CC BY
27
УДК 544.252.4
Н. М. Селиванова, А. Ф. Назмиева
РАЗРАБОТКА ЭФФЕКТИВНОГО ЛЮМИНЕСЦЕНТНОГО ЗОНДА ДЛЯ МОЛЕКУЛЯРНОГО РАСПОЗНАВАНИЯ АСКОРБИНОВОЙ КИСЛОТЫ
Ключевые слова: комплекс тербия, аскорбиновая кислота, эффект тушения люминесценции, мицеллярные среды.
Изучены процесс комплексообразования и люминесцентные свойства хелата тербий (III) - 1,10-фенантролин с аскорбиновой кислотой, солюбилизированного мицеллярными средами различных типов ПАВ. Показано, что введение аскорбиновой кислоты приводит к образованию разнолигандного комплекса, демонстрирующего эффект тушения люминесценции иона тербия (III). Предложено использование данного комплекса в качестве аналитической формы для молекулярного распознавания аскорбиновой кислоты с пределом обнаружения 7,4*10'5 моль/л.
Key words: terbium complex, ascorbic acid, quenching effect, micellar media.
The process of complexation and luminescent properties of terbium (III) chelate with 1,10-phenanthroline in the presence of ascorbic acid solubilized by micellar media of several type of surfactant. The introduction of ascorbic acid leads to the ternary complex formation and quenching effect of luminescence of terbium ion. This complex allows for the determination of ibuprofen with the detection limit - 7,4-x10'5 mol/L.
Введение
В настоящее время в аналитической химии, в химических и биологических исследованиях широко используют высокочувствительный флуориметри-ческий метод анализа, основанный на сенсибилизированной люминесценции комплексов лантаноидов. Этот метод эффективен для определения соединений, способных образовывать с ионами лантаноидов ¡-П(Ш) комплексы, в которых реализуется связь ¡-П(Ш)- аналит и последний выполняет роль либо сенсибилизатора, либо тушителя [1,2].
Ввиду уникальных фотофизических свойств комплексов ¡.п(Ш), таких как узкая полоса эмиссии и высоким квантовым выходом люминесценции оптические зонды на их основе применяются в качестве высокочувствительных аналитических сенсоров, для визуализации различных поражений в клетках и тканях, а также мониторинга доставки лекарств [3,4].
В аспекте молекулярного распознавания различных лекарственных средств выдвигаются требования к разработке простых, экспрессных и высокочувствительных методик их определения в дозированных лекарственных препаратах. В этом плане оптические зонды на основе комплексов лантаноидов представляют значительный интерес, обеспечивая необходимую точность, чувствительность и экс-прессность определения [1,5].
С помощью сенсибилизированной люминесценции лантаноидов определяют лекарственные препараты различных классов, молекулы которых способны к комплексообразованию с ионами ¡-П(Ш): производные бензойной и салициловой кислот [6,7]; нестероидные противовоспалительные лекарственные препараты - производные антраниловой, про-пионовой кислот, ибупрофена [8-10]; антибиотики тетрациклинового ряда [11].
Аскорбиновая кислота, известная также как витамин С, выполняет биологические функции восстановителя и кофермента метаболических процессов. Является одним из основных веществ в рационе человека, которое необходимо для нормального
функционирования соединительной и костной ткани. Она играет важную роль в таких биологических процессах как захват свободных радикалов, синтез белка коллагена и ряда гормонов, в том числе антистрессовых, способствует поддержания гемостаза, улучшает способность организма усваивать кальций, выводит токсины, регулирует обмен веществ. Дефицит аскорбиновой кислоты в организме может привести к сердечно-сосудистым и онкологическим заболеваниям [12]. На сегодняшний день различные аналитические методы применяются для детектирования аскорбиновой кислоты, включающие спек-трофотометрические, хроматографические, калориметрические, электрохимические [13-15]. Несмотря на то, что перечисленные методы чувствительны и весьма специфичны, некоторые недостатки все же существуют. Например, хроматографические методы требуют дорогостоящей аппаратуры и сложного процесса подготовки пробы.
Вопросы определения аскорбиновой кислоты на основе сенсибилизированной люминесценции тербия (III) были рассмотрены в работах [16,17] на примере комплекса нитрата тербия (III) с гидрокси-метилом в метаноле и комплекса хлорида тербия (III) с ацетилацетоном в водной среде. Пределы обнаружения аскорбиновой кислоты в первом случае составил 1,2-10-7 моль/л, во втором - 0,008 моль/л.
С целью поиска более эффективных условий для молекулярного распознавания аскорбиновой кислоты и повышения предела обнаружения флуоримет-рическим методом, в данной работе были изучены процессы комплексообразования и люминесцентные свойства комплекса нитрата тербия (III) с лигандом - 1,10-фенантролином и аскорбиновой кислотой. Выявлено влияние таких факторов, как pH среды и солюбилизации мицеллярными средами на люминесценцию иона Tb(III).
Экспериментальная часть
Пентагидрат нитрата тербия Tb(NO3)35H2O, 1,10-фенантролин C12H8N2 (Phen), монододецило-вый эфир декаэтиленгликоля
C12H25O(CH2CH2O)10H (C12EO10), додецилсульфат натрия CH3(CH2)10CH2OSO3Na (C12H25SO4Na), гек-содецилтриметиламмоний бромид
CH3(CH2)15N(Br)(CH3)3 (C1gH42BrN) являлись коммерческими продуктами фирмы «Aldrich» и использовались без дополнительной обработки. Аскорбиновая кислота C6H8O6 (Asc) фирмы «Татфарм». Растворы всех основных и вспомогательных химических реактивов готовили на бидистиллированной воде, концентрация растворов составляла 1,6-10-3 моль/л.
Для получения комплекса Tb(Phen) навеска 1,10-фенантролина m = 0,002 г растворялась в 100 мкл этанола, исходя из мольного соотношения Tb:Phen - 1:1, и приливалась к водному раствору пентагидрата нитрата тербия m = 0,005 г, доводя дистиллированной водой либо раствором ПАВ (Спав = 1,6^ 10-3 моль/л) до метки колбы объемом 5 мл. Далее раствор перемешивали в течение 3-4 часов при комнатной температуре.
Для получения раствора с аскорбиновой кислотой навеску вещества m = 0,01408 г доводили дистиллированной водой до метки в колбе объемом 20 мл. Концентрация кислоты составляла 4 10-3 моль/л. Раствор перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре.
Электронные спектры поглощения регистрировали на спектрофотометре «Lamda-9» фирмы Perkin-Elmer. Использовали кварцевые кюветы с длиной оптического пути 1 см.
Спектры люминесценции регистрировали на спектрофлуориметре «Cary Eclipse» фирмы Varian. Измерения проводили в кварцевой кювете с толщиной 1 см, сигнал регистрировали под углом 90° к возбуждающему свету. Светофильтры использовались в автоматическом режиме. Параметры дифракционной щели возбуждения 20 нм, излучения - 5 нм.
Для измерения размеров мицеллярных и везикулярных агрегатов в полученных системах использовали метод динамического рассеяния света. Исследования проводили на приборе Malvern Zetasizer Nano компании Malvern Instruments. Перед измерениями растворы для удаления пыли фильтровали через гидрофильный фильтр Millipore фирмы Millex HV Filter Unit 0,45 цт. Угол рассеяния света составлял 0=173. Эксперимент был выполнен при температуре 25 °С. Значение pH растворов измеряли на pH -метре Knick. Варьирование pH осуществляли с помощью растворов 1N HCl и 0,01 М NaOH.
Обсуждение результатов
Эффективность переноса энергии и интенсивность сенсибилизированной люминесценции зависит от ряда факторов, таких как природа лиганда, тип иона лантаноида, растворителя, величина pH среды и разность в энергиях триплетного уровня лиганда и излучающего уровня лантаноида. Люминесценция иона Tb(III) осуществляется только с определенных резонансных уровней. Величина энергии триплетного уровня Ej для Phen составляет 22075 см-1, соответственно это значение выше, чем энергия резонансного уровня иона тербия 20950 см-1 [18]. Это делает возможным перенос энергии возбу-
ждения от молекулы органического лиганда к иону тербия, что способствует проявлению сенсибилизированной люминесценции.
Для оценки возможного взаимодействия комплекса ТЬ(РЬеп) с аскорбиновой кислотой были проведены спектрофотометрические исследования.
1,G-
G,B-
G,6-
G,4
G,2
G,G
25G
26G
27G
2BG
29G
3GG
длина волны, нм
Рис. 1 - Спектры поглощения Tb(Phen) -1 и Tb(Phen)- Asc - 2
комплексов
Как видно из рисунка 1 в присутствии аскорбиновой кислоты наблюдается гипсохромный сдвиг с 267 нм к 264 нм. Полученные данные свидетельствуют о возможном комплескообразовании неподе-ленной электронной пары кислорода аскорбиновой кислоты с вакантными орбиталями иона тербия.
66D Л, нм
а б
Рис. 2 - Спектры возбуждения (а) и люминесценции (б) систем ТЬ(РЬвп) -1 и ТЬ(РЬеп)-Азо-2,
СА8с=1,4'10-4 моль/л
В спектрах возбуждения и люминесценции системы ТЬ(РЬеп)-Аво наблюдается значительное снижение интенсивности по сравнению с системой ТЬ(РЬеп) (рис. 2а,б). Полученные данные свидетельствуют об эффекте тушения люминесценции иона ТЬ(111). При добавлении аскорбиновой кислоты С= 1,4-10-4 моль/л интенсивность люминесценции уменьшается в 3 раза, при этом время жизни люминесценции уменьшается от 194 до 123 мкс.
Влияние мицеллярных растворов ПАВ
Как показано в работах Штыкова с соавторами [11,19,20], солюбилизация комплекса лантаноида в наноразмерных мицеллах ПАВ сопровождается дополнительным возрастанием интенсивности сенсибилизированной люминесценции благодаря концен-
8D
D
45D
6DD
65D
Л нм
трированию, сближению реагирующих компонентов, повышению устойчивости комплексов, а также экранированию люминесцирующей частицы от посторонних тушителей. В связи с этим нами было изучено влияние различных типов ПАВ.
В таблице 1 представлены характеристики используемых ПАВ. Рабочие концентрации растворов были выше ККМ.
Таблица 1 - Характеристика ПАВ
ПАВ Используемая ККМ, Б,
концентрация моль/л нм
Спав, моль/л
C12EO10 1,6-10-3 5,68-10-3 8
C12H25SO4Na 8,3-10-3 8,3-10-3 5
C19H42NBr 3-10-2 3,3-10-4 6
При введении в растворы ПАВ комплекса ТЬ(РЬеп)-Авс не наблюдается единой закономерности изменения размера мицелл ПАВ (рис. 3). Так в случае, использования С12ЕО10 размер мицелл в присутствии комплекса ТЬ(РЬеп)- Авс составляет 1,7 нм, в случае С12Н253О4Мд - размер увеличивается 7 нм, а при использовании С19Н42МВг размер агрегатов несколько уменьшается до 5,5 нм.
2 .3
0 2 4 6 8 10 12 14 16 Размер частиц d, нм
Рис. 3 - Кривые распределения частиц по размерам, СА8С=1,4-10"4 моль/л. 1 - С19Н42йВг -ТЬ(РЬеп)- Лее; 2 - C12EO10- Tb(Phen)- Asc; 3-C12H25SO4Na- Tb(Phen)- Asc
Данные флуориметрии показали, что эффективность люминесценции (п), оцениваемая как отношение интенсивностей основных энергетических переходов п = К^4-^5)Л(Ъ4-^б)) , комплекса ТЬ(Р^1еп) в присутствии мицелл различного типа ПАВ существенно не изменяется (табл. 2). Однако, изучение времени жизни возбужденного состояния иона тербия, позволило выявить дифференцирующий эффект ПАВ (рис. 5).
В таблице 2 представлены данные значений времени жизни возбужденного состояния комплекса тербия в организованных средах.
Как видно, время жизни в присутствии мицелл С12ЕО10 возрастает. Полученные данные согласуются с нашими ранними работами, где показано взаимодействие ионов лантаноидов с неионными ПАВ [21], что видимо, способствует наилучшей со-любилизации комплекса. Таким образом, для дальнейших исследований использовался неионный ПАВ С12ЕО10 .
140-, 12010080604020-
I I \
2 I \ \ \ 1 ! V \ \ \ \ \ V \ ч 3. \ 4
0,0
0,5
т-
1,0
1,5
Рис. 4 - Кривые затухания люминесценции комплекса ТЬ(РЬеп)- Лее, солюбилизированного растворами ПАВ: 1 - C12EO10; 2 - C12H25SO4Na; 3 - C19H42NBr
Таблица 2 - Время жизни возбужденного состояния и эффективность люминесценции комплекса ТЬ(РЬеп)- Лее в организованных средах (¿=545 нм, переход 5й4 ^ 7Р5)
ПАВ C12EO10 C12H25SO4Na C19H42NBr
т, мкс 194 40 187
п 1,98 1,98 1,91
Влияние pH среды
Интенсивность сенсибилизированной люминесценции комплексов 1-П(111) значительно зависит от рН среды, что связано с кислотно-основными равновесиями лиганда и комплекса, процессами гидролиза ионов лантаноидов [22]. В связи с этим нами было проведено исследование влияния рН среды на эффективность люминесценции.
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
0 2 4 6 8 10 12
pн
Рис. 5 - Влияние рН на эффективность люминесценции комплексов Tb(Phen) - 1 и ТЬ(РЬеп)-
Лэе - 2, Са,С= 5,9-10"5 моль/л
Как видно из рисунка 6, при увеличении рН параметр п люминесценции анализируемых комплексов сначала возрастает, достигая максимума, затем уменьшается. Для комплекса ТЬ(РЬеп) наблюдается небольшое плато в диапазоне рН 5,4-7,2; для комплекса ТЬ(РЬеп)Аэс максимальное значение параметра п отмечается при рН 7-8. Увеличение рН приводит к резкому снижению интенсивности люминесценции. Вероятно, это объясняется тем, что при
1
0
время, мс
30-
25-
20
15
10-
5-
0
рН>7,2 для ТЬ(РЬеп) (при рН>8 для ТЬ(РЬеп)Азо) комплексные соединения разрушаются с образованием гидроксида тербия - ТЬ(ОН)3. Низкая интенсивность люминесценции исследуемых комплексов в кислой области свидетельствует о том, что степень образования комплексного соединения мала. Для комплекса ТЬ(РЬеп)-Аво характерен более широкий диапазон существования люминесценции в пределах рН равным 2-10, с максимальной интенсивностью люминесценции при рН 7-8. Таким образом, рН рабочих растворов комплекса ТЬ(РЬеп)-Аво поддерживался в пределах 7-8.
Определение предела обнаружения аскорбиновой кислоты
С целью поиска более эффективных условий идентификации аскорбиновой кислоты и его аналогов, в частности увеличения чувствительности определения и понижения предела обнаружения флуори-метрическим методом, были изучены спектры возбуждения и люминесценции ТЬ(РЬеп) в присутствии аскорбиновой кислоты в концентрационном диапазоне 1,6-10-5-6,1-10-4 моль/л.
Как видно из спектров люминесценции (рис. 6) в присутствии различных объемов кислоты наблюдается снижение интенсивности люминесценции. Данный эффект тушения 4/-люминесценции иона ТЬ(111) был использован для определения аскорбиновой кислоты по градуировочному графику в координатах «эффективность люминесценции - концентрация аскорбиновой кислоты», представленного на рисунке 7.
180 160 140 120 100 80 60 40 20
V,
доб' мл -0
- - 0,006 ■•■■ 0,015 — 0,02 ■— 0,03
.....0,04
•■— 0,06 ■-----0,07
450
500
А-
650
длина волны,нм
Рис. 6 - Спектры люминесценции комплекса Tb(Phen) в присутствии различной концентрации аскорбиновой кислоты
В области концентраций 0,016-0,14 мкг/мл график линеен и апроксимируется уравнением
y = 1,268x + 28,936 (R= 0,99).
Согласно [23] предел обнаружения, в случае линейной зависимости детектируемой величины от концентрации вещества корректно определяется по 35 критерию, согласно которому минимальное содержание вещества отклонение определяется по уравнению 1:
C . = 3S /Ь 1
min 0
где S0 - стандартное отклонение при измерении сигнала холостого опыта, b -коэффициент инстру-
ментальной чувствительности, характеризующий изменение сигнала с изменением концентрации, численно равный тангенсу угла наклона.
5,5 5,0 4,5 4,0 h 3,5 3,0 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5
0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 0,12 0,14
Рис. 7 - Градуировочный график для определения содержания аскорбиновой кислоты
Согласно уравнению 2:
S0 =
1 2 -Z (xi - x)
n -1
где, n- объем выборки, Xj-i-ый элемент выборки, х-средняя арифмическая выборка.
¿(x - xf = 2,521.
В нашем случае значение So= 0,71. Используя уравнения 1 и 2, был найден предел обнаружения аскорбиновой кислоты, который составил Cmin = 7,4-10-5 моль/л.
Заключение
Таким образом, изучены процесс комплексооб-разования и люминесцентные свойства комплекса тербия (III) с 1,10-фенантролином и с аскорбиновой кислотой. Показано, что вследствие образования разнолигандного комплекса наблюдается тушение люминесценции иона тербия (III). Выявлен дифференцирующий эффект солюбилизации различными типами ПАВ на время жизни возбужденного состояния комплекса Tb(Phen)- Asc. Наибольшее время жизни наблюдается при использовании мицелл неионного ПАВ. Определены оптимальные значения рН равные 7-8. Комплекс Tb(Phen) эффективен в молекулярном распознавании аскорбиновой кислоты с пределом обнаружения 7,4-10-5 моль/л, что
превышает известный аналог Ciim описанный в работе [17].
810-3
Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РФФИ № 14-03-00109
Литература
1. Штыков, С.Н. Комплексы с переносом энергии в возбужденном состоянии в организованных средах для флуориметрического определения биологически активных веществ / С. Н. Штыков, Т. Д. Смирнова, Н. В. Нев-рюева, Ю. Г. Конюхова // Биомед. - технол. и радиоэлектроника. - 2006. - 12. - 4-9.
2. Егорова А. В. Сенсибилизированная люминесценция ионов лантанидов и ее применение в биоанализе/ А. В.
0,0
Casc, мкмоль/л
2
0
Егорова, Ю.В. Скрипинец, Д. И. Александрова, В. П. Антонович// Методы и объекты химического анализа. -2010. - Т. 5. - № 4. - С.180-201.
3. Bunzli G. J.-C. Lanthanide Luminescence for Biomedical Analyses and Imaging/ J.-C. G. Bunzli//Chem. Rev. - 2010. - 110. - P. 2729-2755.
4. Rai M. Enhanced red upconversion emission, magnetoluminescent behavior, and bioimaging application of NaSc0 75, r0 02, Yb0.i8,Gd0.05, F4AuNPs nanoparticles. / M. Rai, S. Kumar Singh, A. Kumar Singh, R. Prasad, B. Koch, K. Mishra, S. Bahadur Rai // ACS Appl. Mater. Interfaces.-2015. - 7 (28) - P. 15339-15350.
5. Zhou J. Upconversion Luminescent Materials: Advances and Applications. / J. Zhou, Q. Liu, W. Feng, Y. Sun, F. Li. // Chem. Rev. - 2015. - 115- P.395-465.
6. Ortega-Algar S. Flow-injection solid surface lanthanide-sensitized luminescence sensor for determination of p-aminobenzoic acid. / S. Ortega-Algar, N. Ramos-Martos, A. Molina-Diaz // Anal Bioanal Chem. - 2008. - 391 - P.715-719.
7. Panadero S. Rinetic determination of salicylic acid, diflunical ad their mixture based on lanthanide - sensitized luminescence. / S. Panadero, A. Gomes - Hens,D. Perez-Bendito. // Anal. Chim. Acta. - 1996. - V. 329 - P.135-141.
8. Wang Q. A New fluoride luminescence quencher based on a nanostructured covalently bonded terbium hybrid material. / Q. Wang, C. Tan, H. Chen, H. Tamiaki. // J. Phys. Chem. C. - 2010. - 114 - P.13879-13883.
9. Selivanova N. Luminescent complexes of terbium ion for molecular recognition of Ibuprofen / N. Selivanova, K. Vasilieva, Y. Galyametdinov // Luminescence. - 2014. -V.29. - N.3 - P. 202-210.
10. Селиванова Н.М. Определение ибупрофена на основе сенсибилизированной люминесценции комплекса тербия (III) / Н.М. Селиванова, К.С. Васильева, Ю.Г. Галя-метдинов // Вестник Казанского технологического университета. 2012. - Т. 15. - № 10. С. 66-70.
11. Shtykov S. N. Fluorimetric determination of tetracyclines with the europium chelate of 1,10-phenathroline in micellar solutions of anionic surfactants / S. N. Shtykov, T. D. Smirnova, Yu. G. Bylinkin, D. A. Zhemerichkin // J. Of Anal. Chem. - 2005. - 60. - P.24-28.
12. Khaw K.T. Relation between plasma ascorbic acid andmortality in men and women in EPIC-Norfolk prospective study: a prospective population study. / KT Khaw, S Bingham, A Welch, R Luben, N Wareham, S Oakes, N Day // Lancet - 2001. - 357 - P.657-663.
13. Guclu K. Spectrophototermic determination of ascorbic acid using copper (II)- neocuproine reagent in beverages and
phannaceuticals. / K Guflu, K Sozgen, E Tutem, M Ozyurek, R Apak // Talanta - 2005. - 65 - P.1226-1232.
14. Gokmen V. Enzymatically validated liquid chromatograph-ic method for the determination ascorbic and dehydroascorbic acids in fruit and vegetables. / Gokmen V, Kahraman N, Demir N, Acar J. // J Chromatogr - 2000. - A. 881 - P.309-316.
15. Zhang LP. Label- free colorimetric sensing of ascorbic acid based on Fenton reactionwith unmodified gold nanopar-ticle probes and multiple molecular logic gates. / L.P Zhang, B Hu, J.H Wang. // Anal Chim Acta - 2012. - 717 - P.127-133.
16. Tan H. Terbium(III) based coordination polymer microparticles as a luminescent probe for ascorbic acid / H. Tan, J. Wu, Y. Chen // Microchim Acta - 2014. - P.014-12.
17. Lun W. Preparation of a Novel Fluorescence Probe of Terbium Composite Nanoparticles and its Application in the Determination of Ascorbic Acid /W. Lun, G. Bian, D. Ling, X. Yingting, H. Shi // Microchim Acta - 2005. - 150 -P.291-296
18. Паркер, С. Фотолюминесценция растворов/ С. Паркер; пер. с англ. Н. Л. Комиссарова, Б. М. Ужинова - М.: Мир, 1972. - 512 с.
19. Смирнова Т.Д. Перенос энергии возбуждения в хела-те европия с доксициклином в присутствии второго ли-ганда в мицеллярных растворах неионных ПАВ/ Т. Д. Смирнова, С. Н. Штыков, В. И. Кочубей, Е. И. Хрячков// Оптика и спектроскопия. - 2011. - Т. 110. - № 1. - С. 6571.
20. Штыков, С. Н. Синергетические эффекты в системе европий - теноилтрифторацетон-1.10-фенантролин в мицеллах блоксополимеров неионных ПАВ и их аналитическое применение / С. Н. Штыков, Т. Д. Смирнова, Ю. В. Молчанова // Журн. анал. химии. - 2001. - 56 (10).
- 1052-1056.
21. Селиванова, Н. М. Влияние ионов лантаноидов на процессы самоорганизации монододецилового эфира тетераэтиленгликоля в водной и водно-деканольной средах / Н. М. Селиванова, М. А. Кузовкова, А. И. Га-леева, Ю. Г. Галяметдинов // Вестник Казанского технологического университета. - 2011. - № 18. - С. 19-26.
22. Панюшкин В. Т, Афанасьев Ю. А, Ханаев Е. И, Гар-новский А. Д, Осипов О. А. Лантаноиды. Простые и комплексные соединения. Изд. Ростовского университета, 1980. - С. 296.
23. Экспериандова Л. П. Еще раз о пределах обнаружения и определения/ Л. П. Экспериандова, К. Н. Беликов, С. В. Химченко, Т. А. Бланк// Журнал анал. химии. - 2010.
- Т. 65. - № 3. - С. 229-234.
© Н. М. Селиванова - д-р хим. наук, проф. каф. физической и коллоидной химии КНИТУ, [email protected]; А. Ф. Назмиева -магистр 1 курса той же кафедры, [email protected].
© N. M. Selivanova - doctor of sciences in chemistry, professor, physical and colloid chemistry department, KNRTU, [email protected]; N. F. Nazmieva - - master 1 course of physical and colloid chemistry department, KNRTU, [email protected].
