CC BY
3
m сч о сч
>-
и о
-J
о и Z
о
ОС <
о
DOI: 10.17650/2313-805X-2023-10-3-90-97 (сс)
Ю
О >
Прогностическая тонкоигольная аспирационная биопсия увеальной меланомы: молекулярно-генетические факторы риска развития метастазов
В.А. Яровая1, И.А. Левашов1, А.Р. Зарецкий2, Л.В. Чудакова2, В.В. Назарова3, А.Д. Матяева1,
^ Л.В. Демидов3,А.А. Яровой1
'ФГАУ«Национальный медицинский исследовательский центр «Межотраслевой научно-технический комплекс «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России; Россия, 127486Москва, Бескудниковский бульвар, 59а; ФГАОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава России;
< Россия, 117997Москва, ул. Островитянова, 1;
О ФГБУ«Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России; Россия, ^ 115522Москва,Каширскоешоссе,23
tf Контакты: Вера Андреевна Яровая verandreevna@gmail.com О
О Введение. Для определения прогноза заболевания при увеальной меланоме активно используются молекулярно-
^ генетические методы исследования материала первичной опухоли, который может быть получен в рамках органо-
© сохраняющего лечения с помощью тонкоигольной аспирационной биопсии (ТИАБ). Молекулярно-генетическое
>s тестирование и ТИАБ в отечественной практике имеют ряд особенностей, связанных с хирургической техникой,
® методикой молекулярно-генетического тестирования и классификационными подходами.
о- Цель - представить собственный опыт применения молекулярно-генетических методов в прогнозировании риска
развития метастазов у пациентов с увеальной меланомой на основе материала ТИАБ.
Материалы и методы. Был проанализирован материал ТИАБ, полученный от 151 пациента. Тонкоигольную аспи-ш рационную биопсию с прогностической целью выполняли одновременно с органосохраняющим лечением (брахи-
О терапией или стереотаксической радиохирургией). В ходе молекулярно-генетического исследования осуществляли
S анализ мутаций в генах GNAQ, GNA11, EIF1AXи SF3B1 (методами высокочувствительной мутационно-специфической
^ полимеразной цепной реакции в реальном времени и полимеразной цепной реакции с последующим секвениро-
uj ванием продуктов этой реакции по Сэнгеру) и количества копий генов PPARG и MYC (методом флуоресцентной
гибридизации in situ). Также проводили цитологическое исследование всех образцов, полученных при ТИАБ. Результаты. Уровень информативности материала ТИАБ составил 91 %, медиана срока наблюдения - 36 мес. За этот период отдаленные метастазы выявлены у 12 пациентов из 151. Частота встречаемости молекулярно-гене-тических нарушений в целом соотносится с данными других крупных исследований. Оригинальная прогностическая панель впервые продемонстрировала возможность определения прогноза пациента в зависимости от делеции гена PPARG, наличие которой ассоциировано с низкими показателями выживаемости (p <0,01). Мутации в генах EIF1AX и SF3B1, амплификация гена MYC и клеточный тип опухоли по результатам цитологического исследования не продемонстрировали статистической значимости.
Заключение. Использованные нами у пациентов с увеальной меланомой технологии ТИАБ и молекулярно-генети-ческого тестирования продемонстрировали надежность и высокую информативность. Ряд прогностических факторов требуют дальнейшего исследования с более длительными сроками наблюдения за пациентами.
Ключевые слова: офтальмоонкология, молекулярная онкология, увеальная меланома, прогнозирование, выживаемость
Для цитирования: Яровая В.А., Левашов И.А., Зарецкий А.Р. и др. Прогностическая тонкоигольная аспирационная биопсия увеальной меланомы: молекулярно-генетические факторы риска развития метастазов. Успехи молекулярной онкологии 2023;10(3):90-7. Э01: 10.17650/2313-805Х-2023-10-3-90-97
BY 4.0
Prognostic fine needle aspiration biopsy of uveal melanoma: Molecular and genetic factors of metastasis risk
V.A. Yarovaya1, I.A. Levashov1, A.R. Zaretsky2, L. V. Chudakova2, V.V. Nazarova3, A.D. Matyaeva1, L. V. Demidov3, A.A. Yarovoy1
1S. Fyodorov Eye Microsurgery Federal State Institution, Ministry of Health of Russia; 59a Beskudnikovsky Boulevard, Moscow 127486, Russia;
2PirogovRussian National Research Medical University, Ministry of Health of Russia; 1 Ostrovityanova St., Moscow 117997, Russia; 3N.N. Blokhin National Medical Russian Research Center of Oncology, Ministry of Health of Russia; 24 Kashirskoye Shosse, Moscow 115522, Russia;
Contacts: Vera Andreevna Yarovaya verandreevna@gmail.com
Introduction. Molecular genetic testing is actively used for prognostication in patients with uveal melanoma (UM). Tissue for genetic analysis may be obtained either by surgical excision or through fine-needle aspiration biopsy (FNAB). Performing genetic testing and FNAB in each institution can differ in surgical techniques and laboratory methodologies. Aim. To present our own experience of performing FNAB-based molecular genetic testing for prognostication in patients with uveal melanoma.
Materials and methods. Prognostic FNAB (n = 151) were combined with brachytherapy or stereotactic surgery. Genetic testing was performed by methods based on polymerase chain reaction (GNAQ, GNA11, EIF1AXand SF3B1 mutations) and fluorescence in situ hybridization (copy numbers of PPARG and MYC genes); cytology of FNAB material was also assessed. Results. Fine-needle aspiration biopsy material was informative in 91 % of cases. At the median follow-up of 36 months, 12 cases of distant metastases were detected. Occurrence of the assessed mutations and copy numbers were related to other representative studies. PPARG deletion was shown to be a significant prognostic factor for metastasis-free survival (p <0,01), which was demonstrated for the first time; EIF1AX and SF3B1 mutations, MYC amplification and cytological class were not shown to be significantly associated with survival in our study.
Conclusion. FNAB-based molecular genetic testing for prognostication in patients with uveal melanoma was shown to be a reliable and highly informative approach. Some of the prognostic factors need to be evaluated further with longer follow-up.
Keywords: ocular oncology, molecular oncology, uveal melanoma, prognostication, survival
For citation: Yarovaya V.A., Levashov I.A., Zaretsky A. R. et al. Prognostic fine needle aspiration biopsy of uveal melanoma: Molecular and genetic factors of metastasis risk. Uspekhi molekulyarnoy onkologii = Advances in Molecular Oncology 2023;10(3):90-7. (In Russ.). DOI: 10.17650/2313-805X-2023-10-3-90-97
m сч о
СЧ
>-
(J
о
—I
о и z о
ОС <
о ж.
to
< >
а
<
о
ВВЕДЕНИЕ
Молекулярно-генетические методы исследования в современной онкологии используются чаще всего для подбора таргетной терапии, несколько реже — для уточнения диагноза и еще реже — для определения прогностических факторов [1—3]. Прогностические факторы — это биологические или клинические маркеры, позволяющие уточнить шансы на реализацию различных исходов заболевания, например, вероятность развития метастазирования. Одним из редких примеров активного использования молекулярно-ге-нетических методов в прогнозировании течения онкологического заболевания является их применение при увеальной меланоме (УМ).
Увеальная меланома — наиболее распространенное злокачественное внутриглазное новообразование, клеточным субстратом которого являются меланоциты сосудистой оболочки глаза [3—5]. Показатели локального контроля первичного очага УМ даже при органо-сохраняющем лечении находятся на уровне 70—98 % [3, 6, 7]. Тем не менее УМ характеризуется сравнительно низким уровнем выживаемости: 5-летняя общая выживаемость при данном типе опухоли составляет около 80 %, 10-летняя — 50—70 % [8, 9]. Такие показатели обусловлены прежде всего отсутствием эффективных методов системной терапии — как в адъювантном режиме, так и при лечении метастатической болезни.
Вероятность возникновения метастазов УМ зависит от ряда факторов: клинических (возраст пациента,
размеры, локализация и особенности роста опухоли), морфологических (клеточный тип опухоли, митоти-ческая активность, инфильтрация лимфоцитами и др.) и молекулярно-генетических (мутации в генах и хромосомные аберрации) [3, 5, 10]. Изучение молекулярно-генетических особенностей УМ позволило улучшить понимание механизмов и рисков метастазирования данной опухоли, а выявление соответствующих прогностических маркеров стало центральным звеном в определении прогноза заболевания.
Успех применения генетических методов в прогнозировании заболевания во многом обусловлен относительно узким и уникальным мутационным профилем УМ. По данным литературы, наиболее часто встречаются мутации в генах GNA11, GNAQ, EIF1AX, SF3B1 и BAP1, а также хромосомные аберрации — нарушения количества копий обширных участков хромосом 1, 3, 6 и 8 [3, 5, 10—13]. Мутации в гене BAP1 ассоциированы с моносомией по короткому плечу хромосомы 3 (что неудивительно с учетом того, что ген BAP1 физически расположен именно на 3р) и являются наиболее существенным молекулярным фактором плохого прогноза при УМ. Мутации в гене EIF1AX при данной опухоли связаны с самым благоприятным прогнозом и ожидаемой продолжительностью жизни как у здоровых людей. Мутации в гене SF3B1 ассоциированы с промежуточным прогнозом и отсроченными метастазами, возникающими спустя 7 и более лет после установления диагноза. Наконец, мутации
а.
в;
£
о ж.
и >
m сч о сч
>-
и о
-J
о и Z
о
ОС <
о ж.
ю
< >
а
<
о
а. те
о ж.
и >
в генах GNA11 и GNAQ являются драйверными, т. е. участвуют в начальных процессах онкогенеза, однако, по имеющимся данным, не оказывают существенного влияния на показатели выживаемости [4, 14].
В зависимости от представленных нарушений и использованных молекулярно-генетических методов авторы используют различные классификационные подходы. Наиболее распространенным методом стратификации является профилирование генной экспрессии (gene expression profiling, GEP), разделяющее все опухоли на 2 класса; результаты этой классификации ассоциированы со статусом хромосомы 3 (дисо-мия хромосомы 3 — класс 1, более благоприятный; моносомия — класс 2, менее благоприятный) [15]. Более детальное разделение на подклассы и подтипы предполагает учет других прогностических факторов: наличия мутаций в генах EIF1AXи SF3B1, статуса хромосом 1, 6 и 8. В зависимости от этих особенностей авторы могут использовать различные прогностические панели [4, 15—17].
В отечественной практике молекулярно-генетиче-ские методы прогнозирования течения УМ на материале первичной опухоли, полученном либо по результатам энуклеации, либо с помощью тонкоигольной аспирационной биопсии (ТИАБ), широко не используются в связи с отсутствием возможности проведения данного исследования на бюджетной основе и предвзятости отдельных специалистов-офтальмологов в отношении технологии ТИАБ. В то же время применение ТИАБ в отечественной практике имеет ряд особенностей, связанных с хирургической техникой, методикой молекулярно-генетического тестирования и классификационными подходами [12, 18—23].
Цель исследования — представить собственный опыт применения молекулярно-генетических методов в прогнозировании риска развития метастазов у пациентов с УМ на основе материала ТИАБ.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
За период с января 2017 г. по январь 2022 г. в отделении офтальмоонкологии и радиологии Национального медицинского исследовательского центра «Межотраслевой научно-технический комплекс «Микрохирургия глаза» им. акад. С. Н. Федорова» была проведена 151 ТИАБ с прогностической целью. Всем пациентам ТИАБ выполнялась одновременно с органосохраня-ющим лечением в качестве первичного метода терапии или в течение нескольких дней от его начала (бра-хитерапия — в 136 (90 %), стереотаксическая радиохирургия гамма-нож — в 15 (10 %)). Тонкоигольная аспирационная биопсия проводилась по стандартной технологии, описанной ранее [20]. Все пациенты подписали информированное согласие на обработку персональных данных, диагностические исследования и лечение.
Молекулярно-генетическое исследование выполнялось методами высокочувствительной мутационно-специфической полимеразной цепной реакции в ре-
альном времени (ПЦР-РВ), ПЦР с последующим секвенированием продуктов этой реакции по Сэнгеру и флуоресцентной гибридизации in situ (fluorescence in situ hybridization, FISH).
Анализ мутаций в GNAQ и GNA11 проводился 151 пациенту, EIF1AX и SF3B1 — 144 и 142 соответственно (количество копий генов PPARG и MYC оценивалось у 121 и 122 пациентов соответственно). Тест на деле-цию гена PPARG использовали для определения статуса короткого плеча хромосомы 3, тест на амплификацию гена MYC — для выявления статуса длинного плеча хромосомы 8.
Также проводилось цитологическое исследование, по результатам которого определялся клеточный тип опухоли: как по стандартной трехчастной классификации (веретеноклеточная, смешанноклеточная или эпителиоидноклеточная УМ), так и по упрощенной бинарной (присутствие или отсутствие эпителиоид-ных клеток) [24].
Средний срок наблюдения за пациентами, прошедшими ТИАБ и находящимися на диспансерном наблюдении, составил 33 мес (минимум — 2 мес, максимум — 70 мес, медиана — 34 мес). Критерии включения в анализ показателей выживаемости: наличие на момент исследования актуальной информации о больных в архиве учреждения (по данным диспансерного наблюдения или, при отсутствии актуальной информации, по заключениям офтальмологов, терапевтов, онкологов или патологоанатомов, полученных через органы здравоохранения по месту жительства), срок наблюдения при отсутствии метастазов более 12 мес. Критериями исключения являлись установленная метастатическая болезнь до проведения локального лечения, эндовитреальные вмешательства в течение всего срока наблюдения, наличие >1 опухолевого очага и билатеральная УМ.
Анализ риска метастазирования проводился по типу «случай—контроль»: 2 группы пациентов — с метастазами («случаи») и без них («контроль») — сравнивались на основе частоты встречаемости предполагаемого влияющего фактора и по методу Каплана—Майера. Для статистической обработки данных использовали программное обеспечение Google Sheets (Google LLC), Microsoft Office Excel 2019 (Microsoft) и GraphPad Prism 9.2.0 (GraphPad Software, LLC). Для оценки достоверности различий между количественными значениями 2 выборок применяли U-критерий Манна—Уитни; для сравнения качественных признаков — критерии Х2 и Фишера. Безрецидивную выживаемость (выживаемость до выявления метастазов) оценивали с помощью метода Каплана—Майера с проверкой значимости различий по логранговому критерию. Различия между группами считали статистически значимыми приp <0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Общая информативность материала ТИАБ, определяемая как возможность верификации диагноза УМ
цитологическим или молекулярно-генетическим методом, составила 91 % (n = 138). Таким образом, в 9 % (n = 13) случаев не обнаружено никаких молекулярно-генетических и цитологических признаков УМ, оцениваемых в рамках данного исследования, что, однако, не исключало клинически установленный диагноз УМ.
Встречаемость мутаций в информативных образцах составила 44 % (n = 61) для гена GNAQ, 43 % (n = 59) для гена GNA11, 18 % (n = 25) для гена EIF1AX и 18 % (n = 25) для гена SF3B1. В информативных образцах, в которых проводился анализ на делецию гена PPARG и амплификацию гена MYC, встречаемость этих молекулярных нарушений составила 31 (n = 36) и 54 % (n = 64) соответственно. Драйверные мутации (в генах GNAQ или GNA11) были обнаружены в 78 % (n = 108) информативных образцов; в большинстве случаев они оказывались взаимоисключающими (в 5 случаях отмечались обе мутации). Результаты попарного анализа взаимовстречаемости молекулярных нарушений в информативных образцах УМ в рамках настоящего исследования представлены в таблице.
Попарный анализ взаимовстречаемости молекулярных нарушений в исследованных образцах продемонстрировал высокозначимые различия (p <0,01) при сравнении групп с мутациями в генах GNAQ и GNA11. Умеренно значимые различия были обнаружены при сравнении образцов с мутациями в гене
Взаимовстречаемость молекулярных нарушений Cross-incidence of molecular abnormalities
ЕШ1АХ и с молекулярными нарушениями в генах GNAQ, SF3B1 и PPARG (показатель р составил 0,047; 0,03 и 0,03 соответственно), а также при сравнении образцов с нарушениями количества копий генов РР^т и MYC (р = 0,02).
По результатам цитологического исследования в 20 % случаев клеточный тип опухоли определить не удалось. В оставшихся случаях встречаемость вере-теноклеточной меланомы составила 79 %, эпителио-идноклеточной — 11 % и смешанноклеточной — 10 % (в соответствии с классическим принципом определения клеточного типа УМ). Согласно бинарному принципу определения клеточного типа, в соответствии с которым выявляется наличие (>10 % эпителиоидных клеток) или отсутствие эпителиоидного компонента (<10 % эпителиоидных клеток), встречаемость клеточных типов составила 30 и 70 % соответственно [24].
В группу пациентов, в которой проводился анализ показателей выживаемости в соответствии с критериями включения и исключения, вошли 133 больных. Средний срок наблюдения в ней составил 36 мес (медиана — 36 мес, минимум — 2 мес, максимум — 70 мес). За это время отмечены 12 случаев метастазирования УМ (метастазы в печени — 9 случаев, в легких — 1, множественные метастазы — 2).
Риск развития метастазов в зависимости от наличия мутаций, ассоциированных с уровнем выживаемости,
Ген GNAQ (n = 138) GNA11 (n = 138) EIF1AX (n = 131) SF3B1 (n = 129) PPARG (n = 117) MYC (n = 118)
Mt WT Mt WT Mt WT Mt WT Mt WT Mt WT
GNAQ Mt - - 5 56 16 44 13 46 12 39 27 24
WT - - 54 23 9 62 12 58 24 42 37 30
GNA11 Mt 5 54 - - 10 46 12 44 18 36 30 24
WT 56 23 - - 15 60 13 60 18 45 34 30
EIF1AX Mt 16 9 10 15 - - 1 24 2 18 12 8
WT 44 62 46 60 - - 24 79 31 60 50 42
SF3B1 Mt 13 12 12 13 1 24 - - 5 18 14 10
WT 46 58 44 60 24 79 - - 28 57 47 38
PPARG Mt 12 24 18 18 2 31 5 28 - - 13 23
WT 39 42 36 45 18 60 18 57 - - 49 31
MYC Mt 27 37 30 34 12 50 14 47 13 49 - -
WT 24 30 24 30 8 42 10 38 23 31 - -
m сч о сч
>-
из о
—I
о и Z
о
ОС <
о ж
ю ш и
Z <
>
а
<
о ы X
о о
X а.
в;
£ ы ш с; о Ж.
и >
Примечание. Mt — молекулярное нарушение в соответствующем гене; WT — в соответствующем гене молекулярных нарушений не обнаружено. Статистическая значимость оценивалась по точному двустороннему критерию Фишера (ячейки зеленого цвета — p <0,05, белого — p >0,05).
Note. Mt — molecular abnormality in a corresponding gene; WT — no abnormalities found in the corresponding gene. Statistical significance was calculated using Fisher's exact two-sided test (green cells — p <0.05, white cells — p >0.05).
m сч о сч
>-
и о
-J
о и Z
о
ОС <
о ж
ю
< >
а
<
о
а. те
о ж.
и >
оценивался по типу «случаи—контроль»: пациенты были разделены на 2 группы — с метастазами («случаи») и без них («контроль»). Сравнение проводилось на основе предполагаемого влияющего фактора (мутации в генах GNAQ, GNA11, ЕШЛХ, SF3B1, РРЛЯО, MYC и клеточный тип) по критерию х2.
Статистически значимые различия определялись при делеции гена РРЛ^З, наличие которой ассоциировано с негативным прогнозом (р <0,01). Различия не были статистически значимы для молекулярных нарушений в генах GNЛQ (р = 0,99), GNЛ11 (р = 0,31) Е№1ЛХ(р = 0,1), SF3B1 (р = 0,09) и MYC (р = 0,44). Аналогичный анализ показателей выживаемости проводился в зависимости от клеточного типа как по традиционной трехчастной классификации, так и по предложенной нами двухчастной; в обоих случаях статистически значимые различия не были выявлены (р = 0,27 и 0,62 соответственно).
В ходе анализа по методу Каплана—Майера получены схожие результаты статистически значимые различия показателей выживаемости в зависимости от наличия или отсутствия молекулярного нарушения определялись только для делеции гена PPARG (р <0,01), различия не были статистически значимы для молекулярных нарушений в генах Е№1ЛХ (р = 0,11), SF3B1 (р = 0,10), МУС (р = 0,53), GNAQ (р = 0,93) и GNAП (р = 0,22) по логранговому критерию. График выживаемости по методу Каплана—Майера представлен на рисунке.
ОБСУЖДЕНИЕ
Генетический анализ опухолевого материала является частью комплексного подхода к ведению пациентов с УМ [1, 3, 5]. В специализированных офтальмо-онкологических центрах Европы и США такой анализ осуществляется на материале как энуклеированных глаз, так и ТИАБ, в то время как в российской практике этот подход все еще не является общепризнанным. Данная работа представляет собой описание молеку-лярно-генетических результатов первого масштабного
100
о —~
2 § ш
го ^
m
о: ¿j
го <и
х с m
80
60
40
20
Отсутствие делеции PPARG / Absence of PPARG deletion Делеция PPARG / PPARG deletion
-i—i—p—i—i—i—p—i—i—i—i—|—i—i—i—|—i—p—i—|
0 12 24 36 48 60
Срок наблюдения, мес / Follow up time, months
Безрецидивная выживаемость в зависимости от наличия делеции гена PPARG по методу Каплана—Майера
Recurrence-free survival depending on the presence of PPARG gene deletion per the Kaplan-Meier method
отечественного опыта применения ТИАБ с прогностической целью у пациентов с УМ.
Информативность ТИАБ зависит от размеров опухоли и техники получения биопсии (использование иглы или витреотома, диаметра инструмента) и, по данным различных исследований, варьирует от 22 до 100 % [18, 22, 23, 25]. Как правило, низкий уровень информативности может наблюдаться при биопсии опухолей небольшого размера или при цитологическом анализе материала [26, 27]. Информативность генетического материала, по результатам различных исследований, находится на сравнительно высоком уровне: 85—100 %. По нашим данным, в 91 % образцов удалось провести молекулярно-генетический анализ.
По результатам наиболее крупных исследований, мутации GNAQ и GNA11 в ткани УМ можно обнаружить в 57 и 41 % образцов соответственно, что соотносится с полученными нами результатами: эти мутации были выявлены в 44 и 43 % случаев соответственно [21, 28]. Мутации в генах Е^1ЛХ и SF3B1 и амплификация гена МУС, по данным литературы, встречаются в 8-21, 10-24 и 70 % случаев УМ [12, 21, 28, 29]. Представленная информация в целом соотносится с результатами нашего исследования: встречаемость мутаций в гене Е№1ЛХ в исследованной группе образцов составила 18 %, в гене SF3B1 — 18 %, амплификации гена МУС — 54 %. Вероятнее всего, разница обусловлена применением различных молекулярно-генетических методов идентификации мутаций. Информации о частоте встречаемости делеции гена РРЛКЭ в литературе найти не удалось; по нашим данным, эта мутация обнаружена в 31 % образцов. Анализ нарушений количества копий генов РРЛЛО и МУС является отличительной особенностью нашей прогностической панели, в основе которой тем не менее лежат многократно валиди-рованные принципы прогностической классификации УМ. Согласно этим принципам одними из главных прогностических факторов являются статусы хромосом 3 и 8 [3, 5, 10—13, 30].
В ходе анализа взаимовстречаемости молекулярных нарушений было показано, что в большинстве случаев мутации GNAQ и GNA11 являются взаимоисключающими (р <0,01), что полностью соответствует результатам предыдущих исследований [4, 14, 31]. При оценке попарной частоты встречаемости мутаций в гене Е№1ЛХ с другими молекулярными нарушениями получены статистически значимые результаты для молекулярных нарушений в генах GNAQ, PPARG и SF3B1, однако в случае с GNAQ такой результат является скорее пограничным (р = 0,047) и требует дополнительной проверки. В то же время анализ взаимовстречаемости молекулярных нарушений в генах Е^1ЛХ, РРЛКЭ и SF3B1 демонстрирует намного более высокий уровень статистической значимости, что указывает на редкость сочетания этих мутаций, которые по своей прогностической сути во многом являются противоположными.
В наиболее крупных исследованиях, посвященных изучению клеточного типа УМ на гистологическом материале энуклеированных глаз, веретеноклеточная мела-нома была выявлена в 34—44 % случаев, смешаннокле-точная — в 35—62 %, эпителиоидноклеточная — в 3—21 % [24, 32, 33]. В нашем исследовании встречаемость данной патологии составила 79 %, смешанноклеточной — 10 %, эпителиоидноклеточной — 11 %. Представленную разницу во встречаемости веретеноклеточной УМ, вероятно, можно объяснить определенной степенью клеточной гетерогенности опухоли, а также тем фактом, что возможности цитологического анализа заведомо ограниченны по сравнению с гистологическим анализом [34, 35].
Связь с уровнем выживаемости как при оценке риска развития метастазов по типу «случай—контроль», так и по методу Каплана—Майера, показала делеция гена PPARG. Данный ген несет информацию о синтезе рецепторов, активируемых пролифератором перокси-сом, — белков-факторов транскрипции с плейотропны-ми эффектами, влияющими на метаболизм жиров и углеводов, развитие атеросклероза, воспалительных и онкологических процессов. Интерес к этой мутации обусловлен ее тесной связью с моносомией хромосомы 3 — главного прогностического фактора УМ [30]. Наше исследование впервые продемонстрировало возможность использования данного молекулярного маркера для оценки прогноза пациентов с УМ.
Наше исследование показало отсутствие статистически значимой связи между наличием мутаций в генах GNAQ, ТШ11, Е^1АХ, SF3B1 и амплификации гена М¥С и безрецидивной выживаемости пациентов с УМ. С учетом данных предыдущих работ, продемонстрировавших исключительно инициирующую роль мутаций в генах GNAQ и GNA11 в процессе онкогенеза УМ, полученные результаты по этим мутациям являются вполне ожидаемыми [4, 14]. В ходе этого исследования не удалось продемонстрировать прогностическую значимость мутаций в генах ЕШ1АХ и SF3B1 и амплификации MYC, что можно объяснить сроками наблюдения (оценивалась только 3-летняя выживаемость, в то время как первое плато безрецидивной выживаемости отмечается после 5—6 лет, а в контекс-
те анализа мутации SF3B1 — после 7—10 лет) [8—10]. В то же время необходимо отметить полное отсутствие случаев метастазирования УМ у пациентов с мутациями Е^1АХи SF3B1, что предварительно подтверждает потенциальную прогностическую ценность этих молекулярно-генетических факторов.
В одном из первых исследований прогностической значимости материала ТИАБ, проведенном в 1996 г., изучался только клеточный тип опухоли [36]. Авторы продемонстрировали статистически значимое влияние клеточного типа, а точнее — количества обнаруженных эпителиоидных клеток, на выживаемость пациентов с УМ. По данным этой работы, веретеноклеточная УМ обнаруживалась в 70—79 % случаев (в зависимости от классификационного подхода). Наш анализ выживаемости в зависимости от клеточного типа опухоли продемонстрировал отсутствие статистически значимого влияния этого фактора, что можно объяснить как относительно малыми сроками наблюдения, так и ограничениями метода, описанными выше [24, 32—34].
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Тонкоигольная аспирационная биопсия УМ при проведении органосохраняющего лечения позволяет получить информативный материал в большинстве случаев (в нашем исследовании — в 91 %).
Высокий уровень информативности и частота встречаемости молекулярных нарушений в основных генах, значимых для УМ, обнаруживаемых в материале биопсии, в целом соотносятся с данными других крупных исследований, что позволяет сделать вывод о надежности используемых технологий биопсии и моле-кулярно-генетических методов оценки материала.
Использованная нами прогностическая панель продемонстрировала возможность определения прогноза пациентов в зависимости от наличия делеции гена PPARG. Остальные прогностические факторы, такие как мутации в генах Е№1АХи SF3B1, амплификация гена MYC и клеточный тип опухоли по результатам цитологического исследования, требуют дальнейшего изучения с более длительными сроками наблюдения за больными.
m сч о сч
>-
из о
—I
о и Z
о
ОС <
о ж
ю
< >
а
<
о
а.
в;
о ж.
и >
ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES
1. Hoiom V., Helgadottir H. The genetics of uveal melanoma: current in sights. Appl Clin Genet 2016;9:147-55. DOI: 10.2147/TACG.S69210
2. Olopade O.I., Pichert G. Cancer genetics in oncology practice. Ann Oncol 2001;12(7):895-908. DOI: 10.2147/TACG.S69210
3. Chattopadhyay C., Kim D.W., Gombos D.S. et al. Uveal melanoma: from diagnosis to treatment and the science in between. Cancer 2016;122(15):2299-312. DOI: 10.2147/TACG.S69210
4. Royer-Bertrand B., Torsello M., Rimoldi D. et al. Comprehensive Genetic landscape of uveal melanoma by whole-genome sequencing. Am J Hum Genet 2016;99(5):1190-8. DOI: 10.1016/ j.ajhg.2016.09.008
5. Jager M.J., Shields C.L., Cebulla C.M. et al. Uveal melanoma. Nat Rev Dis Prim 2020;6(1):24. DOI: 10.1038/s41572-020-0158-0
6. Egger E., Zografos L., Schalenbourg A. et al. Eye retention after proton beam radiotherapy for uveal melanoma. Int J Radiat Oncol 2003;55(4):867-80. DOI: 10.1016/S0360-3016(02)04200-1
7. Shields C.L., Shields J.A., Perez N. et al. Primary transpupillary thermotherapy for small choroidal melanoma in 256 consecutive cases: outcomes and limitations. Ophthalmology 2002;109(2):225-34. DOI: 10.1016/S0161-6420(01)00902-2
8. Kaliki S., Shields C., Shields J. Uveal melanoma: estimating prognosis. Indian J Ophthalmol 2015;63(2):93. DOI: 10.4103/0301-4738.154367
m сч о сч
>-
и о
-J
о и Z
о
ОС <
о ж
ю
< >
а
<
о
а. те
о ж.
и >
9. Radivoyevitch T., Zabor E.C., Singh A.D. Uveal melanoma: long-term survival. PLoS One 202;16(5):e0250939. DOI: 10.1371/ journal.pone.0250939
10. Singh A.D., Zabor E.C., Radivoyevitch T. Estimating cured fractions of uveal melanoma. JAMA Ophthalmol 202;139(2):174-81. DOI: 10.1001/jamaophthalmol.2020.5720
11. Shain A.H., Bagger M.M., Yu R. et al. The genetic evolution of metastatic uveal melanoma. Nat Genet 2019;51(7):1123-30. DOI: 10.1038/s41588-019-0440-9
12. Shields C.L., Ganguly A., Bianciotto C.G. et al. Prognosis of uveal melanoma in 500 cases using genetic testing of fine-needle aspiration biopsy specimens. Ophthalmology 2011;118(2):396-401. DOI: 10.1016/j.ophtha.2010.05.023
13. Зарецкий А.Р., Яровая В.А., Чудакова Л.В. и др. Опыт молекулярного тестирования увеальной меланомы I—III стадии при консервативном и хирургическом лечении. Вопросы онкологии 2018;5:625-32.
Zaretsky A.R., Yarovaya V.A., Chudakova L.V. et al. Experience of molecular testing of stage I—III uveal melanoma in conservative and surgical treatment. Voprosy onkologii = Questions of Oncology 2018;5:625-32. (In Russ.).
14. Dogrusoz M., Jager M.J. Genetic prognostication in uveal melanoma. Acta Ophthalmol 2018;96(4):331-47. DOI: 10.1111/aos.13580
15. Onken M.D., Worley L.A., Char D.H. et al. Collaborative Ocular Oncology Group report number 1: prospective validation of a multigene prognostic assay in uveal melanoma. Ophthalmology 2012;8(119):1596-603. DOI: 10.1016/j.ophtha.2012.02.017
16. Jager M.J., Brouwer N.J., Esmaeli B. The cancer genome atlas project: an integrated molecular view of uveal melanoma. Ophthalmology 2018;125(8):1139-42. DOI: 10.1016/j.ophtha. 2018.03.011
17. Robertson A.G., Shih J., Yau C. et al. Integrative analysis identifies four molecular and clinical subsets in uveal melanoma. Cancer Cell 2017;32(2):204-20.e15. DOI: 10.1016/j.ccell.2017.07.003
18. McCannel T.A., Chang M.Y., Burgess B.L. Multi-Year follow-up of fine-needle aspiration biopsy in choroidal melanoma. Ophthalmology 2012;119(3):606-10. DOI: 10.1016/j.ophtha.2011.08.046
19. Яровая В.А., Яровой А.А., Коробов Е.Н. и др. Молекулярное тестирование увеальной меланомы. Находки. Современные технологии в офтальмологии 2018;(4):297-9.
Yarovaya V.A., Yarovoy A.A., Korobov E.N. et al. Molecular testing of uveal melanoma. Nahodki. Sovremennye tekhnologii v oftal'mo-logii = Finds. Modern technologies in ophthalmology. 2018;(4):297-9. (In Russ.).
20. Левашов И.А., Яровой А.А., Яровая В.А. и др. Оценка риска метастазирования при проведении «прогностической» тонкоигольной аспирационной биопсии увеальной меланомы. Злокачественные опухоли 2022;12(2):29-35. DOI: 10.18027/22245057-2022-12-2-29-35
Levashov I.A., Yarovoy A.A., Yarovaya V.A. et al. Assessment of the risk of metastasis during the "prognostic" fine needle aspiration biopsy of uveal melanoma. Zlokachestvennye opuholi = Malignant tumors 2022;12(2):29-35. (In Russ.). DOI: 10.18027/2224-50572022-12-2-29-35
21. Dogrusoz M., Jager M.J. Genetic prognostication in uveal melanoma. Acta Ophthalmol 2018;96(4):331-47. DOI: 10.1111/ aos.13580
22. Sellam A., Desjardins L., Barnhill R. et al. Fine needle aspiration biopsy in uveal melanoma: technique, complications, and outcomes. Am J Ophthalmol 2016;162:28-34.e1. DOI: 10.1016/j.ajo. 2015.11.005
23. Singh A.D., Medina C.A., Singh N. et al. Fine-needle aspiration biopsy of uveal melanoma: outcomes and complications.
Br J Ophthalmol 2016;100(4):456-62. DOI: 10.1136/ bjophthalmol-2015-306921
24. Яровая В.А., Шацких А.В., Зарецкий А.Р. и др. Прогностическое значение клеточного типа увеальной меланомы. Архив патологии 2021;83(4):14. DOI: 10.17116/patol20218304114 Yarovaya V.A., Shatskikh A.V., Zaretsky A.R. et al. Prognostic value of the cell type of uveal melanoma. Arhiv patologii = Pathology archive 2021;83(4):14. (In Russ.). DOI: 10.17116/patol20218304114
25. Finn A.P., Materin M.A., Mruthyunjaya Р. Choroidal tumor biopsy: a review of the current state and a glance into future techniques. Retina 2018;38(1):S79-87. DOI: 10.1097/IAE.0000000000001997
26. Augsburger J.J., Correa Z.M., Schneider S. et al. Diagnostic transvitreal fine-needle aspiration biopsy of small melanocytic choroidal tumors in nevus versus melanoma category. Trans Am Ophthalmol Soc 2002;100:225-32.
27. Cohen V.M.L., Dinakaran S., Parsons M.A. et al. Transvitreal fine needle aspiration biopsy: the influence of intraocular lesion size on diagnostic biopsy result. Eye 2001;15(2):143-7. DOI: 10.1038/ eye.2001.48
28. Yavuzyigitoglu S., Koopmans A.E., Verdijk R.M. et al. Uveal melanomas with SF3B1 mutations. Ophthalmology 2016;123(5):1118-28. DOI: 10.1016/j.ophtha.2016.01.023
29. Parrella P., Caballero O.L., Sidransky D. et al. Detection of c-myc amplification in uveal melanoma by fluorescent in situ hybridization. Invest Ophthalmol Vis Sci 2001;42(8):1679-84. PMID 11431428
30. Souri Z., Wierenga A.P.A., van Weeghel C. et al. Loss of BAP1 is associated with upregulation of the NFkB Pathway and Increased HLA class i expression in uveal melanoma. Cancers (Basel) 2019;11(8):1102. DOI: 10.3390/cancers11081102
31. Shoushtari A.N., Carvajal R.D. GNAQ and GNA11 mutations in uveal melanoma. Melanoma Res 2014;24(6):525-34. DOI: 10.1097/CMR.0000000000000121
32. Paul E.V., Parnell B.L., Fraker M. Prognosis of malignant melanomas of the choroid and ciliary body. Int Ophthalmol Clin 1962;2(2):387-402. DOI: 10.1097/00004397-19620600000007
33. Callender Colonel G.R., Wilder H.C., Ash J.E. Five hundred melanomas of the choroid and ciliary body followed five years or longer. Am J Ophthalmol 1942;25(8):962-7. DOI: 10.1016/S0002-9394(42)90595-6
34. Sidawy M.K., Del Vecchio D.M., Knoll S.M. Fine-needle aspiration of thyroid nodules. Cancer 1997;25;81(4):253-9. DOI: 10.1002/(SICI)1097-0142
35. De Lange M.J., Nell R.J., van der Velden P.A. Scientific and clinical implications of genetic and cellular heterogeneity in uveal melanoma. Mol Biomed 2021;2(1):25. DOI: 10.1186/s43556-021-00048-x
36. Char D.H., Kroll S.M., Miller T. et al. Irradiated uveal melanomas: cytopathologic correlation with prognosis. Am J Ophthalmol 1996;122(4):509-13.DOI: 10.1016/S0002-9394(14)72110-5
Вклад авторов
В.А. Яровая: ведение пациентов с УМ, разработка концепции исследования, сбор, анализ и интерпретация данных; И.А. Левашов: разработка дизайна исследования, сбор, анализ и интерпретация данных, написание текста статьи;
A.Р. Зарецкий: разработка концепции и дизайна исследования, анализ и интерпретация данных, научное редактирование; Л.В. Чудакова: проведение молекулярно-генетических тестов, сбор и анализ данных;
B.В. Назарова: ведение пациентов с УМ, разработка дизайна исследования, анализ и интерпретация данных; А.Д. Матяева: сбор, анализ и интерпретация данных;
Л.В. Демидов: разработка концепции исследования, научное редактирование;
А.А. Яровой: разработка концепции и дизайна исследования, научное редактирование.
Authors' contribution m
V.A. Yarovaya: management of patients with mental illness, development of the research concept, data collection, analysis and interpretation; ^
I.A. Levashov: research design development, data collection, analysis and interpretation, article writing; ® A.R. Zaretsky: development of the research concept and design, data analysis and interpretation, scientific editing; L.V. Chudakova: conducting molecular genetic tests, data collection and analysis;
V.V. Nazarova: management of patients with mental illness, study design development, data analysis and interpretation; т A.D. Matyaeva: data collection, analysis and interpretation;
L.V. Demidov: development of the research concept, scientific editing; (j
A.A. Yarovoy: development of the concept and design of research, scientific editing. О
О
ORCID авторов / ORCID of authors tJ
B.А. Яровая / V.A. Yarovaya: https//orcid.org/0000-0001-8937-7450, q И.А. Левашов / I.A. Levashov: https//orcid.org/0000-0001-6949-1002 Q£
A.Р. Зарецкий / A.R. Zaretsky: https//orcid.org/0000-0002-7778-6617 < Л.В. Чудакова / L.V. Chudakova: https//orcid.org/0000-0002-8592-1188
B.В. Назарова / V.V. Nazarova: https//orcid.org/0000-0003-0532-6061 и А.Д. Матяева / A.D. Matyaeva: https//orcid.org/0000-0001-7543-619X ^ Л.В. Демидов / L.V. Demidov: https//orcid.org/0000-0002-8562-6082 О А.А. Яровой / A.A. Yarovoy: https//orcid.org/0000-0003-2219-7054 Ж
z
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. ^
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest. ш
U Z
Финансирование. Исследование проведено при поддержке Минздрава России (государственное задание № 300060056 для ФГАОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава России). q Funding. The study was conducted with the support of the Ministry of Health of the Russian Federation (state task No. 300060056 for the Pirogov Russian ^ National Research Medical University of the Ministry of Health of Russia). ___
Соблюдение прав пациентов и правил биоэтики
Протокол исследования одобрен локальным этическим комитетом ФГАУ «Национальный медицинский исследовательский центр «Меж- |_ отраслевой научно-технический комплекс «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России.
Пациенты подписали информированное согласие на публикацию своих данных. О
Compliance with patient rights and principles of bioethics
The protocol of the study was approved by the committee on biomedical ethics of S. Fyodorov Eye Microsurgery Federal State Institution, Ministry ^ of Health of Russia.
The patients gave written informed consent to the publication of their data. q
X Q_
в; ы
Ш
c; о Ж
и >
Статья поступила: 22.12.2022. Принята к публикации: 13.06.2023. Article submitted: 22.12.2022. Accepted for publication: 13.06.2023.
