CC BY-ND
18
июнь №6 (219)
27
ПРОТЕКТИВНОЕ ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА «БЕСТИМ» НА ТЕЧЕНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИИ
О.А. Бургасова1, Н.Д. Ющук1, Е.А. Воскресенская2, Г.Я. Ценева2
PROTECTIVE EFFECT OF THE DRUG «BESTIM» IN THE COURSE OF EXPERIMENTAL PSEUDOTUBERCULOSIS INFECTION
O.A. Burgasova, N.D. Yuschuk, E.A. Voskresenskaya, G.Ya. Tseneva ТОУ ВПО МГМСУ Минздравсоцразвития, 2ФГУН НИИЭМ им. Пастера Роспотребнадзора, г. Санкт-Петербург
Дана оценка эффективности применения препарата «Бестим» при экспериментальной псевдотуберкулезной инфекции с учетом сравнительной количественной характеристики диссеминации Y. pseudotuberculosis в органы и ткани животных опытной и контрольной групп. Показано защитное влияние препарата «Бестим», выражающееся в ограничении генерализации инфекционного процесса, сокращении его длительности, предотвращении гибели животных. Проведенный эксперимент показал возможность применения препарата «Бестим» в клинических исследованиях.
Ключевые слова: экспериментальная псевдотуберкулезная инфекция, препарат «Бестим».
The authors give the evaluation of the efficacy of the application of the drug «Bestim» at the experimental pseudotuberculosis infection in view of the comparative quantitative characteristics of the dissemination of Y. pseudotuberculosis in organs and tissues of animals of experimental and control groups. The article shows a protective effect of the drug «Bestim», such as restrictions on the generalization of the infectious process, reduce of its length, prevention of the animal death. The experiment showed the possibility of application of the drug «Bestim» in clinical trials. Keywords: experimental pseudotuberculosis infection, the drug «Bestim».
Введение. Известно, что возбудитель псевдотуберкулеза характеризуется широким набором факторов патогенности, определяющих, с одной стороны, высокий патогенный потенциал Yersinia pseudotuberculosis, а с другой — полиморфизм проявлений заболевания, часто затрудняющий своевременную диагностику и адекватное лечение. Лечение псевдотуберкулеза нельзя считать полностью решенным вопросом. До настоящего времени продолжается поиск эффективных средств и методов лечения больных. Поскольку ряд клинических штаммов Y. pseudotuberculosis обладает лекарственной устойчивостью, вызывая тяжелое течение с генерализацией инфекционного процесса, сопровождающегося, как правило, снижением резистентности организма, то традиционное лечение псевдотуберкулеза часто не приносит успеха. В этой связи актуальной задачей является поиск других подходов в лечебной тактике, в том числе, с использованием препаратов, обладающих иммуномодулирующей биологической активностью.
Наше внимание привлек препарат «Бес-тим», который не использовался в комплекс-
ной терапии псевдотуберкулеза. Опыт применения препарата «Бестим» в клинической практике продемонстрировал перспективность использования данного препарата для лечения таких заболеваний, как туберкулез легких, хламидийная инфек ция, сепсис и другие (1, 2, 3). В настоящее время препарат выпускает ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России (г. Санкт-Петербург). Фармакологическое действие препарата определяется усилением дифференцировки и пролиферации предшественников Т-лимфоцитов. Бестим стимулирует продукцию интерлейкина-2 и гамма интерферона, увеличивает экспрессию рецепторов интерлейкина-2 и маркеров дифференцировки Т-клеток, восстанавливает иммуно-регуляторный индекс. Препарат «Бестим» положительно влияет на течение инфекционных процессов, протекающих с преимущественным участием клеточного иммунитета.
Учитывая, что одним из основных патогенных свойств возбудителя псевдотуберкулеза является генерализация инфекции, в условиях эксперимента изучена роль «Бестима» в
28
ЗНиСО ИЮНЬ №С (219)
противоинфекционной защите лабораторных животных от развития псевдотуберкулезного патологического процесса.
Цель исследования — оценить эффективность применения препарата «Бестим» при экспериментальной псевдотуберкулезной инфекции с учетом сравнительной количественной характеристики диссеминации Y. pseudotuberculosis в органы и ткани животных опытной и контрольной групп.
Материалы и методы. Моделировали генерализованный инфекционный процесс у 160 белых беспородных мышей массой 14— 16 г. Две группы опытных и контрольных животных заражали интрагастрально вирулентным штаммом Y. pseudotuberculosis 1 серотипа № 560, выделенным от больного. Штамм обладает комплексом факторов патогенности (плазмида вирулентности иерсиний pYV, суперантиген YPM, плазмида pVM 82 МД), характеризуясь высокой вирулентностью. Доза заражения — 108 м.к./мл. Использование указанной дозы заражения обосновано на данных предварительных опытов моделирования псевдотуберкулезной инфекции, проводимого в рамках испытания других иммунобиологических препаратов, а также препарата Бестим при пробных экспериментах при введении Y. pseudotuberculosis в дозах 5 х 107, 108, 109 м.к./ мл. Для нейтрализации желудочного сока иерсиний вводили в 7,5 % растворе пищевой соды (NaHCO3) в объеме 0,3 мл. Животным опытной группы (50 мышей), начиная с 3-х суток от момента заражения, ежедневно вводили Бестим в/б (1,0 мкг/кг) в течение пяти дней. У опытных и контрольных (70 мышей) животных в динамике инфекционного процесса на 3, 6, 9, 14, 21 сутки бактериологическим методом (4) исследовали пробы печени, селезенки, мезентериальных лимфатических узлов, тонкого кишечника. Для этого по 10 мышей опытной и контрольной групп на каждом сроке исследования умерщвляли хлороформом, в асептических условиях извлекали органы, взвешивали, помещали в стерильные ступки и готовили растиранием гомогенаты. Затем к каждой пробе добавляли 1 мл 0,9 % раствора NaCl, перемешивали и по 0,1 мл засевали на четыре чашки Петри с дифференциально-диагностической средой с бромтимоловым синим (СБТС). Через 48 ч просматривали рост колоний, подсчитывали число выросших колоний (КОЕ) и рассчитывали на грамм исследуемого органа мыши; оценивали накопление возбудителя в органах, длительность
персистенции в них и, соответственно, про-тективный эффект Бестима. Оценку действия препарата «Бестим» проводили в динамике инфекционного процесса с морфологической визуальной оценкой органов и тканей (увеличение органов, наличие некротических образований в печени и селезенке и увеличение лимфоидных образований в кишечнике), также протективный эффект препарата оценивали по количеству размножившихся бактерий на каждом сроке исследования, длительности выживания и частоте гибели опытных и контрольных животных.
Результаты и обсуждение. У мышей контрольной группы на 3 сутки после заражения высоко вирулентным штаммом наблюдали ме-заденит и генерализацию возбудителя из кишечника в паренхиматозные органы, в которых происходило размножение бактерий . На 3 сутки отмечался выраженный энтероколит, абсцедирующий мезаденит, генерализация инфекции, милиарные очаги в печени и селезенке. Концентрация иерсиний в кишечнике составила 3,2 х 105 КОЕ/г, в паренхиматозных органах — 1,0 х 103, 5,4 х 103 КОЕ/г в печени и селезенке, соответственно. Гибель единичных (8 мышей) животных. К 6 суткам выраженность инфекционного процесса в этой группе животных существенно возросла. Микробиологически к этому сроку количество иерсиний у животных увеличилось в лимфатических узлах в 31 раз, в печени — в 17 раз, в селезенке — в 33 раза. Морфологически отмечалась прогрессирующая генерализация инфекции, гнойный мезаденит, милиарные и сливные абсцессы, преимущественно в печени. Гибель животных к этому сроку составила 30 % животных. К 9 суткам патологический процесс начинал постепенно ослабевать, в мезентери-альном лимфоузле концентрация иерсиний уменьшалась до 6,9 х 104 КОЕ/г, в других органах существенно не изменялась. В печени и селезенке отмечали единичные абсцессы. Гибель животных составила 20 %.
В опытной группе животных, получавших препарат «Бестим» в течение 3 дней, наблюдали ослабление инфекционного процесса. К шестым суткам выраженных изменений внутренних органов не находили (отмечено небольшое увеличение лимфатических узлов и селезенки, единичные гранулемы в печени и селезенке), иерсинии высевались в существенно меньших концентрациях по сравнению с контрольными животными: в печени до 1,8х 103 КОЕ/г, в кишечнике — 2,6х 104 КОЕ/г. Лимфатические
ИЮНЬ №6 (219)
29
Таблица 1. Локализация Y. Pseudotuberculosis в органах мышей* при интрагастральном заражении
Исследуемый орган Сутки от момента заражения КОЕ/г органа у животных опытной группы (Y. ps.+ Бестим) КОЕ/г органа у животных контрольной группы (Y. ps.)
Печень 3 1,0 х 103
Селезенка 5,4 х 103
Лимфоузел 5,9 х 103
Кишечник 3,2 х 105
Печень 6 1,8 х 103 1,7 х 104
Селезенка 1,3 х 104 1,8 х 105
Лимфоузел 0 1,8 х 105
Кишечник 2,6 х 104 3,1 х 105
Печень 9 3,5 х 103 3,3 х 104
Селезенка 1,0 х 104 1,8 х 105
Лимфоузел 2,1 х 103 6,9 х 104
Кишечник 1,8 х 103 3,4 х 105
Печень 14 0 5,3 х 104
Селезенка 0 1,8 х 105
Лимфоузел 0 0
Кишечник 0 0
Печень 21 0
Селезенка 0
Лимфоузел 0
Кишечник 0
* — концентрация возбудителя в органах по результатам бактериологических посевов.
узлы на этом сроке были свободны от иерси-ний. Гибели мышей не отмечено.
К 9 суткам у опытных животных, получавших пятидневный курс Бестима, выраженность инвазии и размножения иерсиний в органах была существенно слабее по сравнению с контрольной группой. Иерсиний высевали из паренхиматозных органов в концентрации 103—104 КОЕ/г, из кишечника — 1,8 х 103 КОЕ/г.
На 14 сутки у опытных животных иерснии не выделяли, равно как и не находили изменений во внутренних органах. Морфологические изменения во внутренних органах также не отмечены. Напротив, у животных контрольной группы инфекционный процесс продолжался и сопровождался обнаружением высоких концентраций иерсиний в печени и селезенке на уровне 5,3 х 104 и 1,8х105 КОЕ/г, соответственно (табл. 1).
Выводы. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о защитном влиянии препарата «Бестим» при экспериментальной псевдотуберкулезной инфекции, проявляющимся ограничением диссеминации Y. pseudotuberculosis в органы и ткани у 80—90 % мышей, сокращением сроков развития (на 6 дней) патологического
процесса, предотвращением гибели животных. Проведенный эксперимент показал возможность применения препарата «Бестим» в клинических исследованиях.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Заболотных Н.В., Виноградова ТИ., Сквор-цова Л.А., Колобов А.А., Петров А.В. Пига-рева Н.В., Сахарова И.Я., Васильева Г.Ю. Бестим в комплексной терапии туберкулеза легких /Под ред. Ю.Н. Левашева и А.С. Симбирцева. СПб.: Борей-Арт, 2007. 68 с.
2. Карпов И.А. Особенности патогенеза, клинических проявлений и лечения осложнений после реконструктивно-восстановительных операций: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук /И.А. Карпов. Челябинск, 2009. 47 с.
3. Лобзин Ю.В., Ляшенко Ю.И., Поздняк А.Л. Хла-мидийные инфекции. СПб.: ООО «Издательство ФОЛИАНТ», 2003. 400 с.
4. Ценева Г.Я., Кокорина Г.И., Воскресенская Е.А., Бургасова О.А. и др. Псевдотуберкулез и иерси-ниоз (эпидемиология, клиника, диагностика, терапия): Мет. рекоменд. МЗ и Соцразвития РФ. СПб., 2005. 49 с.
Контактная информация:
Бургасова Ольга Александровна, тел.: (499)-972-47-73 Contact information:
Burgasova Olga Aleksandrovna, tel.: (499)-972-47-73
