CC BY
28
5. Кашкин А.П., Леви Э.В. Использование протеиназ медицинского назначения в активной кожной анафилаксии // Химико-фармацевтический журнал - 1977. - № 12. - С. 43-49.
6. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М.: Медицина, 2000. - С. 25-32.
7. Гланц С. Медико-биологическая статистика - М.: Практика, 1998. -С. 324-356.
8. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / Под ред. проф. В.В. Меньшикова. - М.: Медицина, 1987. - 368 с.
9. Проблемы нормы в токсикологии / Под ред проф. И.М. Трахтенбер-га. - М.: Медицина - 1991. - С. 204.
ПРОТИВОВИРУСНАЯ АКТИВНОСТЬ МОДИФИЦИРОВАННОГО РЕМАНТАДИНА НА МОДЕЛИ ГЕРПЕТИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ
© Полякова И.Н.*, Шитикова Г.СД Нынь И.В.*
Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов» Федерального медико-биологического агентства, г. Санкт-Петербург
На модели герпетической инфекции проводили сравнительное изучение противовирусного действия ремантадина (Р) и ремантадина химически модифицированного декстраном (МР). Показано, что коэффициент защиты мышей при использовании МР составил 1,55, а исходного Р - 1,06, а индекс защиты составил 35,48 % и 5,6 %, соответственно. Целесообразно расширить изучение МР с целью получить результаты доклинического изучения для определения перспективы применения МР в медицине.
Ремантадин (Р) представляет собой солянокислую соль а-метил-1-адамантил-метиламина. При подщелачивании он переходит в форму основания с первичной аминогруппой. Для химической модификации ремантадина мы использовали прием ранее предложенный и описанный в [1, 2]. Он заключается в образовании шиффовых оснований между первичным амином и альдегидными группами окисленного декстрана, которые далее при воздействии боргидрида натрия или калия переходят в связь С-Ы".
* Научный сотрудник НПК «Новые лекарственные формы».
♦ Руководитель научно-производственного комплекса «Вирусные препараты», кандидат медицинских наук.
" Директор.
Модифицированный ремантадин (МР) содержал 20 % Р и остальные 80 % декстрана.
Материалы и методы. В работе были изучены Р и МР (0,5 % или 1,0 %), изготовленные на стерильной биводе. Оба препарата были уравновешены по действующему веществу, т.е. вводились в концентрациях одинаковых по исходному ремантадину.
Работа проводилась с использованием белых беспородных мышей массой 15-20 г. Препараты вводили подкожно, внутриорбитально (в синус глаза), а также внутривенно в хвостовую вену. Мышей по 6 штук в группе заражали вирусом простого герпеса I и II серотипов (штаммы УС или ВН), которые вводили интрацеребрально в разведениях 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5 (0,03 мл). За животными наблюдали в течение 11 дней. Учитывали летальность по группам, выбирали рабочую дозу разведения вируса, в которой определялась 50 % летальность мышей при внутримозговом заражении. Контрольным мышам вводили среду 199.
Для изучения лечебного действия препараты Р и МР использованы в концентрациях 0,3 %; 0,4 % и 0,5 % по действующему веществу. Доза в 0,1 мл раствора препаратов составила 0,3 мг, 0,4 мг или 0,5 мг. Контрольным группам мышей вводили физиологический раствор. Наблюдение за гибелью мышей в опытах проводили в течение 14 дней.
Результаты. Рабочая доза вирусов простого герпеса определена в разведении для штамма ВН равной 10-2 и для штамма УС равной 10-5. Эти разведения вирусов были использованы для изучения лечебного действия МР. Для лечения зараженных вирусом в мозг мышей применили МР через 24 часа после заражения. Препарат МР вводили ежедневно четырехкратно внутриорбитально по 0,1 мл (0,3 %, 0,4 % и 0,5 % раствора по действующему веществу, соответственно). Курсовая доза МР в лечебных схемах составила 1,2, 1,6 и 2,0 мг на курс, соответственно. В этих исследованиях нами не установлено защитного действия МР при применении выбранных схем лечения зараженных мышей. Гибель мышей была одинаковой как в контроле, так и в опыте.
В последующих опытах было начато более раннее лечение зараженных животных и увеличена курсовая доза МР до 4-5 мг на мышь. Для достижения лечебного эффекта была увеличена кратность введения препарата. Отработана максимально переносимая доза препарата, равная 0,1 мл 0,5 % раствора Р при внутриорбитальном введении. Лечение начинали через 1 час после заражения мышей, вводя препараты Р в орбитальной синус глаза дважды в день, чередуя глаза. При этом курсовая доза препарата по действующему веществу была доведена до 4,5 мг/мышь на курс лечения. Наблюдения за животными проводили на протяжении 16 дней. Результаты опыта позволяют считать, что при выбранной схеме и дозах применения препаратов Р проявляется его токсическое действие на жи-
вотных. На это указывает средняя продолжительность жизни контрольных и опытных мышей. В контроле срок жизни животных при заражении 10 ЕД, 100 ЕД и 1000 ЕД доз вируса герпеса 1 типа (штамм УС) составил соответственно 15,5, 14,4 и 9,1 дней. Тогда как введение не зараженным вирусами мышам Р уменьшает продолжительность их жизни до 14,1 дней, а введение МР - до 10,8 дней (средний срок жизни, соответственно). Вместе с тем, четко проявляется защищенность мышей от герпетической инфекции при применении МР, выражающаяся в уменьшении летальности и увеличении их выживаемости в опыте, по сравнению с контролем (табл. 1). Так, выживаемость мышей, леченных МР, составляет 57,2 %, тогда как в контроле - 33,4 %, при заражении 1000 ЕД инфекционного вируса герпеса. Выживаемость мышей, леченных Р, составляла 37,5 %, и практически не отличалась от контроля.
Таблица 1
Влияние препаратов ремантадина на летальность мышей от герпетической инфекции при внутриорбитальном введении препаратов ремантадина
Группа Летальность, % КЗ ИЗ, %
Контроль (физиологический раствор) 66,6 - -
Ремантадин 62,5* 1,06 5,6
Модифицированный ремантадин 42,8 1,55 35,48
Примечание: * не достоверно; не установлено защитного действия (р > 0,05).
В этом опыте летальность мышей, зараженных вирусом герпеса, составила в контроле 66,6 %, а среди мышей, защищенных МР, летальность составила 42,8 %. Коэффициент защиты определили равным 1,55, тогда как при применении Р этот коэффициент был ниже, и составлял 1,06.
Летальность среди мышей, зараженных герпесом и защищенных Р, была близкой к контрольной и равной 62,5 %.
Так что, в данной схеме лечения МР оказал выраженное лечебное действие от герпетической инфекции, хотя препарат применяли в субтоксических дозах. В результате проведенных исследований коэффициент защиты (КЗ) у МР определяли равными 1,55, а индекс защиты (ИЗ) - равным 35,58 %. У Р эти показатели определены равными 1,06 и 5,6 %, соответственно.
Таким образом, защитного действия Р от герпетической инфекции у мышей при такой схеме применения не установлено, тогда как ИЗ МР составил 35,58 %.
На последнем этапе исследований была поставлена задача изучения лечебного действия МР на модели герпетической инфекции у белых мышей при внутривенном введении препарата в хвостовую вену. Установлена максимально переносимая доза (МПД) МР, которая составила 1,25 мг/мышь
весом 15 грамм. Практически в хвостовую вену вводили 1 % раствор МР в количестве 0,125 мл однократно, что соответствовало МПД (125 мг/мышь). Контрольных и опытных мышей заражали вирусом герпеса в рабочей дозе инфекционного вируса, равной 100 ТЦД50/мл, по 0,03 мл в мозг. Опытным животным вводили однократно в хвостовую вену препарат МР, в количе -стве МПД. Учитывали летальность в контрольной и опытной группах мышей и определяли коэффициент защиты (КЗ) и ИЗ. Контрольные животные гибли в течение 3-5-7 дней после заражения.
При одноразовой дозе внутривенного введения МР через 48 или 24 часа после заражения мышей вирусом лечебного действия препарата не установлено. В связи с этим, было проведено исследование, где в параллельном опыте одной группе зараженных мышей вводили однократно внутривенно МР через 1 час после заражения вирусом, а другая группа зараженных животных для лечения получила МР в такой же дозе (0,125 мл 1 % раствора) подкожно через 1 час, через 24, 48 и 72 часа после инфицирования. Курсовая доза МР в первом случае (при внутривенном введении) составила 1,25 мг/мышь, во втором (при подкожном введении) - 1,25 х 4 = 5 мг/мышь. Полученные результаты представлены в табл. 2.
Таблица 2
Противовирусная защита мышей в зависимости от способа введения ремантадина
Группа Способ введения препарата МР Доза МР, мг/мышь Курсовая доза МР, мг/мышь Летальность, % КЗ ИЗ
Контроль - - - 71,4 - -
I Внутривенно однократно 1,25 1,25 66,6* 1,07 6,5
II Подкожно четырехкратно 1,25 5 50 1,4 28,57
Примечание: * нет статистических различий от контроля р < 0,05.
При анализе полученных данных установлено, что в группе контрольных мышей, не защищенных Р, зараженных вирусом простого герпеса (ВПГ) в количестве 100 тканевых цитопатогенных доз вируса, необходимых для того, чтобы погибла половина группы испытуемых животных, содержавшихся в 1мл раствора (100ТЦД50/мл), летальность составила 71,4 %.
В группе опытных мышей, получивших Р внутривенно однократно в количестве 1,25 мг/мышь, летальность была 66,6 %, КЗ был всего 1,07 и ИЗ был равен всего 6,5 %.
Во второй группе мышей, леченных Р подкожно четырехкратно по 1,25 мг/мышь, при курсовой дозе 5 мг/мышь, летальность была равной 50 %, т.е. ниже, чем в контроле на 21 %. При этом КЗ был 1,4 и индекс защиты был равен 28,57 %.
Можно сделать вывод, что МР обладает лечебным противовирусным действием в отношении герпесвирусной инфекции и для достижения этого эф-
фекта необходимо правильно выбирать курсовую дозу. При более высоких курсовых дозах, которые были достигнуты четырехкратным подкожным введением препарата, ингибирующий лечебный эффект МР стал очевидным.
Авторы благодарны Е. М. Дементьевой за статистическую обработку результатов.
Список литературы:
1. Иммобилизация протеолитического фермента террилитина на водорастворимой полимерной матрице / Т.Б. Тенникова [и др.] // Химико-фармацевтический журнал. - 1977. - Т. 11, Вып. 7. - С. 86-90.
2. Изучение физико-химических свойств протеолитического фермента террилитина, модифицированного сополимером на основе винилпирролидо-на / Т.Б. Тенникова [и др.] // Биохимия. - 1980. - Т. 45, Вып. 3. - С. 438-448.
СИНТЕЗ И ПРОТИВОВИРУСНАЯ АКТИВНОСТЬ МОДИФИЦИРОВАННОГО РЕМАНТАДИНА
© Полякова И.Н.*, Шитикова Г.СД Нынь И.В.*
Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов Федерального медико-биологического агентства, г. Санкт-Петербург
Изучали химическую модификацию ремантадина (Р) с помощью декстрана-полиглюкина. Показано что Р при взаимодействии с окисленным полиглюкином образует полимерное растворимое производное (МР). При испытании на куриных эмбрионах МР обладает токсичностью в 20 раз меньшей исходного Р. При лечении мышей, зараженных вирусом, МР показал высокий уровень защиты животных. Коэффициент защиты мышей, зараженных клещевым энцефалитом, при использовании МР в 1,4 раза выше, чем у исходного Р. Дальнейшее изучение МР позволит определить возможность применения в медицине.
Ремантадин (Р) представляет собой солянокислую соль а-метил-1-адамантил-метиламина и используется в настоящее время (в виде таблеток) при лечении гриппа и ОРЗ. Препарат оказывает угнетающее действие только на вирус гриппа типа А, а также на вирусы Herpes simplex типа I и II, вирусы клещевого энцефалита.
* Научный сотрудник НПК «Новые лекарственные формы».
♦ Руководитель научно-производственного комплекса «Вирусные препараты», кандидат медицинских наук.
" Директор.
