результаты оценки воспроизводимости методики
Лаборатория № 1
Лаборатория № 2
Уровни
Объем аликвоты раствора А, мл Среднее содержание ФК, %, Л"ср
1
0.75 3.68
2 1.00 4.94
3
1.25
6.26
1
0.75 3.76
2 1.00 4.98
3 1.25 6.49
Метрологические характеристики определения на разных уровнях концентрации
№ лабора- Хер Б2 Б Эх & Р,% 1 (Р, 1)* Ах е,%
тории
1 3.68 0.002 0.10 0.04 0.003 95 2.77 0.12 3.28
1 4.94 0.001 0.02 0.01 0.004 95 2.77 0.03 0.58
1 6.26 0.010 0.09 0.04 0.016 95 2.77 0.12 1.95
2 3.71 0.002 0.12 0.045 0.031 95 2.77 0.11 3.13
2 4.98 0.0001 0.07 0.03 0.022 95 2.77 0.07 1.48
2 6.49 0.0014 0.09 0.04 0.013 95 2.77 0.09 1.43
Метрологические характеристики определения между двумя лабораториями
1 уровень 3.69 0.0003 0.023 0.013 0.006 95 4.3 0.06 1.57
2 уровень 4.96 0.0004 0.030 0.020 0.006 95 4.3 0.07 1.45
3 уровень 6.37 0.012 0.150 0.090 0.020 95 4.3 0.39 6.25
Таблица 4. Результаты оценки линейности методики
Номер уровня Объем аликвоты раствора, А % от принятого опорного значения Содержание ФК, %
Первый 0.50 50 2.41
Второй 0.75 75 3.68
Третий 1.00 100 4.98
Четвертый 1.25 125 6.26
Пятый 1.50 150 7.12
Рис. 2. График линейной зависимости между оптической плотностью и содержанием суммы фенолокислот в надземной части '/^¡рЬога сИпоройШйез
Таблица 5. Результаты определения правильности методики
Уровни (концентрации) 1 1 1 2 2 2 3 3 3
V - объем аликвоты раствора А, мл; 0.75 0.75 0.75 1.00 1.00 1.00 1.25 1.25 1.25
Содержание суммы фенолокислот, г 0.0371 0.0363 0.0372 0.0493 0.0493 0.0484 0.0635 0.0646 0.0651
Добавлено СО хлорогено-вой кислоты, г 0.010 0.010 0.010 0.015 0.015 0.015 0.020 0.020 0.020
Содержание суммы фенолокислот (ожидаемое), г 0.0464 0.0468 0.0476 0.0597 0.0599 0.0582 0.0722 0.0759 0.0734
Сумма фенологислот (полученное), г 0.0464 0.0468 0.0456 0.0597 0.0599 0.0582 0.071 0.0759 0.0724
Отношение, % М полученное* 100% / М ожидаемое 98.51 101.08 100.85 100.67 101.01 99.66 98.23 101.74 97.74
Метрологические характеристики
Хер Б1 Б Эх & Р (О/о) ЦР,1) Ахср е,%
100.29 3.19 1.01 0.41 0.01 95 2.31 0.96 0.95
Заключение
Разработана методика количественного определения суммы фенолокислот в надземной части Ziziphora clinopodioides методом прямой спектрофотометрии в пересчете на хлорогеновую кислоту. Установлены оптимальными условия методики: экстрагент - 70% спирт этиловый, двухкратная эктракция по 20 мин, соотношение сырья и экстрагента - 1 : 200, степень измельченности сырья - 1 мм, температура экстракции - 100 °С.
Проведена валидация методики количественного определения суммы фенолокислот в надземной части Ziziphora clinopodioides', на основании полученных данных установлено, что предложенная методика является высокочувствительной, правильной, воспроизводимой и пригодна для использования в аналитической лаборатории.
Список литературы
1. Плантарпум. Определитель растений онлайн. Род Зизифора - описание таксона. - Электрон, дан. [Электронный ресурс]. URL: http://www.plantarium.ru/ (дата обращения: 22.01.2019).
2. Флора Сибири. Pyrolaceae - Lamiaceae (Labiatae): в 14 томах. Т. 11 / под ред.Л.И. Малышева. Новосибирск, 1997. С. 202-203.
3. Никифоров Ю.В. Алтайские растения-целители. Горно-Алтайск, 1992. 208 с.
4. Zou G.A., Guo D., Zhao H.Q., Aisa H.A. Bioactive Constituents of Ziziphora clinopodioides II Chemistry of Natural Compounds. 2015. Vol. 51, issue 5. Pp. 961-963. DOI: 10.1007/sl0600-015-1462-x.
5. Li Q., Tursun D., Shi C., Heyrulla M., Zhang X., Yang W. Ziziphora clinopodioides flavonoids protect myocardial cell damage from myocardial ischemia-reperfusion injury //Evid Based Complement Alternat Med. 2018. Vol. 2018. Article ID 8495010. 9 p. DOI: 10.1155/2018/8495010.
6. Растительные ресурсы России: дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность: в 4 т. 4 т. / под ред. A.JI. Буданцева. СПб., 2011. С. 286-287.
7. Дембицкий АД., Бергалиев Е.Ш., Калинкина Г.И. Исследование химического состава эфирных масел зизифор, произрастающих в различных экологических условиях// Изв. HAH РК: Сер. хим. 1993. №4. С. 86-91.
8. Королюк Е.А., Кениг В., Ткачев А.В. Состав эфирного масла зизифоры пахучковидной (Ziziphora clinopodioides Lam.) из Алтайского края и республики Алтай // Химия растительного сырья. 2002. № 1. С. 49-52.
9. Калинкина Г.И., Зарубина Л.А., Дмитрук С.Е., Гуськова И.А. Антимикробные свойства эфирного масла зизифоры клиноподиевидной // Материалы науч. конф., посвящ. 75-летию Иркутского мед. ун-та. Иркутск, 1996. С. 110.
10. Aghajani Z., Assadian F., Masoudi Sh. Chemical composition and in vitro antibacterial activities of the oil Ziziphora clinopodioides subsp. Bungeana (Juz.) from Iran // Chemistry of Natural Compounds. 2008. Vol. 44, issue 3. Pp. 387389. DOI: 10.1007/sl0600-008-9073-4.
11. Георгиевский В.П., Комисаренко Н.Ф., Дмитрук С.Е. Биологически активные вещества лекарственных растений. Новосибирск, 1990. 336 с.
12. Mahboubi М., Tabar R.H., Mahdizadeh Е. Chemical composition and antifungal activities of Ziziphora tenuir and Z. clinopodioides essential oils against dermatophytes // Herba Polonica. 2018. Vol. 64, issue 2. Pp. 37^15. DOI: 10.2478/hepo-2018-0011.
13. Gursoy N., Sihoglu-Tepe A., Tepe B. Determination of in vitro antioxidative and antimicrobial properties and total phenolic contents of Ziziphora clinopodioides, Cyclotrichium niveum and Mentha longifolia ssp. typhoides var. ty-phoides// Journal of medicinal food. 2009. Vol. 12, no. 3. Pp. 684-689. DOI: 10.1089/jmf.2008.0102
14. Калинкина Г.П., Березовская Т.П., Сальникова Е.Н., Дмитрук С.Е. Перспективы использования эфирномасличных растений флоры Сибири в медицинской практике // Химия растительного сырья. 2000. №3. С. 5-12.
15. Оганесян Г.Б., Галстян A.M., Мнацаканян В.А. и др. Фенольные и флавоноидные соединения Ziziphora clinopodioides И Химия природных соединений. 1991. №2. С. 286-287. DOI: 10.1007/М00629776.
16. Yang X., Li N, Meng W. et al. Isolation and identification of chemical constituens from Ziziphora clinopodioides Lam. // Shenyang Yaoke Daxue Xuebao. 2008. Vol. 25, no. 6. Pp. 456-458.
17. Tian S., Shi Y, Zhou L. et al. Total polyphenolic (flavonoids) content and antioxidant capacity of different Ziziphora clinopodioides Lam. extract // Pharmacognosy magazine. 2011. Vol. 7, no. 25. Pp. 65-68. DOI: 10.4103/09731296.75904.
18. Senejoux F., Girard C., Kerram P., Aisa H.A., Berthelot A., Bevalot F., Demougeot C. Mechanisms of vasorelaxation induced by Ziziphora clinopodioides Lam. (Lamiaceae) extract in rat thoracic aorta. // J. Ethnopharmacol. 2010. Vol. 132, issue 1. Pp. 268-273. DOI: 10.1016/j.jep.2010.08.028.
19. Государственная фармакопея Российской Федерации: научное издание. 14 изд. М., 2018. Т. 1. С. 276-288. [Электронный ресурс]. URL: http://resource.rucml.ru/feml/pharmacopia/14_l/HTML/index.html (дата обращения: 22.01.2019).
20. Государственная фармакопея Российской Федерации: научное издание. 14 изд. М., 2018. Т. 4. С. 6143. [Электронный ресурс]. URL: http://resource.rucml.ru/feml/pharmacopia/14_l/HTML/index.html (дата обращения: 22.01.2019).
21. Коломиец Н.Э., Калинкина Г.И., Сапронова H.H. Стандартизация листьев крапивы // Фармация. 2011. №6. С. 22-24.
22. ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений. М., 2002. 42 с.
Поступила в редакцию 8 декабря 2018 г. После переработки 20 февраля 2019 г. Принята к публикации 20 февраля 2019 г.
Для цитирования: Андреева В.Ю., Калинкина Г.И., Ли В.В. Разработка и валидация методики количественного определения суммы фенолокислот в надземной части зизифоры клиноподиевидной (Ziziphora clinopodioides Lam.)//Химиярастительного сырья. 2019. №3. С. 161-168. DOI: 10.14258/jcprm.2019034683.
Andreeva V. Y. *, Kalinkina G.I., Li V. V. THE DEVELOPMENT AND VALIDATION OF THE METHOD TO QUANTIFY THE AMOUNT OF PHENOLIC ACIDS IN AERIAL PARTS OF ZIZIPHORA CLINOPODIOIDES LAM.
Samara State Medical University, ul. Chapaevskaya, 89, Samara, 443099 (Russia), e-mail: [email protected]
Development and validation of method for quantitative determination of the amount of phenolic acids in the aerial part of the Ziziphora clinopodioides Lam.
Objective: to develop and conduct a validation assessment of the method for determining the content of the amount of phenolic acids in the Ziziphora clinopodioides.
The method of quantification of phenolic acids equivalent to chlorogenic acid by direct spectrophotometry in aerial parts of the Ziziphora clinopodioides has been developed based on the study of the absorption spectrum of an aqueous-alcoholic extract. The influence of the following factors on the yield of phenolic acids was studied: the nature of the extractant, the ratio of raw material: extractant, the degree of particle fineness, the extraction multiplicity, the extraction temperature; their optimum values were established.
The method of quantitative determination of the amount of phenolic acids in the aerial part of the Ziziphora clinopodioides is validated; it has been established that the proposed method is highly sensitive, correct, reproducible and suitable for use in an analytical laboratory based on the data obtained.
Keywords: Ziziphora clinopodioides, phenolic acids, spectrophotometry, validation.
* Corresponding author.
References
1. Plantarium. Opredelitel' rasteniy onlayn [Plantarium. Identifier of plants online] [Electronic resource], URL: http://www.plantarium.ru/ (in Russ.)
2. Flora Sibiri. Pyrolaceae - Lamiaceae (Labiatae) [Flora of Siberia. Pyrolaceae - Lamiaceae (Labiatae)], vol. 11, Novosibirsk, 1997, pp. 202-203. (in Russ.)
3. Nikiforov Yu. V. Altayskiye rasteniya-tseliteli [Altai healing plants], Gorno-Altaysk, 1992. 208 c. (in Russ.)
4. Zou G.A., Guo D., Zhao H.Q., Aisa H.A. Chemistry of Natural Compounds, 2015, vol. 51, issue 5, pp. 961-963. DOI: 10.1007/sl0600-015-1462-x.
5. Li Q., Tursun D., Shi C., Heyrulla M., Zhang X., Yang W. Evid Based Complement AlternatMed., 2018, vol. 2018, article ID 8495010, 9 p. DOI: 10.1155/2018/8495010.
6. Rastitel'nyye resursy Rossii: dikorastushchiye tsvetkovyye rasteniya, ikh komponentnyy sostav i biologicheskaya ak-tivnost' [Plant resources of Russia: wild flowering plants, their component composition and biological activity], vol. 4, Sankt-Peterburg; Moscow, 2011, pp. 286-287. (in Russ.)
7. Dembitskiy A.D., Bergaliyev Ye.SH., Kalinkina G.I. Izvestiya natsional'noy akademii nauk respubliki kazakhstan. Ser-iya khimiya, 1993, no. 4, pp. 86-91. (in Russ.)
8. Korolyuk Ye.A., Kenig V., Tkachev A. V. Khimiya rastitel'nogo syr'ya, 2002, no. 1, pp. 49-52. (in Russ.)
9. Kalinkina G.I., Zarubina L.A., Dmitruk S.Ye., Gus'kova I.A. Materialy nauchnoy konferentsii, posvyashchennoy 75-letiyu Irkutskogo meditsinskogo universiteta [Materials of the scientific conference dedicated to the 75th anniversary of the Irkutsk Medical University], Irkutsk, 1996, p. 110. (in Russ.)
10. Aghajani Z., Assadian F., Masoudi Sh. Chemistry of Natural Compounds, 2008, vol. 44, issue 3, pp. 387-389. DOI: 10.1007/sl0600-008-9073-4.
11. Georgiyevskiy V.P., Komisarenko N.F., Dmitruk S.Ye. Biologicheski aktivnyye veshchestva lekarstvennykh rasteniy [Biologically active substances of medicinal plants], Novosibirsk, 1990, 336 p. (in Russ.)
12. Mahboubi M., Tabar R.H., Mahdizadeh E. Herba Polonica, 2018, vol. 64, issue 2, pp. 37^15. DOI: 10.2478/hepo-2018-0011.
13. Gursoy N., Sihoglu-Tepe A., Tepe B. Journal of medicinal food, 2009, vol. 12, no. 3, pp. 684-689. DOI: 10.1089/jmf.2008.0102.
14. Kalinkina G.I., Berezovskaya T.P., Sal'nikova Ye.N, Dmitruk S.Ye. Khimiya rastitel'nogo syr'ya, 2000, no. 3, pp. 5-12. (in Russ.)
15. Oganesyan G.B., Galstyan A.M., Mnatsakanyan V.A. i dr. Khimiyaprirodnykh soyedineniy, 1991, no. 2, pp. 286-287. DOI: 10.1007/bf00629776 (in Russ.)
16. Yang X., Li N., Meng W. et al. Shenyang Yaoke DaxueXuebao, 2008, vol. 25, no. 6, pp. 456^158.
17. Tian S., Shi Y., Zhou L. et al. Pharmacognosy magazine, 2011, vol. 7, no. 25, pp. 65-68. DOI: 10.4103/09731296.75904
18. Senejoux F., Girard C., Kerram P., Aisa H.A., Berthelot A., Bevalot F., Demougeot C. J. Ethnopharmacol, 2010, vol. 132, issue 1, pp. 268-273. DOI: 10.1016/j.jep.2010.08.028.
19. Gosudarstvennaya farmakopeya Rossiyskoy Federatsii [State Pharmacopoeia of the Russian Federation], Moscow, 2018, vol. 1, pp. 276-288. [Electronic resource] URL: http://resource.rucml.ru/feml/pharmacopia/14_l/HTML/in-dex.html (in Russ.)
20. Gosudarstvennaya farmakopeya Rossiyskoy Federatsii [State Pharmacopoeia of the Russian Federation], Moscow, 2018, vol. 4, p. 6143. [Electronic resource] URL: http://resource.mcml.ni/feml/phaimacopia/14_l/inML/index.html (in Russ.)
21. Kolomiyets N.E., Kalinkina G.I., Sapronova N.N. Farmatsiya, 2011, no. 6, pp. 22-24. (in Russ.)
22. GOST R ISO 5725-2-2002. Tochnost' (pravil'nost' i pretsizionnost') metodov i rezul'tatov izmereniy. Chast' 2. Osnov-noy metod opredeleniya povtoryayemosti i vosproizvodimosti standartnogo metoda izmereniy [State standart R ISO 5725-2-2002. Accuracy (correctness and precision) of measurement methods and results. Part 2. The main method for determining the repeatability and reproducibility of the standard measurement method], Moscow, 2002,42 p. (in Russ.).
Received December 8, 2018 Revised February 20, 2019 Accepted February 20, 2019
For citing: Andreeva V.Y., Kalinkina G.I., Li V.V. Khimiya Rastitel'nogo Syr'ya, 2019, no. 3, pp. 161-168. (in Russ.). DOI: 10.14258/jcprm.2019034683.
