Разработка и валидация методик спектрофотометрического и хроматографического определения тимолола в глазных каплях Тимолол-лонг Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

О.Г. Парахневич1, Н.П. Янюк1, Т.В. Трухачева1, А.И. Жебентяев2

РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИК СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОГО И ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИМОЛОЛА В ГЛАЗНЫХ

КАПЛЯХ ТИМОЛОЛ-ЛОНГ

1РУП «белмедпрепараты», г. Минск 2Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет

Разработана методика количественного определения действующего вещества в пролонгированной форме глазных капель на основе тимолола спектрофотометрическим методом анализа. Результаты валидации методики показали линейную зависимость оптической плотности от содержания тимолола в диапазоне исследуемых концентраций от 0,0105 до 0,0195 мг/мл, коэффициент корреляции - 0,999. Правильность методики находится в пределах от 100,1 до 101,2%. RSD при определении сходимости и внутрилабораторной воспроизводимости удовлетворяют критериям приемлемости и не превышают значений 2% и 3%, соответственно. Подтверждены специфичность и диапазон применения методики. Методика включена в фармакопейную статью производителя на лекарственное средство Тимолол-лонг производства РУП «Белмедпрепараты».

Для определения количественного содержания действующего вещества в глаз-

ных каплях на основе тимолола предложена методика с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии. На основании полученных ва-лидационных испытаний установлено, что методика воспроизводима и позволяет проводить контроль качества ЛС Тимолол и Тимолол-лонг производства РУП «Бел-медпрепараты».

Ключевые слова: тимолол, глазные капли, количественное определение, валидация, спектрофотометрия, жидкостная хроматография.

ВВЕДЕНИЕ

Глазные капли на основе тимолола предназначены для лечения открытоугольной глаукомы, вторичной глаукомы, закрытоугольной глаукомы, а также для надежного снижения внутриглазного давления при остром повышении офтальмотонуса. Длительное применение лекарственного средства (ЛС) вызывает побочные эффекты. С целью минимизации побочных эффектов разработана пролонгированная форма глазных капель тимолола на основе полимерной композиции гипромеллозы и повидона [1].

Разработанные глазные капли пролонгированного действия Тимолол-лонг в качестве действующего вещества содержат тимолола малеат в концентрации 3,4 мг/мл и 6,8 мг/мл, что соответствует содержанию тимолола 2,5 мг/мл и 5,0 мг/мл, соответственно. Качество субстанции тимолола малеат регламентируется требованиями частной статьи для фармацевтического использования «Тимолола малеат» ГФ РБ [2]. Количественное содержание тимолола малеата в субстанции определяется методом потенциометрического титрования в неводных средах [2-4].

В литературе описаны различные методы количественного определения ти-молола в лекарственных средствах: кулонометрический метод, метод высокоэффективной тонкослойной хроматографии, высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), спектрофотометрический метод и др. [5-6].

Фармакопейные методики, применяемые для определения содержания тимоло-ла в лекарственных средствах для офтальмологии, описаны в монографиях «Тимо-лол, глазные капли» Британской Фармакопеи [3] и «Офтальмологический раствор тимолола» Американской Фармакопеи [4] и основаны на спектрофотометрическом методе и методе ВЭЖХ, соответственно.

Количественное содержание тимоло-

ла вычисляется с использованием удельного показателя поглощения при анализе спектрофотометрическим методом [3]. Выполнение анализа требует трудоемкой пробоподготовки, многократного проведения экстракции толуолом с последующим реэкстрагированием тимолола раствором серной кислоты. Для количественного определения действующего вещества в глазных каплях Тимолол-лонг нами предложена простая в исполнении спектрофотометрическая методика, основанная на сравнении оптических плотностей раствора лекарственного средства и раствора стандартного образца в одних и тех же условиях. Для доказательства того, что выбранные аналитические условия обеспечивают воспроизводимые и надежные результаты, обязательным условием является проведение валидационных испытаний.

Применение методики определения содержания тимолола в разработанных глазных каплях Тимолол-лонг методом ВЭЖХ, согласно указаниям [7], требует проведения исследований, направленных на подтверждение воспроизводимости этой методики, поскольку состав глазных капель отличается от состава лекарственного средства, используемого при проведении валидации фармакопейной методики.

В связи с этим целью данной работы являлась разработка и валидация методики количественного определения тимоло-ла в глазных каплях пролонгированного действия Тимолол-лонг спектрофотометрическим методом, а также проведение валидационных испытаний для подтверждения воспроизводимости методики количественного определения тимолола в разработанных глазных каплях с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии.

МА ТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Количественное определение тимоло-ла в глазных каплях пролонгированного

действия проводилось двумя методами: спектрофотометрическим и ВЭЖХ.

Образцы лекарственного средства с содержанием тимолола 2,5 мг/мл и 5,0 мг/мл (ЛС Тимолол-лонг и Тимолол) были приготовлены в тюбик-капельницах по 1 мл с учетом разработанной технологии приготовления, фильтрации и розлива глазных капель в условиях действующего производства РУП «Белмедпрепараты».

Спектрофотометрический метод. Измерение оптической плотности анализируемых растворов осуществляли на спектрофотометрах Specord М 40 и СФ-46. Для проведения анализа использовали весы электронные Sartorius ВР21Ш, пипетки (ГОСТ 29228-91), колбы мерные (ГОСТ 1770-74).

Приготовление испытуемого раствора.

3,00 мл лекарственного средства Тимолол-лонг с концентрацией тимолола 5,0 мг/мл или 6,00 мл лекарственного средства с концентрацией тимолола 2,5 мг/мл доводили до объема 100,0 мл водой. 10,0 мл полученного раствора доводили до объема 100,0 мл водой.

Приготовление раствора рабочего стандартного образца (РСО) тимолола. 0,050 г тимолола малеата (НД РБ 0108С-2010) растворяли в воде и доводили до объема 100 мл водой. 2 мл полученного раствора доводили до объема 50,0 мл водой.

Измерение оптической плотности испытуемого раствора и раствора РСО тимо-лола проводили на спектрофотометре при длине волны 294 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве компенсационного раствора воду.

Содержание тимолола (Х) в лекарственном средстве, в мг/мл, вычисляли по формуле (1):

х _ А1 • т0 • 2,00 • 100,0 • 100,0 • 0,732 • 1000 ^

_ А0 • 100,0 • 50,0 • V • 10,0 , ( )

где А1 - оптическая плотность испытуемого раствора;

А0 - оптическая плотность раствора РСО тимолола;

т0 - навеска РСО тимолола, в граммах;

V - объем ЛС, взятый для количественного определения, в миллилитрах;

0,732 - коэффициент пересчета тимо-лола малеата на тимолол;

10,0; 100,0; 100,0 - разведение для приготовления испытуемого раствора, в миллилитрах;

2,00; 50,0; 100,0 - разведение для приготовления раствора РСО, в миллилитрах;

1000 - коэффициент пересчета грамм в миллиграммы.

Жидкостная хроматография. Количественное определение тимолола осуществляли на жидкостном хроматографе «Shimadzu» со спектрофотометрическим детектором модели SPD-10AVP, работающим в диапазоне длин волн от 190 до 600 нм. В хроматографической системе использовался двухканальный насос модели LC-10ATVP и воздушный термостат модели СТО-10 AVP для поддержания постоянного уровня температуры процесса. Процесс разделения осуществлялся на колонке «Hypersil GOLD, Thermo» размером 0,15^4,6 мм, заполненной силикагелем октадецилсилильным для хроматографии с размером частиц 5 мкм, в следующих условиях: температура колонки составляла 40°С; скорость подвижной фазы - 1,2 мл/ мин; детектирование осуществлялось при длине волны 295 нм; объем вводимой пробы - 10 мкл; время хроматографирования составляло не менее двух времен удерживания пика тимолола; в качестве подвижной фазы использовали фосфатный буфер рН 2,8 и метанол в соотношении 65:35.

Приготовление фосфатного буферного раствора рН 2,8. Растворяли 11,1 г натрия дигидрофосфата в 1000 мл воды для хроматографии и доводили значение рН до 2,8±0,5 кислотой фосфорной. Полученный раствор фильтровали через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и дегазировали.

Приготовление растворителя. Готовили смесь фосфатного буферного раствора рН 2,8 и ацетонитрила для хроматографии в соотношении 1:2 (по объему).

Приготовление испытуемого раствора. К точно измеренному объему лекарственного средства, содержащего 5,0 мг тимоло-ла, добавляли 15 мл растворителя и доводили полученную смесь до объема 50,0 мл водой для хроматографии.

Приготовление раствора РСО тимолола малеата. 34,0 мг тимолола малеата (НД РБ 0108С-2010) растворяли и доводили до объема 25,0 мл водой для хроматографии. К 5,00 мл полученного раствора добавляли 15 мл растворителя и доводили получен-

ную смесь до объема 50,0 мл водой для хроматографии.

Попеременно хроматографировали по 10 мкл испытуемого раствора и раствора РСО тимолола малеата.

Содержание тимолола (Х) в лекарственном средстве, в мг/мл, вычисляли по формуле (2):

v Б • с, • 50,0 • 0,732

х =_1Т^ • (2)

где Б - среднее значение площади пика тимолола, вычисленное из хроматограмм испытуемого раствора;

- среднее значение площади пика тимолола, вычисленное из хроматограмм раствора сравнения;

с, - концентрация тимолола малеата в растворе РСО тимолола малеата, в мг/мл;

V - объем ЛС, взятый для количественного определения, в миллилитрах;

50,0 - разведение, в миллилитрах;

0,732 - коэффициент пересчета тимолола малеата на тимолол.

Валидация методик. Валидацию методик проводили в соответствии с требованиями, изложенными в [7-9].

Разработанная методика количественного определения тимолола в лекарственном средстве спектрофотометрическим методом исследовалась по валидацион-ным характеристикам: специфичность, линейность, прецизионность (сходимость и внутрилабораторная воспроизводимость), правильность, диапазон применения.

Валидацию методики осуществляли с применением субстанции тимолола мале-ата (НД РБ 0108-2010) для приготовления модельных растворов и раствора РСО. Для приготовления раствора плацебо использовали динатрия фосфата дигидрат, натрия дигидрофосфата дигидрат, натрия хлорид, динатрия эдетат, бензалкония хлорид, ги-промеллозу, повидон, воду для инъекций в количествах, согласно составу лекарственного средства [1].

Для доказательства специфичности записывали УФ-спектры раствора плацебо и испытуемого раствора на спектрофотометре в области длин волн 200 - 350 нм.

Для установления линейности метода использовали 7 испытуемых растворов с концентрацией тимолола 70%, 80%, 90%, 100%, 110%, 120% и 130% к номинальной

в ЛС. Растворы готовили путем разведения модельного раствора, приготовленного растворением навески тимолола малеата в растворе плацебо (концентрация тимоло-ла 5,00 мг/мл). Концентрация тимолола в испытуемых растворах составила 0,0105, 0,0120, 0,0135, 0,0150, 0,0165, 0,0180 и 0,0195 мг/мл. Испытуемые растворы готовили в 3-х повторениях.

Прецизионность оценивали по двум параметрам: сходимость и внутрилабора-торная воспроизводимость. Сходимость оценивали по результатам 6 параллельных анализов одной серии лекарственного средства с концентрацией тимолола 2,50 мг/мл и одной серии с концентрацией ти-молола 5,00 мг/мл. Оценку внутрилабо-раторной воспроизводимости проводили по результатам 3 параллельных анализов, полученных при определении сходимости для лекарственного средства с концентрацией тимолола 5,00 мг/мл, и результатам 3 параллельных анализов той же серии, полученных другим аналитиком в другой день на другом оборудовании и химической посуде.

Для определения правильности вали-дируемой методики готовили три модельных раствора тимолола с концентрацией 70%, 100% и 130% к номинальной. Приготовление модельных растворов осуществляли путем добавления точно взвешенных количеств тимолола малеата к раствору плацебо.

Методика количественного определения тимолола методом ВЭЖХ исследовалась по следующим валидационным характеристикам: специфичность и прецизионность.

Для исследования специфичности анализировали испытуемые растворы ЛС «Тимолол-лонг» и «Тимолол»; раствор РСО тимолола малеата; раствор, приготовленный из вспомогательных компонентов для ЛС «Тимолол-лонг» (плацебо 1) и раствор, приготовленный из вспомогательных компонентов для ЛС «Тимолол» (плацебо 2).

Для определения разрешения пиков тимолола и малеиновой кислоты использовали раствор, содержащий смесь из 2 мл раствора РСО тимолола малеата и 0,1 мл 15 г/л раствора малеиновой кислоты.

Прецизионность методики оценивали по двум параметрам: сходимость и внутри-лабораторная воспроизводимость. Сходимость определялась одним аналитиком по

результатам 6 параллельных анализов одной серии лекарственного средства. Вну-трилабораторная воспроизводимость оценивалась по результатам трех параллельных анализов одной серии, проводимых двумя аналитиками в разные дни. В качестве результатов испытаний, выполненных одним из аналитиков, использовались результаты, полученные при определении сходимости.

Статистическую обработку полученных результатов валидационных испытаний выполняли с помощью программы Microsoft Office Excel.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Для количественного определения ти-молола в глазных каплях пролонгирован-

ного действия Тимолол-лонг разработана спектрофотометрическая методика, основанная на сравнении результатов измерения оптических плотностей растворов лекарственного средства и стандартного образца при длине волны 294 нм. Основное преимущество методики заключается в простоте и доступности для выполнения в ряде аналитических лабораторий.

Специфичность методики подтверждена получением УФ-спектров лекарственного средства и раствора плацебо. Изучение спектров показало отсутствие поглощения компонентов плацебо при длине волны 294 нм (рисунок 1). Следовательно, вспомогательные вещества, входящие в состав лекарственного средства, не оказывают влияния на определение тимо-лола.

Рисунок 1 - УФ-спектры ЛС Тимолол-лонг (1) и раствора плацебо (2)

С целью оценки линейности методики в исследуемом диапазоне концентраций тимолола графически представлена зависимость оптической плотности как функции содержания тимолола в испы-

туемых растворах (рисунок 2). Визуальная оценка показала линейный характер построенного графика в диапазоне концентраций тимолола от 0,0105 до 0,0195 мг/мл.

nm

Концентрация тимолола, мг/мл

Рисунок 2 - Зависимость оптической плотности как функции содержания анализируемого вещества тимолола в испытуемых растворах

Выполнив статистическую обработку результатов испытаний методом наименьших квадратов в соответствии с [9], были определены: уравнение зависимости у = 27,567х; коэффициент корреляции, равный 0,999; пересечение с осью

Y - 0,02% отклика от номинальной концентрации.

Полученные результаты удовлетворяют критериям приемлемости (коэффициент корреляции должен быть не менее

0,995; пересечение с осью Y - не более 2% отклика номинальной концентрации) и подтверждают линейность валидируемой

Пригодность спектрофотометрической методики подтверждена по параметру правильность. Полученное при исследовании правильности значение процента восстановления находится в пределах 100,1% -101,2% и удовлетворяет критерию приемлемости (процент восстановления - от 98% до 102%).

На основании результатов, полученных при проведении испытаний на линейность, прецизионность и правильность, подтвержден диапазон применения ва-лидируемой методики количественного определения содержания тимолола в лекарственном средстве Тимолол-лонг, раствор 2,5 мг/мл или 5,0 мг/мл - от 2,00 до

3,00 мг/мл или от 4,00 до 6,00 мг/мл.

Результаты валидационных испытаний методики количественного определения тимолола в лекарственном средстве Тимолол-лонг представлены в таблице 2.

Результаты валидационных испытаний

методики в исследуемом диапазоне концентраций тимолола.

Относительные стандартные отклонения (RSD), полученные при оценке сходимости, составили 0,71% и 0,44% для растворов тимолола с концентрацией 2,5 мг/ мл и 5,0 мг/мл, соответственно, и удовлетворяют критерию приемлемости (не более 2,0%). RSD, полученное при оценке вну-трилабораторной воспроизводимости, составило 0,51% и удовлетворяет критерию приемлемости (не более 3,0%). Результаты статистической обработки данных анализа приведены в таблице 1.

удовлетворяют критериям приемлемости и доказывают пригодность разработанной методики определения количественного содержания тимолола в ЛС Тимолол-лонг спектрофотометрическим методом.

С целью повышения уровня стандартизации глазных капель на основе тимоло-ла количественное содержание действующего вещества определяли также методом ВЭЖХ.

При выполнении валидационных испытаний была проведена оценка специфичности и прецизионности (сходимости и внутрилабораторной воспроизводимости) и доказана пригодность хроматографической системы: эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику тимолола из хроматограмм раствора РСО тимолола малеата, должна быть не менее 3600 теоретических тарелок; фактор асимметрии пика тимолола, рассчитанный из хроматограмм раствора РСО тимолола

Таблица 1 - Результаты статистической обработки данных анализа, выполненных при исследовании прецизионности методики количественного определения тимолола спектрофотометрическим методом (Р=0,95, п=6)

Наименование измерения Прецизионность

Сходимость Внутрилабораторная воспроизводимость

Тимолол-лонг, 2,5 мг/мл Тимолол-лонг, 5,0 мг/мл Тимолол-лонг, 5,0 мг/мл

Среднее значение, Хср, мг/мл 2,52 5,11 5,10

Дисперсия, S2 0,0003 0,0005 0,0007

Стандартное отклонение, S 0,018 0,022 0,026

Доверительный интервал, X 0,05 0,06 0,07

Относительная ошибка определения, 8 1,82 1,12 1,31

Относительное стандартное отклонение, RSD 0,71 0,44 0,51

Таблица 2 - Результаты валидационных испытаний методики количественного определения тимолола в лекарственном средстве Тимолол-лонг ____________________спектрофотометрическим методом_____________________

Валидационные характеристики и их критерии приемлемости Полученные результаты испытаний

Специфичность Отсутствие поглощения вспомогательных компонентов при длине волны 294 нм

Линейность: - коэффициент корреляции >0,995; - пересечение с осью Y - 2,0 % отклика от номинальной концентрации 0,999; 0,02 %

Прецизионность: - сходимость - RSD (%): не более 2,0 % - внутрилабораторная воспроизводимость - RSD (%): не более 3,0 % 0,71 % для раствора 2,5 мг/мл 0,44 % для раствора 5,0 мг/мл 0,51 % для раствора 5,0 мг/мл

Правильность: - процент восстановления 100±2 % от 100,1 % до 101,2 %

Диапазон применения: - от 80 % до 120% от номинального содержания активного вещества от 2,0 до 3,0 мг/мл для 2,5 мг/мл от 4,0 до 6,0 мг/мл для 5,0 мг/мл

малеата, должен быть не более 2,0; относительное стандартное отклонение, рассчитанное для площади пика тимолола из хроматограмм РСО тимолола малеата, должно быть не более 2%, разрешение между пиками тимолола и малеиновой кислоты должно быть не менее 5 (рисунки 3,4).

При исследовании специфичности методики количественного определения тимолола в глазных каплях Тимолол-лонг получены хроматограммы раствора «пла-

цебо 1», на которых отсутствуют пики со временем удерживания, совпадающим со временем удерживания пика тимолола на хроматограммах испытуемого раствора лекарственного средства. На хроматограмме испытуемого раствора лекарственного средства Тимолол-лонг время удерживания основного пика тимолола соответствует времени удерживания пика тимолола на хроматограмме раствора РСО тимолола малеата (рисунки 3,5).

250

225

200.

175

150

125

100

75

50

25

0

Рисунок 3 - Хроматограмма РСО тимолола малеата

Исследование специфичности ВЭЖХ методики проводилось также для глазных капель Тимолол производства РУП «Белмедпрепараты». Сравнением хроматограмм раствора «плацебо 2», испытуемого раствора лекарственного средства Тимолол и раствора РСО тимолола ма-

леата установлено отсутствие влияния вспомогательных компонентов на результаты анализа. В составы растворов «плацебо 1» и «плацебо 2» входят одинаковые вспомогательные компоненты: динатрия фосфата дигидрат, натрия дигидрофосфата дигидрат, натрия хлорид,

динатрия эдетат, бензалкония хлорид и вода для инъекций. Отличие состоит в количественном соотношении указанных компонентов и дополнительном содержании гипромеллозы и повидона в

составе раствора «плацебо 1». Времена удерживания пиков тимолола на хроматограммах испытуемых растворов лекарственных средств Тимолол и Тимолол-лонг составляли около 3,8 мин.

Г Тимолол/3,832

Малеиновая

кислота/1,760 1. _

175

150

Рисунок 4 - Хроматограмма РСО тимолола малеата и малеиновой кислоты

225

200 і Тимолол/3,848

175

150

125

100

75

50

25

0 0 ,0 1,0 20 30 L • 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 9,0 mi

Рисунок 5 - Хроматограмма испытуемого раствора ЛС Тимолол-лонг

mV

250

75

Разрешение пиков тимолола и малеи-новой кислоты на хроматограмме раствора РСО тимолола малеата и малеиновой кислоты составило 13,7, что соответствует критерию приемлемости - не более 5 (рисунок 4).

В ходе проведения валидационных испытаний, выполненных на опытных образцах лекарственных средств Тимолол, раствор 2,5 мг/мл, и Тимолол-лонг, раствор

5,0 мг/мл, подтверждена сходимость методики. RSD, полученные при оценке сходимости, составили 0,21% как для раствора тимолола ЛС Тимолол, так и раствора ЛС Тимолол-лонг и удовлетворяют критерию приемлемости (не более 2,0%). RSD, полученные при оценке внутрилабораторной воспроизводимости, составили 0,30% и

0,93%, соответственно, и удовлетворяют критерию приемлемости (не более 3,0%). Результаты статистической обработки данных анализа приведены в таблице 3.

Результаты проведенных валидацион-ных испытаний удовлетворяют критериям приемлемости и подтверждают воспроизводимость методики количественного определения тимолола методом ВЭЖХ в глазных каплях на его основе.

Таким образом, валидированные методики количественного определения ти-молола спектрофотометрическим методом и методом ВЭЖХ пригодны для контроля качества глазных капель пролонгированного действия Тимолол-лонг. Результаты анализа достоверны.

Для контроля качества промышленных серий лекарственного средства «Тимолол-лонг, раствор (капли глазные) 5 мг/мл» выбрана методика количественного определения тимолола спектрофотометрическим методом, который является более экономичным и экспрессным при выполнении рутинных анализов, чем метод ВЭЖХ.

Таблица 3 - Результаты статистической обработки данных анализа, выполненных при исследовании прецизионности методики количественного определения тимолола

методом ЖХ (Р=0,95, п=6)

Прецизионность

Наименование Сходимость Внутрилабораторная воспроизводимость

измерения Тимолол, 2,5 мг/мл Тимолол-лонг, 5,0 мг/мл Тимолол, 2,5 мг/мл Тимолол-лонг, 5,0 мг/мл

Среднее значение, Хср, мг/мл 2,49 5,04 2,50 5,00

Дисперсия, S2 2,5х10-5 1,0х10-4 5,6х10-5 2,2х10-3

Стандартное отклонение, S 0,005 0,010 0,008 0,047

Доверительный интервал, X 0,01 0,03 0,02 0,12

Относительная ошибка определения, е 0,22 0,22 0,32 0,98

Относительное стандартное отклонение, RSD 0,21 0,21 0,30 0,93

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

1. Разработана методика определения количественного содержания действующего вещества в пролонгированной форме глазных капель на основе тимолола спектрофотометрическим методом. Методика провалидирована и включена в ФСП РБ 1522-10 «Тимолол-лонг, раствор (капли глазные) 5 мг/мл».

2. Проведены валидационные испытания методики количественного определения тимолола методом ВЭЖХ; доказана воспроизводимость и пригодность методики определения действующего вещества в глазных каплях Тимолол и Тимолол-лонг производства РУП «Белмедпрепараты».

SUMMARY

O.G. Parakhnevich, N.P. Yanyuk,

T.V. Trukhachova, A.I. Zhebentyaev DEVELOPMENT AND VALIDATION OF SPECTROFOTOMETRIC AND CHROMATOGRAPHIC ASSAY TIMOLOL IN TIMOLOL-LONG EYE DROPS The spectrophotometric assay of active substance in the prolonged form of eye drops on the basis of timolol is developed. The validation data of the developed technique showed that the dependence of an absorbance from a content of timolol in the tested concentration from 0,0105 to 0,0195 is linear with factor of correlation R=0,999. Accuracy is in the range of 100,1 to 101,2%. RSD of repeatability and intralaboratory reproducibility satisfy to criteria and not exceed values of 2% and 3%, respectively. Specificity and a range of application of

a technique are confirmed. The assay is included into the pharmacopoeia monograph of the manufacturer of the medical product Timolol-long produced by RUE «Belmedpreparaty».

The high-performance liquid chromatography method for assay of active substance in eye drops on the basis of timolol is offered. On the basis of the received data it was established that the assay is comprehensible and allows spending quality control of the medical products Timolol and Timolol-long produced by RUE «Belmedpreparaty».

Keywords: timolol, eye drops, assay of timolol, validation, spectrophotometry, liquid chromatography.

ЛИТЕРАТУРА

1. Разработка состава пролонгированных глазных капель тимолола / О.Г. Парах-невич [и др.] // Вестник фармации. - 2012.

- №1 (55). - С. 45 - 53.

2. Государственная фармакопея Республики Беларусь: в 3 т. / УП «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении», 2006

- 2009. - Т. 3. Контроль качества вспомогательных веществ и лекарственного растительного сырья / УП «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении»; под общ. ред. А.А. Шерякова. - Молодечно: «Типография «Победа», 2009. - 728 с.

3. British Pharmacopoeia 2009 [Электронный ресурс]. - Электрон., текстовые дан. и прогр. -Effective date: 1 January 2009. - CD-ROM version.

4. United States Pharmacopоeia 32 - National Formulary 27. The Official Compendia of Standards [Электронный ресурс]. - Элек-

трон., текстовые дан. и прогр. - Official May

1, 2009. - Электрон.опт. диск (CD-ROM).

5. Turkdemir, M.H. Voltammetric Determination of Timolol Maleate: b Ayad, M.M. Spectrophotometric methods for determination of enalapril and timolol in bulk and in drug formulations / M.M. Ayad, A. Shalaby, H.E. Abdellatef // J. Anal Bioanal Chem. -2003. - № 375. - P. 556-560.

6. Ayad, M.M. Spectrophotometric methods for determination of enalapril and timolol in bulk and in drug formulations / M.M. Ayad, A. Shalaby, H.E. Abdellatef // J. Anal Bioanal Chem. - 2003. - № 375. - P. 556-560.

7. Руководство для предприятий фармацевтической промышленности: методические рекомендации / Н.В. Юргель [и др.] - М.: Изд-во «Спорт и культура - 2000», 2007. - 192 с.

8. Валидация аналитических методик для производителей лекарств: типовое ру-

ководство предприятия по производству лек. средств / под ред. В.В. Береговых. -М.: Литтерра, 2008. - 132 с.

9. Государственная фармакопея Республики Беларусь: в 3 т. / УП «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении», 2006 - 2009. - Т. 1. Общие методы контроля качества лекарственных средств / УП «Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении»; под общ. ред. Г.В. Годовальни-кова. - Минск: Минский государственный ПТК полиграфии, 2006. - 656 с.

Адрес для корреспонденции:

220007, Республика Беларусь, г. Минск, ул. Фабрициуса, 30,

РУП «Белмедпрепараты», тел./факс 8(017)220 31 42, е-mail: nfc@belmedpreparaty. com.

Парахневич О.Г.

Поступила 28.05.2013 г.