CC BY
17PROPERTIES OF TRICHODERMA SP 4 MICROMYCETTE
Karimov H.,
base doctoral student, Institute of Microbiology, Academy of Sciences of Republic of the Uzbekistan, Uzbekistan, Tashkent Turaeva B.,
PhD of Biological Sciences, senior researcher, Institute of Microbiology, Academy of Sciences of Republic of the Uzbekistan, Uzbekistan, Tashkent
Azimova N.,
PhD of Biological Sciences, senior researcher, Institute of Microbiology, Academy of Sciences of Republic of the Uzbekistan, Uzbekistan, Tashkent
Khamidova Kh.
PhD of Biological Sciences, senior researcher, Institute of Microbiology, Academy of Sciences of Republic of the Uzbekistan, Uzbekistan, Tashkent
СВОЙСТВА МИКРОМИЦЕТА TRICHODERMA SP 4
Каримов Х.Х.
Базовый докторант, Институт микробиологии,Академия Наук Республики Узбекистан, Республика
Узбекистан, г. Ташкент Тураева Б.И.
PhD, ст. науч. сотр., Институт микробиологии, Академия Наук Республики Узбекистан,
Республика Узбекистан, г. Ташкент Азимова Н.Ш.
PhD, ст. науч. сотр., Институт микробиологии, Академия Наук Республики Узбекистан,
Республика Узбекистан, г. Ташкент Хамидова Х.М.
канд. биол. наук, ст. науч. сотр., Институт микробиологии, Академия Наук Республики
Узбекистан, Республика Узбекистан, г. Ташкент
Abstract
The corn root rhzosphere and 23 local microorganisms strain belonging to the Trichoderma family were isolated from other sources. From these strains, during the experiments, Trichoderma sp 4 micromiset strain was selected due to its high antifungal activity. The temperature of 28-30°С for the growth of the fungal strain of Trichoderma sp 4, the nutrient medium was determined to be optimal in the potato dextrose agar with a рН of 57. Fusarium oxysporum, Verticillium dahliae and Alternaria alternate were found to exhibit active antagonistic properties against phytopathogenic fungi.
Аннотация
Из ризосферы корней кукурузы и пшеницы ранее было выделено 23 местных штамма микроорганизмов, принадлежащих к роду Trichoderma. В ходе исследования среди выделенных штаммов отобран микромицет Trichoderma sp 4 с высокой противогрибковой активностью. Оптимальная температура роста гриба Trichoderma sp 4 на картофельно-декстрозном агаре (КДА) - 28 - 30 ° C, pH 5-7. Установлено, что гриб Trichoderma sp 4 проявляет активные антагонистические свойства в отношении фитопатогенных грибов Fusarium oxysporum, Verticillium dahliae и Alternaria alternata.
Keywords: Trichoderma sp 4, phytopathogen, Fusarium oxysporum, Verticillium dahliae, Alternaria alternata, antagonist, micromycet.
Ключевые слова: Trichoderma sp 4, фитопатоген, Fusarium oxysporum, Verticillium dahliae, Alternaria alternata, антагонист,микромицет.
Введение
Защита сельскохозяйственных растений от болезней и вредителей является важным звеном аграрного сектора. Вопросы разработки эффективных микробных средств защиты растений являются актуальными и постоянно находятся в центре внимания науки и производства. В настоящее время основным средством защиты растений от болезней и вредителей является использование химических средств защиты. Желание скорейшего достижения
максимального эффекта до сих пор является приоритетным в выборе средств защиты растений. Однако, одной из основных проблем в растениеводстве является появление резистентности фитопато-генных микроорганизмов к химическим препаратам. Изменение чувствительности микроорганизмов способствует увеличению кратности обработок и повышению используемых концентраций препаратов, что в свою очередь, приводит к ухудшению экологической ситуации. В частности, значительный ущерб наносят фитопатогенные
грибы в почве. Из-за изменений в сельском хозяйстве в последние годы распространение фитопато-генных грибов, принадлежащих к родам Pitium, Phytophthora, Botrytis, Rhizoctonia и Fusarium, Alternaria, Verticillium и других расширяется, что отрицательно сказывается на людях и окружающей среде, а также на экономическом потенциале страны [1, с,165-184].
Известно, что грибы рода Trichoderma являются продуцентами ряда метаболитов, обладающих антагонистической активностью по отношению к широкому кругу бактериальных и грибных патогенов. 90% грибов, принадлежащих к роду Trichoderma, используются в качестве агентов биологической борьбы при выращивании сельскохозяйственных культур во всем мире [2, с.565-572]. Биопродукты, созданные на основе этих культур, и предприятия, которые их больше всего производят, расположены в Америке, Европе и Азии. Большинство из них числятся в списке препаратов с фунги-цидными свойствами и только 38% продаются [3, с. 171-126].
Эффективность этого микроорганизма объясняется защитой растений, усиленным вегетативным ростом и высокими противогрибковыми свойствами против патогенных популяций в сельскохозяйственных условиях, а также активацией разрушающих целлюлозу микроорганизмов в почве.
Грибы рода Trichoderma также обеспечивают резкое сокращение популяции фитопатогенных грибов, стабилизируют баланс почвенных микроорганизмов, предотвращают заболевания растений, вызванные фитопатогенами. Поэтому целесообразно широко использовать результаты современных исследований метаболитов гриба Trichoderma, обладающего механизмом фунгицидного действия, особенно в процессе защиты растений в сельском хозяйстве. Первое заметное исследование было проведено Weidling (1932) и показало высокую противогрибковую активность грибов, принадлежащих к семейству Trichoderma, от дейтеромице-тов до фитопатогенных грибов [4, с.837-845].
Биологическая активность изолятов трихо-дермы обусловлена образованием первичных (белки, ферменты, аминокислоты) [5,с.5803-5808] и вторичных метаболитов (антибиотики, фитогор-моны, витамины и др.), проявляющихся в виде антагонизма и полного доминирования над фитопато-генами [6,с.4-10; 7,с.1428-1434; 8,с.337-393; 9,с.70-72]. Грибы Trichoderma защищают сельскохозяйственные культуры от таких патогенов как Rhizoctonia, Sclerotium, Sclerotinia, Fusarium, Armillaria, Colletotrichum, Verticillium, Venturia, Endothia, Pythium, Phytophthora, Rhizopus, Diaporthe, Fusicladium.
Определено сочетание ферментов и антибиотиков, синтезируемых микромицетами триходер-мии, и активное действие их метаболитов на фито-патогены [10,c.73-79; 11,c.4364-4367].
Под влиянием генерализованной активности всех первичных и вторичных метаболитов, синте-
зируемых триходермой за счет растворения фито-патогенной клеточной стенки ограничивает развитие и активность патогенных грибов [12,c.65-74]. В фитопатогенных гифах происходит процесс де-струкции-аппрессора, гифы штамма-антагониста проникают в фитопатогенно-грибной мицелий и демонстрируют доминирование [13,c.85-88; 14,c. 180-187]. Это свойство широко используется при скрининге штаммов-продуцентов биопрепаратов in vitro [15,c.52-56; 16,c.68-70]. Dennis и Webster (1971) первыми установили, что продукция антибиотиков грибом Trichoderma связана с активными антагонистическими свойствами синтеза [17,c.25-39;18,c.41-48] веществ с избыточной антибиотической активностью [19,c.152-159; 20,c.409-412; 21,c. 181-185; 22,c.43-56]. Пептаиболы представляют собой большое семейство антимикробных пептидов, продуцируемых Trichoderma sp. Было обнаружено, что антибиотический механизм действия пептаиболов Тricoconin VI против патогенных растений грибов происходит через апоптоз [23,c.950-964]. Грибы, принадлежащие к роду Trichoderma, были выделены из различных источников, T.harzianum, T.koningii, T.hamatum, T. longibrachiatum, T.reesei, и было обнаружено, что они продуцируют вещества антибиотической природы [24,c.166-175]. Проведены системные исследования активных антагонистических свойств штамма T. harzianum в отношении фитопатоген-ного гриба Botritis cinerea, выделения антибиотических веществ и образующихся им ферментов [25,c. 1011-1020]. Изучена фитогормонная активность штамма Trichoderma harzianium 55 благодаря синтезу вторичных метаболитов ГК и ИУК [26,c.79-86; 27,c.32-43]. ИУК активирует деление клеток в растущей части корня растения и усиливает развитие корня, устраняет токсичные метаболиты, продуцируемые патогенными микроорганизмами и непосредственно контролирует корневые патогены [28,c.43-56].
Рядом исследований показано снижение заболеваемости различных культур (бобов) при обработке почв грибами антагонистами патогенов [29,c.163-173; 30,c.1022-1028; 31,c.13-19; 32,c.301-305;33,c.401-406; 34.c.156-167; 35,c.99-107]. P.citrinum, T.viride и T. harzianum используют в качестве средства биологической борьбы для защиты фасоли от F.oxysporum [36,c.44-57; 37,c.493-502].
Защита сельскохозяйственных культур от фи-топатогенов, рациональное использование средств борьбы для получения высоких и качественных урожаев дает эффективные результаты. В этой связи широко используются штаммы T.viride, T.lignorum, T.koningi, T.harzianum. Они обладают антагонистическими свойствами широкого спектра и синтезируют антибиотики, такие как виридин, глиотопсин, циклоспорин, аламицин, ториксопо-лин [38,c.23-24].
Материалы и методы исследования
Для выбора оптимальной питательной среды для гриба Trichoderma sp 4, выделенного из ризосферы кукурузы были испытаны следующие среды; картофельный агар с декстрозой (KДA),
Эшби, Сабуро, Чапека, Мандельса, крахмало-аммиачный агар (KAA), сусло агар, соевый казеин, сыворотка. Грибы выращивали в чашках Петри при температуре 28- 30 ° C.
Радиус колоний измеряли с помощью линейки каждые 24 часа.
Для выбора оптимальной среды гриб культивировали жидкой и твердой среде КДА при pH 3,4,5,6,7,8 и 9. Глубинное культивирование проводили в колбах Эрленмейера на 500 мл с 200 мл среды, инкубировали в шейкере при 180 об/мин при температуре 28- 30 °С.
В качестве посевного материала использовали суспензию штамма Trichoderma sp 4 с концентрацией 106-7 спор / мл, выращенного в течение 6 суток в среде с КДА.
Изучено образование биомассы штаммом Trichoderma sp 4 на питательной среде КДА.
Антагонистические свойства штамма Trichoderma sp 4 против фитопатогенных грибов Fusarium oxysporum, Verticillium dahliae, Alternaria alternata определяли методами лунок и агаровых блоков [39,c.311].
Среднее значение трех интеграционных результатов, полученных в трех отдельных экспериментах (± SE), использовали в Microsoft Excel (США, ассоциация Microsoft) для анализа данных. Что касается значений, полученные
Скорость роста колоний (диаметр, мм) штамма
результаты были проанализированы в программе ANOVA на предмет достоверного отличия от контрольного значения при Р<0,05. Результаты исследования Известно, что питательная среда температура, рН являются важными источникам для развития штаммов микромицетов, выделенных из природы [40,с.440; 41,с.146-170].
Культуральные свойства гриба Trichoderma sp 4 изучали в процессе роста колоний, выращенных на различных средах; картофельный агар с декстрозой (КДА), Эшби, Сабуро, Чапека, Мандельса, крахмало-аммиачный агар (КАА), сусло-агаре, сыворотке при температуре 28-30 ° С при поверхностним культивировании (таблица 1).
По результатам роста было обнаружено, что колонии гриба Trichoderma sp 4 быстрорастущие, уже на вторые сутки показали видимый рост на всех испытанных нами средах, за исключением среды Эшби, а на 4-тые сутки колонии на среде КДА занимали полностью всю поверхность чашки Петри. Центр 3-дневной колонии на этой среде был темно-зеленым, это свидетельствует о том, что конидиеобразование начинается с центра колонии, а к краю колонии переходит от светло-зеленого к белому. К 4-5 суткам колония приобретала темно-зеленый цвет, Колония сформировала кольцевую форму (рис.1).
Табл. 1
Рост гриба, сутки КДА Эшби Сабуро Чапека Мандельса (КАА) Сусло агар Соевый казеин Сыворотка с агаром
2 24±0,3 0 14±0,3 16±0,7 16±0,9 8±0,7 25±0,1 10±0,9 8±0,7
3 51±0,1 0 46±0,1 40±0,1 43±0,3 30±0,3 50±0,3 30±0,3 19±0,7
4 90±0,05 10±0,1 79±0,3 72±0,3 75±0,5 55±0,1 90±0,05 47±0,3 32±0,3
5 90±0,05 21±0,3 90±0,05 90±0,05 90±0,05 86±0,1 90±0,05 57±0,1 68±0,1
6 90±0,05 35±0,0 90±0,05 90±0,05 90±0,05 90±0,05 90±0,05 67±0,1 90±0,05
9 90±0,05 70±0,1 90±0,1 90±0,05 90±0,05 90±0,05 90±0,05 71±0,1 90±0,05
На сусло-агаре уже на 2 сутки в центре колонии образуется рыхловатый, войлочный бесцветный мицелий с усиливающимся развитием воздушного мицелия к периферии. На 4-5 сутки зона спо-роношения представлена плотным невысоким мицелием, на котором расположены дерновинки, образованные органами спороношения, близко расположенными друг к другу. Цвет колонии вначале белый, на 5 сутки роста переходит из желто-зеленого в темно-зеленый цвет. Колонии гриба Trichoderma sp 4 имеют форму кольцеобразных концентрических кругов.
Среды Сабуро, Чапека, Мандельса и КАА показали более медленный рост, колония гриба покрывала поверхность чашки Петри только на 5-сутки. Мицелий по внешней окружности колонии
был белого цвета, равномерно распределен ради-ально от центра и местами в виде небольших гранул. В центре колонии было обнаружено, что мицелий бесцветный, пушистый, паукообразный. Наиболее медленный рост отмечен на среде Эшби и соевом казеине, диаметр колоний не превышал 71см.
С целью выбора относительно недорогой питательной среды нами была испытана сыворотка, являющаяся отходом молочного производства. На этой среде колония покрыла поверхность чашки на 6 сутки. Воздушный мицелий слабо развит, не густой, представлен дерновинками вначале белого, затем желтоватого цвета, на 6-7 сутки окраска становится зеленой.
Рисунок 1. Колонии гриба Trichoderma sp 4 на различных питательных средах А-КДА; Б- Сабуро; С- Чапека; D- Мандельса; E- КАА; F- Сусло-агар; G- Соевый казеин; H- сыворотка.
Согласно результатам исследования, гриб Trichoderma sp 4 является быстрорастущим грибом, и в большинстве изученных питательных сред его колония полностью покрывает поверхность чашки через 4 дня. В колонии гриба Trichoderma sp 4 образование зеленого пигмента, радиального и кольцевидного роста, зернистого мицелия и конидий является морфологической особенностью, характерной грибов рода Trichoderma [42,c.451-456; 43,c.2710-2723; 44,c.58; 45,c.60; 46,c.10; 47,c.108].
Изучение влияния pH среды проводили на среде
Работами ряда ученых установлена антагонистическая активность грибов рода Trichoderma к широкому спектру патогенных и условно -патогенных микроорганизмов [48,c.171-175; 49,c.295-299; 50,c.4364-4370]
биомассы проводили в жидкой питательной среде в динамике роста в течение 20 дней. Полученные результаты показали, что при pH среды от 5 до 7 содержание биомассы гриба уже на 3-6 сутки составляло 44-47 мкг/мл, максимальное количество биомассы было получено на 8-14 сутки роста культуры (рис.2).
При pH 3-4 и высокой щелочности (8-9) среды скорость роста культуры и образование биомассы штаммом Trichoderma sp 4 было низким.
Нами проведены исследования по изучению антагонистической активности гриба Trichoderma sp 4 по отношению к широко распространенным в Узбекистане фитопатогенам Fusarium oxysporum,
КДА с значениями pH от 3 до 9. Образование
8 10 12 14 16 18 20 сутка
Рис. 2 Влияние pH на образование биомассы Trichoderma sp 4
Verticillium dahliae, Alternaria alternata. Гриб - антагонист выращивали в глубинных условиях на среде КДА при различных значениях pH от 3 до 9.
Как показали результаты исследований уже на 3-тьи сутки штамм проявил максимальную антагонистическую активность к патогенам A. alternata, F.oxysporum и V. dahliae при росте на питательной среде КДА при рН равной 6,0. Зона подавления роста A. alternata при pH 6 составила 44, при pH 7 - 38 мм. Зона подавления роста патогенаA. alternata при дальнейшем культивировании гриба Trichoderma sp 4 до 6 суток была достаточно высокой, за исключением рН 3,0, где подавления роста патогена не
наблюдалось. Действие гриба на F.oxysporum было активным уже на 3-и сутки при рН 5-7 - 40 ,42, 42 мм, соответственно. При рН 3, антагонизма по отношению к F.oxysporum не наблюдалось, а при выращивании гриба Trichoderma sp 4 в щелочных условиях антагонистическая активность значительно снижалась. Зона подавления роста фитопа-тогена V. dahliae гриб ом Trichoderma sp 4 была наиболее высокой ( от 32 до 50 мм ) при выращивании до 6 суток. Наименьшая активность отмечена при выращивании гриба при рН-3.(табл.3, рис.3)
Табл. 3
Влияние pH питательной среды на антагонистические свойства штамма Trichoderma sp 4
Патогенные грибы pH среды
3 4 5 6 7 8 9
3 сутки (мм)
A. alternata 14±0,9 18±0,3 28±0,3 44±0,9 38±0,9 18±0,6 10±0,8
F.oxysporum 8±0,3 8±0,3 40±0,3 42±0,6 42±0,6 28±0,9 12±0,8
V. dahliae 4±0,3 42±0,3 42±0,3 44±0,8 38±0,6 32±0,9 20±0,8
4 сутки (мм)
A. alternata - 30±0,3 34±0,3 32±0,3 44±0,6 40±0,9 36±0,8
F.oxysporum - 8±0,3 34±0,3 28±0,3 34±0,7 30±0,6 18±0,5
V. dahliae 4±0,7 44±0,7 50±0,7 42±0,6 46±0,6 42±0,9 34±0,3
6 сутки (мм)
A. alternata - 38±0,9 28±0,9 30±0,6 40±0,9 38±0,9 26±0,9
F.oxysporum - 4±0,6 32±0,6 38±0,9 36±0,7 28±0,7 6±0,3
V. dahliae 5±0,3 44±0,6 34±0,6 36±0,9 44±1,2 42±1,2 14±0,3
Рис. 3. Антагонистические свойства штамма Trichoderma sp 4, выращенного в средах с различным pH, против патогенных штаммов (лунок метод) А) A.alternata;В) F. oxysporum;C) V. dahliae
Заключение
В ходе исследования изучали влияние 9 различных питательных сред на рост микромицета Trichoderma sp.4. Было показано, что гриб является быстрорастущим, уже на 4 сутки на средах КДА и сусло покрывал всю поверхность чашки Петри, а на 5 сутки на средах Сабуро, Чапека, Мандельса, КАА, агаризованной сыворотке. Изучено влияние исходного значения pH на накопление биомассы и антагонистическую активность гриба Trichoderma sp. 4 к фитопатогенам. Установлено, что гриб растет в диапазоне pH от 4,0 до 9,0 и проявляет антагонизм к фитопатогенам Fusarium oxysporum, Verticillium dahliae, Alternaria alternata. Наибольшее образование биомассы и антагонистические свойства наблюдалась при выращивании на среде КДА. срН от 5,0 до 7,0. Максимальная антагонистическая активность гриба Trichoderma sp. 4 к фитопатогенам отмечена при рН 5 - 7 в 3 и 4 суточной культуре.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:
1. Chet I, Inbar J, Hadar I (1997) Fungal antagonists and mycoparasites. In: Wicklow DT, Siderstrim B (eds) The Mycota IV: Environmental and microbial relationships. Springer-Verlag, Berlin, pp 165-184.
2. Vyas SC, Vyas S (1995) Integrated control of dry root of soybean. In: Lyr H, Russell PE and Sisler HD (eds) Modern fungicides and antifungal compounds. Intercept, Andover, pp 565-572
3. Sheridan L. Woo1., Michelina Ruocco., Francesco Vinale., Marco Nigro., Roberta Marra., Nadia Lombardi., Alberto Pascale., Stefania Lanzuise., Gelsomina Manganiello and Matteo Lorito. Trichoderma -based Products and their Widespread Use in Agriculture // The Open Mycology Journal. -2014. -V8. -P 171-126
4. Weidling R. Trichoderma lignorum as a parasite of soil fungi// Phytopath. -1932. -Vol.22, N7. -P. 837-845.
5. Kh.M. Khamidova, B.I.Turaeva, H.Kh.Kari-mov, Z.S.Shakirov. Properties of the cellulase and xy-lanase enzyme complexes of Trichoderma harzianum UzCF-28.//EurAsian Journal of BioSciences 14: 2020. -P. 5803-5808. -IF -0.59. H-5.
6. Howell C.R. Mechanisms employed by Trichoderma species in the biological control of plant diseases. The history and evolution of current concepts // Plant Dis. -2003. -Vol. 87. -P. 4-10. 6.
7. Green H. Suppresion of the Biocontrol Agent Trichoderma harzianum by Mycelium of the Arbuscular Mycorrhizal Fungus Glomus intraradices in Root-Free Soil / H.Green, J.Larsen, P.A.Olsson, D.F.Jensen, I.Jakobsen // Applied and Environmental Microbiology. -1999. -Vol. 65, N4. -P. 1428-1434
8. Harman G.E. Myths and dogmas of biocon-trol. Changes in perceptions derived from research on Trichoderma harzianum T-22 // Plant Dis. -2000. -Vol. 84. -P. 337-393
9. B.I.Turaeva, N.Y.Zukhritdinova, X.X.Kari-mov, Kh.M Khamidova, Z.Y. Ahmedova The antagonistic activity of fungus T. harzianum uz cf - 55 against some phytopathogens. European Journal of Biomedical
AND Pharmaceutical sciences. Volume: 3 Issue: 9 7072 Year: 2016
10. Lorito M. Chitinolytic enzymes and their genes /M.Lorito, G.E.Harman, C.P.Kubicek // Tricho-derma and Gliocladium. -Taylor and Francis. London. - 1998. -Vol. 2. -P. 73-99.
11. Schirmbock M. Parallel formation and syner-gism of hydrolytic enzymes and peptaibol antibiotics, molecular mechanisms involved in the antagonistic action of Trichoderma harzianum against phytopatho-genic fungi / M.Schirmbock, 61 M.Lorito, Y.L.Wang, C.K.Hayes, I.Arsian-Atac, F. Scala, G.E.Harman, C.P.Kubicek // Appl. Environ. Microbiol. -1994. -Vol. 60, N12. -P. 4364-4370.
12. Harman, G.E., 1996. "Trichoderma for biocontrol of plant pathogens: From basic research to comercialized products," Conference on Biological Control, Cornell community, April 11-13 pp-65-74
13. Elad Y. Parasitism of Trichoderma spp. on Rhizoctonia solani and Sclerotium rolfsii scanning electron microscopy and fluorescence microscopy / Y.Elad, I.Chet, P.Boyle, Y.Henis // Phytopathology. -1983. -Vol.73. -P. 85-88
14. Ridout C.J. Fractionation of extracellular enzymes from a mycoparasitic strain of Trichoderma-harzianum / C.J.Ridout, J.R.Coley-Smith, J.M.Lynch // Enzyme Microbiology and Technology. -1988. -Vol. 10. -P. 180-187.
15. Великанов Л. Л. Сравнение гиперпаразити-ческойи антибиотической активности изолятов рода Trichoderma Pers.: Fr. И Gliocladium virens Miller, Giddens et Foster по отношению к патогенам, вызывающим корневые гнили гороха / Л.Велика-нов, Е.Сухоносенко, С.Николаева, И.Завелишко // Микология и фитопатология. -1994. -Т.28, вып. 6. -С. 52-56.
16. Ranasingh, N., Saturabh, A., Nedunchezhi-yan, M., 2006. "Use of Trichoderma in disease man-agemant," Orissa Review, September-October, pp.6870
17. Dennis C. Antagonistic properties of spe-ciesgroupsof Trichoderma / C.Dennis, J.Webster // Transactions of the British Mycological Society. I.Pro-duction of nonvolatile antibiotics. -1971. -Vol. 57. -P. 25-39. 44.
18. Dennis C. Antagonistic properties of spe-ciesgroupsof Trichoderma / C.Dennis, J.Webster // Transactions of the British Mycological Society. II. Production of volatile antibiotics. -1971. -Vol.57. -P. 41-48.
19. Sivasithamparam, K. &Ghisalberti, E. L. in Trichoderma and Gliocladium Vol. 1 (eds Kubicek, C. P. & Harman, G. E.) 139-191 (Taylor and Francis, London, 1998).
20. de Wit, P. J. G. M. et al. The molecular basis of co-evolution between Cladosporium fulvum and tomato. Antonie van Leeuwenhoek 81, 409-412 (2002).
21. Hammond-Kosack, K. E., Staskawicz, B. J., Jones, J. D. G. &Baulcombe, D. C. Functional expression of a fungal avirulence gene from a modified potato virus X genome. Mol. Plant Microbe Interact. 8, 181185 (1995).
22. Harman, G. E., Howell, C. R., Viterbo, A., Chet, I., &Lorito, M. (2004). Trichoderma species — opportunistic, avirulent plant symbionts. Nature Reviews Microbiology, 2(1), 43-56. doi:10.1038/nrmi-cro797
23. Rosado, I., Rey, M., Codon, A., Gonavites, J., Moreno-Mateos, M.A., Benitez, T., 2007. "QID74 Cell wall protein of Trichoderma harzianum is involved in cell protection and adherence to hydrophobic surfaces," Fungal Genetics and Biology, Vol.44(10), pp.950-964.
24. Mei Shi, Lei Chen, Xiao-Wei Wang, Tian Zhang, Pei-Bao Zhao, Xiao-Yan Song, Cai-Yun Sun, Xiu-Lan Chen, Bai-Cheng Zhou and Yu-Zhong Zhang.Antimicrobial peptaibols from Trichoderma pseudokoningii induce programmed cell death in plant fungal pathogens.Microbiology (2012), 158, 166-175 DOI 10.1099/mic.0.052670-0
25. Ghisalberti E.L. Antifungal antibiotics produced by Trichoderma spp / E.L.Ghisalberti, K. Sivasithamparam // Soil Biol. Biochem. -1991. -Vol.23, N11. -P. 1011-1020.
26. Schirmbock M. Parallel formation and syner-gism of hydrolytic enzymes and peptaibol antibiotics, molecular mechanisms involved in the antagonistic action of Trichoderma harzianum against phytopatho-genic fungi /pp 79-86
27. Bakhora Turaeva, Azam Soliev, Farkhod Eshboev, Lukhmon Kamolov, Nodira Azimova, Husniddin Karimov, Nigora Zukhritdinova and Khurshida Khamidova. The use of three fungal strains in producing of indole-3-acetic acid and gibberelllic acid.//Plant Cell Biotechnology and Molecular Biology 21(35&36):32-43; 2020
28. Harman, G. E., Howell, C. R., Viterbo, A., Chet, I., &Lorito, M. (2004). Trichoderma species — opportunistic, avirulent plant symbionts. Nature Reviews Microbiology, 2(1), 43-56. doi:10.1038/nrmi-cro797
29. Lewis JA, Lumsden RD, Locke JC (1996). Bi-ocontrol of damping-off diseases caused by Rhi-zoctonia solani and Pythium ultimum with alginate prills of Gliocladiumvirens, Trichoderma hamatum and various food bases. Biocontrol Sci.Technol., 6:163173.
30. Larkin RP, Fravel DR (1998). Efficacy of various fungal and bacterial biocontrol organisms for control of Fusarium wilt of tomato. Plant Dis. 82:10221028.
31. Bashar MA, Rai B (1994). Antagonistic potential of root region microflora of chickpea against Fusarium oxysporumf.sp. ciceri. Bangladesh J. Bot., 23:13-19.
32. Pieta D, Pastucha A (2004). Biological methods of protecting common bean (Phaseolus vulgaris, L.) Folia UniversitarisAgriculturaeStetinensis Agricultura, 9:301-305.
33. Pieta D, Pastucha A, Patkowska E (2003). The use of antagonistic microorganisms in biological control of bean diseases. SodininlysteirDarzininkyste, 22:401-406
34. Abd-El-Khair HR, Khalifa M, Karima HE, Haggag (2011). Effect of Trichoderma species on damping off diseases incidence, some plant enzymes activity and nutritional status of bean plants. J. American Sci., 7:156-167
35. Otadoh JA, Sheila A, Okoth, Ochanda J, James P, Kahindi (2011). Assessment of Trichoderma isolates for virulence efficacy on Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli. Trop. Subtrop. Agroecosys., 13:99-107
36. Hend A. Alwathnani. (2012). Evaluation of biological control potential of locally isolated antagonist fungi against Fusarium oxysporum under in vitro and pot conditions. African Journal of Microbiology Research, 6(2). doi:10.5897/ajmr11.1367
37. Fravel D, Olivain C, Alabouvette C (2003). Fusarium oxysporum and its biocontrol. New Phytol., 157:493-502.
38. Буханова Ю.В.Особенности применения триходермина. //Защита и карантин растений. №11. 2005. - с.23-24. 1.
39. Паников Н.С. Кинетика роста микроорганизмов. М., «Наука». -1991. -311 с.
40. Билай В. И. Фузарии. - Киев, Наукова думка, 1977 - 440 с.
41. Samuels G.J., Dodd S.L., Gams W., Castle-burry L.A. Petrini O. Trichoderma species associated with the green mold epidemic of commercially grown Agaricusbisporus // Mycologia. - 2002. -V. 94. -P. 146-170.
42. Sharma K.K., Singh U.S. Cultural and morphological characterization of rhizospheric isolates of fungal antagonist Trichoderma // Journal of Applied and Natural Science. - 2014. - V. 6 (2). -P. 451-456.
43. Srinivasa N., Prameela Devi T., Sudhirkumar S., Kamil Deeba, Lekha Borah Jyoti, Prabhakaran N. Bioefficacy of Trichoderma isolates against soil-borne pathogens //African Journal of Microbiology Research. - 2014. -V. 8(28). -P. 2710-2723.
44. Азимова Н.Ш. Микробиологическая переработка целлюлозного сырья с использованием мицелиального гриба Trichoderma harzianum // Диссертация на соискание ученой степени доктора философских наук - Т. -2018. - 58 с.
45. Тураева Б.И. Влияние и противогрибковые свойства перспективных местных микромицетов на развитие растений. // Диссертация на соискание ученой степени доктора философии биологических наук - Т. -2019. - 60 с.
46. И.А. Гнеушева, Н.Е. Павловская, А.В. Лушников, О.А. МаркинаВестник биотехнологиии физико-химической биологии имени ю.а. 0вчинникова.2019, Т. 15, № 1. ст. 10
47. Anuradha Singh, Mohammad Shahid, Mukesh Srivastava, Sonika Pandey, Antima Sharma and Vipul Kumar. Optimal Physical Parameters for Growth of Trichoderma Species at Varying pH, Temperature and Agitation. // Virology & Mycology.Singh et al., Virol Mycol 2014, 3:1 DOI: 10.4172/2161-0517.1000127
48. Azevedo, A.M.C.; DeMarco, J.L.; Felix, C.R. Production of hydrolytic enzymes by Trichoderma sp. isolate with antagonistic activity against Crinipellis perniciosa, the causal agent of witches' broom of cocoa. Fems. Microbiol. Lett., 188: 171-175, 2000.
49. Boland G.J. Biological control of plant diseases with fungal antagonists: challenges and opportunities. Can. J. Plant Pathol., 12: 295-299, 1990.
50. Schirmbock, M.; Lorito, M.; Wang, U.L.; Hayes, C.K.; Arisan-Atac, I.; Scala, F.; Harman, G.; Kubicek, C. Parallel formation and synergism of hydro-lytic enzymes and peptaibol antibiotics, molecular mechanisms involved in the antagonistic action of Trichoderma harzianum against phytopathogenic fungi. Appl. Environ. Microbiol., 60: 4364-4370, 1994.
