CC BY
202
© В. М. Прокопенко, Н. Г. Павлова, А. В. Арутюнян
ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта СЗО РАМН
ПРООКСИДАНТНАЯ И АНТИОКСИДАНТНАЯ СИСТЕМЫ В МИТОХОНДРИЯХ ПЛАЦЕНТЫ ПРИ ЕЕ ДИСФУНКЦИИ
УДК: 618.39:618.46-07
■ Исследована про- и антиоксидантная системы в митохондриях, выделенных из центра и периферии плаценты при физиологической беременности и преждевременных родах. Показано, что уровень интенсивности свободноради-кального окисления и величина общей антиоксидантной активности (ОАА)
в митохондриях, выделенных из периферического участка плацент женщин при преждевременных родах, выше таковых в митохондриях соответствующего участка при физиологической беременности. Уровни активности глутатионпероксида-зы (ГП) в митохондриях плацент женщин при преждевременных родах составили 52 % (р < 0,05) в центральном участке и 60 % (р < 0,05) по периферии плаценты по отношению к активности ГП в митохондриях, выделенных из соответствующих участков плацент женщин с физиологической беременностью. Выявлена положительная корреляция между уровнем интенсивности хемилюминесценции и уровнем ОАА, активностью СОД, активностью ГП в митохондриях, полученных из центра плацент, интенсивностью хемилюминесценции и уровнем ОАА, активностью супероксиддисмутазы (СОД) в митохондриях, полученных из периферии плацент. Отрицательная корреляция наблюдалась между интенсивностью хемилюминесценции и активностью ГП в митохондриях, выделенных из периферии плацент женщин, беременность которых завершилась преждевременными родами в сроки 28-36 недель.
■ Ключевые слова: плацента; митохондрии; окислительный стресс; невынашивание.
Плацента представляет собой орган, который играет динамичную роль в процессах взаимодействия двух организмов — матери и плода. Высокий темп развития плаценты, растущие потребности плода сопровождаются особыми требованиями к метаболическим процессам, лежащим в основе функциональной деятельности плаценты. Исследование особенностей метаболизма в физиологически развивающейся плаценте дает представление о путях координации метаболических процессов в функциональной системе мать-плацента-плод. Один из фундаментальных механизмов биохимической адаптации, учитывающий метаболическую регуляцию плаценты, связан с системами генерации активных форм кислорода и функциональным состоянием многокомпонентной антиоксидантной защиты [8, 14, 22, 24].
Физиологическая беременность характеризуется развитием окислительного стресса, являющегося одним из центральных механизмов общей системы адаптации к новым условиям состояния организма женщины, при которой наблюдается сбалансированное состояние прооксидантной и антиоксидантной систем на более высоком уровне.
Окислительный стресс выполняет в этой ситуации важные физиологические функции, участвуя в запуске механизмов дифференцировки клеток [19]. В кратковременный период относительного дисбаланса между генерацией и элиминированием активных форм кислорода (АФК) происходит адаптация механизмов системы антиоксидантной защиты к нарушению физиологического равновесия. При этом эффективность анти-оксидантной системы зависит не столько от абсолютных величин отдельных компонентов системы, сколько от соотношения между ними. Неспособность системы антиоксидантной защиты (АОЗ) противостоять усилению процессов свободноради-кального окисления приводит к значительному ослаблению метаболической и детоксицирующей функций плаценты.
В последнее время стремительно возрастает количество работ, посвященных роли систем генерации активных форм кислорода и антиоксидантной системы в формировании метаболических и детоксицирующих функций плаценты. Однако многие вопросы, связанные с развитием дисфункции плаценты в условиях окислительного стресса, еще весьма далеки от разрешения.
В литературе отсутствуют сведения о соотношении систем образования АФК и их элиминации в митохондриях разных функциональных зон плаценты (центральные и периферические участки) при акушерских осложнениях беременных.
АФК, которые образуются в митохондриях, рассматривают в качестве одного из факторов, усиливающих внутриклеточный окислительный стресс. Исследования последних лет прояснили многие детали механизмов генерации АФК в митохондриях, но общая картина процесса пока не ясна. Недостаточность
фактических данных пока еще не позволяет более подробно обосновать представления о роли митохондрий в генерации активных форм кислорода в организме [1].
Известно, что с увеличением срока гестации количество митохондрий в плаценте возрастает, что может привести, как предполагают некоторые авторы, к увеличению вклада электронно-транспортной цепи митохондрий плаценты в процессы генерации АФК [18].
В связи с вышесказанным актуальным представляется выяснение роли про- и антиоксидант-ной систем митохондрий плаценты в патогенезе метаболических и функциональных нарушений, развивающихся в плаценте человека при наиболее распространенном в акушерской практике осложнении — синдроме плацентарной недостаточности.
Самопроизвольное преждевременное прерывание беременности может служить моделью для изучения универсальных механизмов, вызывающих каскад нарушений в метаболизме плаценты и представляющих собой срыв адаптационно-гомеостатических реакций поддержания адекватного обмена между организмами матери и плода [7, 10].
Цель исследования
Оценка состояния про- и антиоксидантной систем в митохондриях плаценты при физиологической беременности и преждевременных родах для анализа роли процессов генерации активных кислородных метаболитов и системы антиоксидант-ной защиты в развитии дисфункции плаценты.
Материалы и методы
Материалом для исследования служили ткани плацент женщин, беременность которых самопроизвольно прервалась в сроки 28-36 недель (основная группа). Параллельно исследовали плаценты женщин с физиологически протекающей беременностью, завершившейся родами в срок (группа сравнения).
Образцы ткани готовили из центральной и периферической зон плаценты. Кусочки ткани тщательно отмывали в холодном физиологическом растворе и гомогенезировали в соотношении 1 : 9 (вес/объем) в среде выделения (0,25 М раствор сахарозы, содержащий 1 мМ ЭДТА, рН 7,4) Гомогенат центрифугировали при 4000 об/мин в течение 15 минут при 40 °С. Полученный цен-трифугат использовали для выделения фракции митохондрий.
В основе получения митохондриальной фракции плаценты лежал метод дифференциального центрифугирования. Для разрушения митохон-
дрий использовали прием 3-кратного замораживания и оттаивания [5].
Для изучения процессов свободнорадикально-го окисления был использован метод регистрации хемилюминесценции митохондриальной фракции в присутствии люминола на биохемилюми-нометре «Emilite-1005» (Россия). Для инициации процесса вносили 200 мкл 2 % раствора перекиси водорода. Измерение светосуммы (СС) осуществляли при температуре 37 °С в течение 2 минут и выражали в относительных единицах (1 отн. ед. — 1 мV на мг белка). Величину максимальной вспышки (МВ) выражали в отн. ед. ( 1 отн. ед. соответствовала мV в секунду) [2].
Для оценки общей антиоксидантной активности (АОА) использовали ХЛ-реакцию рибофлавина в присутствии перекиси водорода и ионов двухвалентного железа. Измерение свечения осуществляли при 37 °С в течение 2 мин. АОА выражали в относительных единицах [2].
Определение супероксиддисмутазы (СОД) осуществляли, используя способность фермента тормозить реакцию восстановления нитросинего тетразолия (НСТ) с образованием супероксидного радикала. За единицу активности фермента (Е) принимали 50 %>-е торможение реакции. Результаты выражали в Е/мг белка [12].
Определение глутатионпероксидазы основано на способности фермента окислять восстановленный глутатион в присутствии гидроперекиси третичного бутила. В основе развития цветной реакции лежит взаимодействие SH-групп с 5,5дитиобис (2-нитробензойной кислотой) (ДТНБК) с образованием окрашенного продукта — тионитрофенильного аниона. Количество последнего пропорционально количеству SH-групп, прореагировавших с ДТНБК. Активность глутатионпероксидазы (ГП) выражали в мкмолях израсходованного восстановленного глутатиона в минуту на мг белка [6].
Определение содержания белка в пробах осуществляли по Lowry и соавт. [20].
Результаты и обсуждение
Известно, что биохимические изменения в тканях, вызванные интенсивной генерацией АФК, при всех патологических состояниях, в том числе и при дисфункции плаценты, имеют общие закономерности: нарушение мобилизации системы АОЗ в ответ на повышение активности свободно-радикальных процессов [3].
Одним из основных источников АФК в клетке является митохондриальная электронно-транспортная сеть, в которой ключевыми точками генерации супероксидного анион-радикала являются комплексы I (НАДН : убихинон-оксидоредуктазный комплекс)
Таблица 1
Уровень интенсивности люминолзависимой хемилюминесценции (Л-ХЛ) в митохондриях плацент женщин основной группы и группы сравнения
Группы женщин Интенсивность хемилюминесценции (отн. ед/мг белка)
Центр Периферия
Основная (n = 8) 3500,1± 182,6лл 4514,8 ± 290,9*
Сравнения (n = 8) 3429,6 ± 250,8 3652,2 ± 309,4
Примечание: * — р < 0,05 по отношению к периферии группы сравнения; лл — р < 0,01 по отношению к периферии основной группы.
Рис. 1. Схема электрон-транспортной цепи, демонстрирующая сайты образования активных кислородных радикалов в митохондриях
и III (коэнзим Q: цитохром с-редуктазный комплекс) (рис. 1) [21]. Недостаточность биологического окисления является ключевым фактором в развитии окислительного стресса, прежде всего в самих митохондриях [4].
Результаты определения интенсивности процессов свободнорадикального окисления в митохондриях плацент обследованных женщин методом люминолзависимой хемилюминометрии представлены в таблице 1.
Как видно из таблицы 1, уровень интенсивности ХЛ в митохондриях периферической части плацент женщин, беременность которых закончилась преждевременными родами в 28-36 недель (основная группа), выше на 24 % (р < 0,05) по сравнению с таковым группы сравнения. Различий интенсивности ХЛ в митохондриях центральной части плацент беременных сопоставляемых групп выявить не удалось. В плацентах основной группы уровень интенсивности ХЛ в мито-
□ Центр □ Периферия
Рис. 2. Общая антиокислительная активность в митохондриях плацент женщин основной группы и группы сравнения
Примечание: * — р < 0,05 - дано по отношению к группе сравнения; л — р < 0,05 — дано по отношению к центру основной группы.
хондриях периферической части превышал в 1,3 раза уровень интенсивности ХЛ в митохондриях, полученных из центральной части плацент. При этом у пациенток группы сравнения центральная и периферическая части плацент не отличались по величине интенсивности ХЛ в митохондриях.
Согласно литературным данным, усиление процессов ПОЛ наблюдалось в митохондриях плаценты беременных с гипертензивными формами гестоза. Так, содержание МДА во фракции митохондрий, выделенных из плацент женщин с гестозом, превышает уровень МДА митохондрий, выделенных из плацент женщин с физиологически протекающей беременностью, завершившейся родами в срок (27,4 ± 3,0 против 17,0 ± 1,8 пто1/г ткани) [25].
То есть собственные и литературные данные позволяют говорить о том, что усиление процессов пероксидации в митохондриях плаценты имеет универсальный характер и сопровождается дисфункцией плаценты.
Проявлению повреждающего эффекта АФК на структуры клеток плаценты препятствует сложная многокомпонентная система антиоксидант-ной защиты (АОЗ).
Одним из интегральных показателей, отражающих активность антиоксидантных систем в митохондриях плаценты, может служить величина общей антиокислительной активности (ОАА), определяемая методом хемилюминометрии. Результаты наших исследований представлены на рисунке 2.
Как видно на рисунке 2, уровень ОАА в митохондриях, выделенных из центральной и перифери-
ческой частей плацент пациенток основной группы, выше в 1,5 и в 1,8 раз, чем уровень ОАА в митохондриях, выделенных из соответствующих частей плацент женщин группы сравнения. При этом ОАА в митохондриальной фракции плацент пациенток группы сравнения была одинакова в центральном и периферическом участках. В плацентах женщин основной группы значения ОАА в митохондриях, полученных из периферической части плаценты, были в 1,3 раза выше (р < 0,05) по сравнению с величиной ОАА в митохондриях центральной части плаценты.
Кроме интегрального показателя ОАА мы оценивали ферментативную составляющую антиок-сидантной системы в митохондриях плацент.
Известно, что наиболее важными ферментами метаболизма глутатиона в митохондриях являются глутатионпероксидазы (ГП). ГП-1 функционирует как в цитозоле, так и митохондриях [19]. ГП-4 обладает сигнальным пептидом и транспортируется в митохондрии за счет мембранного потенциала, укорачиваясь до 20 кДа [23]. Сообщений об исследовании ГП активности в митохондриях при дисфункции плаценты в доступной нам литературе обнаружить не удалось.
Результаты оценки активности ГП в митохондриях разных функциональных частей плаценты при ее дисфункции представлены на рисунке 3.
Как видно из рисунка, в митохондриях, выделенных из плацент женщин основной группы, уровни активности ГП составляли 52 % (р < 0,05) в центральном участке и 60 %о (р < 0,05) в периферическом участке плаценты по отношению
□ Центр □ Периферия
Рис. 3. Активность глутатионпероксидазы в митохондриях плацент женщин основной группы и группы сравнения Примечание: * — р < 0,05 дано по отношению к группе сравнения
Таблица 2
Уровень интенсивности люминолзависимой хемилюминесценции (Л-ХЛ) в митохондриях плацент женщин основной группы и группы сравнения
Группы женщин Активность супероксиддисмутазы (Е/мг белка)
Центр Периферия
Основная (n = 8) 24,52 ± 6,68 24,93 ± 5,42
Сравнения (n = 8) 15,42 ± 5,70 21,56 ± 5,19
к активности ГП в митохондриях, выделенных из соответствующих участков плацент женщин группы сравнения. Следует отметить, что уровни активности фермента в митохондриях, выделенных из центральной и периферической частей, были равны как в плацентах женщин основной группы, так и группы сравнения (рис. 3).
По литературным данным, касающимся изучения в митохондриях мозга крыс характеристик сайтов, продуцирующих супероксидный анион-радикал при инкубации в присутствии перекиси водорода, было показано, что в них наряду с увеличением генерации Н2О2, связанной с транспортом электронов, наблюдается уменьшение примерно на 30 0% уровня восстановленного глу-татиона ^БН) [17]. Подобная картина, по мнению авторов, может иметь место при патологических состояниях и у человека [13]. Дефицит GSH у животных приводил к повреждению митохондрий, которое сопровождалось гибелью новорожденных крыс и морских свинок [24].
Наряду с активностью ГП мы определяли активность супероксиддисмутазы, поскольку при ее участии прерывается цепь свободнорадикальных процессов на стадии одноэлектронного восстановления кислорода с образованием супероксид-
ного анион-радикала. Результаты исследования представлены в таблице 2.
Как видно из таблицы 2, значимых изменений в активности СОД в митохондриях, полученных из плацент женщин основной группы, и в активности фермента в митохондриях, выделенных из плацент беременных группы сравнения, выявлено не было. Не обнаружено разницы в уровнях активности фермента в митохондриях, выделенных из центральной и периферической частей плаценты у женщин обследованных групп.
Согласно литературным данным, полученным методами гистохимии L. МуаН с соавторами [15], ми-тохондриальный изофермент МпСОД слабо экспрес-сируется в синцитиотрофобластах, но весьма интенсивно образуется в ворсинах сосудистого эндотелия. Региональные отличия в экспрессии антиоксидант-ных ферментов в плаценте могут быть связаны со степенью оксигенации [16]. Через центральную область плаценты протекает более высокооксигениро-ванная кровь, чем через периферию. Однако сосуды центральной области плаценты в силу морфологических и функциональных особенностей считаются более юными по сравнению с сосудами периферической области плаценты. Несмотря на это, авторы не выявили отличий в содержании мРНК для син-
Таблица 3
Корреляционный анализ между параметрами прооксидантной и антиоксидантной системы в митохондриях плацент женщин при преждевременных родах
Показатели Коэффициент ранговой корреляции Спирмэна (г)
Центральная часть Периферическая часть
Интенсивность ХЛ ОАА 0,65* 0,83*
СОД 0,42* 0,31*
ГП 0,23* -0,34*
Примечание: * — р < 0,05
теза МпСОД и уровне суммарной активности СОД в центральной и периферической областях [18], что согласуется с полученными нами результатами.
Таким образом, в митохондриях, выделенных из плацент женщин при преждевременных родах, уровень интенсивности процессов свободнора-дикального окисления в периферической части плаценты был выше, чем в митохондриях плацент женщин при физиологическом течении беременности, завершившейся родами в срок. При этом величина ОАА была больше в митохондриях плацент женщин основной группы, полученных как из центральной, так и периферической частей плаценты. Однако уровень активности ГП в митохондриях плацент женщин основной группы был ниже, чем таковой у пациенток группы сравнения. Не выявлено изменений уровней активности СОД в митохондриях плацент у женщин обследованных групп.
Для выяснения взаимосвязей между параметрами прооксидантной и антиоксидантной системы в митохондриях плацент женщин основной группы был проведен корреляционный анализ. Результаты анализа представлены в таблице 3.
Корреляционный анализ выявил прямую связь уровня интенсивности ХЛ с величиной ОАА (г=0,65; р < 0,05) и уровнями активности СОД (г=0,42; р < 0,05) и ГП (г=0,23; р < 0,05) в митохондриях, полученных из центральной части плацент женщин основной группы. Прямая корреляционная зависимость также отмечена между интенсивностью ХЛ и величиной ОАА (г=0,83; р < 0,05), интенсивностью ХЛ и активностью СОД (г=0,31; р < 0,05) в митохондриях периферической части плацент женщин, беременность которых завершилась преждевременными родами. Обращает на себя внимание выявленная нами отрицательная корреляция между уровнем интенсивности ХЛ и активностью ГП (-0,34; р < 0,05) в митохондриях периферической части плацент женщин основной группы, что, по нашему мнению, может отражать депрессивное состояние глутатионзависимого звена антиоксидантной системы в митохондриях плацент женщин, беременность которых прервалась в сроки 28-36 недель.
Полученный фактический материал свидетельствует о том, что при преждевременных родах в митохондриях периферического участка
плаценты на фоне повышения уровня интенсивности процессов СРО наблюдается недостаточное увеличение общей буферной емкости АОЗ и значительное ослабление глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты, что указывает на развитие окислительного стресса. В митохондриях центрального участка при преждевременных родах мы не наблюдаем повышения уровня интенсивности процессов СРО, поскольку увеличение общей буферной емкости АОЗ, вероятно, компенсирует недостаточную активность глута-тионзависимого звена антиоксидантной защиты.
Следует отметить, что интенсификация работы отдельных звеньев в системе АОЗ при продолжительном и усиленном образовании АФК в митохондриях плаценты может привести к ее истощению и/ или истощению отдельных звеньев АОЗ в других компартменах клетки [9, 11] и развитию системного окислительного стресса организма, сопровождавшегося дисфункцией плаценты и осложнениями беременности, завершившимися невынашиванием.
Литература
1. Андреев А. А., Картавенко В. И. Метаболизм активных форм кислорода в митохондриях // Биохимия. — 2005. — Т. 70, № 2. — С. 246-264.
2. Арутюнян А. В., Дубинина Е. Е., Зыбина Н. Н. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма: методические рекомендации. — СПб.: Фолиант, 2000. — 104 с.
3. ДубининаЕ. Е. Продукты метаболизма кислорода в функциональной активности клеток (жизнь и смерть, созидание и разрушение). — СПб.: Медицинская пресса, 2006. — 694 с.
4. Лю Б. Н., Лю М. Б., Исмаилов Б. И. Роль митохондрий в развитии и регуляции уровня окислительного стресса в норме, при клеточных патологиях и реверсии опухолевых клеток // Успехи соврем. биологии. — 2006. — Т. 126, № 4. — С. 388-399.
5. Методы биохимических исследований (липидный и энергетический обмен): учебное пособие / ред. М. И. Прохорова. — Л.: Изд-во ЛГУ, 1982. — 271 с.
6. Моин И. М. Простой и чувствительный метод определения глутатионпероксидазы в эритроцитах // Лабораторное дело. — 1986. — № 12. — С. 724-727.
7. Молекулярные аспекты плацентарной недостаточности / Погорелова Т. Н. [и др.]. — Ростов: Изд-во РГУ, 1997. — 176 с.
8. Окислительный стресс в плаценте при физиологической и патологически протекающей беременности / Доброхотова Ю. Э. [и др.] // Росс. вестник акушера-гинеколога. — 2008. — Т. 8, № 6. — С. 33-35.
9. Прокопенко В. М. Свободнорадикальные процессы в плаценте при преждевременных родах // Журнал акушерства и женских болезней. — 2000. — № 2. — С. 37-40.
10. Радзинский В. Е., Смалько Т. Я. Биохимия плацентарной недостаточности. — М.: Изд-во Рос. университета дружбы народов, 2001. — 273 с.
11. Свободнорадикальное окисление и антиокислительная активность в тканях плаценты при преждевременных родах / Прокопенко В. М. [и др.] // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 1997. — Т. 124, № 12. — С. 632-634.
12. Чевари С., Чаба И., Секей Й. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод определения ее в биологических материалах // Лабораторное дело. — 1985. — №11. — С. 678-681.
13. Characterization of superoxide-producing sites in isolated brain mitochondria / Kudin A. P. [et al] // J. Biol. Chem. — 2004. — Vol. 279. — P. 4127-4135.
14. Del Maestro R. F. An approach to free radicals in medicine and biology // Acta Physiol. Scand. — 1980. — Vol. 492, suppl. — P. 153-168.
15. Differential localization of superoxide dismutase isoforms in placental villious tissue of normotensive, pre-eclamptic, and intrauterine growth-restricted pregnancies / Myatt L. [et al.] // J. Histochem. Cytochem. — 1997. — Vol.45. — P. 1433-1438.
16. Intralobular differences in antioxidant enzyme expression and activity reflect the pattern of maternal arterial bloodflow within the human placenta // Hempstock J. [et al] // Placenta. — 2003. — Vol. 24. — P. 517-523.
17. Meister A. Mitochondrial changes associated with glutathione deficiency // Biochim. Biophys. Acta. — 1995. — Vol. 1271. — P. 35-42.
18. Myat L., Cui X. Oxidative stress in the placenta // Histochem. Cell Biol. — 2004. —Vol. 122. — P. 369-382.
19. Oxidants in mitochondria: from physiology to diseases / Richter Ch. [et al] // Biochem. Biophys. Acta. — 1995. — Vol. 1271. — P. 67-74.
20. Protein measurement with the Folin phenol reagent / Lowry O. H. [et al.] // J. Biol. Chem. — 1951. — Vol. 193. — P. 265-275.
21. Production of reactive oxygen species by mitochondria; central role of complex III / Qun Chen . [et al] // J. Biol. Chem. — 2003. — Vol. 278. — P. 36027-36031.
22. Smith C. V. Correlations and apparent contradictions in assessment of oxidant stress status in vivo // Free Radic. Biol. Med. — 1992. — Vol. 10, N 3/4. — P. 217-224.
23. Turrens J. F. Superoxide production by the mitochondrial respiratory chain // Biosci. Rep. — 1997. — Vol.17. — P. 3-8.
24. Van der Vliet A., Bast A. Effect of oxidative stress on receptors and signal transmission // Chem. Diol. Interact. — 1992. — Vol. 85., N 2/3. — P. 95-116
25. Wang Y., Walsch S. W. Placental mitochondria as a source of oxidative stress in pre-eclampsia // Placenta. — 1998. — Vol. 19. — P. 581-586.
PROOXIDANT AND ANTIOXIDANT SYSTEMS IN PLACENTA MITOCHONDRIA IN PLACENTAL DISFUNCTIONS
Prokopenko V. M., Pavlova N. G., Arutyunyan A. V.
■ Summary: Prooxidant and antioxidant systems of mitochondria from centrum and periphery of placenta in physiological pregnancy and preterm delivery were studied. There were shown that intensity level of free radical oxidation and the general antioxidant activity in mitochondria from periphery of placenta in preterm delivery were higher than in physiological pregnancy.
■ Key words: placenta; mitochondria; oxidant stress.
■ Адреса авторов для переписки-
Прокопенко Валентина Михайловна — к. б. н., старший научный сотрудник лаборатории перинатальной биохимии. ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта СЗО РАМН. 199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3. E-mail: vmp47@mail.ru
Павлова Наталия Григорьевна — д. м. н., профессор, руководитель лаборатории физиологии и патофизиологии плода с отделением ультразвуковой диагностики.
ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта СЗО РАМН. 199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3. E-mail: iagmail@ott.ru
Арутюнян Александр Вартанович — д. б. н., профессор, руководитель лаборатории пренатальной биохимии.
ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта СЗО РАМН. 199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3. E-mail: arutjunyan@aa3703.spb.edu
Prokopenko Valentina Mihailovna — the senior research assistant of laboratory perinatal biochemistry.
D. O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology, RAMS. 199034 Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line, 3. E-mail: vmp47@mail.ru
Pavlova Natalia Grigorievna — MD, the professor the principal of laboratory of physiology and a pathophysiology of a fetus with unit of ultrasonic diagnostics.
D. O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology, RAMS. 199034 Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line, 3. E-mail: iagmail@ott.ru
Arutjunyan Alexandr Vartanovich — Dr. Sci., Head of the department of biochemistry.
D. O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology, RAMS. 199034 Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line, 3. E-mail: arutjunyan@aa3703.spb.edu
