CC BY
95
АКУШЕРСТВО / ГИНЕКОЛОГИЯ / БИОТЕХНИКА РАЗМНОЖЕНИЯ
УДК 636.32/38.082.453.5
Разработка эффективных схем индукции полиовуляции у молочных коз с применением различных препаратов
П.В. Аксенова, кандидат биологических наук, М.М. Айбазов, доктор сельскохозяйственных наук,
Д.В. Коваленко, кандидат биологических наук
ГНУ «Ставропольский НИИ животноводства и кормопроизводства» РАСХН (Ставрополь)
Ключевые слова: зааненская порода, козы, крестар, оваген, полиовуляция, трансплантация, хорулон Сокращения: АЕ—арморовские единицы, ДВ—дейст ву-ющее вещество, ФСГ — фолликулостимулирующий гормон
Введение
В настоящее время на базе опытной станции ГНУ СНИИЖК Россельхозакадемии (Ставрополь) проводятся экспериментальные работы по получению первичных коз-продуцентов, содержащих ген лактофер-рина человека [1]. Ключевой момент метода — разработка эффективной схемы индукции полиовуляции. В то же время высокая вариабельность показателей реакции полиовуляции и несинхронность овулирования созревших фолликулов приводит к получению эмбрионов, находящихся на разных стадиях развития. Большой процент выхода неоплодотворенных ооцитов и непригодных для трансплантации эмбрионов служит главной помехой полномасштабного применения метода [2.. .5].
Цель исследования
Изучить эффективность применения различных гонадотропных препаратов для индукции полиовуляции у коз-доноров и разработать эффективные схемы индукции полиовуляции.
Материалы и методы
В исследованиях использовали коз зааненской породы в возрасте от 2 до 4 лет. В отдельных экспериментах формировали по две группы интактных животных, фолликулогенез у которых индуцировали по собственным схемам.
Обработка состояла из двух этапов: синхронизации половых циклов у животных (использовали интрава-гинальные пессарии либо ушные импланты, пропитанные прогестагенами) и собственно индукции полиовуляции (посредством различных фолликулостимулирующих препаратов).
При обработке применяли следующие гормональные препараты:
• мегестролацетат, спиртовым раствором которого пропитывали интравагинальные пессарии;
• крестар (ДВ норгестамет) — ушные импланты и раствор для инъекций;
• оваген (ДВ овечий питуитарный ФСГ);
• фоллигон (ДВ сывороточный гонадотропин жеребых кобыл);
• хорулон (ДВ хорионический гонадотропин) и ФСГ-супер (ДВ свиной ФСГ).
Препараты мегестролацетат и крестар использовали для синхронизации полового цикла; ДВ препаратов, как аналоги прогестерона, создавали в организме условия для имитации лютеиновой фазы полового цикла. За 60 ч до извлечения имплантов (пессариев) животным однократно инъецировали фоллигон. Для подготовки яичников к полиовуляции дробно вводили ФСГ-супер либо оваген. Для синхронизации овуляций использовали хорулон. Общая схема обработки приведена на рис. 1.
Фоллигон Хорулон
Импланты/пессарии
Оваген/ФСГ-супер
Рис. 1. Рабочая схема индукции полиовуляции у коз
Результативность (достижение состояния охоты) фиксировали рефлексологическим путем (использовали козлов-пробников). Наличие и качество полиовуляции определяли по результатам лапароскопии либо лапарото-мии (наличие и количество желтых тел) и вымывания клеток. К пригодным относили ооциты (эмбрионы) на стадии двух пронуклеусов, двух- и четырехбластомер-ные, без нарушений в строении и целостности оболочки, развивающиеся при инкубировании. Особенности отдельных экспериментов приведены далее.
Результаты
Эксперимент 1. Сравнивали эффективность про-лонгаторов лютеиновой фазы. Для этого козам первой подопытной группы (п = 5) интравагинально ввели пессарии с мегестролацетатом в дозе 30 мг, козам второй подопытной группы (п = 5) — ушные импланты крес-тар в дозе 1,5 мг норгестамета и однократно инъецировали раствор крестар в дозе 1,5 мг норгестаме-та и 1,9 мг эстрадиола. Срок введения имплантов — 12 дней, пессариев — 14 дней. Дальнейшая гормональная обработка в обеих группах была одинаковой.
По результатам исследования было отмечено однозначное преимущество препарата крестар: 100 % животных пришли в охоту в течение 24 ч после извлечения импланта при реакции полиовуляции 9,3 (против 50 % животных и полиовуляции 8,0 фол/гол. при использовании пессариев). Таким образом, из двух способов пролонгации лютеиновой фазы полового цикла и синхронизации охоты были выбраны ушные имп-ланты крестар.
Дальнейшие исследования шли по двум параллельным путям: разрабатывались оптимальные схемы с использованием препаратов ФСГ-супер либо оваген в качестве стимуляторов фолликулогенеза.
Разработка эффективных схем индукции полиовуляции у молочных коз с применением различных препаратов
Эксперимент 2. ФСГ-супер вводили начиная с 60 ч до извлечения импланта, дробно, по убывающей, с интервалом 12 ч. В первой подопытной группе (п = 9) — в общей дозе 24 АЕ/гол, во второй группе (п = 9) - 48 АЕ/гол. Кроме того, всем животным также за 60 ч до извлечения импланта делали однократную инъекцию 500 ед. фоллигона и по прихождении коз в охоту инъецировали им 300 ед. хорулона.
При аппликации данных схем половую охоту проявляли 100 % животных. В первой группе множественная овуляция отмечена у 80 % коз при реакции полиовуляции 6,42 ± 1,12 желтых тел и выходе пригодных эмбрионов 65,6 %; во второй группе показатели составили: 100%-я охота, 12,55 ± 1,33 желтых тел и 62,1 % пригодных эмбрионов. По результатам эксперимента с применением ФСГ-супер в качестве рабочей была принята вторая схема.
Эксперимент 3. При разработке схемы с препаратом оваген варьировали дозы препарата, время и кратность введения. Для этого была проведена серия опытов на 41 животном. Козам за 60 ч до извлечения импланта однократно инъецировали 500 ед. фоллигона, а для синхронизации овуляций — 300 ед. хорулона.
Наилучшей оказалась схема с применением ова-гена в общей дозе 6,4 мг/гол., дробно, восьмикратным введением равных количеств гормона. Состояние охоты отмечено у 100 % животных, реакция полиовуляции - 15,5 ± 1,16 желтых тел, выход полноценных эмбрионов - 74,3 %
Эксперимент 4. Задачей следующего эксперимента было сравнить лучшие схемы с применением ФСГ-супер и овагена. Для этого было сформировано две группы, животных обрабатывали по приведенным выше схемам. Результаты эксперимента отражены в таблице. Данный эксперимент подтвердил высокую эффективность обеих схем индукции суперовуляции. Уровень полиовуляции в первой группе составил 14,3 ± 1,54 овуляций на донора, во второй - 12,9 ± 1,46 при выходе пригодных эмбрионов 68,7 и 64,3 % соответственно. Различия между группами были не достоверны.
Не наблюдали «перестимуляции» яичников, кист, а также созревших, но не лопнувших фолликулов. Раз-
Библиография
Рис. 2. Полиовуляция в яичниках козы при обработке овагеном (а) и ФСГ-супер (б)
меры яичников составили: 2,8 ± 0,26 х 2,1 ± 0,20 см в первой группе и 2,7 ± 0,33 х 2,0 ± 0,24 см во второй. Отмечена разница в диаметре желтых тел: 5...7 и 2...3 мм соответственно (рис. 2).
Выводы
Обе разработанные схемы достаточно эффективны, при этом достигается высокая полиовуляция с большим процентом выхода пригодных эмбрионов. Однако если учесть, что в первой группе козы получили с овагеном всего 5,6 мг овечьего питуитарного ФСГ на голову, а во второй группе с ФСГ-супер — 48 мг свиного ФСГ, то, принимая во внимание риск нарушения гомеостаза организма животного при введении большого количества экзогенного гормона, более предпочтительна первая схема.
Результаты индукции полиовуляции у коз, эксперимент 4
Показатель Группа 1: схема с применением овагена (n = 6) Группа 2: схема с применением ФСГ-супер (n = 6)
Проявили половую охоту, % 100,0 100,0
Реагировало полиовуляцией, % 100,0 100,0
Реакция полиовуляции, число желтых тел 14,3 ± 1,54 12,9 ± 1,46
Извлечено эмбрионов на одного донора, всего в т ч.: пригодных непригодных из них неоплодотворенных ооцитов 12,6 ± 1,25 8,7 ± 0,49 4,0 ± 0,19 2,3 ± 0,25 11.2 ± 1,37 7.2 ± 0,50 4,0 ± 0,22 2,8 ± 0,31
Выход пригодных эмбрионов, % 68,7 64,3
1. Айбазов М.М., Аксенова П.В. Лактоферрин человека от трансгенных коз 1. Особенности физиологии репродукции молочных коз зааненской породы // Вестник ветеринарии, 2010; 3 (54): 12—16.
2. Трубникова П.В., Айбазов ММ, Милошенко Д.С. Результаты индукции множественной овуляции у зааненских коз // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные, 2007; Спец. выпуск: 37.
3. Krisher R.L., Gvardauskas F.C., Page R.L., Russel C.G., Canseco R.S., Sparks A.E.T., Velander V.N., Jonson J.L. and Pearson R.E. Ovulation
rate, zygote recovery and follicular populations FSH-superovulated goats treated with PGF and/or GnRH // Theriogenology, 1994; 41:491—498.
4. Cameron A.W.N., Battye K.M. and Trounson A.O. Time of ovulation in goats (Capra Hircus) induced to superovulate with PMSG // J. Reprod. Fertil., 1988, 136:747—752.
5. Pendleton R.J, Youngs C.R., Rorie R.W., Pool S.H., Memon M.A. and Godke R.A. Follicle stimulating hormone versus pregnant mare serum gonadotropin for superovulation of dairy goats // Small Ruminant Research, 1992; 8: 217—247.
Summary
P.V. Aksenova, M.M. Aibazov, D.V. Kovalenko. Effective Schemes of Polyovulation Induction in Dairy Goats with Different Hormonal Preparations Application. The scheme of induction superovulation induction in dairy goats as elements of the transgenic animals biotechnology are developed. Efficiency of application various hormonal preparations for folliculogenesis stimulation and poliovulation induction in goats-donors is studied.
РВЖ • СХЖ • № 4/2012
