CC BY
26
«АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ИММУНОГЕНЕТИКИ И ТКАНЕВОГО ТИПИРОВАНИЯ»
Санкт-Петербург 24-25 июня 2015 г.
коцитарного антигена (HLA) локусов А, В, С, DRB1, DQB1 методом ПЦР с сиквенс-специфи-ческими праймерами (SSP) и проанализировать частоту этого явления у матерей и новорожденных с патологией перинатального периода.
В исследование были включены 49 пар мать-новорожденный с патологией перинатального периода, в том числе 21 пара с ЗВУР плода, 20 пар с ГБН и 8 пар после операции внутриутробного поворота плода. Группу контроля составили 23 пары без патологии перинатального периода. Анализ микрохимеризма генов системы HLA локусов А, В, С, DRB1, DQB1 выполнялся методом ПЦР-SSP с использованием коммерческих тест-систем. Оценка значимости различий в ча-
стоте выявления химерных генов выполнялась на основании точного критерия Фишера.
В результате исследования микрохимеризм был выявлен в группе пациентов в 38,8 % случаев (38 человек) и в 19,2 % (5 человек) случаев в группе контроля ф = 0,03). При этом более часто данное явление встречалось среди пар с ГБН (47,5 % против 19,2 % в контрольной группе, р = 0,013). Отличия встречаемости химерных генов системы HLA в других исследуемых группах не были статистически значимыми по сравнению с группой контроля. Частота выявления микрохимеризма по генам системы HLA в исследуемых группах представлена в таблице.
Таблица.
Частота выявления микрохимеризма по генам системы HLA в исследуемых группах.
Исследуемая группа Количество человек в группе Химеризм общий Локус HLA Химеризм, %
A B C DRB1 DQB1 Комбинация локусов
ЗВУР 42 14 1 1 12 2 0 1 33,33 %
ГБН 40 19 0 2 15 4 1 3 47,50 %
Наружный поворот 16 5 1 0 3 1 0 0 31,25 %
Контроль 26 5 1 1 2 0 1 0 19,23 %
Во всех исследуемых группах чаще выявлялся микрохимеризм генов в локусе HLA-C, а у пациентов с ЗВУР и ГБН еще и в локусе HLA-DRB1. Кроме того, в ряде случаев у пациентов из групп ЗВУР и ГБН отмечалось сочетание нескольких химерных генов из разных локусов. Изучение распределения химерных генов у матерей и их детей в исследуемых группах и контроле показало, что частота выявления материнского и фе-тального микрохимеризма не имела значимых отличий как среди пар с перинатальной патологией (МХ = 40,8 % и ФХ=32,6 %), так и у здоровых лиц (МХ = 23,1 % и ФХ = 15,4 %).
Полученные данные подтвердили наше предположение о возможности выявления микрохи-меризма по генам системы HLA локусов А, В, С, DRB1 и DQB1 в образцах крови матерей и их новорожденных детей методом ПЦР-SSP. При этом явление микрохимеризма генов HLA нами чаще наблюдалось среди пациентов с перинатальной патологией, чем у здоровых лиц и было более распространено, по нашим данным, среди пар с ГБН, что согласуется с данными литературы. Материнский и фетальный микрохимеризм выявлялся в исследуемых группах примерно с одинаковой частотой.
Преймачук Е. А., Степанов А. А., Коротаев Е. В. Пономарев С. А.
АУ «Югорский научно-исследовательский институт с банком стволовых клеток», Ханты-Мансийск
РАСПРЕДЕЛЕНИЕ АЛЛЕЛЕЙ HLA У ЖИТЕЛЕЙ ХАНТЫ-МАНСИЙСКОГО АВТОНОМНОГО ОКРУГА
Введение. Необходимым условием для проведения аллогенной трансплантации гемопоэ-тических стволовых клеток (ГСК) является наличие гистосовместимого донора. Вероятность найти HLA-идентичных сиблингов внутри семьи составляет только 25 %. Поиск неродствен-
ного донора в существующих российских регистрах заканчивается результативно пока только в единичных случаях. Успешность поиска доноров для пациентов, проживающих в национальных регионах России, зависит от особенностей распределения HLA-аллелей среди населения.
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XI, № 2, 2015
Исследование особенностей частоты встречаемости HLA-аллелей у жителей Ханты-Мансийского автономного округа позволит обосновать необходимость создания регионального банка доноров.
Материалы и методы. В ходе исследования проведено HLA-типирование по двум локу-сам класса I (HLA-A,— В) и по одному локусу класса II (HLA-DRB1) 99 образов пуповинной крови, собранных в роддоме г. Ханты-Мансийска и предназначенных для общественного хра-
нения. HLA-типирование образцов пуповинной крови проводили методом PCR SSP. Выделение ДНК выполнялось методом колоночной фильтрации реагентами Protrans (Германия). Концентрация ДНК оценивалась на спектрофотометре. Для амплификации использовали наборы Protrans HLA-A,— B,— DRB1 (Германия). Разделение продуктов амплификации проводилось методом электрофореза в агарозном геле.
Результаты. Частота генов HLA-A, HLA-B, HLA-DRB1 представлена в таблице.
Таблица.
Аллельные варианты локусов HLA-A, HLA-B, HLA-DRB1 и частоты их встречаемости в образцах ПК общественного регистра Югорского НИИ КТ г Ханты-Мансийска.
HLA-A HLA-B HLA-DRB1
Аллель n Частота Аллель n Частота Аллель n Частота
01 30 0,152 07 19 0,096 01 15 0,076
02 59 0,298 08 14 0,071 03 20 0,101
03 22 0,111 13 15 0,076 04 27 0,136
11 14 0,071 15 14 0,071 07 33 0,167
23 1 0,005 18 12 0,061 08 7 0,035
24 27 0,136 27 5 0,025 09 2 0,010
25 9 0,045 35 21 0,106 10 2 0,010
26 13 0,066 37 1 0,005 11 14 0,071
29 4 0,020 38 9 0,045 12 8 0,040
30 3 0,015 39 14 0,071 13 36 0,182
31 2 0,010 40 10 0,051 14 8 0,040
32 6 0,030 41 4 0,020 15 19 0,096
33 1 0,005 44 19 0,096 16 7 0,035
34 0 0,00 46 2 0,010
36 0 0,00 47 1 0,005
43 0 0,00 48 3 0,015
66 0 0,00 49 5 0,025
68 7 0,035 50 2 0,010
69 0 0,00 51 13 0,066
74 0 0,00 52 6 0,030
80 0 0,00 53 1 0,005
55 2 0,010
56 2 0,010
57 3 0,015
58 1 0,005
В локусе А определились 14 из 21 типиру-емых генов. Не встречались специфичности ^А-А: *34, *36, *43, *66, *69 *74, *80. Наиболее распространен вариант гена HLA-A*02 — наиболее часто встречаемый аллельный вариант локуса, его частота составляет 0,298. Вторым по частоте встречаемости в локусе HLA-A у населения, проживающего на территории округа, определен *01—0,152. Далее по
частоте встречаемости идут специфичности *24-0,136, *03-0,111, * 11-0,071. Высокие частоты данных аллелей типичны для европеоидной популяции. Эти 5 аллельных вариантов обнаруживаются в 76,8 % случаев исследованной выборки. Аллельные варианты *33, *31, характерные для монголоидной популяции, наблюдались с минимальной частотой — 0,005 и 0,010.
«АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ИММУНОГЕНЕТИКИ И ТКАНЕВОГО ТИПИРОВАНИЯ»
В локусе В определились 25 из 34 типиру-емых генов. Не встречались специфичности ^А-В: *14, * 42, *54, *67, *73, *78, *81, *82, *83. Наиболее распространен вариант гена *35, его частота составляет 0,106. Следующими по частоте встречаемости в локусе В являются аллели *7 и *44 с частотой 0,096. Далее идут специфичности *13 с частотой 0,076 и *8, *15, *39 с одинаковой частотой встречаемости 0,071.
В локусе DRB1 с разной частотой обнаружены все исследуемые гены. С частотой 0,182 превалирует DRB1*13. На втором месте по ча-
Санкт-Петербург 24-25 июня 2015 г.
стоте встречаемости находится ген DRB1*07-0,167. По данным литературы достаточно высокая (около 0,20) частота DRB1*07 встречается у представителей Волго-Уральского региона — удмурты (0,231), татары (0,24), представителей центрально-сибирских популяций — буряты (0,26 и 0,13), и центрально-сибирской народности — манси (0,17).
Вывод. В результате исследования установлены частоты распределения HLA-генов у жителей Ханты-Мансийского автономного округа.
Рудакова Г. А., Вавилов М. Н., Беляева С. В., Завьялова Т. М., Суздалева С. Л., Суслова Т. А.
ГБУЗ «Челябинская областная станция переливания крови», Челябинск, Россия
ОПЫТ ПОДБОРА СОВМЕСТИМЫХ ДОНОРОВ КОСТНОГО МОЗГА ИЗ РЕГИСТРА ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОСПК
Введение. Челябинский Регистр потенциальных доноров стволовых клеток создавался на Челябинской областной станции переливания крови с 2004 года. В 2015 году в Регистре состоит более 5000 потенциальных доноров стволовой клетки, более 3000 типированы по 5 локусам HLA и включены в объединенную платформу поиска доноров костного мозга (BMDS) на базе НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой.
Известно, что подбор донора по фенотипу, состоящему из устойчивых гаплотипов, типичных для населения территории, на которой создается Регистр, будет намного проще, если искомый га-плотип HLA будет представлен генами, которые не имеют неравновесного сцепления.
Мы провели анализ HLA-фенотипов совместимых по 5 локусам доноров, которыми была выполнена донация за период 2007-2015 годы (11 человек). Еще 11 доноров были совместимы с пациентами, но оказались невостребованными по различным причинам. Пациенты были жителями различных российских городов, дона-ция стволовой клетки проводилась в Екатеринбургской детской областной клинической больнице — 4 случая, в НИИ детской онкологии,
гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой — 5, в Республиканской детской клинической больнице (Москва) — 1, в Гематологическом научном центре РАМН — 1. В 2 случаях пары донор-реципиент были жителями Челябинской области.
Материалы и методы. Иммунологическое типирование было проведено методом SSP-PCR с помощью реактивов Protrans. Для статистических данных были использованы данные HLA типирования 1908 потенциальных доноров Челябинского Регистра различной национальности. Расчет генных частот гаплотипов (HF) проводился методом максимизации ожидания в компьютерной программе Arlequin 3.1 (http:// cmpg.unibe.ch/software/arlequin3/).
Результаты. Из 44 гаплотипов доноров, HLA-совместимых с реципиентами за период 2007-2015 годы 35 представляют из себя устойчивые гаплотипы (данные представлены в таблице). Чаще всего у пары донор-реципиент встречались гаплотипы, имеющие наибольшую частоту встречаемости в Регистре (A*01-B*08-DRB 1*03-6, A*03-B*07-DRB 1*15-4, A*03-B*35-DRB1*01-6)
