CC BY
89
Табличное значение коэффициента Стьюдента при 95%-ной доверительной вероятности и степени свободы 1=5 равно 2,57, т.е. 1выч. 1^. (95%, 5).
Это позволяет нам считать, что итоговые результаты, полученные данным методом, не отягощены систематической ошибкой.
Расчеты показывают, что истинное значение определяемой величины (количественное содержание циклопла-тама) с доверительной вероятностью Р=95% в единичном определении находится в интервале х1±0,54%, а для среднего значения х ± 0,31%.
При статистической обработке данных, полученных двумя разными аналитиками, рассчитано, что критерий Фишера равен Рвыч= 4,76 < Ртай1 (99%, 5, 5) = 10,97, т.е. методика анализа воспроизводима. Метод линеен: результаты хорошо описываются зависимостью у = 0,42х +0,02; коэффициент корреляции равен 0,9995.
Выводы. Проведенная валидация гравиметрического метода количественного определения циклопла-тама в субстанции показала, что метод позволяет получать достоверные результаты, обладает высокой точностью и воспроизводимостью.
РАСТИТЕЛЬНЫЕ ПРЕПАРАТЫ
С.М. Адекенов1, А.К. Сариев2, Х.И. Итжанова1,
А.Н. Жабаева1, Л.И. Арыстан1, В.П. Жердев2 ИЗУЧЕНИЕ
ОТНОСИТЕЛЬНОЙ БИОДОСТУПНОСТИ КАПСУЛИРОВАННОЙ ФОРМЫ АРГЛАБИНА
1АО НПЦ Фитохимия, Караганда, Казахстан 2НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН, Москва
Задачи исследования. Изучение относительной биодоступности капсулированной ЛФ арглабина.
Материалы и методы. Исследование проведено на 8 кроликах-самцах массой тела 2,8 0,2 кг. В случайном порядке животным с помощью зонда внутрь вводили нативный арглабин в капсулах или субстанцию (суспензия в 1%-ном крахмальном клейстере), а затем, спустя 7 дней - наоборот. Отбор плазмы крови производили из ушной краевой вены в следующие дискретные интервалы времени: 0,0; 0,25; 0,5; 0,75; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 и 4,0 ч. Экстракцию арглабина из плазмы крови проводили ди-этиловым эфиром. Количественное определение арглабина в биологических образцах проводилось методом ВЭЖХ. Основные фармакокинетические параметры (ЛиЄ0-м, Ттах, Стах/лиє^, МЯТ, Ъйеь £>) рассчитаны модельно-независимым методом (программа «М-1МЭ»).
Результаты. Сравнительный анализ основных фармакокинетических параметров арглабина показал, что изучаемое соединение всасывается из ЖКТ с различной скоростью. Субстанция арглабина всасывается из ЖКТ в 1,62 раза быстрее, чем при введении в виде капсулы (Стах/ЛиС0 „- для субстанции 1,072 0,229; для капсул -0,660 0,179 ч-1). Время достижения максимальной концентрации (1тах) составило в среднем для субстанции 0,72 0,21 ч.; для капсул - 1,56 0,32 ч. То есть, арглабин из капсулы всасывается в 2,17 раза медленнее, чем при введении в виде субстанции. Необходимо также отметить: ме^ду сравниваемыми ЛФ арглабина существует значимое достоверное различие в параметрах полупе-риода элиминации препарата (Ті/2е1) и среднего времени удерживания молекулы вещества в организме (МЯТ). В случае введения арглабина в виде капсулы препарат в 2,94 раза (Ту2е1) и 1,7 раза (МЯТ) дольше выводится из организма по сравнению с теми же параметрами субстанции. Относительная биологическая доступность (і) арглабина, определяемая отношением индивидуальных значений ЛиС0-м и доз составляет для капсулы по отношению к субстанции в среднем 410,79 276,30 %. Высокую относительную биодоступность арглабина и его замедленное всасывание можно объяснить кислото-устойчивостью капсул, предотвращающей деградацию субстанции в кислой среде желудка и как следствие более полным всасыванием исходного соединения из кишечного тракта в системный кровоток.
Вывод. Выявлена высокая относительная биодоступность капсул арглабина нативного в сравнении с субстанцией (410,79 276,30 %).
Н.В. Бочкова1, А.Х. Досаханов2, В.Б. Сирота1,
Л.Е. Муравлева1, Д. С. Кусаинова1 ОСОБЕННОСТИ ТЕЗИОГРАФИЧЕСКОЙ КАРТИНЫ ПЛАЗМЫ КРОВИ БОЛЬНЫХ РАКОМ ПИЩЕВОДА ПРИ ЛУЧЕВОЙ ТЕРАПИИ С АРГЛАБИНОМ 1КГМА, Караганда, Казахстан 2ННМЦ М3 РК, Астана, Казахстан
Задачи исследования. Изучение тезиографиче-ской картины плазмы крови больных раком пищевода (РП) при лучевой терапии (ЛТ) с арглабином.
Материалы и методы. Объектом исследования являлась кровь 15 больных РП в возрасте от 51 до 74 лет, находившихся на лечении в КГКП «ООД». Из них 12 мужчин, 3 женщины. Среди пациентов у 14 был диагностирован РП III стадии, у 1 - IV стадии. Все больные получали ЛТ динамическим фракционированием дозы: первые 3 дня РОД - 4,5 Гр, далее методом мультифракционирования: РОД - 1,2 Гр 2 раза в день с интервалом в 4,5 ч до СОД, эквивалентной 60-80 Гр классического фракционирования. Забор материала производился утром натощак до проведения курса ЛТ. 8 больным ежедневно перед ЛТ вводили в/в 2%-ный раствор арглабина из расчета 185 мг/м2, суммарная доза препарата варьировала от 4 000 до 9 000 мг (15 введений). Тезиограммы ставили по методу В.Н. Шабалина и С.Н. Шатохиной.
Результаты. Тезиограмма плазмы крови больных РП имеет специфические элементы по сравнению с таковой плазмы здорового человека. Радиальные трещины меняют направленность по окружности, могут иметь конкреции правильной и неправильной формы; конкреций может быть много или мало. После ЛТ тезиограмма имеет особенности: капля по-прежнему не принимает округлой формы, количество амебовидных выпячиваний в 2-3 раза меньше, трех зон, в которых сохраняются листовидные растрескивания, в 4 раза меньше; количество секторов и отдельностей приближено к норме; конкреции приобрели округлую форму и расположены асимметрично. Особенности тезиограммы плазмы на фоне ЛТ с арглабином: фация структурирована, наблюдаются краевая, центральная и не полностью промежуточная зона; центральная зона разбита радиальными трещинами, но нет четкого центра, радиальные трещины ветвятся друг от друга; отдельности очень большие (в одной радиальной трещине может быть всего от 3 до 6 отдельностей); конкреции в отдельности занимают всю площадь, следовательно, их не окружает белковое кольцо.
Выводы. Эти особенности тезиограммы плазмы крови больных РП на фоне ЛТ с арглабином обусловлены снижением интоксикации продуктами распада опухолевой ткани, снижением количества тяжелых молекул, липопротеинов, липидов, белков с низкой градиентной плотностью (альбумин, церулоплазмин и.т.д), присутствием нормального количества белков с высокой градиентной плотностью (гамма-глобулины).
В.П. Дерягина, Н.И. Рыжова, Е.Е. Антошина,
Т.Г. Горькова
ДЕЙСТВИЕ БИОАКТИВНЫХ КОМПОНЕНТОВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ НА РОСТ КАРЦИНОМЫ ЭРЛИХА У МЫШЕЙ ПОД КОНТРОЛЕМ ЭНДОГЕННОГО ОБРАЗОВАНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ОКСИДА АЗОТА ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА
Введение. Экспериментальные и эпидемиологические данные подтверждают превентивную роль в онкогенезе ряда веществ (флавоноидов, индолов, полисахаридов и др.), содержащихся в овощах и фруктах. Ранее нами было показано, что рост карциномы Эрлиха (КЭ) сопровождается усилением эндогенного образования оксида азота и его производных, нитратов (НА) и нитритов (НИ), количество которых увеличивается в прямой зависимости от размера опухоли. Учитывая антиоксидант-ные свойства изучаемых веществ, можно ожидать, что в условиях их регулярного введения мышам с опухолями будет подавлено образование реакционного N0 и, одновременно, снижена скорость роста опухоли.
Цель исследования. Экспериментальное изучение влияния флавоноидов, индолов и разных форм микроводоросли спирулины на рост КЭ под контролем эндогенного образования N0.
Материалы и методы. Исследования проведены на 100 мышах СБА/Ьас и Б1 [(С57В1 СбЛ)] массой тела 2224 г разводки питомника «Столбовая» РАМН. Мыши были разделены на 10 групп, 2 из которых служили контролем. КЭ имплантировали п/к по 10 клеток на мышь, срок наблюдения 24 дня. Изучаемые вещества: флаво-ноиды (Фл) - Пикногенол (Пг, «Віо1аМе8», Франция), препарат из виноградных косточек, стандартизованный по содержанию олигомерных проантоцианидинов (ВК, «Ьа ваМоппещие»), Диквертин (Дк, «Флавир»), фенольные кислоты - галловая (ГК, «Иика») и таниновая (ТК, «Sigma»), индол-3-карбинол (И-3-К, «Sigma»), спи-рулина (Сп, АгїИоіріга рШвпш) и спирулина, обогащенная селеном (Сп^е, ООО «Агро-Виктория»). Вещества в виде водной суспензии вводили мышам рег оі' в течение 14-21 дня до перевивки КЭ и после нее до конца опыта. ТРО рассчитывали по средним объемам и по массе опухоли в % по отношению к контролю. Количественную оценку эндогенного образования НА и НИ по выделению их с суточной мочой проводили на 14-21 дни методом Грисса; антиоксидантную активность веществ изучали хемилюминесцентным методом.
Статистическую обработку результатов проводили с использованием критерия Стьюдента.
Результаты. Показано, что 100 мг/кг ГК, 100 мг/кг ТК, 1 г/кг Сп и 1 г/кг Сп^е увеличивали в 1,4—1,6 раз (р<0,01-0,05) латентный период формирования опухолевых узлов и выражено ингибировали рост КЭ при многократном введении веществ. Максимальные значения эффективности по ТРО на ранних сроках наблюдения составили для ГК, ТК, Сп и Сп^е соответственно 91 %; 78 %; 75 % и 89 % (р<0,01 - 0,05). Пг в дозе 150 мг/кг и И-3-К в дозе 75 мг/кг достоверно тормозили рост КЭ соответственно на 52% и 56% (р<0,01). Статистически значимое ТРО поддерживалось только при действии Пг или ГК, что привело к достоверному уменьшению массы опухоли на 31 % (р<0,01) и 27 % (р<0,05) соответственно. Обогащение селеном на 14 % повышало эффективность ингибирующего действия Сп в отношении КЭ. Препарат из ВК достоверно стимулировал на 45 % (р<0,05) рост КЭ на фоне повышенной продукции N0. Из 8 испытанных веществ только ГК снижала на 34 % образование НА и НИ, в то время как Пг, Дк, В К, ТК и Сп стимулировали их образование на 14-65 %. Отсутствие эффекта антиоксидантов по отношению к эндоген-
ному образованию NO на этапе контроля НС у мышей опытных групп возможно из-за ускорения роста опухолей, сопровождающееся интенсификацией радикальных процессов, в том числе гиперпродукцией NO.
Заключение. ГК, ТК, Сп, Cn-Se, Пг и И-З-К ингибируют рост КЭ и могут рассматриваться в качестве перспективных соединений для более полного изучения их действия на опухолевый рост с целью применения в онкопрофилактике. Поскольку большинство изученных веществ стимулировали эндогенное образование производных NO у мышей с КЭ на этапе ускоренного роста опухоли, представляется важным изучение его образования на этапе торможения роста опухоли.
А.Б. Капитанов1, П.А. Капитанов2, М.Я. Шашкина1, А.В. Сергеев1
БИОДОСТУПНОСТЬ ЛИКОПИНА
‘Гу РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА 2Icon Holding, Дублин, Ирландия
Введение. Ликопин является природным кароти-ноидом, широко распространенным в растительном мире. Наибольшее его количество содержится в красных и оранжевых овощах и фруктах, особенно в плодах томатов. Ликопин в организме человека не синтезируется, а его содержание в крови и тканях определяется поступлением с пищей. Проведенные к настоящему времени эпидемиологические исследования показывают обратную зависимость частоты приема ликопинсодержащих овощей и распространение рака той или иной локализации. В настоящее время можно считать доказанной антиканцерогенную активность ликопина. Рамки проведения доклинических испытаний новых лекарственных препаратов требуют проведения оценки активного начала по фармакокинетическим параметрам. Однако данные литературы по фармакокинетике ликопина у животных довольно скудны.
Цель исследования. Оценить биодоступность ликопина как активного начала нового потенциального антиканцерогенного отечественного препарата.
Материалы и методы. Фармакокинетику ликопина изучали на кроликах самцах «шиншилла» массой З,2-4,2 кг. Препарат вводили однократно перорально в виде масляного раствора в дозе 5GG мг по ликопину. Пробы крови отбирали из краевой ушной вены животных через каждые два часа в течение З6 ч после введения препарата. Для построения внешней калибровочной кривой использовали стандартные растворы кристаллического ликопина. Процент извлечения ликопина из плазмы крови составил 7G,5 4,5 %.
Установлено, что эндогенные компоненты плазмы крови не мешают определению концентрации ликопина. Концентрации ликопина в плазме крови определяли хроматографически. Использовали хроматографическую систему Perkin Elmer Nelson, Model iG2G. Колонка Диа-сорб Ci6 Т б мкм (З i5G). Подвижная фаза:
метанол: ацетонитрил : тетрагидрофуран ^G^GIG).
При изучении скорость потока элюента i,5 мл/мин, давление 2GGG psi; температура 22 С; детектирование ликопина 46G нм, объем анализируемой пробы 2G мкл. Время удерживания для ликопина 4,2 мин. Чувствительность 5 нг/мл. Количество ликопина определяли методом нормализации по данным прямой калибровки, используя площади хроматографических пиков. Фармакокинетические параметры рассчитаны методом статистических моментов с использованием программы M-IND.
Результаты. Анализ профилей фармакокинетических кривых показал, что процессы всасывания, распределения и элиминации могут быть описаны двухкамерной моделью, что говорит о возможности перераспределения изучаемого вещества из плазмы крови в органы и ткани, обладающие выраженной липотропностью.
После перорального введения ликопина невысокие концентрации изучаемого вещества регистрировали в плазме крови лишь через 2 ч. Препарат достаточно медленно всасывался, достигая максимальной концентрации к восьмому часу, при этом отмечен значительный индивидуальный разброс в достижении максимальных значений концентраций (10,8-47,7 нг/мл).
Через 36 ч после начала опыта ликопин в плазме крови не регистрировался. Значительный межиндивиду-альный разброс значений концентраций препарата на фазе всасывания объясняется тем, что всасывание ликопина начинается и происходит в двенадцатиперстном и тонком кишечнике при рН>7,0. Большие значения величины кажущегося клиренса говорят о низких концентрациях ликопина, регистрируемых в различные интервалы времени, что, в свою очередь можно объяснить эффектом «первого прохождения через печень».
Анализируя величины объема распределения, необходимо отметить, что большие значения полученного параметра указывают на способность ликопина к кумуляции в периферических органах. Среднее время удерживания ликопина в организме составило 13,5 0,85 ч, а время полувыведения - 6,2 0,9 ч.
Выводы. Среднее время достижения максимальной концентрации ликопина в плазме крови кроликов составляет 8 ч, средняя величина - 21,4 нг/мл. Ликопин подвергается интенсивной биотрансформации, что определяется высокими значениями кажущегося клиренса.
Большая величина кажущегося объема распределения ликопина указывает на его липофильность и, соответственно, способность к кумуляции этого вещества в органах и тканях.
А.Б. Капитанов1, П.А. Капитанов2, И.Р. Просалкова1 ИЗУЧЕНИЕ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ ЛИКОПИНА ‘ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н.БЛОХИНА РАМН, МОСКВА 2Icon Holding, Дублин, Ирландия
Введение. В настоящее время показано, что ликопин обладает антиканцерогенной активностью. Важно отметить, что ликопин в организме животных и человека не синтезируется и накапливается в тканях в зависимости от потребления пищевых продуктов. При этом ликопин, в отличие от -каротина, не превращается в витамин А. Нами разработан новый антиканцерогенный ликопинсо-держащий препарат, получаемый из плодов томатов -Томатол®. Очевидно, что при разработке новых лекарственных композиций необходима оценка их острой и хронической токсичности.
Цель исследования. Оценить токсичность ликопина как активного начала нового отечественного антиканцерогенного препарата.
Материалы и методы. Опыты по изучению «острой» токсичности Томатола® проводили на беспородных мышах обоего пола массой тела 18-20 г и крысах массой тела 200-220 г. По прохождении 2-недельного карантина животных содержали в виварии в стационарных условиях, со свободным доступом к воде и сбалансированному по питательности брикетированному комбикорму. Исследование было проведено в весеннее (март) и осеннее (октябрь) время.
Препарат вводили через зонд per os и внутрибрю-шинно в дозах 100; 200; 1000; 2000; 4000 и 10000 мг То-матола®/кг (1; 2; 10; 20; 40 и 100 мг ликопина/кг).
Дальнейшее увеличение дозы было затруднительным в силу технических причин. Контрольным животным вводили в том же объеме оливковое масло. Количество животных в опытных (на каждую дозу) и контрольных группах равнялось десяти.
Результаты. В ходе исследований общей продолжительностью 2 нед. установлено, что Томатол® в указанных дозах, большая из которых (100 мг ликопина/кг)
превышает терапевтическую в 100 раз, не вызывает клинических признаков интоксикации экспериментальных животных и их гибели. Ни в первый день после введения соответствующей дозы препарата, ни в последующие не было отмечено особенностей в общем состоянии животных, их поведении, интенсивности и характере двигательной активности, координации движений, состоянии волосяного и кожного покровов, окраске слизистых оболочек. Гематологические показатели а также активность печеночных трансаминаз, в опытных группах не отличались от контрольных. Консистенция фекальных масс, потребление корма и воды, изменение массы тела в опытных группах также не отличались от контрольных. Вскрытие и визуальный осмотр внутренних органов, проведенные по истечению двухнедельного периода наблюдения, отклонений от нормы не обнаружили.
Выводы. Таким образом, на основании проведенного исследования «острой» токсичности и в соответствии с общепринятой классификацией можно заключить, что ликопин относится к препаратам пятой категории токсичности и является практически нетоксичным.
Э.Л. Кристаллович1, М.Б. Овчаров1, А.А. Титов1,
И.В. Воробьев1, Л.Г. Воскресенский2, В.Н.Осипов3 СИНТЕЗ НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ АРТЕМИЗИНИНА И ИССЛЕДОВАНИЕ ИХ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ 'ООО Лаборатории НГХ, Москва 2РУДН, Москва
3ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА
Введение. Пристальное внимание к артемизинину, сесквитерпеновому лактону полыни горькой Artemisia annua, и его производным (таким как дигидроартемизинин, метиловый эфир дигидроартемизинина, артесунат, артесуниковая кислота) в значительной мере вызвано их высокой антималярийной активностью. Исследования показали значительную цитотоксическую активность артемизинина. Существенным недостатком артемизинина является его низкая растворимость в воде и масле, чувствительность к гидролитическому воздействию. В связи с этим возникает необходимость поиска новых производных артемизинина с более эффективными фармакологическими и фармакокинетическими характеристиками.
Цель исследования. Химическая модификация молекул производных сесквитерпенового лактона артемизинина, определение острой токсичности, изучение ци-тотоксической активности полученных соединений.
Материалы и методы. Модификация производных артемизинина проводилась по 3 основным направлениям: синтез производных дигидроартемизинина по атому Ci2, синтез амидов артесуната и синтез замещённых 11-азоартемизининов. По 1 направлению осуществлены реакции ацилирования и алкилирования дигидроартемизинина. Амиды артесуната получены методом активированных эфиров с синтезом пентафторфенилового эфира артесуната в качестве промежуточного продукта.
Результаты. В результате химической модификация молекул производных артемизинина было получено 54 новых соединения: 19 производных дигидроартемизинина, 34 производных артесуната и одно N-11-азопроизвод-ное артемизинина. Изучение острой токсичности проводили на белых беспородных мышах обоих полов массой тела 18-20 г. Значения среднесмертельной (LD50) токсичности для полученных соединений находятся в пределах 600-1500 мг/кг. Биоскрининг на цитотоксическую активность на опухолевых клетках толстой кишки человека линии LS174T показывает: все синтезированные производные артемизинина проявляют цитотоксическую активность при концентрации ~ в 2 раза ниже таковой артемизинина и более чем в 5 раз ниже относительно контрольного препарата урацила.
Из общего числа исследованных in vitro препаратов по проявлению цитотоксической активности можно выделить вещества с гидрофильными заместителями (с наиболее высоким значением logP).
Выводы. Показано, что направленная химическая модификация позволяет получить более активные вещества с цитотоксической активностью в ряду производных сесквитерпенового лактона артемизинина.
И.И. Мурин1, В.М. Баева1, А.М. Козлов2 ВЛИЯНИЕ АГРИМОНИИНА И СУММЫ ПОЛИФЕНОЛОВ,
ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ТРАВЫ МАНЖЕТКИ,
НА ОБЩУЮ ТОКСИЧНОСТЬ
ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ПРЕПАРАТА
ЦИКЛОФОСФАМИД
ТОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова, Москва
2ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА
Цель исследования. Изучить влияние агримонии-на и суммы полифенолов, выделенных из травы манжетки, на общую токсичность циклофосфамида.
Материалы и методы. Исследование проводили на мышах-самцах линии C57Bl/6 массой 23-27 г. В качестве модели опухоли использовали карциному легкого Льюис. Дозы агримониина и полифенолов взяли эквимолярно ранее исследованному настою травы манжетки 1:10, приготовленному по методике ГФХГ агримониин - 10 мг/кг, сумма полифенолов - 10 мг/кг. Животных разделили на 3 группы: мышам 1-й группы ввели внутрибрюшинно однократно циклофосфамид в дозе 450 мг/кг, мышам 2-й
- внутрибрюшинно однократно циклофосфамид в дозе 450 мг/кг и 10-кратно перорально водный раствор агримониина по 0,3 мл/мышь (10 мг/кг) с интервалом 24 ч; животным 3-й группы - однократно внутрибрюшинно циклофосфамид в дозе 450 мг/кг и 10-кратно перорально водный раствор суммы полифенолов по 0,3 мл/мышь (10 мг/кг) с интервалом 24 ч. В качестве критериев оценки общетоксического действия терапии использовали показатель СПЖ, изменение массы тела в % к начальной и общее состояние мышей.
Результаты. В ходе проведения эксперимента в 1-й группе животных, получавших только циклофосфамид, 83 % мышей пали спустя, в среднем, 5 дней после введения цитостатика. Во 2-й группе животных, при сочетанном применении циклофосфамида и водного раствора агримониина и в 3-й группе, при сочетанном применении циклофосфамида и водного раствора суммы полифенолов, гибели животных не отмечено. Установлено также, что в течение первой недели после введения препаратов масса тела животных в 1-й группе уменьшилась на 25,2 % по сравнению с первоначальной, во 2-й и 3-й группах - увеличивалась соответственно на 6,4 и 4,4 %.
Выводы. Агримониин и сумма полифенолов травы манжетки снижают общетоксическое действие циклофосфамида. Выживаемость и общее состояние животных в группах, получавших сочетанное лечение водными растворами агримониина и суммы полифенолов намного выше, чем в группе, получавшей монотерапию циклофосфамидом. Биологически активные соединения, выделенные из травы манжетки (агримониин и сумма полифенолов) являются перспективными для дальнейшего изучения в качестве препаратов, снижающих общетоксическое действие цитостатиков.
М.В. Нехорошее, А.В. Бородина, Н.В. Поспелова БУРЫЕ ВОДОРОСЛИ - ОСНОВНОЙ И ЕСТЕСТВЕННЫЙ ИСТОЧНИК ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ
ИнБЮМ им. А.О. Ковалевского НАН Украины, Севастополь
Бурые макрофиты - самые распространенные водоросли, масса которых превышает запасы всех лесов
планеты. В их состав входят альгиновые кислоты, фукоидан, каротиноиды. Эти соединения в разной степени обладают цитотоксической и противоопухолевой активностью. Наибольший интерес для онкологов представляет главный каротиноид бурых водорослей
- фукоксантин, который ингибирует рост in vitro клеток GOTO нейробластомы человека, рака предстательной железы, рака толстой кишки и лейкоза крови человека. В некоторых работах показано, что противоопухолевое действие фукоксантина может быть обусловлено апоптогенными свойствами этого соединения. Украинскими исследователями недавно показано, что инкубация клеток МТ-4 ОЛЛ человека в присутствие фукоиданов приводит к повышению их чувствительности к последующей индукции апоптоза стандартным индуктором ингибитором топоизомера-зы этопозидом. Фукоксантин обладает цитотоксиче-ским действием на клетки МТ-4, однако, в отличие от фукоиданов, апоптогенный эффект выражен относительно слабо и проявляется в области низких доз препарата. Еще более активным соединением по отношению к клеткам РС-3 человеческого рака простаты является естественный метаболит фукоксантина - фу-коксантинол. На 15 симпозиуме по каротиноидам (Окинава, 2008) несколько докладов было посвящено исследованию свойств фукоксантина. Хотя полный синтез фукоксантина был осуществлен в 1994 г., до сих пор это соединение получают из бурых водорослей. В Японии основана фирма по его производству, что позволяет наработку фукоксантина для клинических испытаний. В Украине разработаны альтернативные способы получения этого пигмента из черноморских водорослей и ведутся интенсивные исследования его на противоопухолевую активность.
В. Б. Сирота1, Г. О. Олжатаева2 ПРИМЕНЕНИЕ АРГЛАБИНА ПРИ ЛТ РАКА СЛИЗИСТОЙ ПОЛОСТИ РТА
'КГМА, Казахстан
2КГКП КООЦ, Караганда, Казахстан
Задача исследования. Улучшение результатов лечения рака слизистой полости рта путем комбинации ЛТ злокачественных опухолей данных локализаций с арглабином в качестве радиомодификации.
Материалы и методы. ЛТ с арглабином проведена 17 больным с впервые установленными диагнозами: рак языка - 6 пациентов; рак слизистой полости рта - 4; рак слизистой ретромолярной области - 2, рак небной миндалины - 3, рак ротоглотки - 2 больных.
I и II стадии опухолевого процесса диагностирована у 11 пациентов, III - у 6. Все больные имели цито-гистологическую верификацию рака. Средний возраст составил 56,4 года.
Группу контроля составили 16 больных с аналогичной нозологией, получавшие ЛТ без арглабина. Дистанционная гамма-терапия проводилась в два этапа на аппарате «Рокус АМ» обычным фракционированием дозы по 2 Гр на первичную опухоль и области регионарного метастазирования.
На первом этапе подводилась СОД 40 Гр, перерыв 2 недели до стихания лучевой реакции, на втором этапе СОД доводили до 64-66 Гр. Арглабин ежедневно вводили внутривенно одномоментно медленно из расчета 185 мг/м за 10-20 мин до сеанса ЛТ. Суммарная доза варьировала от 4000 до 8400 мг. Эффективность комбинированного лечения оценивали по стандартным критериям ВОЗ.
Результаты. Полный регресс опухоли наблюдали в группе больных, получавших на фоне ЛТ арглабин, у 23,5 10,2 % пациентов; в группе больных, получавших ЛТ без арглабина, у 12,5 8,3 % (p>0,05).
Частичный ответ: в группе больных, получавших на фоне ЛТ арглабин, у 52,9 12,1 % пациентов, в группе больных, получавших ЛТ без арглабина, у 18,8 9,8 % (t=2,2; p<0,05). У 68,8 11,6 % больных, получавших ЛТ без арглабина, произошла стабилизация опухолевого процесса. При использовании арглабина в сочетании с ЛТ не наблюдали анемии и агранулоцитоза, в то время как при ЛТ без арглабина гематологические изменения проявились: анемия в 6,2 3,4 %; лейкопения в 12,5 4,6 % наблюдений; агранулоцитоз в 12,5 4,6 % случаев. Тром-бопении не было ни в одной из групп.
Выводы. Наблюдается общая положительная динамика ЛТ у больных раком слизистой полости рта и глотки, получавших при ДГТ арглабин. Необходимо отметить положительную субъективную оценку состояния больных при введении арглабина, что способствует улучшению качества жизни данных пациентов.
Э.Ш. Соломко, Е.В. Степанова, И.Н. Григорьева,
А.Ю. Барышников
ОЦЕНКА АНТИАНГИОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ЭКСТРАКТОВ РАСТЕНИЙ И ИХ ФРАКЦИЙ, ПРОИЗРАСТАЮЩИХ НА ТЕРРИТОРИИ РОССИИ
ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА
Введение. Ангиогенез - формирование новых микрососудов из уже существующих в ткани капилляров. Антиангиогенная терапия блокирует формирование новых микрососудов и развитие метастазов в опухоли. Одним из подходов к поиску новых антиангиогенных веществ является изучение свойств растений, используемых в народной медицине.
Цель исследования. Нами были проанализированы антиангиогенные свойства 15 растений, используемых для лечения онкологических заболеваний и ревматизма в России.
Материалы и методы. Исследование проводилось на клеточной линий SVEC-4-10, полученной из эндотелиальных клеток мыши, трансформированной вирусом SV-40. Для определения специфичности действия на эндотелий использовались опухолевые клеточные линии молочной железы (SK-BR-3), яичников (SKOV-3) и другие.
Анализ антиангиогенных свойств in vitro включал цитотоксический и антипролиферативный тест (МТТ-тест), анализ ингибирования миграции и формирования трубочкоподобных структур in vitro.
Антиангиогенное действие препаратов подтверждался in vivo тестом на блокирование ангиогенеза в имплантанте матригеля.
Результаты. Было показано, что некоторые экстракты и их фракции обладают цитотоксическим и антипро-лиферативным действием на эндотелиальные и опухолевые клетки. При проведении исследования было показано влияние различных доз растительных экстрактов и их фракций на ангиогенез in vitro.
Исследуя антиангиогенный ответ различных фракций растительных экстрактов, мы получили максимальный эффект при концентрации 0,1 мг/мл.
В данной дозе наблюдалось специфическая гибель эндотелиальных клеток. При более низких концентрациях наблюдалось ингибирование миграции эндотелиальных клеток и формирования трубочкоподобных структур.
Исследования in vivo в имплантанте Матригеля показали ингибирование ангиогенеза в концентрациях 50 мг/кг и 25 мг/кг.
В дальнейшем планируется изучение антиангиогенных свойств экстрактов растении на опухолевых моделях.
Работа поддержана государственным контрактом Федерального агентства по науке и инновациям № 02.512.11.2195.
Е.В. Уютова1, О.А. Бочарова2, Б.А. Крапивкин3,
О.П. Шейченко1, О.Н. Толкачев1, Р.В. Карпова ,
Е.В. Бочаров4, В.А. Быков1 ИССЛЕДОВАНИЕ
КОМПЛЕКСНОГО ФИТОАДАПТОГЕНА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
‘ГУ ВИЛАР, Москва
2ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА 3ФГУ ВГНКИ, Москва 4ГУ НИИ ОПиП, Москва
В предыдущих исследованиях определена возможность использования ЯМР-, УФ-спектроскопии, хрома-то-масс-спектрометрии для характеристики комплексного фитоадаптогена и его отдельных компонентов. Целью данной работы явилась инструментальная физико-химическая оценка, контроль и стандартизация фитоадаптогена методом ВЭЖХ. Были исследованы несколько образцов фитокомплекса разных лет изготовления (2005; 2007 годов). Определены условия анализов. Первый этап: система ВЭЖХ STAR, аналитическая колонка Res Elut C18. Подвижные фазы: А - метанол/вода, фаза Б -метанол. УФ-детектирование проводили при 190-367 нм. Второй этап: колонка XBridge. Подвижная фаза: линия А - МеОН (100 %) и H3PO4 (0,05 %); линия Б - вода (100 %) и H3PO4 (0,05 %). УФ-детектирование проводили при 200-800 нм. Для аминокислотного анализа фитокомплекса использовали систему ВЭЖХ ProStar.
Идентификацию аминокислот и их количественный анализ проводили относительно калибровочной смеси аминокислот. По литературным данным выявлены наиболее часто встречаемые в составе растений, компонентов фитокомплекса, флавоноиды и катехины
- аментофлавон, апигенин, астрагалин, галлокатехин, гиперин, гиперозид, изокверцитрин, изорамнетин, кверцетин, кверцитрин, кемпферол, лютеолин, нарингенин, рутин, скутеллареин, эпигаллокатехин, эпикатехин, катехин. В соответствии с этим выбраны стандартные образцы для ВЭЖХ-исследования.
Идентифицированы флавоноиды гиперозид, рутин, апигенин, кверцетин, нарингенин, лютеолин, лютеолин-7-гликозид, а также сирингин (элеутерозид В), катехин, олеаноловая и глициризиновая кислоты.
Определена стабильность содержания соединений в течение двух лет. Из 19 обнаруженных аминокислот в наибольшем количестве содержатся пролин, аргинин, аланин, аспарагиновая и глютаминовая кислоты.
Таким образом, проведена качественная и количественная оценка химического состава фитокомплекса в отношении флавоноидов, катехинов и аминокислот методом ВЭЖХ, а также подтверждена его стабильность в течение 2 лет.
А.Е. Хубулова1,Ф.К. Джиоев1, А.В. Сергеев2,
М.Я. Шашкина2
АНТИМУТАГЕННЫЕ И АНТИОКСИДАНТНЫЕ СВОЙСТВА КАСКОРУТОЛА И ЧАГОВИТА
'СОГМА, Владикавказ
2ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА
Введение. Каскорутол и чаговит разработаны в РОНЦ в рамках программы «Химиопрофилактика рака». Ранее нами доказана антиканцерогенная активность этих препаратов на модели химически индуцированного диэтилнитрозамином (ДЭНА) рака печени и пищевода крыс.
Каскорутол и чаговит ингибировали канцерогенез, снижали индекс множественности опухолей, удлиняли латентный период появления первой опухоли.
Цель исследования. Изучить в динамике влияние каскорутола и чаговита на процессы мутагенеза и ок-сидантного стресса, индуцированные ДЭНА.
Материалы и методы. Исследования проведены на крысах-самцах линии Вистар. ДЭНА добавляли к питьевой воде в дозе 100 мг/кг массы тела животных в течение 4 мес. Каскорутол и чаговит вводили в корм из расчета, соответственно 0,4 г/кг 4 раза в неделю и 50 мг/кг ежедневно, начиная за 3 дня до введения ДЭНА и в течение всего эксперимента.
Через 2; 4; 8; 12; 16 нед. животных декапитировали и определяли антимутагенную активность по количеству хромосомных аберраций в клетках костного мозга в сравнении с контрольной группой. Антиоксидантную активность определяли по концентрации МДА спектрофотометрически в тесте с тиобарбитуровой кислотой. Состояние антиоксидантной защитной системы (АОЗ) -по уровню активности фермента каталазы фотометрическим методом и церулоплазмина - колориметрическим.
Результаты. В контроле ДЭНА повреждал генетический аппарат клетки, ингибировал систему репарации, продуцируя 10-33 % аберраций хромосомного и хрома-тидного типов в зависимости от времени воздействия и усиливал процессы ПОЛ, концентрация МДА в плазме крови возрастала в 2 - 3 раза. Снижалась активность каталазы в 4-2,5 раза через 2 и 4 недели соответственно, а затем резко компенсаторно возрастала, что приводило к истощению АОЗ и нарушению баланса ПОЛ-АОЗ. Каскорутол и чаговит достоверно снижали на 15; 26,9; 30,3 % и на 36,8; 42,3; 36,4 % число хромосомных повреждений соответственно на 8-; 12-; 16-недельный срок воздействия. Восстановилась активность ключевых ферментов АОЗ до значений, соответствующих здоровому организму, уменьшилась степень интоксикации и дисбаланса ПОЛ-АОЗ на все сроки наблюдения.
Выводы. Каскорутол и чаговит ослабляют генотоксические и оксидантные действия ДЭНА, способствуют нормализации физиологических процессов защиты организма от мутагенных и канцерогенных факторов, что позволяет использовать их в качестве доступных нетоксичных средств химиопрофилактики рака.
М.Я. Шашкина1, Л.З. Болиева2, Г.И. Кабацкая1, А.В. Сергеев1 РОЛЬ КАРОТИНСОДЕРЖАЩИХ ПРЕПАРАТОВ В ХИМИОПРОФИЛАКТИКЕ РАКА
‘ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН, МОСКВА 2СОГМА, Владикавказ
В рамках Г осу дарственной программы «Ликвидация последствий аварии на ЧЭС» разработана серия оригинальных нетоксичных отечественных препаратов на основе Р-каротина: бета-каротин (драже, капсулы, микрогранулы), бетаск (драже), каскатол (драже), каскорутол (драже), бета-кламин (капсулы).
В эксперименте доказана их антиканцерогенная и ан-тимутагенная активность на различных моделях хими-чески-индуцированного и врожденного канцерогенеза и мутагенеза. Доклинические исследования подтвердили их безопасность и наличие у препаратов иммуномодулирующих, антиоксидантных, антитоксических свойств.
Препараты зарегистрированы в М3 РФ и разрешены для производства и применения. Проведена их апробация в группах повышенного онкологического риска и в клинических условиях в качестве средств «сопровождения» при лечении предопухолевых, онкологических и сопутствующих заболеваниях.
В группе риска практически здоровых лиц Северного региона (177 человек) с иммунным дисбалансом и гиповитаминозом бета-каротин, каскатол, каскорутол оказывали иммунокоррегирующее действие.
При курсовом применении бета-каротина нормализовалось сниженное содержание В-лимфоцитов, на 19 % увеличивался уровень Т-лимфоци-тов. В 1,5-2 раза возрастало содержание В- и Т-лимфоцитов, повышалась фагоцитарная активность клеток и сократилось в 1,5-2 раза количество циркулирующих иммунных комплексов, снизилось содержание МДА.
Применение бета-каротина в группах часто болеющих детей (104 человека) способствовало снижению заболеваемости и нормализации иммунитета. В группах курильщиков (450 человек, «Центр профилактической медицины») каскатол улучшал состояние здоровья 60 % участников (повышался до нормы уровень р -каротина и витамина Е в плазме крови). 15 % «злостных» курильщиков прекратили курение, а 23 % - сократили дневную норму (в плацебо группе 6 % и 11 % соответственно).
У больных мастопатией (группа риска рака молочной железы) применение каскотола в комплексной терапии (265 человек, Онкодиспансер, г. Владикавказ) сопровождалось нормализацией иммунного и гормонального статуса, уменьшением через месяц субъективных проявлений мастопатии у 90 % женщин.
Положительные результаты получены и при включении каскатола в сочетанную схему терапии больных мастопатией (457 человек, г. Москва). Каскатол и каскорутол в комплексном лечении группы мужчин (346 человек, г. Москва) с аденомой простаты улучшали состояние здоровья у 68,6 %; стабилизировали - у 23 %.
Выводы. Каротинсодержащие препараты обладают иммуннокоррегирующим действием при различных им-мунодефицитных нарушениях.
В отличие от традиционных иммуностимуляторов они нетоксичны и не влияют на нормальные физиологические показатели.
КЛИНИЧЕСКАЯ ОНКОЛОГИЯ
Е.В. Артамонова, Л.В. Манзюк МЕСТО ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ В ТЕРАПИИ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
ГУ РОНЦ ИМ. Н.Н.БЛОХИНА РАМН, МОСКВА
Одним из важных факторов появления и дальнейшей прогрессии опухоли является ускользание опухолевых клеток от надзора иммунной системы. Задачами иммунотерапии в онкологии являются:
1. «Базисная» иммунотерапия опухолей с целью получения непосредственного противоопухолевого эффекта.
2. Снижение побочных эффектов традиционной противоопухолевой терапии: лечение миелосу-прессии, иммуносупрессии, коррекция общеток-
сического действия, антиоксидантный эффект.
3. Профилактика рецидивов опухоли.
4. Профилактика и лечение сопутствующих инфекционных осложнений.
По своей направленности различают иммуномодулирующие, иммунодепрессивные и иммуностимулирующие иммунотропные лекарственные средства. Наиболее оптимальным в онкологической практике является применение иммуномодулягоров, которые в терапевтических дозах восстанавливают функции иммунной системы. Целесообразно назначать ИМ при вторичных иммунодефицитах, проявляющихся в виде хронических, вялотекущих, рецидивирующих инфекционно-воспалительных процессов любой локализации.
