CC BY
91
О КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2015 УДК 613.31-074
Иксанова Т.И., Стехин А.А., Яковлева Г.В., Каменецкая Д.Б.
ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ ЖИЗНИ ГИДРОБИОНТОВ DAPHNIA MAGNA В НЕКОНТАКТНО АКТИВИРОВАННОЙ ВОДЕ
ФГБУ «НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина» Минздрава России, 119121, г Москва
Исследование посвящено изучению влияния неконтактно активированной воды на продолжительность жизни и репликативную функцию гидробионтов Daphnia magna, относящихся к высокоорганизованным животным организмам. Установлена пропорциональная зависимость между концентрацией перекиси водорода (в анион-радикальной форме) и продолжительностью жизни гидробионтов. Показано, что в неконтактно активированных водных средах со значениямиредокс-потенциала (Eh) ~ 130 мВ (против Eh = 213 мВ в контроле) продолжительность жизни гидробионтов Daphnia magna увеличивается в среднем на 9 сут и достигает 34 сут (при 25 сут в контроле). Репликативная функция гидробионтов в активируемой среде не изменяется, но отмечается задержка во времени вымета потомства в среднем на 7 сут.
Отмеченные закономерности изменения продолжительности жизни гидробионтов Daphnia magna в активируемых водных средах интерпретируются на основе зависимости пролиферативной активности клеток от концентрации перекиси водорода в воде.
Полученные данные продолжительности жизни Daphnia magna в активированных электрон - донорных средах могут служить доказательством гигиенической безопасности и биологической активности физически активированной (неконтактно) питьевой воды.
Ключевые слова: неконтактная активация воды; перекись водорода; гидробионты Daphnia magna; продолжительность жизни.
Для цитирования: Гигиена и санитария. 2015; 94 (1): 41-45
Iksanova T.I., Stekhin A.A., Yakovleva G.V., Kamenetskaya D.B. LIFETIME OF HYDROBIONTS DAPHNIA MAGNA IN A NONCONTACT - ACTIVATED WATER
A. N. Sysin Research Institute of Human Ecology and Environmental Health, Moscow, Russian Federation, 119121
The article is devoted to the study of the influence of non-contact activated water on the lifetime and replicative function of aquatic organisms Daphnia magna, belonging to a highly organized animal organisms. There was established the proportional relationship between the concentration of hydrogen peroxide (in the anion - radical form) and the duration of aquatic lifetime of hydrobionts. In a non contact activated water media with values of redox - potential (Eh) ~ 130mV (against Eh = 213mV- in the control) the lifetime of hydrobionts Daphnia magna is shown to increase in average up to 9 days and reaches 34 days (as 25 days in the control). Replicative function activated in the aquatic environment does not change, but there was noted a delay in the time of dropping by 7 days in average. Noted regularities in the change in the lifetime of aquatic organisms Daphnia magna in aquatic activated environments are interpreted on the basis of the dependence of the proliferative activity of cells on the concentration of hydrogen peroxide in water. The obtained data on lifetime of Daphnia magna in activated electron - donor environments can serve as proof of the hygienic safety and biological activity ofphysically - activated (non-contact) drinking water.
Key words: noncontact activation of water, hydrogen peroxide, aquatic Daphnia magna, lifetime Citation: Gigiena i sanitariya. 2015; 94 (1): 41-45 (In Russ.)
Как отмечается в документах ВОЗ [1], некачественная питьевая вода, играет лидирующую роль в пандемии метаболически обусловленной заболеваемости населения планеты, что стимулирует исследования глубинных причин подобной связи и выработку адекватных мер противодействия.
Питьевая вода, приготовляемая в устройствах физической активации [2-5] или обогащенная природными минералами, имеющими напряженную кристаллическую структуру (коралловый кальций, темарокс, мицеллат кальция углекислого и др.), характеризуется электрон-донорными свойствами. В исследованиях последних лет [6-10] показано, что биологическая активность питьевой воды с электрон-донорными свойствами в значительной степени зависит от содержания в ней малоустойчивых анион-радикальных форм активного кислорода.
Для корреспонденции: Стехин Анатолий Александрович (Stekhin Anatolij) Stekhin-aa@mail.ru
For correspondence: Stekhin Anatolij, Stekhin-aa@mail.ru.
Электрон-восстановленная вода (ЭВВ), обладающая восстановительными свойствами, в последние годы является объектом системных исследований, направленных на установление механизмов ее биологического действия и использование в медицинской практике, особенно для борьбы с заболеваниями, обусловленными нарушениями клеточного метаболизма [10, 11]. Такая вода оказывает положительное влияние на различные процессы, происходящие в организме животных, а именно: повышает неспецифическую резистентность (устойчивость организма к воздействию повреждающих факторов); стимулирует клеточный и гуморальный иммунный ответ организма животных; оказывает пребиотическое действие на кишечную микрофлору и регуляторное действие на гомеостаз при дефиците витаминов и микроэлементов. ЭВВ дает антионкогенный эффект, вызывая укорочение теломер в раковых клетках [12], блокирует ангиогенез опухоли путем утилизации внутриклеточных активных форм кислорода (АФК) и подавления гена экспрессии и секреции фактора роста эндотелия сосудов
[гиена и санитария 1/2015
[13, 14], подавляет рост раковых клеток и микроорганизмов [15, 16] и индуцирует апоптоз в человеческих клетках лейкемии HL60 [17].
Клинические исследования [13] указывают на то, что потребление подобной воды в течение длительного периода приводит к увеличению доли пациентов, состояние которых существенно улучшается. При этом значительно снижается уровень сахара в крови больных сахарным диабетом, уровни триглицеридов и общего холестерина у пациентов с гиперлипидемией [18]. Отмечается также снижение артериального давления, уровней липопроте-идов низкой плотности, гамма-глутатионтрансферазы и гамма-глутамилтрансферазы, индекса артериосклероза и концентрации мочевой кислоты.
В то же время остается много нерешенных вопросов относительно использования физически активированных питьевых вод в практике водопотребления, особенно в связи с отмечаемыми рядом авторов негативными явлениями. Вода с выраженными восстановительными свойствами может значительно увеличить активность желез внутренней секреции, регулирующих рост и минеральный обмен в организме животных и человека, что приводит к увеличению массы тела, а также к фагоцитирующей способности эритроцитов в крови. Потребление такой воды оказывает существенное биологическое влияние и на постнатальный рост крыс, их ускоренное послеродовое развитие и увеличение массы тела. В то же время у самцов крыс через 15 нед экспозиции отмечался некроз с последующим фиброзом миокарда [19]. Эти исследования подтвердили ранее полученные результаты клинических испытаний [20], показавших, что потребление щелочной электрохимически приготовленной воды с экстремальными значениями редокс-по-тенциала вызывает повышение метаболической активности, а длительное ее использование (в течение 15 нед) приводит к патологическим изменениям в мышцах миокарда, особенно у мужчин.
Поэтому при исследовании безопасности воздействий физически активированных вод на живые организмы необходим системный подход, позволяющий оценивать состояние всех взаимосвязанных звеньев защиты организма в зависимости от уровня активности потребляемой воды. Очевидно, таким интегральным показателем безопасности питьевой воды может служить продолжительность жизни животных.
При проведении исследований по оценке безопасности физически активированных вод наиболее перспективно использование ракообразных животных, особенно Daphnia magna [21], так как их организм отражает системный отклик на влияние АФК и неравновесного электрофизического состояния воды, подвергнутой физической активации. Под физической активацией подразумевается физический процесс формирования электрически неравновесной воды в результате переноса электронов из внешней среды в обрабатываемую воду.
Как показывают генетические исследования, Daphnia magna относятся к высокоорганизованным организмам, в которых обнаружены гены белков нейротрофинов, характерных для позвоночных животных. Эти белки отвечают за процессы развития нервной системы и обучения, тренировку памяти, т. е. высшей нервной деятельности, что характеризует живой организм как сложную систему [22]. В этой связи Daphnia magna служат высокочувствительными индикаторами для оценки качества питьевой воды, остро реагирующими на недостаток кислорода или его избыток, уровень токсинов и загрязнения окружа-
ющей среды. Влияние малых доз токсикантов и развитие хронического стресса, если оно присутствует, неизбежно сказываются на жизненном цикле особей, включая их воспроизводство [23]. Дисбаланс ферментативных и неферментативных компонентов системы антиоксидантной защиты, закономерные колебания активности гидролитических и окислительно-восстановительных ферментов, которые могут вызывать патологические состояния у гидробионтов в результате потребления физически активированной воды [24], оказывают системное влияние на продолжительность их жизни [25].
Экологическим оптимумом для пойкилотермных ги-дробионтов являются не оптимальные стационарные условия, а периодические отклонения от них параметров среды в пределах экологической нормы вида, что представляет собой общебиологическую закономерность, проявляющуюся на разных этапах их жизненного цикла и уровнях филогенетического развития [26]. В связи с этим периодические изменения электрохимического состояния среды жизнедеятельности гидробионтов, возникающие в результате ее неконтактной активации (1 раз в сутки), призваны создать более благоприятные условия для их развития.
Наличие у Daphnia magna столь важных и чувствительных рецепторов, ответственных за высокий уровень организации организма, позволяет использовать их не только в тесте качества питьевой воды, включая токсичность и биологическую активность, но и в качестве системного экспресс-тест-объекта для оценки влияния физически активированной питьевой воды на геронто-логические показатели жизни человека.
Целью настоящего исследования явилось изучение влияния электрохимических изменений и концентрации анион-радикалов в составе неконтактно активируемой католитом среды на геронтологические показатели ракообразных гидробионтов Daphnia magna.
Материалы и методы
Для параметризации неравновесных состояний воды, возникающих в результате ее неконтактной электронной активации, использовали показатели, включающие оценку изменений концентрации перекиси водорода (ион-радикальной формы [6]), редокс-потенциала (ЕЬ) и водородного показателя (рН) среды развития гидроби-онтов. Измерения электрохимических показателей среды развития гидробионтов осуществляли через 4 ч после ежедневной замены активирующей воды (католита) вновь приготовленной.
В качестве объекта исследований влияния на продолжительность жизни тест-объекта Daphnia magna использовали неконтактно активированную в среде ка-толита воду (московская водопроводная, выдержанная в течение 3 нед для удаления избыточных концентраций АФК). В исследовании использовали односуточных Daphnia magna. В отстоянную водопроводную воду c температурой 20 ±1 °С, обогащенную хлореллой согласно методическим рекомендациям [7], в полипропиленовых емкостях объемом 500 мл были помещены половозрелые самки, которые в течение 8 сут производили потомство. Далее самки отсажены, а односуточ-ные дафнии подвержены опытным исследованиям. В 2 емкости по 500 мл было рассажено по 20 дафний. Одна из них представляла собой контроль и находилась в емкости объемом 10 л с отстоянной водопроводной водой, а вторая подвергалась неконтактному воздействию активированной водой с редокс-потенциалом порядка
250
m 2
sz
Ш §
s 3
о с
200
*** V ¡рп
150
25 п
100
Контроль Опыт
30 40 Время, сут
Периоды активации среды жизнедеятельности гидробионтов
Рис. 1. Периодические изменения окислительно-восстановительного потенциала (Eh, мВ) среды развития гидробионтов Daphnia magna, подверженной периодической (ежесуточной) неконтактной активации католитом (10 л католита с Eh = -100.. .150 мВ) в опытной серии и контроле.
Eh = -100.150 мВ (суммарный объем воды в активирующей емкости также 10 л). Для поддержания равенства температур в емкостях с дафниями активирующую воду предварительно подогревали до температуры 20 °С. Кормление дафний осуществляли ежедневно путем внесения культуры одноклеточных водорослей типа хлореллы в концентрации 350-700 тыс. кл/мл объемом 0,5 мл на 500 мл среды содержания дафний.
Для минимизации возможного неконтактного взаимодействия активируемых вод с дафниями опытную и контрольную емкости размещали на удалении друг от друга (~ 10 м в отдельных комнатах).
Результаты и обсуждение
Электрохимические показатели среды выращивания гидробионтов Daphnia magna, представленные на рис. 1 и в табл. 1, свидетельствуют о более низких значениях редокс-потенциала неконтактно активируемой (в емкости с дафниями) среды жизнедеятельности ги-дробионтов по сравнению с контролем. Колебательные изменения Eh среды в емкости с опытными дафниями обусловлены, вероятно, нелокальным действием магнитного векторного потенциала электрически неравновесного состояния активирующей воды на структурное состояние. После прекращения активации (на 61-е сутки эксперимента) редокс-потенциалы среды контрольной и опытной серии выравнивались и колебательных процессов не наблюдалось.
Усредненные значения электрохимических показателей среды развития гидробионтов и концентрации в ней донаторов электронов - пероксид анион-радикалов (см. табл. 1) указывают на то, что в активируемой среде средние значения pH изменяются незначительно (в опыте pH 8,54 против рН 8,57 в контроле). Средние значения редокс-потенциала среды составляют 134,5 мВ (в контроле 212,8 мВ) при высокой межсуточной вариабельности значений порядка 44%. Отмечены также высокие значения межсуточной вариабельности концентрации пероксид-анион-радикалов - 50% как в опыте, так и в контроле. При этом средние значения концентрации пероксид-анион-радикалов [6] в образцах среды опытной серии несколько ниже (13,1 мкг/л против 16,9 мкг/л в контроле), что
>5 V
ю о и о
о ш
I-
о CD X 5
Ц
О ^
30 40 Время, сут Контроль —с
Опыт
Рис.
. 2. Динамика изменения численности (количество материнских особей, n) гидробионтов Daphnia magna в среде, подвергаемой периодической неконтактной активации католитом (опыт), и в контроле неконтактно с отстоянной водопроводной водой.
связано с процессами частичной нейтрализации перок-сидных форм кислорода сольватированным электроном и супероксид-анион-радикалами в процессах неконтактной активации воды [8].
Продолжительность жизни инкубированных в неконтактно активируемой среде гидробионтов (рис. 2) выше, чем в контрольной серии. При этом динамика изменения численности гидробионтов Daphnia magna примерно одинакова.
Изменения параметров жизнедеятельности изучаемых гидробионтов также проявляются в показателях рождаемости особей (рис. 3). Вымет молоди особей в опытной серии несколько растянут во времени. При этом для отдельных особей в опыте появление потомства отмечалось в сроки времени более 50 сут, что является рекордным показателем для гидробионтов, у которых в наиболее благоприятных условиях длительность жизни не превышает 45 сут [7, 22].
Сравнение средних значений продолжительности жизни гидробионтов Daphnia magna в неконтактно активируемой среде жизнедеятельности свидетельствует об увеличении их жизненного цикла в среднем на 9 суток (табл. 2). Задержка вымета потомства составляет 7 сут.
Сравнение полученных данных по показателям жизнедеятельности гидробионтов Daphnia magna подтверждает предположение об увеличении продолжительности жизни высокоорганизованных животных организмов в электрически активных средах (воде), характеризуемых более низкими значениями редокс-потенциала и концентрации анион-радикальных АФК.
По результатам ранее выполненных исследований [9, 27] установлено, что перекись водорода в анион-радикальной форме оказывает на клеточные структуры системное регуляторное действие, которое проявляется не только в отношении внутриклеточных процессов,
Таблица 1
Электрохимические показатели неконтактно активируемой католитом среды развития гидробионтов Daphnia magna
рН Eh, мВ Концентрация НО2 -(*), мкг/л
Эксперимент среднее значение вариации среднее значение вариации среднее значение вариации СКО
Контроль 8,57 0,007 212,8 0,07 16,9 0,53 8,4
Опыт 8,54 0,006 134,5 0,44 13,1 0,48 6,3
Примечание. Здесь и в табл. 2: СКО - среднеквадратичное отклонение.
]^1гиена и санитария 1/2015
180 и
Таблица 2
Показатели жизнеспособности (продолжительность жизни) и время продукции потомства гидробионтов Daphnia magna в неконтактно активированной католитом среде развития
20 30
Время, сут Контроль —с
Опыт
Рис. 3. Динамика продуктивности (количество особей, n, нарастающим итогом) гидробионтов Daphnia magna в среде, подвергаемой периодической неконтактной активации католитом (опыт), и в контроле неконтактно с отстоянной водопроводной водой.
но и как неконтактная реакция на АФК в инкубируемой среде. Однако АФК не только оказывают регуляторное действие, но и являются поставщиками некомпенсированных по заряду электронов, формируя в клеточных структурах электрически неравновесное состояние, необходимое для реализации колебательных явлений, в основе которых лежат периодические процессы квантовой конденсации электронов на парамагнитном кислороде в составе фазы ассоциированной воды [9].
По данным работы [9], индекс репликации (ИР) лимфоцитов крови человека в диапазоне концентраций пе-роксид анион-радикалов в воде менее 40 мкг/л может быть аппроксимирован зависимостью:
ИР = 0,013[НО2-(>)] + 1,014,
где [НО2-(>)] - концентрация пероксид-анион-радика-лов в воде.
На основании приведенной зависимости, считая длительность жизни организма пропорциональной скорости деления клеток, зависящей от концентрации перок-сид-анион-радикалов, можно оценить связь полученных экспериментальных данных по длительности жизни гидробионтов с концентрацией НО2"(>) среды их жизнедеятельности. Подставляя экспериментальные значения концентрации пероксид-анион-радикалов в среде (см. табл. 1) в уравнение, получаем результаты оценки индекса репликации: в контроле ИР = 1,24 ед., в опыте ИР = 1,19 ед. Сравнивая полученные значения ИР с данными по жизнеспособности гидробионтов в различных средах, находим, что средняя продолжительность жизни гидробионтов Daphnia magna в физически активируемых средах (с более низкими значениями редокс-потен-циала, но с одинаковым химических составом основных соединений) с точностью не менее 5% определяется концентрацией в воде пероксид-анион-радикалов.
Другим результатом проведенных исследований в сопоставлении с данными о повреждениях лимфоцитов крови человека, экспонированных в неконтактно активированной воде [9], является то, что снижение значений редокс-потенциала воды (от 150 до -200 мВ) при концентрациях перекиси водорода в воде менее 20 мкг/л минимизирует риск свободнорадикального повреждения клеток и мутаций ДНК.
Эксперимент Продолжительность жизни, сут Время вымета потомства, сут
среднее значение вариации СКО среднее значение вариации СКО
Контроль 24,9 0,46 11,4 22,4 0,21 4,8
Опыт 33,6 0,40 13,4 29,4 0,40 11,7
Полученные зависимости закономерно отражают влияние воды, обладающей восстановительными свойствами, и на другие физиологические функции, анализ которых дан выше.
Изменение жизненного цикла под влиянием ЭВВ отмечается и в работе [28], в которой выявлено увеличение продолжительности жизни нематод, что связывали со снижением в них уровней АФК. При этом подобные эффекты утилизации АФК в организмах не связаны с молекулярным водородом, присутствующим в ЭВВ [29], как это предполагалось ранее в работах ряда японских исследователей [12, 13]. Этот вывод крайне важен, так как указывает на связь отмеченных выше биологических эффектов не с молекулярным водородом, а с элек-трон-донорной способностью анион-радикальных форм АФК, образующихся в процессах электрохимической активации воды.
В целом, полученные экспериментальные результаты, касающиеся продолжительности жизни гидро-бионтов в физически активированных средах, в сопоставлении с данными литературы подтверждают, с одной стороны, высокую биологическую активность воды, обладающей электрон-донорными свойствами (редокс-потенциал не ниже -200 мВ), а с другой - ее генетическую безопасность, если при этом уровни основного повреждающего агента - перекиси водорода в воде не превышают биологически приемлемые значения (< 20 мкг/л).
Литература (пп. 1, 4, 5, 12-20, 24, 28, 29 - см. References)
2. Бахир В.М., Задорожний Ю.Г, Леонов Б.И., Паничева С.А., Прилуцкий В.И. Электрохимическая активация: очистка воды и получение полезных растворов. М.: ВНИИИМТ, МСС; 2001.
3. Патент Германии Patentantrag 10 2007 042 176.3 vom 04.09.07, Deutschland. «Eine Ein Mittel für die Behandlung von Diabetes des Typs 1 und 2 und ein Verfahren zu seiner Verwendung» (Gitelman D.S.) Способ получения средства для лечения диабета 1 и 2 типа и способ его применения. 2007.
6. Зацепина О.В., Стехин А.А., Яковлева Г.В. Ион-радикальные формы кислорода - основной показатель, отражающий электрон-донорную способность воды. Гигиена и санитария. 2013; 2: 91-7.
7. Методические рекомендации по установлению предельно -допустимых концентраций загрязняющих веществ для воды рыбохозяйственных водоемов. М.: ВНИРО; 1986.
8. Казанкин Д.С., Широносов В.Г. Феномен неконтактного действия электрохимически активированных водных растворов на динамику оседания эритроцитов. В кн.: Сборник тезисов докладов ВНКСФ-10. М.; 2004: 822-4.
9. Зацепина О.В., Ингель Ф.И., Стехин А.А., Яковлева Г.В. Влияние физически активированной воды на репликативную активность, апоптоз и повреждения клеток лимфоцитов крови человека in vitro. Биозащита и биобезопасность. 2013; 5 (3): 21-41.
10. Гомбоев Д.Д. Физиологическое обоснование действия электрохимически - активированных растворов поваренной соли на организм животных. Автореф. дисс. ... д-ра биол. наук. Новосибирск; 2009.
11. Паймерова И.Н. Применение комплекса биоэлементов в ми-целлярной форме отдельно и в сочетании с биокремнийор-ганической кормовой добавкой при выращивании поросят. Дисс. ... канд. биол. наук. Дубровицы: ГНУ ВНИИ животноводства Россельхозакадемии; 2010.
21. Брагинский Л.П. Методологические аспекты токсикологического биотестирования на Daphnia magna S. и других ветвистоусых ракообразных. Гидробиологический журнал. 2000; 36(5): 50-70.
22. Кузнецов В.А. Астатичность факторов среды как экологический оптимум для гидробионтов. Дисс. ... д-ра биол. наук. Саранск; 2005.
23. Селье Г. Стресс без дистресса. М.: Прогресс; 1979.
26. Цветков И.Л., Коничев А.С. Экологическая биохимия гидробионтов. М.: МГОУ; 2006.
25. Чернилевский В.Е. Проблемы гипобиоза и продления жизни. В кн.: СборникМОИП№ 41. Секция геронтологии. М.: 2008.
27. Рахманин Ю.А., Стехин А.А., Яковлев Г.В. Новый фактор риска здоровья человека - дефицит электронов в окружающей среде. Биозащита и биобезопасность. 2012; 4 (4): 21-51.
References
1. UN-water global annual assessment of sanitation and drinking-water: 2008 pilot report - testing a new reporting approach. World Health Organization; 2008.
2. Bakhir V.M., Zadorozhnyy Yu.G., Leonov B.I., Panicheva S.A., Prilutskiy V.I. Electrochemical activation: water treatment and production of useful solutions. [Elektrokhimicheskaya aktivatsiya: ochistka vodyi; poluchenie polesnykh rastvorov]. M.: VNIIIMT, MSS; 2001. (in Russian)
3. German Patent Patentantrag October 2007 042 176.3 vom 04.09.07, Deutschland. "Eine Ein Mittel für die Behandlung von Diabetes des Typs 1 und 2 und ein Verfahren zu seiner Verwendung" (Gitelman DS) Preparation for the treatment of type 1 and type 2 and the method of its application. 2007. (in Russian)
4. Takashi H. Science and technology of functional water (part). Water Science Institute; 1999.
5. Haruhito T. Tasics and Effective Use of Alkaline Ionized Water. In: 25th General Assembly of Japan Medical Congress Functional Water in Medical Treatment, Administrational Offices. 1999; 10-1.
6. Zatsepina O.V., Stekhin A.A., Yakovleva G.V. Ion - ROS levels -the main indicator of the electron-donor ability of water. Gigiena i sanitariya. 2013; 2: 91-7. (in Russian)
7. Guidelines for the establishment of maximum - allowable concentrations of pollutants to water of fish ponds. Moscow: VNIRO; 1986. (in Russian)
8. Kazankin D.S., Shironosov V.G. The phenomenon of non-contact action of electrochemically activated water solution on the dynamics of sedimentation. In: Sbornik tezisov dokladov VNKSF-10. Moscow; 2004: 822-4. (in Russian)
9. Zatsepina O.V., Ingel F.I., Stekhin A.A. Yakovlev G.V. Influence of physically activated water on the replicative activity, apoptosis and cell damage in human blood lymphocytes in vitro. Biozashchita i biobezopasnost'. 2013; 5(3): 21-41. (in Russian)
10. Gomboev D.D. Physiological basis of the action of electrochemically - activated solutions of sodium chloride in the body of animals. Diss. Novosibirsk; 2009. (in Russian)
11. Paymerova I.N. The use of complex bio-elements in micellar
form alone and in combination with biokremniyorganicheskoy feed additive for growing pigs. Diss. Dubrovitsy: GNU VNII zhivitnovodstva Rosselikhozakademii; 2010. (in Russian)
12. Shirahata S., Murakami E., Kusumoto K.I., Yamashita M., Oda M., Teruya K. et al. Telomere shortening in cancer cells by electrolyzed-reduced water. In: Ikura K. Animal cell technology: Challenges for the 21st century. 1999: 355-9.
13. Shirahata S., Nishimura T., Kabayama S., Aki D., Teruya K., Otsubo K. et al. Anti-oxidative water improves diabetes. In: Lindner-Olsson E. et al. Animal cell technology. 2001; 574-7.
14. Kim M.J., Jung K.H., Uhm Y.K., Leem K.H., Kim H.K. Preservative effect of electrolyzed reduced water on pancreatic b-cell mass in diabetic db/db mice. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 2007; 30: 234-6.
15. Ye J., Li Y, Hamasaki T., Nakamichi N., Komatsu T., Kashiwagi T. et al. Inhibitory effect of electrolyzed reduced water on tumor angiogenesis. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 2008 , 31: 19-26.
16. Hamasaki T., Kashiwagi T., Aramaki S., Imada T., Komatsu, T., Li Y. et al. Suppression of cell growth by platinum nanocolloids as scavengers against reactive oxygen species. In: Godia F., Fussenegger M., eds. Animal cell technology meets genomics. 2005; 249-51.
17. Tsai C.F., Hsu Y.W., Chen W.K., Ho Y.C., Lu F.J. Enhanced induction of mitochondrial damage and apoptosis in human leukemia HL- 60 cells due to electrolyzed-reduced water and glutathione. Biosci., Biotechnol. Biochem. 2009; 73: 280-7.
18. Osada K., Li Y.P., Hamasaki T., Abe M., Nakamichi N., Teruya K. et al. Anti-diabetes effects of Hita Tenryosui water, a natural reduced water. In: Ikura K. et al., eds. Animal cell technology: Basic & applied aspects. 2010; 15: 307-13.
19. Watanabe T., Shirai W., Pan I., Fukuda Y., Murasugi E., Sato T. et al. Histopathological influence of alkaline ionized water on myocardial muscle of mother rats. J. Toxicol. Sci. 1998; 23(5): 411-7.
20. Watanabe T., Kishikawa Y., Shirai W. Influence of alkaline ionized water on rat erythrocyte hexokinase activity and myocardium. J. Toxicol. Sci. 1997; 22(2): 141-52.
21. Braginskiy L.P. Methodological aspects of toxicology bioassays on Daphnia magna S. and other cladocerans. Gidrobiologicheskiy zhurnal. 2000; 36(5): 50-70. (in Russian)
22. Kuznetsov V.A. Astatic environmental factors as ecological optimum for aquatic organisms. Diss. Saransk; 2005. (in Russian)
23. Sel'e G. Stress without distress. Moscow: Progress; 1979. (in Russian)
24. Shaw J.R., Colbourne J.K., Davey J.C., Glaholt S.P., Hampton T.H., Chen C.Y. et al. Gene response profiles for Daphnia pulex exposed to the environmental stressor cadmium reveals novel crustacean metallothioneins. BMC Genomics. 2007; 8: 477.
25. Chernilevskiy V.E. Hypobiosis problems and prolong life. In: SbornikMOIP N41. Sektsiya gerontologii. Moscow; 2008: 10523. (in Russian)
26. Tsvetkov I.L., Konichev A.S. Environmental biochemistry of aquatic organisms. Moscow: MGOU; 2006. (in Russian)
27. Rakhmanin Yu.A., Stekhin A.A., Yakovlev G.V. New risk factor to human health - deficiency of electrons in the environment. Biozashchita i biobezopasnost'. 2012; 4(4): 21-51. (in Russian)
28. Brewer G.J. Epigenetic oxidative redox shift (EORS) theory of aging unifies the free radical and insulin signaling theories. Exp. Gerontol. 2009; 45: 173-9.
29. Yan H., Kinjo T., Tian H., Hamasaki T., Teruya K., Kabayama S. et al. Mechanism of the lifespan extension of Caenorhabditis elegans by electrolyzed reduced water participation of Pt nanoparticles. Biosci. Biotechnol. Biochem. 2011; 75: 1295-9.
Поступила 22.11.13 Received 22.11.13
