CC BY
244
УДК 615.262.1
ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ПОЛИФЕНОЛЬНЫХ КОМПЛЕКСОВ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР ДАЛЬНЕВОСТОЧНЫХ РАСТЕНИЙ
Ольга Васильевна АЗАРОВА, Яков Федорович ЗВЕРЕВ
ГОУ ВПО Алтайский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития 656038, г. Барнаул, пр. Ленина, 40
Изучена противовоспалительная активность полифенольных комплексов клеточных культур дальневосточных растений на модели острого каррагенинового воспаления крыс. В условиях длительного профилактического введения фитокомплексов незабудочника шелковистого, марены сердцелистной (100 мг/кг) и воробейника краснокорневого (250 мг/кг) установлено их ингибирующее влияние на развитие отека. Различная динамика реализации противовоспалительной активности фитокомплексов определяется различиями состава полифенолов изучаемых растений.
Ключевые слова: противовоспалительная активность, полифенольный комплекс, клеточная культура, воробейник краснокорневой, незабудочник шелковистый, маакия амурская, марена сердцелистная.
На протяжении двух последних десятилетий флоголитические средства традиционно занимают лидирующее положение на рынке лекарственных средств после антибиотиков и препаратов для лечения сердечно-сосудистых заболеваний [1, 2]. В условиях растущего интереса к противовоспалительным средствам потребительские предпочтения отдаются антифлогистикам на основе лекарственных растений, что связано с рядом достоинств фитопрепаратов, а также с благосклонностью населения к многовековому опыту фитотерапии. Так, по данным многоцелевого инфратестирования потребителей фитопрепаратов г. Москвы (2000— 2002 гг.) 22,4 % опрошенных используют противовоспалительные фитопрепараты. В связи с этим актуальным является поиск новых эффективных нетоксичных препаратов на основе растительных источников для лечения воспалительных заболеваний различной этиологии. В качестве объектов исследования были выбраны фитокомплексы клеточных культур растений дальневосточной флоры воробейника краснокорневого Lithospermum erythrorhizon Sieb. et Zucc., незабудочника шелковистого Eritrichium sericeum Lehm., марены сердцелистной Rubia cordifolia L. и маакии амурской Maackia amurensis Rupr. еt Maxim., содержащие полифенольные соединения различных групп, для которых ранее установлено влияние на функцию почек. В свете концепции современной ренопро-тективной стратегии нормализация уродинамики, достигнутая с помощью растительных диуретиков, эффективна на фоне их противовоспалительного действия, что определяет целесообразность изучения противовоспалительной активности полифенольных комплексов (ПФК) клеточных культур
упомянутых растений. Для оценки флоголитиче-ской активности исследовали влияние ПФК на разные стадии процесса воспаления. В данной работе представлен фрагмент комплексного изучения противовоспалительной активности ПФК клеточных культур на одной из моделей острого воспаления.
Материал и методы
Эксперименты проведены на 121 беспородной крысе обоего пола массой 200—250 г в соответствии с «Правилами работ с использованием экспериментальных животных» (приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977, № 755). Животные содержались в индивидуальных клетках в режиме свободного доступа к воде и пище. В качестве объектов исследования использовали фитокомплексы полифенолов, извлеченные из каллусов воробейника краснокорневого (штамм ВК-39Р), незабудочника шелковистого (штамм Ег-1), марены сердцелистной (штамм ЯС-1) и маакии амурской (линия А-18). Культуры клеток растений созданы из различных вегетативных частей дикорастущих растений Камчатки и Приморского края в Биологопочвенном институте Дальневосточного отделения РАН и выращены на питательных средах '^/мдд и ^к/1АА описанными ранее способами [3—6]. Качественный и количественный состав комплексов полифенольных соединений, извлеченных из клеточных культур исследуемых растений для проведения фармакологических исследований, представлен в таблице 1.
Противовоспалительную активность исследовали на модели острого воспаления после двухнедельного введения фитопрепаратов внутрь в ра-
Азарова О.В. — к.б.н., доцент, докторант кафедры фармакологии; e-mail: kunaza@rol.ru Зверев Я.Ф. — д.м.н., проф. кафедры фармакологии; e-mail: zver@asmu.ru
Таблица 1
Полифенолы клеточных культур воробейника краснокорневого, незабудочника шелковистого,
марены сердцелистной и маакии амурской
Объект исследования Сумма полифенольных соединений, % от сухой массы Доминирующие полифенолы Литературный источник
Культура клеток незабудочника 6,09 ± 0,84 Олигомеры кофейной кислоты: розмариновая кислота, рабдозиин, эритрихин [7]
воробейника 2,80 ± 0,20 Олигомеры кофейной кислоты: розмариновая кислота, рабдозиин [4]
маакии 2,08 ± 0,35 Изофлавоны Птерокарпаны [6]
марены 2,14 ± 0,24 Антрахиноны: муньистин, пурпурин [8]
Примечание: индивидуальные полифенолы перечислены в порядке уменьшения их количественного содержания.
нее установленных оптимальных дозах 100 мг/кг (маакия, марена, незабудочник) и 250 мг/кг (воробейник) в виде крахмальной взвеси. Животные контрольной группы на протяжении 14 дней получали эквиобъемное количество крахмальной взвеси в идентичном режиме. В качестве препаратов сравнения использовали отвар листьев зимолюбки зонтичной Chimaphyla umbellata (L.) W. Barton и зарегистрированный в России в качестве гепато-протектора препарат «Максар», основу которого составляет полифенольный комплекс, выделенный из ядровой древесины маакии.
Острое экссудативное воспаление индуцировали субплантарным введением 0,1 мл 1%-ного раствора каррагенина [9]. Измерение объема правой задней конечности проводили с помощью плетиз-мометра после курса применения фитокомплексов до введения, а также через 60, 120 и 240 минут после инъекции флогистика. На основании данных среднего прироста конечности животных, полученных в результате трех параллельных измерений, рассчитывали степень противовоспалительной активности (Х) по формуле:
X _ Ек—Ео ~ Ек 5
где Ек — средний прирост конечности в контроле, см3;
Ео — средний прирост конечности в опыте, см3.
Эффективными считаются препараты со степенью противовоспалительной активности, превышающей 30 % [10]. Статистическую обработку результатов исследования проводили методом вариационных рядов. Данные представлены в виде M ± m, где M — среднее арифметическое значение, m — ошибка среднего арифметического значения.
Различия между показателями оценивали с помощью парного критерия Стьюдента, достоверными считали результаты при р < 0,05.
Результаты и обсуждение
С учетом фазности воспалительных изменений и значения различных процессов в развитии этих фаз исследование флоголитической активности проводится с использованием различных моделей воспаления, среди которых традиционно используется индуцированный каррагенином отек конечности крыс [11]. Схематично в развитии острого асептического воспаления, вызванного каррагенином, можно выделить несколько фаз. В первую фазу (10—20 минут) в ответ на повреждающее действие флогогена высвобождаются биогенные амины (серотонин и гистамин), активизирующие калликреин-кининовую систему, что приводит к накоплению кининов (1—2 часа). Последние способствуют локальному высвобождению гидролитических ферментов лизосом, стимулирующих образование простагландинов, которые являются посредниками поздней фазы воспаления, развивающейся при каррагенино-вом отеке через 3 часа. Так, максимум концентрации простагландина Е2 регистрируется через 12—24 часа. Далее в эту цепь включается система комплемента, функционирующая в комплексе с кининовой системой и системой свертывания крови [1]. Рядом авторов упомянутые заключительные фазы часто объединяются в одну, и кар-рагениновый отек рассматривается как двухстадийный процесс, вторая стадия которого является результатом высвобождения простагландинов, лизосом, брадикинина и протеаз [12, 13].
В наших экспериментах введение раствора каррагенина контрольным животным приводило к быстрому и последовательному формированию
воспалительного отека. В этих условиях длительное превентивное введение фитокомплексов воробейника, незабудочника и марены ослабляло его формирование. Лидирующее положение среди изучаемых фитопрепаратов по степени выраженности противовоспалительного действия на протяжении всего эксперимента занимал ПФК марены. На ранних стадиях формирования отека максимальный эффект угнетения воспаления под действием фитокомплекса марены составил 44,2 %, причем оставался стабильно высоким в течение всего периода наблюдения, когда степень противовоспалительной активности колебалась в пределах 33—38 % (табл. 2).
Эффект фитокомплексов клеточных культур воробейника и незабудочника, растений семейства Бурачниковые, приобретал статистическую значимость через 1 час после инъекции каррагенина, достигая максимума через 2 часа, и несколько ослабевал к окончанию эксперимента. В период манифестации флоголитической активности препарат воробейника угнетал воспаление на 30,9 %, препарат незабудочника — на 36,4 %, что превышает противовоспалительную активность препарата сравнения в данный период наблюдения в 1,4 и 1,7 раз соответственно.
Среди исследуемых фитокомплексов клеточных культур лишь ПФК маакии не способствовал существенному ослаблению формирования воспалительного отека лапы крыс. Из данных таблицы 2 видно, что эффект фитопрепарата на протяжении всего эксперимента колебался в пределах 7,1— 11,5 %, что не может быть признано выраженной противовоспалительной активностью.
Динамика развития антиэкссудативного эффекта зарегистрированного растительного гепатопро-тектора из ядровой древесины маакии «Максар», использовавшегося в качестве препарата сравнения во второй серии экспериментов, аналогична таковой для ПФК марены. Также сопоставима и степень выраженности противовоспалительной активности на различных этапах развития воспаления. Эффект «Максара» достигал максимума через 1 час после флогогенной агрессии без отмеченного роста в последующий период. Раннее угнетение развития отека, достигающее 42,3 %, позволяет констатировать выраженное противовоспалительное действие «Максара».
В ходе проведения эксперимента была отмечена различная динамика в реализации противовоспалительной активности: для фитокомплексов марены и препарата «Максар» максимум активности сформировался к концу первого часа наблюдения; для фитокомплексов незабудочника и воробейника — к концу второго часа эксперимента.
Целесообразность исследования противовоспалительной активности фитопрепаратов клеточных культур дальневосточных растений продиктована имеющимися литературными данными о флого-литическом действии отдельных полифенолов в
составе изучаемых фитокомплексов. В частности, фармакологическая активность одного из полифенолов клеточных культур растений семейства Бурачниковые, розмариновой кислоты per se и в составе галеновых препаратов, хорошо изучена, и с начала 90-х годов рядом авторов данное соединение рассматривается как перспективное нестероидное противовоспалительное средство, действие которого связано с замедлением возникновения и развития окислительного стресса [14—16]. Противовоспалительную активность розмариновой кислоты связывают с ингибированием фракций комплемента С3 и С5, выступающих в качестве либераторов гистамина [17], а также с уменьшением выработки медиаторов воспаления, секрети-руемых макрофагами [16, 18]. Рабдозиин, другой тетрамер кофейной кислоты, входящий в состав обоих фитокомплексов, обладает способностью к удалению активных форм кислорода и предотвращению ряда клеточных биохимических реакций, обеспечивающих воспалительный процесс, в частности, к подавлению активности гиалуронидазы, что оказывает отчетливый протективный эффект на проницаемость капилляров [19].
На пике противовоспалительной активности полифенолы незабудочника и воробейника продемонстрировали угнетение выраженности отека, превышающее действие известного растительного антифлогистика зимолюбки зонтичной на 67 и 42 % соответственно. Учитывая фазность в развитии острого каррагенинового отека и зарегистрированный максимум активности в период энергичного нарастания отека, эффективность данных ПФК можно объяснить вмешательством в пусковые механизмы воспалительного процесса с угнетением его сосудистого компонента в зоне альтерации. По всей вероятности, выраженное угнетение экссудативной фазы воспаления под влиянием ПФК воробейника и незабудочника связано с наличием в их составе олигомеров кофейной кислоты — рабдозиина и розмариновой кислоты. Сравнительная оценка степени выраженности противовоспалительного действия двух фитокомплексов олигомеров кофейной кислоты с учетом их количественного содержания в клеточных культурах (табл. 1) позволила выявить определенные химико-фармакологические закономерности и выдвинуть предположение об определяющем вкладе данных дериватов в реализацию флоголитического эффекта. Так, для ПФК неза-будочника, характеризующегося более высоким содержанием полифенольных соединений, отмечено более активное угнетение экссудативной фазы воспаления.
В составе полифенолов клеточной культуры маакии амурской, содержащей до 20 индивидуальных изофлавонов и птерокарпанов в свободном и гликозидированном виде, обнаружены изофлавоны, продемонстрировавшие в эксперименте и клинических исследованиях выраженную противовоспалительную активность. Идентифи-
БЮЛЛЕТЕНЬ СО РАМН, ТОМ 30, № 3, 2010 г. 149
Таблица 2
Влияние ПФК клеточных культур воробейника краснокорневого, незабудочника шелковистого, маакии амурской, марены сердцелистной и максара на развитие каррагенинового отека конечностей крыс (М ± т)
Группа исследования Количество животных Доза, мг/кг Часы наблюдения
1 2 4
Средний прирост конечности, см3 Противовоспалительная активность, % Средний прирост конечности, см3 Противовоспалительная активность, % Средний прирост конечности, см3 Противовоспалительная активность, %
Первая серия экспериментов
Контроль (крахмальная взвесь) 15 - 0,49 ± 0,04 - 0,55 ± 0,04 - 0,67 ± 0,05 -
Отвар листьев зимолюбки (1:10) 14 500 0,33 ± 0,03* 32,7 0,43 ± 0,04* 21,8 0,57 ± 0,02 14,9
ПФК незабудочника 15 100 0,35 ± 0,03* 28,6 0,35 ± 0,04* 36,4 0,50 ± 0,05* 25,3
ПФК воробейника 12 250 0,38 ± 0,03* 22,4 0,38 ± 0,04* 30,9 0,55 ± 0,06 17,9
Вторая серия экспериментов
Контроль 14 - 0,52 ± 0,05 - 0,84 ± 0,05 - 1,06 ± 0,04 -
«Максар» 20 100 0,30 ± 0,03* 42,3 0,63 ± 0,03* 25,0 0,73 ± 0,04* 31,1
ПФК маакии 14 100 0,46 ± 0,02 11,5 0,78 ± 0,03 7,1 0,96 ± 0,03 9,4
ПФК марены 17 100 0,29 ± 0,03* 44,2 0,52 ± 0,04* 38,1 0,71 ± 0,03* 33,0
Примечание: * — достоверные изменения по сравнению с контролем (р < 0,05).
Азарова О.В. и др. Противовоспалительная активность полифенольных комплексов... / с. 146—151
цированные в составе полифенолов маакии изо-флавоны генистеин и его О-гликозидированная форма генистин [6], выделенные из другого растительного источника Sophora japonica, ингибируют биосинтез интерлейкина 5 (IL-5), одного из цитокинов воспалительной реакции. Установленная B.G. Min с соавторами связь между выраженностью ингибирования биосинтеза данного клеточного медиатора и числом ОН-групп в составе изофлавонов, а также локализацией гликозидных связей в их молекулах [20], позволяет предположить наличие противовоспалительной активности суммы полифенолов клеточной культуры маакии, в составе которой, кроме двух упомянутых форм, обнаружено не менее 15 изофлавонов, отличающихся характером заместителя и расположением О-гликозидной связи [6]. Позднее было установлено, что изофлавон маакии амурской даидзеин и его О-гликозид даидзин в составе фитопрепарата китайской этномедицины «Extrapone®Pueraria Root» на основе эндемика Pueraria lobata обладают противовоспалительной активностью, реализуемой за счет ингибирования высвобождения IL-1a. Кроме того, гликозиды генистеина из Pueraria lobata в концентрации 0,1 мМ на 23—37 % подавляли продукцию активных форм кислорода [21].
Сопоставимое по степени выраженности и по фазности действие продемонстрировали ПФК клеточной культуры марены и препарат ядровой древесины маакии «Максар», антиэкссудативный эффект которых превосходил на ранних стадиях развития воспаления действие отваров листьев зимолюбки на 35 и 29 % соответственно. Высокая активность данных препаратов была зарегистрирована на поздних стадиях развития воспаления, что позволяет выдвинуть предположение о влиянии полифенолов данных растений на синтез простаглан-динов. Различия в химическом составе изучаемых фитопрепаратов маакии, продемонстрировавших в эксперименте неодинаковую противовоспалительную активность, обусловливают возможность ее реализации за счет отдельных групп полифенолов. Препарат ядровой древесины «Максар» проявил себя как антифлогистик, тогда как ПФК клеточных культур данного растения не вызывал существенного ослабления воспалительного отека. Поскольку ПФК из клеточной культуры маакии не содержит моно- и димерных стильбенов в отличие от нативного источника [6], можно предположить, что угнетение экссудативной фазы воспаления, характерное для полифенолов нативного растения, обусловлено наличием в них стильбенов.
Заключение
Оценка влияния полифенольных комплексов клеточных культур дальневосточных растений на экссудативную фазу острого воспаления показала, что фитокомплексы, существенно ослаблявшие флого-генное действие каррагенина (противовоспалительная активность более 30 %), можно расположить в
следующей последовательности уменьшения активности: марена > «Максар» > незабудочник > воробейник. В условиях двухнедельного превентивного введения полифенольных комплексов этих растений отмечено ингибирующее влияние на развитие острого воспалительного отека, вызванного карра-генином, что свидетельствует об их эффективности при остром воспалительном процессе. Выявленное нами воздействие полифенольных комплексов клеточных культур на одно из патогенетических звеньев воспаления открывает перспективы для комплексного изучения флоголитической активности принципиального нового вида фитосырья — фитокомплексов клеточных культур растений.
Благодарности
Авторы благодарят коллег из отдела биотехнологии Биолого-почвенного института ДВО РАН, возглавляемого член-корр. РАН, д.б.н. В.П. Булгаковым, за предоставленные клеточные культуры растений и сотрудников лаборатории химии природных хиноидных соединений Тихоокеанского института биоорганической химии ДВО РАН, возглавляемой к.х.н. С.А. Федореевым, за предоставленные данные по качественному и количественному составу ПФК клеточных культур.
Список литературы
1. Сигидин Я.А., Шварц Г.Я., Арзамасцев А.П., Либерман С.С. Лекарственная терапия воспалительного процесса. М., 1988. 240 с.
Sigidin Ya.A., Schwarz G.Ya., Arzamastsev A.P., Liberman S.S. The medicinal therapy of inflammatory process. М., 1988. 240 р.
2. Рязанцева И.Б. Экономические криминогенные факторы современного рынка лекарственных средств // Интернет-конференция «Охрана здоровья: проблемы организации, управления и уровни ответственности». 2007. http://ecsocman. edu.ru/db/msg/308472.html
Ryazantsevа I.B. Economic criminogenic factors of the modern market of medical products // Internet conference «Health protection: problems of the organization, management and levels of responsibility». 2007. http://ecsocman.edu.ru/db/msg/308472.html
3. Bulgakov V.P., Kozyrenko M.M., Fedoreyev S.A. et al. Shikonin production by p-fluorophenylalanine resistant cells of Lithospermum erythrorhizon // Fito-terapia. 2001. 72. 394—401.
4. Fedoreyev S.A., Veselova M.V., Krivoscheko-va О.Е. et al. Caffeic acid metabolites from Eritrichi-um sericeum cell cultures // Planta Med. 2005. 71. (5). 446-451.
5. Mischenko N.P., Fedoreyev S.A., Glazunov V.P. et al. Anthraquinone production by callus of Rubia cordifolia // Fitoterapia. 1999. 70. 552-557.
6. Fedoreyev S.A., Bulgakov V.P., Grischenko O.V. et al. Isoflavonoid composition of a callus culture of the relict tree Maackia amurensis // J. Agric. Food Chem. 2008. 56. (16). 7023-7031.
7. Брюханов В.М., Булгаков В.П., Зверев Я.Ф. и др. Клеточная культура Eritrichium sericeum Lehm. — источник полифенольных соединений, обладающих фармакологической активностью // Хим.-фармацевт. журн. 2008. 42. (6). 32—35.
Bryukhanov V.M., Bulgakov V.P., Zverev Ya.F. et al. The callus culture оГ Eritrichium sericeum Lehm. as the source of polyphenols with pharmacological activity // Chim.-pharmatzevt. zhurn. 2008. 42. (6). 32—35.
8. Мищенко Н.П., Федореев С.А., Брюханов В.М. и др. Химический состав и фармакологическая активность антрахинонов из клеточной культуры Rubia cordifolia // Хим.-фармацевт. журн. 2007. 41. (11). 38-41.
Mishchenko N.P., Fedoreyev S.A., Bryukhanov V.M. et al. Chemical composition and pharmacological activity of anthraquinones from Rubia cordifolia callus culture // Chim.-pharmatzevt. zhurn. 2007. 41. (11). 38-41.
9. Winter C.A., Risley E.A., Nuss G.W. Carrageen-an-induced оedema in the hind paw of the rat as an assay for anti-inflammatory activity // Proc. Soc. Exp. Biol. 1962. 111. 544-547.
10. Тринус Ф.П., Клебанов Б.М., Кондратюк В.И. Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) изучению нестероидных противовоспалительных фармакологических веществ. М.: Минздрав СССР, 1983. 16 с.
Trinus F.P., Klebanov В.М., Kondratyuk V.I. Methodical recommendations on experimental (pre-clinical) research of non-steroidal anti-inflammatory pharmacological substances. М: Ministry of Health of the USSR, 1983. 16 р.
11. Di Rosa M., Giroud J.P., Willoughby D.A. Studies of the acute inflammatory response induced in rats in different sites by carrageenan and turpentine // J. Path. 1971. 104. 15-29.
12. Vinegar R., Schreiber W., Hugo R. Biphasic development of carrageenan oedema in rats // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1969. 166. 96—103.
13. Crunkhon P., Mea cock S.E.R. Mediators of the inflammation induced in the rat paw by carrageenan // Br. J. Pharmacol. 1971. 42. 392-402.
14. Englberger W., Hadding U., Etschenberg E. et al. Rosmarinic acid: a new inhibitor of complement C3-convertase with anti-inflammatory activity // Int. J. Immunopharmacol. 1988. 10. (6). 729-737.
15. Al-Sereiti M.R., Abu-Amer K.M., Sen P. Pharmacology of rosemary (Rosmarinus officinalis Linn.) and its therapeutic potentials // Indian J. Exp. Biol. 1999. 37. (2). 124-130.
16. Inoue K., Takano H., Shiga A. et al. Effects of volatile constituents of rosemary extract on lung inflammation induced by diesel exhaust particles // Basic Clin. Pharmacol. Toxicol. 2006. 99. (1). 52-57.
17. Peake P.W., Pussell B.A., Martyn P. et al. The inhibitory effect of rosmarinic acid on complement involves the C5 convertase // Int. J. Immunopharmacol. 1991. 13. (7). 853-857.
18. Sanbongi C., Takano H., Osakabe N. et al. Rosmarinic acid in perilla leaf extract inhibits allergic inflammation induced by mite allergen, in a mouse model // Clin. Exp. Allergy. 2004. 34. (6). 971-977.
19. Ito H., Miyazaki T., Ono M., Sakurai H. Antiallergic activities of rabdosiin and its related compounds: chemical and biochemical evaluations // Bioorg. Med. Chem. 1998. 6. (7). 1051-1056.
20. Min B.G., Oh S.R., Lee H.K. et al. Sophorico-side analogs as the IL5 ingibitors from Sophora japoni-ca // Planta Med. 1999. 65. (5). 408-412.
21. Yun I.U., Oh S.R., Lee H.K. et al. Effect of genistein analogs on oxygen radical production in leukocytes stimulated by unopsonized zimosan // Planta Med. 2001. 67. (3). 274-276.
ANTI-INFLAMMATORY ACTIVITY OF POLYPHENOL COMPLEXES FROM CALLUS CULTURES OF FAR-EASTERN PLANTS
Оl'ga Vasyl'evna AZAROVA, Yakov Fedorovich ZVEREV
Altai State Medical University of Minzdravsotsrazvitie 656038, Barnaul, Lenin av., 40
In this study the probable anti-inflammatory activity of polyphenol complexes from callus cultures of far-eastern plants on carrageenan-induced paw oedema in rats was evaluated. Inhibitory influence of Indian madder, Eritrichium sericeum phytocomplexes in dosage 100 mg/kg and gromwell redroot phytocomplex in dosage 250 mg/kg on development of paw oedema has been determined during their intragastric pre-treatment in rats. Various dynamics of anti-inflammatory activity of phytocomplexes is defined by distinctions in chemical compound of polyphenols of studied plants.
Key words: anti-inflammatory activity, polyphenol complex, callus culture, gromwell redroot Lith-ospermum erythrorhizon, Eritrichium sericeum, amur maackia, Indian madder Rubia cordifolia.
Azarova O.V. — candidate of biological sciences, assistant professor, doctorant of pharmacology faculty; e-mail: kunaza@rol.ru
Zverev Ya.F. — doctor of medical sciences, professor of faculty of pharmacology; e-mail: zver@asmu.ru
