CC BY
5
УДК 591.23-591.69-9:639.1.04
С. В. Полоз
Кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник, РУП «Институт рыбного хозяйства», РУП «Научно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по животноводству»,
г. Минск, Республика Беларусь
РАЗРАБОТКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ОБРАЗЦА СОРБЦИОННО-ДЕТОКСИКАЦИОННОГО ПРЕПАРАТА И ХАРАКТЕРИСТИКА ЕГО СВОЙСТВ ДЛЯ ВКЛЮЧЕНИЯ В СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ ДИКИХ ЖИВОТНЫХ
Разработанный экспериментальный образец сорбционно-детоксикационного препарата нивелирует токсическое влияние ассоциаций паразитов, а также их метаболитов, снижает антигенную нагрузку, защищает клетки и ткани организма животных от повреждающего действия свободных радикалов, способствует усилению защитных свойств организма.
Ключевые слова: сорбционно-детоксикационный препарат, паразитозы, токсическое воздействие, иммунологическая защита.
Введение
Эпизоотическое обследование и анализ болезней и падежа диких копытных животных показывает, что ассоциации паразитов отрицательно влияют на функции воспроизводства и продуктивности, приводят к нарушению иммунного статуса организма и развитию токсических явлений, вызывающих функциональные и структурные изменения в организме животных [1], [2], [3].
Изменение параметров иммунной системы под воздействием паразитов, относящимся к различным экологическим нишам показаны в немногочисленных работах [4], [5], [6]. Гельминтозно - бактериальный паразитоценоз включает сочленов, для которых организм хозяина является средой обитания на одной из стадий цикла развития, что обуславливает особенности механизмов адаптации и взаимное влияние на процесс дальнейшего развития. Собственные обитатели организма млекопитающих - бактерии - в определенных условиях приобретают патогенные свойства, вызывают эндогенные инфекционные заболевания и дисбиозы.
Общепринятые методы профилактики и лечения ассоциативных паразитозов диких и домашних копытных животных в настоящий момент не всегда эффективны. Поэтому, поиск новых эффективных способов элиминации экзо- и эндотоксикантов из организма животных является весьма актуальным, особенно, учитывая тот факт, что конечным звеном трофической цепи является человек, потребляющий продукты животноводства и охоты [7]. Сегодня получение экологически чистой мясной продукции высокого санитарного качества является одной из самых важных проблем устойчивого развития общества.
В решении этой проблемы ведущая роль принадлежит сорбентам различной природы. Способность сорбентов связывать потенциально опасные биологические вещества дает возможность уменьшить их перенос в трофической цепи. Существующие технологии позволяют создавать большой перечень материалов, обладающих сорбционными свойствами как синтетического, так и природного происхождения. Тем не менее, расширение рынка этих материалов за счет создания новых, более дешевых и эффективных, с расширенным спектром действия является весьма актуальным.
Для решения этой задачи был получен экспериментальный образец сорбционно -детоксикационного препарата на основе растительного сырья и антиоксидантного комплекса для включения в систему оздоровительных мероприятий с дегельминтизацией.
Цель данной работы - разработать экспериментальный образец сорбционно-детоксикационного препарата на основе растительного сырья и антиоксидантного комплекса, изучить его свойства для включения в способ повышения устойчивости диких животных при воздействии неблагоприятных факторов среды эндогенного и экзогенного происхождения.
Материалы и методы исследований
Работа выполнена в 2016-2017 гг. Лабораторные исследования проведены на базе ГНПО «НПЦ НАН Беларуси по биоресурсам». Изучение эффективности комплексного применения антгельминтика (альбендазола 10%-го) и разработанного экспериментального образца сорбционно-детоксикационного препарата проводили в условиях вольерного содержания лани европейской в Гродненской области Республики Беларусь.
© Полоз С. В., 2021
Экспериментальные исследования выполнены на белых лабораторных мышах весом 18-20 г, которые содержались в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите животных, используемых для экспериментальных целей (1986) [8].
Конструирование экспериментального образца, стабильность, контроль качества, безвредность, острую и хроническую токсичность определяли в соответствии с требованиями, заложенными в Техническом регламенте Республики Беларусь «Ветеринарные препараты. Безопасность» (ТР 2010/021/BY).
Для определения безвредности животные опытной группы вместе с кормом получали экспериментальный образец однократно в дозе 100 мг/кг. Животные контрольной группы содержались на обычном рационе. В период исследований у животных всех групп трижды проводился контроль массы тела и отбор проб крови.
Острую токсичность определяли при внутрижелудочном введении экспериментального образца белым мышам в дозе 1000 мг/кг, 5000 мг/кг, 10 000 мг/кг, хроническую токсичность -при введении 1/10, 1/20 и 1/50 LD50.
Гематологические и биохимические исследования проводили с использованием автоматического гематологического анализатора и автоматического биохимического анализатора, входящих в состав компьютеризированного лабораторного комплекса (IDEXX, США).
Паразитологические исследования проводили специальными методами [9] .
Адсорбционную активность растительного компонента экспериментального образца -порошка дерновины мхов - и препаратов сравнения (угля активированного и полисорба) in vitro оценивали по маркерам: метиленовому синему (МС), метиловому оранжевому (МО) и желатину спектрофотометрическим способом [10].
Детоксикационные свойства исследуемого экспериментального образца сорбционно-детоксикационного препарата изучали на моделях острого (ОЭТ) и хронического эндотоксикозов (ХЭТ) [11]. Для сравнения использовали уголь активированный и полисорб. Эксперименты проводили в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» [12].
ОЭТ индуцировали внутрижелудочным введением тетрахлорметана (ТХМ) в масляном растворе (1:1) в дозе 1 мл/кг ежедневно в течение 6 дней, на 7-й день липополисахарид S.thyphimurium (ЛПС) внутрибрюшинно. Животным 3-5 групп вводили внутрижелудочно ТХМ в масляном растворе (1:1) в дозе 1 мл/кг ежедневно в течение 6 дней. С третьего дня в течение 21 дня ежедневно вводили в водных растворах соответственно в дозе 500 мг/кг порошок угля активированного (УА), 500 мг/кг экспериментального образца (ЭО), 450 мг/кг - полисорба (П). На 7, 14, 21-й день ЛПС внутрибрюшинно в дозе 20 мг/кг. Контрольные животные получали эквиобъемное количество растворителей: масло подсолнечное рафинированное дезодорированное марки П, вымороженное (Р) и вода для инъекций (Р1) (таблица 1).
Таблица 1. - Схема применения экспериментального образца сорбционно-детоксикационного препарата и препаратов сравнения (угля активированного и полисорба) при остром эндотоксикозе
№ Дни исследований
1-2 3-6 7 8-13 14 15-20 21
Препараты
1 Р Р Р1 Р1 Р1 Р1 Р1
2 ТХМ ТХМ ЛПС - ЛПС - ЛПС
3 ТХМ ТХМ + УА ЛПС + УА УА ЛПС + УА УА ЛПС + УА
4 ТХМ ТХМ + ЭО ЛПС + ЭО ЭО ЛПС + ЭО ЭО ЛПС + ЭО
5 ТХМ ТХМ + П ЛПС + П П ЛПС + П П ЛПС + П
Примечание:
Группа 1 - контрольные животные; Группа 2 - ТХМ + ЛПС; Группа 3 - ТХМ + ЛПС + УА;
Группа 4 - ТХМ + ЛПС + экспериментальный образец; Группа 5 - ТХМ + ЛПС + полисорб;
Р - масло подсолнечное рафинированное дезодорированное марки П, вымороженное; Р] - вода для инъекций.
Животным ХЭТ вводили внутрижелудочно ТХМ в масляном растворе (1:1) 1 мл/кг веса животного в течение 21 дня через день. Животным 8-10 групп вводили внутрижелудочно ТХМ в масляном растворе (1:1) в дозе 1мл/кг через день в течение 21 дня. С третьего дня в течение 21 дня ежедневно вводили в водных растворах соответственно в дозе 500 мг/кг порошок угля активированного, 500 мг/кг экспериментальный образец, 450 мг/кг - полисорба. На 6, 14, 20-й день ЛПС вводили внутрибрюшинно в дозе 20 мг/кг во всех группах. Контрольные животные получали эквиобъемное количество растворителей: масло подсолнечное рафинированное дезодорированное марки П, вымороженное (Р) и вода для инъекций (Р1) (таблица 2).
Таблица 2. - Схема применения экспериментального образца сорбционно-детоксикационного препарата и препаратов сравнения (угля активированного и полисорба) при хроническом эндотоксикозе
Дни Группа животных
6 7 8 9 10
Препараты
1 Р ТХМ ТХМ ТХМ ТХМ
2 - - - - -
3 Р ТХМ ТХМ + УА ТХМ + ЭО ТХМ + П
4 Р1 - УА ЭО П
5 Р ТХМ ТХМ + УА ТХМ + ЭО ТХМ + П
6 Р1 ЛПС ЛПС + УА ЛПС + ЭО ЛПС + П
7 Р ТХМ ТХМ + УА ТХМ + ЭО ТХМ + П
8 Р1 - УА ЭО П
9 Р ТХМ ТХМ + УА ТХМ + ЭО ТХМ + П
10 Р1 - УА ЭО П
11 Р ТХМ ТХМ + УА ТХМ + ЭО ТХМ + П
12 Р1 - УА ЭО П
13 Р ТХМ ТХМ + УА ТХМ + ЭО ТХМ + П
14 Р1 ЛПС ЛПС + УА ЛПС + ЭО ЛПС + П
15 Р ТХМ ТХМ + УА ТХМ + ЭО ТХМ + П
16 Р1 - УА ЭО П
17 Р ТХМ ТХМ + УА ТХМ + ЭО ТХМ + П
18 Р1 - УА ЭО П
19 Р ТХМ ТХМ + УА ТХМ + ЭО ТХМ + П
20 Р1 ЛПС ЛПС + УА ЛПС + ЭО ЛПС + П
21 Р ТХМ ТХМ + УА ТХМ + ЭО ТХМ + П
Примечание:
Группа 6 - контрольные животные;
Группа 7 - ТХМ + ЛПС;
Группа 8 - ТХМ + ЛПС + УА;
Группа 9 - ТХМ + ЛПС + экспериментальный образец;
Группа 10 - ТХМ + ЛПС + Полисорб;
Р - масло подсолнечное рафинированное дезодорированное марки П, вымороженное;
Р1 - вода для инъекций.
Степень развития интоксикации оценивали по активности аланинаминотрансферазы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы (АсАТ), содержанию мочевины, общего белка с использованием автоматического биохимического анализатора, и уровню малонового диальдегида (МДА) [13].
Исследование острой токсичности изучаемого экспериментального образца сорбционно-детоксикационного препарата проводилось на основании ГОСТ 12.1.007-76 [14]. Острые опыты были поставлены на 40 самках белых мышей массой 16-18 г, разделенных на 4 группы (п = 10) при однократном внутрижелудочном введении. Выбранные методы позволяют определить конкретную величину LD50 только в том случае, если хотя бы две дозы вызвали смертность выше 0 %, но ниже 100 %. Длительность периода наблюдения за животными после введения препаратов составила 10 дней. Перед введением животных лишали пищи, но не воды, на 3-4 часа. После периода голодания животных взвешивали и на основании данных массы тела высчитывали дозу, затем вводили им тестируемый образец препарата. Хроническую токсичность определяли на 40 белых мышах массой 18-20 г. Для проведения опыта было сформировано 4 группы по 10 животных в каждой. Экспериментальный образец сорбционно-детоксикационного препарата применяли в аналогичных дозах в течение 30 дней [15].
Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью компьютерной программы «StatBion 2000».
Смешанный паразитоз моделировали введением культур Strongyloides sp. в дозе 0,5 тыс. и E.coli штамм А20 в дозе 1х109 мк/т. Перед постановкой эксперимента всех животных подвергли санации от гельминтов и бактерий с последующей диагностикой. Для снижения интоксикации применяли разработанный нами экспериментальный образец сорбционно-детоксикационного препарата. Препарат вводили в желудок через зонд в дозе 0,1 мг на животное в течение 14 дней после проведения дегельминтизации. Животные были разделены на 3 группы по 11 особей в каждой: 1-я -контрольная, 2-я - получавшая культуры паразитов, 3-я - получавшая образец сорбционно-детоксикационного препарата после дегельминтизации. У мышей определяли неспецифический иммунный ответ (лизоцимную активность сыворотки крови нефелометрическим методом и фагоцитарную активность нейтрофилов методом активного поглощения). Отбор проб крови проводили до и после применения экспериментального образца сорбционно-детоксикационного препарата [16], [17].
Эффективность комплексного применения антигельминтика и разработанного экспериментального образца определяли при проведении дегельминтизации лани европейской в условиях вольерного хозяйства Гродненской области. Проведение копроскопических исследований лани европейской (n = 12) проводили дважды: 1-й раз для подбора адекватного антигельминтика, 2-й раз через 45 дней после его применения. Биохимические исследования сыворотки крови лани европейской (n = 4) проводили дважды: до и после применения экспериментального образца сорбционно-детоксикационного препарата.
Результаты исследований и их обсуждение
Экспериментальный образец сорбционно-детоксикационного препарата состоит из двух компонентов: растительного - высушенная дерновина сфагнового мха и антиоксидантного -витаминно-минерального комплекса. Оценка адсорбционной активности дерновины мха сфагнума в отношении метиленового синего, метиленового оранжевого и желатина проводилась на образцах сырья, дисперсность которых составляла 0,1-0,3 мм. В качестве препаратов сравнения использовали активированный уголь и полисорб с аналогичными размерами частиц. Среднее значение адсорбционной активности двух видов дерновины сфагновых мхов по метиленовому синему статистически значимо отличалось от соответствующего показателя угля активированного. Адсорбционная активность дерновины сфагновых мхов (Sphagnum fuscum и Sphagnum girgensohnii) выше, чем у угля активированного (р < 0,05). Способность связывать метиленового синего и у полисорба оказалась в 3 раза ниже адсорбционной активности угля активированного (р < 0,05) (таблица 3).
Таблица 3. - Адсорбционная активность исследуемых образцов (М ± m), мг/г
Исследуемый образец Адсорбционная активность по маркерам
Метиленовый синий Метиловый оранжевый Желатин
S. fuscum 351,5 ± 2,8*** 11,4 ± 2,2* 159,5 ± 4,1***
S. girgensohnii 456,2 ± 6,1*** 15,2 ± 3,6* 162,1 ± 2,4***
Уголь активированный 293,5 ± 1,4 167,1 ± 4,6 51,3 ± 2,8
Полисорб 87,8 ± 2,4* 16,8 + 1,8* 298,2 ± 1,8*
Примечание:
р - достоверность различий по сравнению со здоровыми животными;
* - р < 0,05 по сравнению с углем активированным;
** - р < 0,05 по сравнению с полисорбом;
*** - р < 0,05 по сравнению с обоими препаратами.
Анализ результатов испытаний адсорбционной активности дерновины по метиленовому оранжевому показал отсутствие выраженного сорбционного эффекта у полисорба. Адсорбционная активность по желатину у дерновины сфагнового мха оказалась в 1,9 раза, а у активированного угля -в 5,8 раз ниже, чем у полисорба.
Наибольшее значение адсорбционной активности дерновины мхов по метиленовому синему установлено для 5! girgensohnii. Немного меньше адсорбционная активность была у 5./шсит, однако показатели биологического запаса сырья в Республике Беларусь у сфагнума бурого для потенциальной эксплуатации выше в 7-10 раз.
Исходя из выше изложенного, для конструирования экспериментального образца сорбционно-детоксикационного препарата и дальнейших углубленных исследований был выбран 5./шсит (сфагнум бурый).
Адсорбционную активность сфагнового мха, входящего в состав экспериментального образца сорбционно-детоксикационного препарата, определяли по дисперсности дерновины. Объектом испытаний являлась высушенная дерновина сфагнового мха (Ж /шсит')■ В качестве маркера, позволяющего определять эффективность действия сорбентов в отношении сред немолекулярных токсинов, использовали краситель метиленовый синий.
Рисунок — Адсорбционная активность растительного компонента экспериментального образца — дерновины мха (8. 1"шсит) — по метиленовому синему
в зависимости от дисперсности
Результаты испытаний свидетельствуют, что с увеличением дисперсности сырья до 0,1 мм способность дерновины поглощать метиленовый синий увеличивается. Дальнейшее уменьшение размеров частиц дерновины не приводило к росту ее адсорбционной активности (рисунок). Это может быть связано с разрушением структур растительной ткани, ответственных за обеспечение основных механизмов сорбционного эффекта.
В экспериментах по оценке детоксикационных свойств исследуемых объектов установлено, что экспериментальный образец сорбционно-детоксикационного препарата эффективнее полисорба и угля активированного. Применение его приводило к снижению концентрации АлАТ и АсАТ в сыворотке крови у животных с ОЭТ и ХЭТ (таблицы 4, 5).
Таблица 4. - Влияние сорбентов на активность ферментов сыворотки крови при остром эндотоксикозе
№ группы Показатели
животных АлАТ, и/1 АсАТ, И/1 Мочевина, Общий белок, МДА,
ммоль/л г/л мкмоль/л
1 45,3 ± 2,4 59,6 ± 2,4 9,3 ± 1,3 82,6 ± 3,6 1,59 ± 0,14
2 140,3 ± 1,3** 165,8 ± 12,4** 5,4 ± 0,4** 63,1 ± 5,2** 3,39 ± 0,18**
3 113,3 ± 11,1* 114,6 ± 7,2* 7,3 ± 0,4* 76,21 ± 2,4* 2,24 ± 0,11*
4 85,6 ± 6,8* 90,5 ± 7,2* 8,5 ± 0,6* 81,76 ± 5,43* 1,98 ± 0,16*
5 88,6 ± 2,2* 93,3 ± 3,2* 8,1 ± 0,8* 73,18 ± 2,8* 2,06 ± 0,28*
Примечание:
Группа 1 - контрольные животные; Группа 2 - ТХМ + ЛПС; Группа 3 - ТХМ + ЛПС + УА;
Группа 4 - ТХМ + ЛПС + экспериментальный образец; Группа 5 - ТХМ + ЛПС + полисорб;
* - р < 0,01 по сравнению с эндотоксикозом, вызванным ТХМ + ЛПС;
** - р < 0,01 по сравнению контрольной группы с эндотоксикозом, вызванным ТХМ + ЛПС.
Результаты наших исследований показали, что энтеросорбенты препятствовали развитию гипопротеинемии. О снижении токсического проявления ТХМ и ЛПС под влиянием данных препаратов свидетельствовало уменьшение концентрации МДА и увеличение уровня мочевины.
Таблица 5. - Влияние сорбентов на активность ферментов сыворотки крови при хроническом эндотоксикозе
№ группы Показатели
животных АлАТ, и/1 АсАТ, И/1 Мочевина, Общий белок, МДА,
ммоль/л г/л мкмоль/л
6 48,12 ± 0,6 62,4 ± 1,2 9,2 ± 0,8 89,8 ± 3,7 1,44 ± 0,16
7 105,3 ± 3,5** 110,6 ± 2,8** 6,1 ± 0,2** 69,4 ± 5,2** 3,5 ± 0,4**
8 89,4 ± 1,6* 91,3 ± 2,8* 7,7 ± 0,2* 87,4 ± 7,2* 2,1 ± 0,2*
9 72,4 ± 4,6* 87,8 ± 3,2* 7,8 ± 0,1* 86,6 ± 2,8* 2,4 ± 0,3*
10 81,4 ± 6,8 85,7 ± 4,5 7,4 ± 0,1 81,8 ± 3,2 2,0 ± 0,4
Примечание:
Группа 6 - контрольные животные;
Группа 7 - ТХМ + ЛПС;
Группа 8 - ТХМ + ЛПС + УА;
Группа 9 - ТХМ + ЛПС + экспериментальный образец;
Группа 10 - ТХМ + ЛПС + полисорб;
* - р < 0,05 по сравнению с эндотоксикозом, вызванным ТХМ + ЛПС;
** - р < 0,05 по сравнению контрольной группы с эндотоксикозом, вызванным ТХМ + ЛПС.
Полученные данные свидетельствуют о том, что курсовое назначение исследуемых энтеросорбентов в значительной мере уменьшает тяжесть эндотоксикоза, частично нормализует биохимические показатели крови. Экспериментальный образец сорбционно -детоксикационного препарата также обладает детоксикационными свойствами при моделировании острого и хронического эндотоксикоза.
Проведенные испытания экспериментального образца на стабильность показали, что образец устойчив, входящие в него компоненты сохраняют свою активность и биологические свойства в течение контрольного периода хранения (12 месяцев).
Применение экспериментального образца не вызывает отрицательных изменений в уровне основных гематологических и биохимических показателей крови мышей опытной группы (№ 1) и контрольной группы (№ 2), которые определили при однократном отборе крови при установлении безвредности (таблица 6). Средняя живая масса животных в опытной и контрольной группах составляла 94,7 ± 7,12 г и 94,3 ± 6,3 г. После однократного введения, а также при ежедневном введении экспериментального образца белым мышам в течение 1 месяца гибели животных во всех группах не произошло. Колебание массы тела подопытных животных в период исследований было незначительным. По результатам клинического осмотра отклонений от физиологической нормы не обнаружено. Поведение животных в течение всего опыта оставалось без изменений, потребление корма и воды удовлетворительное, общее состояние хорошее, слизистые оболочки и кожа розовые, без повреждений.
Таблица 6. - Гематологические и биохимические показатели лабораторных животных
Показатели
№ группы Эритроциты, Гемоглобин, Гематокрит, Общий Глюкоза, Общие
х1012/л г/л % белок, г/л ммоль/л липиды, г/л
1 4,72 ± 0,25 75 ± 2,8 28,7 ± 0,19 39,63 ± 0,16 8,5 ± 0,64 5,28 ± 0,58
2 4,8 ± 0,25 75 ± 2,4г 29,7 ± 0,24 39,58 ± 0,11 8,3 ± 0,51 5,37 ± 0,57
При изучении острой и хронической токсичности экспериментального образца сорбционно -детоксикационного препарата установлено, что однократное введение препарата не вызывает гибели животных в опытных и контрольной группах. Изменений поведения не зарегистрировано, общее состояние было удовлетворительное, шерсть гладкая, блестящая, аппетит не изменился, воду пьют хорошо, не было повышенного возбуждения и угнетения. Согласно ГОСТ 12.1.007-76 «Классификация веществ по степени воздействия на организм» композиция препарата отнесена к IV классу «вещества малоопасные» (таблица 7).
Таблица 7. - Определение острой токсичности разработанного образца препарата
№ группы Вид животного Доза Смертность Класс
мг/кг мл/животное токсичности
1 белые мыши 1 000 0,02 - IV
2 5 000 0,1 - IV
3 10 000 0,2 - IV
4 контроль - IV
При изучении хронической токсичности разработанного экспериментального образца сорбционно-детоксикационного препарата, которая проводилась на мышах, эффектов, подтверждающих влияние на поведение животных в сравнении с контролем, не зафиксировано.
При изучении показателей неспецифического иммунитета при моделировании смешанного паразитоза наблюдали увеличение активности лизоцима в группе зараженных лабораторных животных до 37,6 ± 2,6 % (контроль - 35,4 ± 1,2 %). Существенным фактором иммунитета является фагоцитарная активность клеток крови, при этом фагоцитируются продукты жизнедеятельности и распада паразитов. Экспериментальное заражение лабораторных животных (белых мышей) приводило к увеличению данного показателя до 29,4 ± 1,1 % (контроль - 25,6 ± 1,5 %).
Эффективность комплексного применения антигельминтика и разработанного экспериментального образца определяли при проведении дегельминтизации лани европейской. Выбор рекомендуемого антигельминтного препарата осуществляли по результатам предварительных копроскопических исследований. При этом у лани европейской обнаружены гельминты, относящиеся к 8 родам: ИаетопеЪш Бр. - 2,8 % экстенсивность инвазии (ЭИ), 2 интенсивность инвазии (ИИ); Oesophagostomum Бр. - 17,1 % (ЭИ), 1-2 (ИИ); Trichostrongylus Бр. - 5,7 % (ЭИ), 1-2 (ИИ); Protostrongylus Бр. - 11,4 % (ЭИ), 1-2 (Ии); Ыие11епш Бр. - 26,2 % (ЭИ), 1-6 (ИИ); Dictyocaulis Бр. -25,5 % (ЭИ), 1-7 (ИИ); Ostertagia Бр. - 2,8 % (ЭИ), 1 (ИИ) и Соорепа Бр. - 8,5 % (ЭИ), 1-5 (ИИ). По результатам копроскопического исследования в качестве антигельминтика был выбран альбендазол 10 %. Дозу антгельминтика и разработанного экспериментального образца сорбционно-детоксикационного препарата на порцию корма рассчитывали исходя из численности и половозрастного состава животных, находящихся в вольере.
Экспериментальный образец применяли на следующие сутки после введения антигельминтного препарата в течение 14 дней. Антгельминтик применяли лани европейской однократно, в утреннее время. Доза антгельминтика с учетом живой массы лани европейской составила 110 г, доза экспериментального образца - 110 г.
Экспериментальный образец сорбционно-детоксикационного препарата снижает токсическое действие гельминтов и их метаболитов и восстанавливает биохимические показатели сыворотки крови у лани европейской. При этом наблюдается уменьшение уровня щелочной фосфатазы и аланинаминотрансферазы на 46,4 % и 46,1 % соответственно, а уровня аспартатаминотрасферазы -в 2,2 раза (таблица 8).
Таблица 8. - Биохимические показатели сыворотки крови лани европейской до и после применения экспериментального образца сорбционно-детоксикационного препарата
№ Щелочная фосфатаза, АлАТ, АсАТ,
животного и/1 И/1 И/1
До После До После До После
1 187,0 94,0 61,0 27,0 99,0 43,0
2 195,0 98,0 57,0 29,0 108,0 55,0
3 182,0 103,0 73,0 34,0 112,0 46,0
4 199,0 114,0 54,0 42,0 105,0 49,0
М ± т 190,7 ± 0,16 102,2 ± 0,19* 61,2 ± 0,19 33,0 ± 0,14* 106,0 ± 0,12 48,2 ± 0,11**
Примечание:
р - достоверность различий биохимических показателей сыворотки крови в группе лани европейской до и после применения экспериментального образца сорбционно-детоксикационного препарата; * - р < 0,05; ** - р < 0,02.
Через 45 дней после проведенной дегельминтизации инвазированность лани европейской снизилась с 68,6 % до 0 %. Эффективность дегельминтизации (с учетом всех видов гельминтов) составила 100 %.
Заключение
С учетом биологических запасов перспективным объектом для включения в состав сорбционно-детоксикационного препарата является S. fuscum, адсорбционная активность которого составила 351,5 ± 2,8 мг/г по сравнению с метиленовым синим.
Разработанный экспериментальный образец препарата обладает детоксикационными свойствами. Применение его лабораторным животным приводит к снижению аланинаминотрансферазы на 49-31 %, аспартатаминотрансферазы - на 45-20 %, увеличению уровня общего белка на 25-29 % и снижению количества малонового диальдегида на 42-31 % в зависимости от течения токсического процесса.
Лечебно-профилактическая эффективность комплексного применения антигельминтика и разработанного экспериментального образца сорбционно-детоксикационного препарата при проведении дегельминтизации лани европейской составляет 100 %.
Применение разработанного экспериментального образца сорбционно-детоксикационного препарата лабораторным животным и диким копытным нивелирует токсическое влияние паразитов и их метаболитов, снижает антигенную нагрузку, защищает клетки и ткани организма животных от повреждающего действия свободных радикалов, тем самым способствует повышению устойчивости организма животных к неблагоприятным факторам среды.
СПИСОК ОСНОВНЫХ ИСТОЧНИКОВ
1. Куликов, В. А. Отражение межвидовых взаимоотношений гельминтов в реакциях организма песца на смешанную инвазию / В. А. Куликов, Л. В. Аникиева // Материалы IX науч. конф. укр. паразитол. об-ва. : в 2 ч. - Киев : Наукова думка, 1980. - Ч. 2. - С. 198-199.
2. Полоз, С. В. Особенности иммунологического проявления воздействия гельминтов интродуцированных видов млекопитающих / С. В. Полоз, Е. И. Анисимова // Сучаст проблеми бюлогп, екологп та хми : зб1рка матер1ал1в III М1жнародно! науково-практично! конференцл (1113 травня 2012 року). - Запор1жжя, 2012. - С. 466-467.
3. Полоз, С. В. Формирование паразитоценотических отношений простейших и нематод в патогенезе инвазионных болезней млекопитающих животных / С. В. Полоз, Е. И. Анисимова, А. И. Полоз // Труды 8 Республиканской научно-практической конференции «Современные аспекты патогенеза, клиники, диагностики, лечения и профилактики паразитарных заболеваний». -Витебск, 2012. - С. 151-154.
4. Арикин, А. В. Коррекция иммунного ответа у цыплят, зараженных смешанной инвазией /
A. В. Арикин // Ветеринария. - 1997. - № 1. - С. 30-35.
5. Малов, Д. Н. Ассоциативное проявление балантидиоза и эшерихиоза свиней: эпизоотология, меры борьбы : автореф. дис ... канд. вет. наук : 16.00.03 / Д. Н. Малов. -Н. Новгород, 2004. - 20 с.
6. Bristol, J. Interspecific interaction between Nippostrongylus brasiliensis and Eimeria nischulzi in the rat / J. Bristol, Al. Pinon, L. Mayberry // J. Parasitol. - 1983. - Vol. 69, iss. 2. - P. 372-374.
7. Anke, M. The leading role in solving these problems is played by sorbents of various nature / M. Anke, D. Meisser, C. F. Mills // Verlag Media Touristik. - 1973. - 1156 p.
8. Европейская конвенция о защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных или в иных научных целях // Серии европейских договоров - 123. - Страсбург, 1986. - 13 с. - Режим доступа: https://rm.coe.int. - Дата доступа: 14.04.2016.
9. Котельников, Г. А. Гельминтологичекие исследования животных и окружающей среды / Г. А. Котельников. - М. : Колос, 1984. - 207 с.
10. Решетников, В. И. Оценка адсорбционной способности энтеросорбентов и их лекарственных форм / В. И. Решетников // Химико-фармацевтический журнал. - 2003. - Том 37, № 5. - С. 28-32.
11. Новочадов, В. В. Эндотоксикоз: моделирование и органопатология : моногр. /
B. В. Новочадов, В. Б. Писарев. - Волгоград : ВолГМУ, 2005. - 240 с.
12. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / ред.: Р. У. Хабриев [и др.]. - М. : Медицина, 2005. - 832 с.
13. Yagi, K. A simpl fluorometric assay for lipoperoxide in blood plasma / K. Yagi // Biochem. Med. - 1976. - Vol. 12, № 2. - P. 21-26.
14. ГОСТ 12.1.007-76 ССБТ. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности. - М. : Стандартинформ, 2007. - Режим доступа: http://docs.cntd.ru/document. - Дата доступа: 08.05.2016.
15. Методические указания по токсикологической оценке препаратов и веществ, применяемых в ветеринарии / Министерство сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь, Национальная академия наук Беларуси, РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С. Н. Вышелесского»; [подготовили: А. Э. Высоцкий и др.]. - Минск, 2006. - 34 с.
16. Плященко, С. И. Определение естественной резистентности организма сельскохозяйственных животных (методические рекомендации) / С. И. Плященко, Г. К. Волков, Т. В. Сидоров. - Минск : Западное отделение ВАСХНИЛ, 1985. - 35 с.
17. Cunningham, A. J. Self-tolerance maintained by active suppressor mechanisms / A. J. Cunningham // Transpl. Rev. - 1976. - Vol. 31. - P. 23-43.
Поступила в редакцию 11.05.2020 E-mail: lana.poloz@gmail.com
S. V Polaz
THE DEVELOPMENT OF THE SORPTION-DETOXIFICATION DRUG'S EXPERIMENTAL SAMPLE AND IT'S PROPERTY'S CHARACTERISTIC FOR INCLUSION TO THE WILD ANINALS RESISTANCE INCREASING METHOD
Developed experimental model of biosafety preparation which has properties of sorption and detoxication eliminates the toxic effects of parasites associations in various ecological niches and their metabolites. Also the drug reduces the antigen load, protects cells and tissues of animals against the damaging effect of free radicals and enhances the protective properties of the body.
Keywords: biosafety preparation, parasitosis, toxic effect, immunological protection.
