CC BY
15
поволжский онкологический
ВЕСТНИК
1'2011
© И.А. Балдуева, Т.Л. Нехаева, А.Б.Данилова, А.В. Новик, А.О. Данилов, В.М. Моисеенко, Е.Н. Имянитов, 2011
УДК 616-006.04-097-078
разработка диагностической панели раково-тестикулярных антигенов для оценки поствакцинального ИммУННОГО ОТВЕТА у больных злокачественными новообразованиями
и.А. Балдуева1,2, т.л. Нехаева1,2, А.Б.Данилова1, А.В. Новик1, А.о%Данилов1, В.М. Моисеенко2, Е.Н. имянитов1,2
1 ФГУ «НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздравсоцразвития РФ, Санкт-Петербург
2 СПб МАПО Росздрава, Санкт-Петербург
Введение
Важным этапом в изучении биологии рака было выявление опухолеспецифических антигенов (ОА), присутствие которых чрезвычайно ограничено в нормальных тканях. Раково-тестикулярные (РТ) гены экспрессированы в опухолях различных гистологических типов и кодируют отдельные строго ОА (MAGE, BAGE, GAGE, LAGE, NY-ESO-1). Обычно они определяются в «молчащем» состоянии в нормальных тканях взрослых и экспрессируются в зародышевых клетках яичка мужчин. Эти ОА являются идеальными мишенями для направленного иммунного воздействия и исключают опасность развития аутоиммунных реакций.
В настоящее время РТ-антигены изучаются и активно используются для создания противоопухолевых вакцин. Поствакцинальные противоопухолевые клоны цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) были обнаружены в периферической крови больных с новообразованиями молочной железы, яичников, мочевого пузыря, гепатоцеллюлярной карциномы, карциномы головы и шеи, глиомы, меланомы. В то же время исследование антиген-специфических клонов ЦТЛ с помощью современных технологий (ELISPOT-анализ*) затруднено в связи с отсутствием специфических диагностикумов и использованием дорогостоящих клеточных технологий.
Цель исследования — разработка и изучение диагностической панели РТ-антигенов для оценки поствакцинального иммунного ответа у больных злокачественными новообразованиями.
* ELISPOT-анализ — Enzyme-linked immunosorbent spot assay.
материал и методы
В исследование включено 40 образцов мононук-леаров периферической крови (МНПК) 5 больных диссеминированной меланомой кожи, получавших вакцинотерапию на основе аутологичных ДК, на-груженых аутологичным и/или аллогенным опухолевым лизатом, экспрессирующих РТ-антигены (NY-ESO-1+, MAGE+, HAGE+, GAGE+), и 4 контрольных образца МНПК, полученных от 4 здоровых лиц.
Для изучения специфической активации Т-клеток МНПК инкубировали:
- с опухолевыми клеточными линиями, содержащими антигены NY-ESO-1, MAGE, HAGE, GAGE;
- лизатом вышеуказанных клеточных линий;
- иммуногенными HLA-A2+ пептидами: MAGE-AÏ (KVLEYVIKV), MAGE-A3 (FLWGPRALV), gp 100 (YLEPGPVTA), Melan-A (ILTVILGVL), tyrosinase (YMDGTMSQV), синтезированными в ГНЦ «Институт особо чистых биопрепаратов», ООО «НПФ Верта» (Санкт-Петербург).
Использовали стандартные IFN-y ELISPOT тест-системы BD Biosciences (США), R&D Systems (Великобритания) и Millpore Corporation (США), в которых анти-IFN-Y моноклональные антитела напрямую связываются с INF-y, секретируемым in vitro-стимулированными культурами МНПК.
Для активации МНПК и обнаружения опухолеспе-цифического иммунного ответа, использовали положительный контроль — поликлональный активатор Т-лимфоцитов фитогемагглютинин («Sigma», США) и ростовые факторы Т-клеток (IL-7, IL-12) («Millpore Corporation», США).
16
Организационные вопросы реализации Национальной онкологической программы российской Федерации
поволжский онкологический
ВЕСТНИК
1'2011
результат
В процессе вакцинотерапии была выявлена секреция 1РЫ-у антиген-специфическими Т-клетками:
- у 3 из 5 больных после 1-го введения вакцины (от 3 до 8 секретирующих клеток из 105 МНПК);
- у 4 из 5 больных после 2-й вакцинации (10—30 секретирующих клеток из 105 МНПК);
- у 5 из 5 больных после 3-й вакцинации (12—40 секретирующих клеток из 105 МНПК).
5 из 5 образцов МНПК больных, получавших вакцинотерапию на основе аутологичных ДК, нагруженных аутологичным и/или аллогенным лизатом ЫУ-ЕБО-1+, МДСЕ+, ИДСЕ+, опухолевых клеток до лечения,
и 4 из 4 образцов МНПК здоровых лиц (контрольная группа) не ответили на стимуляцию опухолевым материалом как в сочетании с И-7, так и в сочетании 11.-7 с 11.-12.
Показатели 5-летней выживаемости при раке легкого (РЛ) в мире не превышают 15% и зависят от своевременной диагностики. Если при I стадии выживаемость достигает 70% и более, то при IV стадии она не превышает 5%. Поскольку наличие клинических проявлений заболевания обычно свидетельствует о распространенном патологическом процессе, необходимо расширение диагностических мероприятий в период бессимптомного развития РЛ, в первую очередь путем совершенствования форм скрининга. Первые попытки скрининга РЛ были предприняты еще в середине XX в. на основе массового применения рентгенографии, флюорографии и цитологического исследования мокроты. Позже была выполнена серия перспективных работ, позволивших сделать предварительную оценку эффективности низкодозной компьютерной томографии как скринингового метода и продемонстрировать целесообразность избирательного его использования. В 2008 г. в Канаде стартовала комплексная
Анализ результатов показал, что специфическая продукция 1РЫ-у является статистически значимой при реактивации МНПК опухолевыми клеточными линиями в сочетании с И-7+И-12 (медиана 34,1) по сравнению с одним И-7 (медиана 5,7) ^=0,003) и лизатом клеточных линий с И-7+ И-12 (медиана 15,05) по сравнению с И-7 (медиана 2,35) ^=0,001). Пилотное исследование с опухолевыми пептидами на 5 образцах показало сопоставимые с опухолевым лизатом результаты (медиана 2; р=0,7).
Выводы
Таким образом, иммуногенные ИЬД-связанные пептиды, полученные из РТ-антигенов, могут рассматриваться в качестве элемента диагностической панели и использоваться в ЕИБРОТ-анализе у больных злокачественными новообразованиями.
программа ранней диагностики РЛ, планирующая обследование более 2 500 курильщиков в возрасте от 50 до 75 лет. Главная цель исследования — выявить наиболее эффективный алгоритм скрининга с использованием методов моделирования рисков (Lam, 2008). В качестве перспективных методов выявления раннего РЛ предлагаются определение различных маркеров крови и анализ компонентов выдыхаемого воздуха. Самое пристальное внимание в последние годы привлекли современные высокотехнологичные методы анализа мокроты и флуоресцентная бронхоскопия.
В исследовании, проведенном в НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова, выполнен параллельный проспективный анализ результатов двух видов тестирования образцов мокроты пациентов, обследовавшихся по поводу различных хронических респираторных заболеваний, с клинически обоснованными подозрениями в отношении рака легкого на основании симптомов или рентгенологических данных. Произ-
© А.А. Барчук, А.И. Арсеньев, А.С. Барчук, Е.В. Левченко, А.М. Щербаков, К.Э. Гагуа, А.О. Нефедов, 2011
УДК 616.24-006.6-07
новые возможности скрининга рака легкого
А.А. Барчук, А.и. Арсеньев, А.с. Барчук, Е.В. левченко, А.М. Щербаков, к.Э. Гагуа, а.о. Нефедов
ФГУ «НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздравсоцразвития РФ, Санкт-Петербург
Организационные вопросы реализации Национальной онкологической программы Российской Федерации
17
