CC BY
129
ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2012
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012 УДК 612.649.017.1.083
В. Ю. Талаев, М. А. Ломунова, М. В. Плеханова, А. В. Матвеичев, М. Э. Цатуров, О. Н. Бабайкина, И. Е. Заиченко, Н. Н. Еланкова, Е. Б. Талаева
продукция цитокинов и хемокинов при взаимодействии дендритных клеток и клеток трофобласта плаценты человека
IN VITRO
ФБУН Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. акад. И. Н. Блохиной Роспотребнадзора (603950, г Нижний Новгород, ул. грузинская, д. 44)
Работа поддержана РффИ, проект 10-04-00304
Успешное развитие беременности сопровождается изменениями состава и свойств иммунокомпетентных клеток в тканях матки. Эти изменения необходимы для минимизации последствий иммунных реакций на антигены плода при сохранении защиты от инфекций. Данная работа посвящена исследованию изменений свойств дендритных клеток (ДК) при взаимодействии с клетками цитотрофобласта (ЦТ) плаценты человека in vitro. Показано, что ДК, созревавшие в присутствии клеток ЦТ, обладают пониженной способностью индуцировать продукцию лимфоцитами интерферона-Y и интерлейкина-17 - цитокинов, отвечающих за опасные для плода реакции клеточного иммунитета и воспаления. В то же время ДК, созревавшие в присутствии ЦТ, отличаются повышенной продукцией хемокина МСР-1 (monocyte chemotactic proteine-1), привлекающего моноциты и макрофаги. Представляется вероятным, что усиление продукции МСР-1 необходимо для формирования специфического состава лейкоцитов беременной матки с преобладанием клеток системы естественного иммунитета.
Ключевые слова: Т-лимфоциты, цитокины, хемокины, дендридные клетки
Talaev V.Yu., Lomunova M.A., Plekhanova M.A., Matveichev A.V., Tsaturov M.E., Babaikina O.N., Zaichenko I.E., Elankova N..N., Talaeva E.B.
THE PRODUCTION OF CYTOKINES AND CHEMOKINES DURING IN VITRO INTERACTIONS BETWEEN DENDRITIC CELLS AND TROPHOBLAST CELLS FROM HUMAN PLACENTA
The successful development of pregnancy is known to be associated with the alteration of the composition and properties of immunocompetent cells in uterus tissues. These changes are necessary to reduce to a minimum the consequences of immune reactions to fetal antigens and to ensure protection against infections. The present work was designed to study changes in the properties of dendritic cells (DC) accompanying their in vitro interactions with trophoblast cells (TC) from human placenta. It was shown that maturation of dendritic cells in the presence of trophoblats impairs their ability to induce the lymphocyte-mediated production of interferon-gamma and interleukin-17, i.e. cytokines involved in the reactions of cell-mediated immunity and inflammatory reactions. At the same time, DC that matured in the presence of TC are characterized by the enhanced production of MCP-1 chemokine (monocyte chemotactic protein-1) that recruits monocytes and macrophages. It is concluded that the enhanced production of MCP-1 is needed for the formation of the specific leukocyte composition of the pregnant uterus with the predominance of the cells of the natural immune system.
Key words: T-limphocites, cytokines, chemokines, dendritic cells
Введение. Как известно, дендритные клетки (ДК) представляют собой гетерогенную группу антиген-презентирующих клеток, общими функциями которых являются сбор, процессинг и представление антигенов Т-лимфоцитам [12, 28]. В то же время различные ДК в зависимости от их происхождения, стадии созревания и условий активации существенно отличаются по своей способности снабжать Т-лимфоцит дополнительными стимулирующими сигналами - цитокинами и мембранными молекулами, которые необходимы для выживания активированного лимфоцита и определения пути его дальнейшей дифференцировки. От этих дополнительных сигналов во многом зависит, созреет ли активированный антигеном наивный CD4+ Т-лимфоцит в Т-хелпер 1-го типа (Tx1), Тх2, Тх17, Тх22 или в адаптивную регуляторную Т-клетку [4]. В связи с этим ДК, созревавшие в разных усло-
Талаев Владимир Юрьевич - д-р мед. наук, зав. лаб.
виях, способны стимулировать различные типы иммунной реакции на антиген: гуморальный иммунный ответ, цитотоксические и воспалительные реакции или иммунологическую толерантность. Кроме того, ДК напрямую участвуют в регуляции воспаления и управляют миграцией клеток за счет продукции про-и противовоспалительных цитокинов и хемокинов.
Такая пластичность свойств ДК, а также наличие ДК в тканях, разделяющих организм матери и плода, делает их весьма интересными кандидатами на роль специфических регуляторов, участвующих в предотвращении иммунного конфликта матери и плода [8, 17, 20, 22]. К настоящему времени уже известна часть регуляторных механизмов, обеспечивающих выживание плода, несущего чужие для матери отцовские аллоантигены. К ним относятся модуляция функций NK-клеток матки неклассическими молекулами HLA [23], индукция регуляторных Т-клеток [3, 27, 32], угнетение эффекторных Т-лимфоцитов с помощью катаболизма триптофана [19, 21] и их клональная
- 24 -
КЛЕТОЧНАЯ ИММУНОЛОГИЯ
Рис. 1. Экспрессия мембранных молекул на ДК (слева) и ДК-ЦТ (справа).
Закрашенная гистограмма - изотипический контроль. Над каждой гистограммой тип клеток, название мембранной молекулы, количество клеток, несущих молекулу, яркость окрашивания, результат репрезентативного эксперимента.
делеция [14, 29]. Кроме того, в успехе беременности участвует локальный цитокиновый баланс в тканях беременной матки [8, 9, 11, 18]. По крайней мере часть этих специфических механизмов опосредована действием эмбриональных клеток трофобласта.
Различные группы этих клеток продуцируют гормоны и противовоспалительные цитокины [31], экспрессируют неклассические молекулы HLA [15] и другие про-тективные молекулы: CD200 [10], PDL1 (В7-Н1), PDL2 (B7-DC) [25], FasL [24], белки-регуляторы комплемента [13].
Свою регуляторную активность клетки трофобласта могут проявлять при непосредственном и длительном контакте с клетками иммунной системы матери в децидуальной оболочке матки. Наряду со стромальными клетками материнского происхождения в состав децидуальной оболочки человека входят клетки трофобла-ста якорных хориональных ворсин и отходящие от него колонны ЦТ клетки инвазивного ЦТ [5, 6]. Также в децидуальной оболочке присутствуют материнские лейкоциты. Подавляющее большинство лейкоцитов представлено клетками естественного иммунитета: CD16"CD56++ NK-клетками и макрофагами, тогда как содержание Т-лимфоцитов в децидуальной оболочке относительно невелико. Кроме того, децидуальная оболочка содержит незрелые миелоидные ДК и небольшое количество плаз-моцитоидных ДК и клеток Лангер-ганса [7, 8, 16, 17, 20, 22].
В предыдущих работах, изучая взаимодействие клеток иммунной системы матери и трофобласта в условиях in vitro, мы обнаружили, что совместное культивирование созревающих моноцитарных ДК человека с клетками цито-трофобласта (ЦТ) плаценты ведет к существенному угнетению способности ДК стимулировать опасные для плода Tx1 [2, 30]. Кроме того, ДК, созревшие в присутствии ЦТ (ДК-ЦТ), обладали сниженной способностью индуцировать утрату Т-лимфоцитами CD62L-селектина, необходимого для миграции из крови в лимфатические узлы [3, 30]. По нашему мнению, сохранение экспрессии этой молекулы приводит к тому, что стимулированные Т-клетки продолжают циркулировать по маршруту кровь-лимфатический узел-лимфа-кровь и не могут мигрировать в слизистую беременной матки. В результате снижается возможность участия этих клеток в локальных иммунных реакциях, опасных для плода. В данной работе мы продолжили изучение действия ЦТ на функцио-
- 25 -
ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2012
пг/мл 60
50 -
40 -
30 -
20 -
ИЛ-17
10 -
\#
80 -
60 -
40
20 -
УУУУУУА
Ш
Контроль ЦТ
пг/мл 200 -|
150-
100 -
50-
10
ДК ДК-ЦТ
ИНФ-у
Смесь ДК и ЦТ
Контроль ДК ДК-КСН
пг/мл
120 и
100 -
ш
,#
80 -
60 -
40 -
20 -
Контроль ЦТ
ДК ДК-ЦТ
ИНФ-у
Смесь ДК и ЦТ
Рис. 2. Продукция (в пг/мл) ИЛ-17 и ИФН-у в смешанной культуре лимфоцитов.
p < 0,05: * - достоверные отличия продукции цитокинов в культурах, стимулированных ДК-ЦТ, ДК-КСН и смесью ДК и ЦТ, от культур, стимулированных обычными ДК, # - между культурами, стимулированными ДК-ЦТ и смесью ДК и ЦТ.
нальные свойства ДК в условиях культуры клеток. Показано, что ДК-ЦТ отличаются пониженной способностью индуцировать продукцию не только Тх1-цитокина интерферона (ИФН)-у, но и интерлейкина (ИЛ)-17. Как известно, ИЛ-17 является ключевым цитокином Txl7 - клеток, стимулирующих воспалительные реакции преимущественно с нейтрофиль-ной инфильтрацией [4, 27]. В то же время наряду со снижением способности стимулировать антиген-зависимые иммунные и воспалительные реакции. ДК-ЦТ имеют повышенную продукцию хемокина МСР-1 (monocyte chemotactic proteine-1), привлекающего в зону продукции моноциты и макрофаги. Выделенные в культуру клетки трофобласта также продуцируют МСР-1. Представляется вероятным, что усиление продукции МСР-1 необходимо для формирования специфического состава лейкоцитов беременной матки с преобладанием клеток системы естественного иммунитета.
пг/мл ИЛ-17 Материалы и методы. ЦТ выделяли
120 -I из проб плаценты, полученных в ходе
элективных абортов у женщин с нормальной беременностью со сроком 5-11 100 -\ 'Г нед. Пробы хориональных ворсин ин-
тенсивно отмывали, разрезали на мелкие кусочки и подвергали ферментативному гидролизу в 0,25% растворе трипсина-ЭДТА (“Gibco”, США) в течение 35 мин при 37oC. Полученную суспензию фильтровали через металлическое сито, клетки отмывали центрифугированием и разделяли на 15-40% градиенте пер-колла («Pharmacia», Швеция). После центрифугирования при 460 g в течение 45 мин клетки из слоя 30% перколла собирали, дважды отмывали и засевали в 24-луночные планшеты («Costar», США) в концентрации 3 • 105 клеток/мл в среде DME («Sigma», США) с 10% инактивированной нагреванием фетальной телячьей сыворотки («Биолот», Россия), 0,584 г/л L-гаутамина, 110 мг/л пирувата натрия, 3,9 мг/л 2-р-меркаптоэтанола и 10 мг/л гентамицина («Sigma», США). Клетки культивировали при 37oC в атмосфере с 5% СО2. Чистоту выделения ЦТ верифицировали иммуноферментным окрашиванием цитокератина-7 антителами OV-TL 12/30 и набором LSAB2 System-HRP (“DakoCytomation, Inc.”, США). Культуры ЦТ с чистотой более 95% использовали в дальнейших экспериментах.
Мононуклеарные клетки периферической крови (МНПК) здоровых беременных выделяли центрифугированием на Hystopaque-1077 (“Sigma”, США), дважды отмывали и засевали в 24-луночных планшеты (“Costar”, США) по 5 • 106 клеток на лунку. Через 3 ч неприлипшие клетки собирали, и прилипшие клетки (моноциты) культивировали в течение ночи. На следующий день (1-е сутки) моноциты подсчитывали и засевали с клетками ЦТ или без них. Соотношение между моноцитами и ЦТ было 4:1. Отдельно клетки ЦТ засевали в контрольную культуру, в которую затем добавляли те же стимуляторы созревания, что и в культуры моноцитов. В отдельных экспериментах к моноцитам добавляли не ЦТ, а надосадок из двух суточных культур ЦТ, засеянных в исходной концентрации 5 • 105 клеток/мл. Количество добавляемого надосадка составляло 25% объема среды. Созревание ДК индуцировали добавлением к моноцитам ИЛ-4 (20 нг/мл) и ГМ-КСФ (100 нг/мл) («Invitrogen», США) на 1-е и 4-е сутки культивирования. На 7-е сутки надосадки собирали для определения содержания цитокинов иммуноферментным анализом и клетки стимулировали липополисахаридом (ЛПС) Salmonella typhi (отраслевой стандарт пирогена, ГИСК им Л. А. Тарасевича, Россия) в концентрации 1 мкг/мл. Через 24 ч надосадки вновь отбирали для определения уровня цитокинов, а клетки собирали для смешанной культуры лимфоцитов (СКЛ). При анализе продукции цитокинов для определения концентрации ИЛ-1р, ИЛ-6, ИЛ-10, ИЛ-18, МСР-1 и VEGF использовали тест-системы производства «Вектор-Бест» (Новосибирск, Россия).
Способность зрелых ДК стимулировать аллогенные лимфоциты к цитокинопродукции оценивали в СКЛ. Стимули-
Ш
Контроль ДК
ДК-КСН
рующими клетками были следующие: 1) ДК, созревавшие без
- 26 -
КЛЕТОЧНАЯ ИММУНОЛОГИЯ
Концентрация (в пг/мл) цитокинов в среде культур ДК, ДК-ЦТ и ЦТ
Цитокин Тип пробы среды* Культура клеток Разность значений ДК-ЦТ и ЦТ
ДК ДК-ЦТ ЦТ
ИЛ-1 1 246 ± 34 255 ± 36 0
2 101 ± 17 103 ± 16 0
ИЛ-6 1 11 971 ± 1818 10 858 ± 1852 71 ± 23
2 7705± 1456 7975 ± 1639 38 ± 3
ИЛ-10 1 120 ± 22 133 ± 27 0,4 ± 0,2
2 54 ± 7 50 ± 7 0
VEGF 1 18 ± 9 10 ± 3 18 ± 7
2 13 ± 1 14 ± 3 17 ± 4
МСР-1 1 3 540 ± 523 5 080 ± 292** 498± 135** 4698 ± 303**
2 2780± 578 4187± 535** 113±24** 4121± 660**
Примечание. * - тип пробы: 1 - надосадок из культур клеток, росших 6 сут с ИЛ-4 и ГМ-КСФ, отобранный перед внесением ЛПС; 2 -надосадок, взятый через 24 ч после внесения ЛПС; ** - различия от ДК достоверны при р < 0,01 в парном t-тесте.
ЦТ; 2) ДК, созревавшие в присутствии ЦТ; 3) ДК, созревавшие без ЦТ и смешанные с ними в соотношении 4:1 лишь в момент добавления в СКЛ. В отдельных экспериментах использовали ДК, созревавшие в присутствии среды из культур ЦТ. Отвечающими клетками были аллогенные лимфоциты (неприлипающие МНПК здоровых беременных) в концентрации 1 • 106/мл. Соотношение лимфоцитов и ДК было 1:10. В качестве контроля культур использовали нестимулированные лимфоциты и лимфоциты с клетками ЦТ. Через 72 ч культивирования надосадок клеток собирали и оценивали в нем концентрацию ИФН-у и ИЛ-17 с помощью тест-систем производства «Вектор-Бест» (Новосибирск, Россия).
Для проточного цитометрического анализа ДК, росшие 7 сут с ИЛ-4 и ГМ-КСФ, а затем 2 сут с ЛПС окрашивали РЕконъюгатами антител к CD14, CD83, СD86 вместе с HLA-DR-FITC и CD80-FITC вместе с HLA-DR-PE. Антитела к CD83 и были приобретены в «BD Biosciences» (США), антитела к CD80 и CD86 - в «Beckman Coulter Corp.» (Франция), антитела к CD 14 и HLA-DR - в «Иммуносорбенте» (Россия). Пробы анализировали на проточном цитофлюориметре FacsCanto II («BD Biosciences», США) c помощью программы FacsDiva. ДК гейтировали в соответствии с профилем FSC/SSC, а затем в гейт выделяли HLA-DR+-клетки.
Результаты и обсуждение. Незрелые ДК получали культивированием моноцитов с ИЛ-4 и ГМ-КСФ. Затем для получения зрелых ДК клетки стимулировали ЛПС. Результаты цитофлюориметрического анализа показали, что в использованных нами условиях стимуляции моноциты созревали в ДК с типичным фенотипом. Все они экспрессировали HLA-DR и CD86, более трети клеток экспрессировали CD80 и CD83 (рис. 1). В ходе созревания ДК полностью утрачивали моноцитарный маркер CD14. ДК-ЦТ имели сходный фенотип с небольшими, но воспроизводимыми отличиями, описанными нами ранее [3, 30]. Эти отличия заключались в сохранении низкого уровня экспрессии CD14 на части ДК-ЦТ и меньшей плотности экспрессии HLA-DR на этих клетках.
При анализе продукции цитокинов установили, что ДК и ДК-ЦТ продуцировали значительное количество ИЛ-ip, ИЛ-6 и ИЛ-10. Клетки ЦТ не продуцировали значимого количества этих цитокинов и не оказывали влияния на их секрецию ДК (см. таблицу). В культурах ДК, ДК-ЦТ и ЦТ зарегистрировали слабую продукцию фактора роста эндотелия сосудов
(VEGF) (см. таблицу). Достоверного действия ЦТ на продукцию этого цитокина не обнаружили.
Надосадки из культур незрелых и ЛПС-активированных ДК содержали значительное количество хемокина МСР-1, причем уровень продукции МСР-1 в культурах ДК-ЦТ существенно превышал соответствующие показатели ДК (см. таблицу). Клетки ЦТ контрольных культур также продуцировали этот хемокин, однако концентрация МСР-1 в культурах ЦТ была значительно ниже, чем в культурах ДК и ДК-ЦТ. Среднее значение разности концентрации МСР-1 в культурах ДК-ЦТ и соответствующих контрольных культурах ЦТ достоверно превышало среднее содержание МСР-1 в культурах ДК, что свидетельствует о стимулирующем действии ЦТ на продукцию этого хемокина ДК (см. таблицу).
Мы не обнаружили детектируемой продукции ИЛ-18 ни в одной из культур незрелых ДК и ДК-ЦТ, а также в культурах зрелых ДК и контрольных культурах ЦТ. Слабую продукцию ИЛ-18 отметили лишь в 3 из 22 исследованных культур зрелых ДК-ЦТ. Концентрация ИЛ-18 в 2-суточном супернатанте этих культур составила 37,9, 38,5 и 40,1 пг/мл.
Ранее мы сообщали о том, что совместное культивирование созревающих ДК с клетками ЦТ приводит к угнетению способности ДК индуцировать продукцию ИФН-у лимфоцитами в смешанной культуре [2, 30]. В рамках данной работы провели сравнительный анализ действия ДК и ДК-ЦТ на продукцию аллогенными Т-лимфоцитами ИФН-у и ИЛ-17 (рис. 2). Показано, что концентрация ИФН-у в надосадках культур лимфоцитов, стимулированных ДК-ЦТ, была в 2,88 ± 0,54 раза меньше, чем в надосадках из культур, стимулированных контрольными ДК (р < 0,00001 в парном f-тесте; n = 42). Сами клетки ЦТ, добавленные в культуру нестимулированных лимфоцитов, не оказывали влияния на спонтанную продукцию ИФН-у.
Для оценки прямого действия ЦТ на продукцию ИФН-y использовали вариант смешанной культуры, в которую к лимфоцитам при засеве добавляли ДК, созревшие без трофобласта, и клетки ЦТ, росшие без ДК. При этом соотношение ДК и ЦТ составило 4:1, поскольку ранее с помощью оценки экспрессии
- 27 -
ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2012
HLA-DR мы продемонстрировали стабильность соотношения ДК и ЦТ в течение 9 сут совместного культивирования [30]. При добавлении ЦТ в культуру лимфоцитов вместе с обычными ДК наблюдали небольшое, но достоверное, ослабление продукции ИФН-у (p < 0,01). Тем не менее продукция ИФН в этих культурах была значительно большей, чем в культурах с ДК-ЦТ (р < 0,005) (см. рис. 2). Таким образом, клетки ЦТ оказывают прямое ингибирующее действие на индуцированную ДК продукцию ИФН-у и выраженное опосредованное действие за счет влияния на процесс созревания ДК. Данные о действии ЦТ на интерферониндуцирующие свойства ДК подтверждаются экспериментами с использованием среды, кондиционированной клетками ЦТ. ДК, созревавшие в присутствии этой среды (ДК-КСН), были практически лишены способности стимулировать продукцию ИФН-у (см. рис. 2).
Аналогичные результаты были получены при оценке продукции ИЛ-17 лимфоцитами смешанных культур: обычные ДК стимулировали продукцию ИЛ-17 лимфоцитами, смесь обычных ДК и клеток ЦТ вызывала меньшую продукцию ИЛ-17, и, наконец, ДК-ЦТ обладали наименьшей способностью стимулировать продукцию этого цитокина (см. рис. 2). Концентрация ИЛ-17 в культурах, стимулированных ДК-ЦТ, была в 3,69 ± 0,76 раза ниже, чем в культурах с обычными ДК (р < 0,05 в парном t-тесте), и в 2,53 ± 0,59 раза ниже, чем в культурах, стимулированных смесью обычных ДК и клеток ЦТ (р < 0,05 в парном f-тесте). ДК-КСН также были практически лишены способности стимулировать продукцию ИЛ-17 лимфоцитами (см. рис. 2).
Таким образом, показано, что клетки трофобласта плаценты оказывают существенное влияние на созревание ДК. В результате ДК усиливают продукцию хемоаттрактанта моноцитов МСР-1, но при этом снижают свою способность индуцировать продукцию лимфоцитами ИФН-у и ИЛ-17. Представляется вероятным, что взаимодействие ДК и ЦТ в децидуальной оболочке беременной матки приводит к усилению локальной группировки клеток естественного иммунитета за счет привлечения моноцитов из кровотока. В то же время контакт с клетками ЦТ должен снижать способность ДК, несущих аллоантигены плода в регионарные лимфатические узлы, стимулировать клеточные и провоспалительные адаптивные иммунные реакции.
ЛИТЕРАТУРА
1. Талаев В. Ю., Матвеичев А. В., Ломунова М. А и др. Клетки трофобласта плаценты человека угнетают способность дендритных клеток индуцировать продукцию интерферона-у // Иммунология. - 2009. - Т. 30, № 3. - С. 148-152.
2. Талаев В. Ю., Матвеичев А. В., Ломунова М. А. и др. Действие клеток плацентарного барьера на созревание дендритных клеток in vitro // Иммунология. - 2010. - Т. 31, № 3. - С. 125-131.
3. Aluvihare V. R., Kallikourdis М., Betz A. G. Regulatory T cells mediate maternal tolerance to the fetus // Nature Immunol. -2004. - Vol. 5. - P. 266-271.
4. Annunziato F., Romagnani S. Heterogeneity of human effector CD4+ T cells // Arthr. Res. Ther. - 2009. - Vol. 11. - P. 257-265.
5. Aplin J. D. Implantation, trophoblast differentiation and hemochorial placentation: mechanistic evidence in vivo and in vitro // J. Cell. Sci. - 1991. - Vol. 99. - P. 681-692.
6. Aplin J. D., Haigh T., Jones C. J. P. et al. Development of cytotro-phoblast columns from explanted first-trimester human placental villi: role of fibronectin and integrin a5pl // Biol. Reprod. - 1999.
- Vol. 60. - P. 828-838.
7. Ban Y. L, Kong B. H, Qu X. et al. BDCA-1+, BDCA-2+ and BDCA-3+ dendritic cells in early human pregnancy decidua // Clin. Exp. Immunol. - 2008. - Vol. 151. - P. 399-406.
8. Blois S. M., Kammerer U., Alba Soto C. et al. Dendritic cells: key to fetal tolerance? // Biol. Reprod. - 2007. - Vol. 77. - P. 590-598.
9. Chaouat G., Ledee-Bataille N., Dubanchet S. et al. TH1/TH2 paradigm in pregnancy: paradigm lost? Cytokines in pregnancy/ early abortion: reexamining the TH1/TH2 paradigm // Int. Arch. Allergy Immunol. - 2004. - Vol. 134. - P. 93-119.
10. Clark D. A., Keil A., Chen Z. et al. Placental trophoblast from successful human pregnancies expresses the tolerance signaling molecule, CD200 (OX-2) // Am. J. Reprod. Immunol. - 2003. -Vol. 50. - P. 187-195.
11. Dealtry G. B., O'Farrell M. K., Fernandez N. The Th2 cytokine environment of the placenta // Int. Arch. Allergy Immunol. -2000. - Vol. 123. - P. 107-119.
12. GuermonprezP., Valladeau J., ZitvogelL. et al. Antigen presentation and T cell stimulation by dendritic cells. // Annu. Rev. Immunol. - 2002. - Vol. 20. - P. 621-667.
13. Holmes C. H., Simpson K. L. Complement and pregnancy: new insights into the immunobiology of the fetomaternal relationship // Bailliere’s Clin. Obstet. Gynaecol. - 1992. - Vol. 6. - P. 439-460.
14. Hunt J. S., Vassmer D., Ferguson T. A., Miller L. Fas ligand is positioned in mouse uterus and placenta to prevent trafficking of activated leukocytes between the mother and the conceptus // J. Immunol. - 1997. - Vol. 158. - P. 4122-4128.
15. Hunt J. S., Petroff M. G., McIntire R. H., Ober С. HLA-G in immune tolerance in pregnancy // FASEB J. - 2005. - Vol. 19. - P. 681-93.
16. Ivanova E., Kyurkchiev D., Altankova I. et al. CD83 monocyte-derived dendritic cells are present in human decidua and progesterone induces their differentiation in vitro // Am. J. Reprod. Immunol. - 2005. - Vol. 53. - P. 199-205.
17. Kammerer U., Kruse A., Barrientos G. et al. Role of dendritic cells in the regulation of maternal immune responses to the fetus during mammalian gestation // Immunol. Invest. - 2008. - Vol. 37. - P. 499-533.
18. KnackstedtM. K., Zenclussen A. C., HertwigK. et al. Th1 cytokines and the prothrombinase fgl2 in stress-triggered and inflammatory abortion // Am. J. Reprod. Immunol. - 2003. - Vol. 49.
- P. 210-220.
19. Kudo Y., Boyd C. A. R., Spyropoulou I. et al. Indoleamine 2,3-dioxygenase: distribution and function in the developing human placenta. // J. Reprod. Immunol. - 2004. - Vol. 61. - P. 87-98.
20. Laskarin G., Kammerer U., Rukavina D. et al. Antigen-presenting cells and materno-fetal tolerance: an emerging role for dendritic cells // Am. J. Reprod. Immunol. - 2007. - Vol. 58. - P. 255-267.
21. Mellor A. L., Munn D. H. IDO expression by dendritic cells: tolerance and tryptophan catabolism // Nature Rev. Immunol. -2004. - Vol. 4. - P. 762-774.
22. Miyazaki S., Tsuda H., Sakai M. et al. Predominance of Th2-promoting dendritic cells in early human pregnancy decidua // J. Leukoc. Biol. - 2003. - Vol. 74. - P. 514-522.
23. Moffett-KingA. Natural killer cells and pregnancy // Nature Rev. Immunol. - 2002. - Vol. 2. - P. 656-663.
24. Mor G., Gutierrez L. S., Eliza M. et al. Fas-fas ligand system-induced apoptosis in human placenta and gestational trophoblastic disease // Am. J. Reprod. Immunol. - 1998. - Vol. 40. - P. 89-94.
25. Petroff M. G., Chen L., Phillips T. A. et al. B7 family molecules are favorably positioned at the human maternal-fetal interface // Biol. Reprod. - 2003. - Vol. 68. - P. 1496-1504.
26. Romagnani S. Human Thl7 cells // Arthr. Res. Ther. - 2008. -Vol. 10, N 2. - P. 206-214.
- 28 -
КЛЕТОЧНАЯ ИММУНОЛОГИЯ
27. Saito S., Sasaki Y., Sakai M. CD4+CD25high regulatory T cells in human pregnancy // J. Reprod. Immunol. - 2005. - Vol. 65. - P. 111-120.
28. Steinman R. M. The dendritic cell system and its role in immuno-genicity // Annu. Rev. Immunol. - 1991. - Vol. 9. - P. 271-296.
29. Tafuri A., Alfering J., MollerP. et al. T cell awareness of paternal alloantigens during pregnancy // Science. - 1995. - Vol. 270. - P. 630-633.
30. Talayev V. Yu., MatveichevA. V., LomunovaM. A. et al. The effect of human placenta cytotrophoblast cells on the maturation and T-cell stimulating ability of dendritic cells in vitro // Clin. Exp.
Immunol. - 2010. - Vol. 162, N 1. - P. 91-99.
31. Tarrade A., Kuen R. L., Malassin@e A. et al. Characterization of human villous and extravillous trophoblasts isolated from first trimester placenta // Lab. Invest. - 2001. - Vol. 81. - P. 11991211.
32. Zenclussen A. C., Gerlof K., Zenclussen M. L. et al. Abnormal T cell reactivity against paternal antigens in spontaneous abortion: adoptive transfer of pregnancy-induced CD4+CD25+ T regulatory cells prevents fetal rejection in a murine abortion model // Am. J. Pathol. - 2005. - Vol. 166. - P. 811-822.
Поступила 27.07.11
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012 УДК 612.017.1.014.083
М. Э. Цатуров, В. Ю. Талаев, А. В. Матвеичев, М. В. Плеханова, И. Е. Зайченко,
О. Н. Бабайкина, М. А. Помунова
эффекты последовательного и конкурентного взаимодействия обычных моноцитарных дендритных клеток и дендритных клеток, обработанных индукторами толерогенности, с аллогенными лимфоцитами
ФБУН Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. акад. И. Н. Блохиной Роспотребнадзора (603950, Нижний Новгород, ул. грузинская, д. 44)
Работа поддержана РффИ, проект 10-04-00304
Показано, что инкубирование созревающих дендритных клеток (ДК) новорожденных детей с интерлейкином (ИЛ)-10 или с дексаметазоном (ДЕКС) приводит к частичному сохранению экспрессии CD14 и существенному снижению экспрессии молекул костимуляции. Модулированные ДЕКС и ИЛ-10 ДК детей и взрослых утрачивают способность стимулировать пролиферацию и продукцию интерферона (ИФН)^ аллогенными лимфоцитами, причем лимфоциты после контакта с такими клетками снижают свою способность отвечать на повторную стимуляцию теми же аллоантигенами. В то же время модулированные ДК детей не подавляют пролиферацию и цитокинопродукцию лимфоцитов при конкурентном взаимодействии с обычными ДК, тогда как модулированные ДЕКС ДК взрослых в аналогичных условиях угнетают продукцию ИФН-y.
Ключевые слова: дендритные клетки, толерогенность, глюкокортикоиды, Т-лимфоциты
Tsaturov ME., Talaev V.Yu., Matveichev A.V., Zaichenko I.E., Babaikina O.N., Lomunova M.A. EFFECTS OF COGNITIVE AND COMPETITIVE INTERACTIONS OF NATIVE MONOCYTE-DERIVED DENDRITIC CELLS AND DENDRITIC CELLS TREATED BY TOLEROGENIC INDUCERS WITH ALLOGENOUS LYMPHOCYTES
It has been shown that incubation of the maturing dendritic cells from the newborn infants with interleukin-10 or dexamethasone ensured partial preservation of CD14 expression and resulted in a significant decrease of the expression of co-stimulation molecules. Dendritic cells from the children and adult subjects lost the ability to stimulate proliferation and production of interferon-gamma in allogenous lymphocytes. The lymphocytes that had been in contact with such cells in their turn showed the impaired ability to respond to the repeated stimulation by the same allo-antigens. At the same time, the modulated dendritic cells of the children failed to suppress proliferation and cytokine production by lymphocytes under conditions of competitive interaction with their native counterparts whereas dexamethasone-modulated dendritic cells from adult subjects inhibited production of interferon-gamma in analogous conditions.
Key words: dendritic cells, tolerogenicity, glucocorticoids, T-lymphocytes
Одним из самых важных звеньев в механизме иммунного ответа и регуляции гомеостаза иммунной системы являются дендритные клетки (ДК). Термином ДК объединяются несколько субпопуляций клеток иммунной системы с различными, а порой и кардинально противоположными свойствами. Наиболее общей функцией ДК является презентация
Талаев Владимир Юрьевич - д-р мед. наук, зав. лаб.
антигена Т-лимфоцитам. Выполняя эту функцию, типичная зрелая ДК вовлекает антигенспецифические Т-лимфоциты и, в частности, наивные Т-лимфоциты в реакции иммунного ответа. В то же время ДК с определенными так называемыми толерогенными свойствами могут выполнять роль негативных регуляторов иммунного ответа и участвовать в формировании иммунологической толерантности, в первую очередь толерантности к тканям собственного организма. Такое важное явление, как сохранение полуаллогенного
- 29 -
