CC BY
25
УДК 632.484(470.40)
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ВИДОВ КСИЛОТРОФНЫХ БАЗИДИОМИЦЕТОВ, ЗАНЕСЕННЫХ В КРАСНУЮ КНИГУ ПЕНЗЕНСКОЙ ОБЛАСТИ
Д. Ю. Ильин, канд. биол. наук, доцент; А. И. Иванов, доктор биол. наук, профессор; М. И. Морозова, аспирант; Г. В. Ильина, доктор биол. наук, профессор; Л. В. Гарибова*, доктор биол. наук, профессор
ФГБОУ ВПО «Пензенская ГСХА», Россия, e-mail: [email protected]; *ФГБОУ ВПО «МГУ им. М. В. Ломоносова», г. Москва, Россия
Приводятся сведения о современном состоянии популяций редких и охраняемых видов ксилотрофных базидиомицетов на территории Пензенской области. Рассматриваются приоритетные направления путей сохранения этих видов. Содержится информация о возможностях сохранения генофонда редких видов в качестве живых мицелиаль-ных культур. Обсуждаются проблемы необходимости уточнения и обоснования изменения статусов отдельных видов. Из числа дереворазрушающих грибов, занесенных в Красную книгу Российской Федерации (2008) и Красную книгу Пензенской области (2002), подробно изучены биология и экология четырех видов: Ganoderma lucidum (Curtis) P. Karst., Grifóla frondosa (Dicks.) Gray, Polyporus umbellatus (Pers.) Fr., Sparassis crispa (Wulfen) Fr. Исследования проводились в течение длительного периода, составляющего более 30 лет, и включали два этапа изучения указанных видов: in situ - в природных условиях и ex situ - в чистой культуре. В статье отражены результаты исследования куль-турально-морфологических и физиологических параметров культур названных редких видов грибов. Сообщается о целесообразности включения соединений селена в питательные среды для сохранения физиологических параметров коллекционных мицелиаль-ных культур при длительном хранении.
Ключевые слова: ксилотрофные базидиомицеты, биоразнообразие, редкие виды, мицелиальные культуры, питательные среды.
Одной из важнейших проблем сохранения биологического разнообразия является эффективная организация охраны редких видов грибов. Если принципы охраны высших сосудистых растений в основном отработаны, то для грибов, которые имеют присущие только им особенности размножения и расселения, проблемы сохранения, как отдельных популяций, так и генофонда в целом, изучены очень слабо. Сохранение редких видов грибов имеет четыре основных направления:
1) выявление и охрана природных популяций включая охрану биогеоценозов, в которых они обитают;
2) сохранение генофонда в коллекциях мицелиальных культур;
3) получение плодовых тел в искусственных условиях (in vitro);
4) реинтродукция этих видов в природные экосистемы.
В практике природоохранного дела важно использовать комплекс молекулярных, морфологических, географических и экологических данных с учетом изменчивости морфологических адаптационных характеристик фенотипа [1]. Это в полной мере относится к макромицетам. Поэтому одним
из первых и основных этапов в их охране является выявление популяций редких видов в различных регионах и границ их ареалов.
Проблема охраны грибов имеет серьезную специфику в связи с тем, что их мицелий локализируется в почве или другом субстрате (лесной подстилке и т. п.). В связи с этим обнаружить присутствие того или иного вида оказывается возможным лишь во время появления плодовых тел, либо необходимо использовать для идентификации вида молекулярно-генетические методы. Для первого необходимо благоприятное сочетание как биологических ритмов плодообразования у того или иного вида, так и погодных факторов. Объективную картину, характеризующую распространение видов, могут показать лишь многолетние исследования, так как наблюдения двух-трех лет могут давать совершенно искаженную картину. Например, после засухи 2010 г., в 2011 г., когда вегетационный период был очень благоприятным для развития грибов, некоторые распространенные виды были отмечены единичными находками базидиом, в то время как редкие встречались значительно чаще, чем обыч-
но. В первую очередь это касается видов, находящихся на северной границе своего ареала, предъявляющих повышенные требования к температурному режиму. Подобные особенности развития плодовых тел нередко ведут к серьезным ошибкам, в ходе которых в Красные книги включаются достаточно распространенные и благополучные виды, которым в настоящее время ничто не угрожает. Особенно четко это проявляется, когда в результате многолетних наблюдений накапливается большая информация о их распространении. Например, Cortinarius violaceus (L.) Gray, Gyro-porus castaneus (Bull.) Quél. и Leccinum percandidum (Vassilkov) Watling, включенные в первое издание Красной книги РФ [2], были отмечены многочисленными находками во многих областях при издании региональных Красных книг. Это послужило основанием для исключения этих объектов из второго издания Красной книги РФ [3].
В отдельных случаях удается получать активный посевной мицелий, обычно на твердых органических субстратах, который может быть использован для получения плодовых тел в природных условиях и в культуре. Сохранение генофонда таким путем имеет огромное практическое значение [4, 5]. Причем данное направление перспективно не только с точки зрения охраны грибов. Некоторые редкие виды, например Gano-derma lucidum, Grifola frondosa, являются продуцентами различных биологически активных веществ, нашедших широкое применение в современной медицине [6]. Разработка способов получения плодовых тел этих грибов в культуре также имеет большое природоохранное значение, поскольку это позволит сохранить ресурсы дикорастущих популяций. С другой стороны, находящиеся под охраной популяции также приобретают большое значение как источники материала для селекции промышленных штаммов. Работа по созданию коллекций живых культур грибов ведется в ФГБОУ ВПО «Пензенская ГСХА» [7].
Однако коллекция чистых культур не решает в полной мере проблему сохранения генофонда высших базидиомицетов, т. к. не все виды одинаково хорошо развиваются на искусственных питательных средах. Выделение культур микоризообразу-ющих грибов весьма проблематично. Для их культивирования необходим подбор специальных питательных сред, содержащих различные биофакторы, что требует специальных исследований и больших материальных затрат. Еще одной сложной проблемой является возможность возвра-
щения вида из культуры в природные условия. Особенно в том случае, если он образует микоризы не с молодыми растущими деревьями, а с уже старыми экземплярами, которые сами по себе представляют большую редкость. В связи с этим в Красные книги должны включаться в первую очередь те виды, которые обитают в устойчивых климаксовых сообществах, сохранение генофонда которых в коллекции культур представляет большую сложность, а реинтродукция из коллекции в природу вообще проблематична. В первую очередь это микоризообразующие грибы, занесённые в Красную книгу РФ [3] и обнаруженные на территории Пензенской области: Amanita strobiliformis (Paulet ex Vittad.) Ber-till., Boletus rhodoxanthus (Krombh.) Kallenb., Rubinoboletus rubinus (W. G. Smith) Pilat et Dermer., Tricholoma colessus (Fr.) Quél., а также корневые паразиты старых деревьев: Grifola frondosa (Dicks.) Gray, Polyporus umbellatus (Pers.) Fr. и Sparassis crispa (Wulfen) Fr.
Из видов дереворазрушающих грибов, занесенных в Красную книгу Российской Федерации (2008) и Красную книгу Пензенской области (2002) [8], нами изучены биология и экология четырех видов: Gano-derma lucidum (Curtis) P. Karst., Grifola frondosa (Dicks.) Gray, Polyporus umbellatus (Pers.) Fr., Sparassis crispa (Wulfen) Fr. Исследования проводились в течение длительного периода, составляющего более 30 лет, и включали два этапа изучения указанных видов: in situ - в природных условиях и ex situ - в чистой культуре.
Первая находка G. lucidum была сделана авторами в 1977 г. в дубраве в пойме реки Хопер, вторая - в 2002 г. в условиях широколиственного леса на водоразделе. В обоих случаях гриб развивался на свежих пнях дуба диаметром около 40 см. Также зафиксированы находки в смежных областях. Так, на территории Балашовско-го района Саратовской обл. в 2005 г. найдено плодовое тело, развивающееся в основании ствола старого дуба. Плодовое тело имело аномально крупные размеры: длина ножки составляла 25 см, диаметр шляпки - 15... 18 см. В близлежащих регионах вид встречается и на других субстратах: на пнях ясеня, клена, ольхи, ели; известен в Ленинградской, Курской, Липецкой, Пермской областях, а также в республике Татарстан [3].
Гриб вызывает белую медленно развивающуюся гниль. В последние десятилетия рассматривается как перспективный объект биотехнологии, продуцент биологиче-
Нива Поволжья № 4 (25) 2012 21
ски активных (иммуномодулирующих, онко-статических, гепатопротекторных) веществ.
Остальные изученные виды деревораз-рушающих грибов (G. frondosa, P. umbella-tus, S. crispa) относятся к немногочисленной и уязвимой трофической группе с паразитической стратегией развития, вызывающей поражение нижней части ствола и корневых систем древесных растений. Вероятно, эти грибы имеют длительный жизненный цикл, связанный с развитием неактивных гнилей, не причиняющих большого вреда дереву-хозяину. Плодоношение же происходит обычно на старых деревьях, не ежегодно.
В Пензенской области известно одно местообитание гриба G. frondosa - на территории парка им. В. Г. Белинского, который расположен в черте г. Пензы, в насаждении дуба возрастом более 200 лет. Впервые гриб был обнаружен в 1986 г. в основании старого дуба. Плодовое тело развивалось в основании ствола усыхающего дерева, которое через несколько лет было удалено при санитарной рубке. На пне развития плодовых тел не наблюдалось. Следующее плодоношение было отмечено на той же территории спустя 25 лет на корневых лапах другого дерева, также находящегося на стадии усыхания. Из базидиомы была выделена чистая культура. Возможно, развитие мицелия гриба в тканях дерева является очень длительным процессом, а плодоношение происходит перед гибелью растения-хозяина. В последние годы на территории области отмечается устойчивая тенденция к сокращению площадей, занятых старовозрастными дубравами, и замена последних вторичными лесами. В этой связи вызывает определенную тревогу тот факт, что под угрозу ставятся и популяции G. frondosa, как вида, строго приуроченного в условиях рассматриваемого региона к
старым деревьям дуба. В результате данный вид в условиях области следует рассматривать не только в качестве редкого, но и исчезающего, а значит, требующего специальных мер охраны. Гриб вызывает белую сердцевинную гниль, заражение происходит, по-видимому, посредством мицелия, распространяяющегося в почве от одного дерева к другому [9].
P. umbellatus отмечен в Пензенской области тремя находками. Первая была сделана в 1977 г. на корнях старого дерева ивы. Вторая находка состоялась в 1982 г. на корнях осины, а третья - в 2002 г. на корнях березы. Гриб вызывает малоактивную белую гниль. В 2011 г. он был обнаружен на территории соседней Ульяновской области на корнях старой березы (по информации коллег).
S. crispa впервые был найден на территории Пензенской области в 1976 г. В последующие 32 года плодоношение этого вида нами зафиксировано не было, и лишь в 2010 и 2011 гг. было сделано еще две находки: одна на территории заповедника Приволжская лесостепь, а вторая - в окрестностях г. Никольска в том же лесном массиве, где гриб был обнаружен впервые. К сожалению, состояние базидиомы, обнаруженной в 2011 г., не дало возможности произвести выделение штамма в культуру, однако в коллекцию включен изолят, выделенный из базидиомы, найденной в 2010 г. Все находки были связаны с местами прохождения низовых пожаров, что дает основания предполагать стимуляцию плодоношения данного вида пирогенным фактором или указывает на его слабую конкурентную способность по отношению к другим грибам и бактериям. Во всех случаях гриб развивался на корнях сосен в возрасте 60-70 лет. Вызывает медленно развивающуюся бурую сердцевинную гниль.
Таблица 1
Некоторые ростовые и продуктивные свойства культур базидиомицетов
Вид, штамм Показатель
Средняя скорость роста мицелия на сусло-агаре, мм/сут. Телеоморфа в чистой культуре Биомасса воздушно-сухого глубинного мицелия, г/л среды, 10 суток Ферментативная активность мицелия
тирози-назная общая лакказная перокси-дазная
G. lucidum, Gl+ 9,10±0,11 Дифференцированные примордии, базидиомы 4,9±0,15 - + +
S. crispa, AI-10 0,87±0,03 Недифференцированные примордии 1,8±0,09 + - -
G. frondosa, Grf-11 1,35±0,05 Дифференцированные примордии, базидиомы 3,7±0,12 + + +
В итоге в искусственную культуру нами выделены штаммы трех из четырех рассмотренных выше видов: G. lucidum, S. crispa и G. frondosa. Культуры (по одному штамму каждого из видов) поддерживаются в коллекции Пензенской сельхозакадемии наряду с промышленными штаммами и природными изолятами более чем 250 видов базидиомицетов. Подробно изучены культурально-морфологические, ростовые и продуктивные свойства выделенных штаммов (табл. 1). Проведена качественная оценка приоритетных сторон ферментативной активности мицелия: определены общая лакказная, тирозиназная и пе-роксидазная активности изученных штамм-мов. В ходе работы использовали метод капельных цветных реакций [10].
Мицелий изолята штамма G. lucidum войлочный, тяжистый, белый, примордии с тенденцией к дифференциации. Есть пряжки, отмечены хламидоспоры. Мицелий штамм-ма S. crispa белый, войлочный, неоднородный, воздушный мицелий слабо выражен. Обнаруживаются пряжки, редко отмечаются хламидоспоры. Мицелий G. frondosa белый, со слабым серым оттенком, очень плотный, имеет тенденцию к образованию складчатости, воздушный мицелий не выражен. На мицелии встречаются пряжки, анаморфы не отмечены.
Культура штамма Gl+ G. lucidum интенсивно развивалась на сусло-агаре (СА) и на картофельно-глюкозном агаре (КГА). Средняя скорость роста мицелия этого штамма значительна и сопоставима с аналогичными показателями, установленными для имеющихся в коллекции промышленных и селекционных штаммов названного вида. В чистой культуре для штамма характерна короткая фаза адаптации, что объясняет-
ся, по-видимому, богатым спектром конститутивных ферментов. Однако, как показали наши исследования, при совместном выращивании с мезофильными культурами плесневых грибов (родов Fusarium Mucor, Rhizopus) в период лаг-фазы штамм имеет низкую конкурентоспособность и его развитие легко подавляется последними. При этом заражение контаминантами чистой культуры, находящейся на логарифмической или стационарной стадии роста, позволило установить, напротив, значительную устойчивость штамма G. lucidum и подавление развития конкурента. На наш взгляд, это одна из особенностей, которую следует учитывать при разработке мероприятий по реинтродукции данного вида в природные экосистемы.
Средняя скорость роста штаммов двух других изученных видов S. crispa и G. frondosa на указанных выше средах была относительно низкой. Причина низких средних показателей заключается в длительном периоде адаптации мицелия (рис. 1). Заражение культур контаминантами показало их относительно высокую конкурентоспособность на всех стадиях развития. Культура штамма Grf-11 G. frondosa после искусственной контаминации долгое время сосуществовала с конкурентами, однако впоследствии при очень низких скоростях роста перекрывала их колонии, подавляя развитие. В результате неоднократно было установлено самостоятельное очищение культуры от контаминанта.
Отдельным направлением лабораторных исследований стала разработка приемов, обеспечивающих сохранность физио-лого-биохимических характеристик культур при длительном хранении в коллекции. Практически ни один из существующих много-
•G. lucidum, Gl+ ■S. crispa, AI-10 G. frondosa,Grf-11
Время, сут.
Рис. 1. Динамика роста колоний мицелиальных культур грибов при культивировании штаммов на сусло-агаре, диаметр чашки Петри 90 мм (р<0,05, повторность трехкратная)
Нива Поволжья № 4 (25) 2012 23
численных способов хранения живых культур микроорганизмов не дает полной гарантии стабильности штамма и сохранения его продуктивности. С другой стороны, при частых пересевах культуры нередко изменяют физиологические параметры, теряют способность к нормальному развитию, а следовательно, не могут служить продуцентами биологически активных веществ и ресурсом для реинтродукции в естественные экосистемы. Среди прочих причин это обусловлено спонтанной диссоциацией штаммов, инициируемой окислительными стрессами, являющимися обязательным последствием процессов многократного пересева. Окислительный стресс рассматривается как главный механизм дезорганизации клеточного метаболизма [11, 12]. Существуют сведения, свидетельствующие о выраженных антиоксидантных свойствах микроэлемента селена [13]. Механизмы нивелирования окислительного стресса в клетке связывают с работой антиоксидантных ферментных систем, в состав активных центров которых входит селен.
В связи с этим целью нашей работы было исследование возможностей использования соединений селена для снижения уровня окислительного стресса у хранящихся мицелиальных культур. Нами изучены возможности использования неорганического (селенат натрия) и органического (9 -фенил -симметричный-октагидроселен-оксантен) соединений селена. Состояние культур оценивалось по маркерным показателям: скорости роста, степени базофи-лии протоплазмы, оксидазной активности культуры. Установлено, что указанные соединения способствуют сохранению физиологических параметров хранящихся культур в течение 18-20 месяцев. Предположе-
ние о том, что соединения селена нивелируют негативное влияние свободных радикалов, нашло подтверждение при определении содержания в мицелии хранящихся культур биохимического маркера окислительного стресса - малонового диальдеги-да (МДА). Предварительно проведенный методом газовой хроматографии анализ жирнокислотного состава мицелия выявил преобладание ненасыщенных жирных кислот (моноеновых, диеновых) (табл. 2). Помимо тривиальных компонентов и изомеров во всех образцах обнаружено небольшое количество высококипящих компонентов, по всей видимости, не являющихся высшими жирными кислотами.
Таблица 2
Общий жирнокислотный состав мицелия (% от сухой массы) штаммов изученных видов (р<0,05, повторность трехкратная)
Жирная кислота Вид, штамм
G. lucidum, Gl+ S. crispa AI-10 G. frondosa, Grf-11
С 14:0 0,012 - 0,015
С 15:0 0,014 - 0,012
С 16:0 0,142 0,354 0,116
С 16:0 (2-ОН) 0,009 - 0,001
С 16:1 0,019 0,013 0,015
С 18:0 0,028 0,033 0,045
С 18:1 0,056 0,028 0,089
С 18:2 0,204 0,299 0,186
С 18:3 0,009 0,015 0,012
С 20:1 0,006 - 0,019
С 22:0 0,001 - -
С 24:0 0,011 - -
Тем не менее значительное представительство ненасыщенных жирных кислот свидетельствует о существовании своеоб-
Таблица 3
Содержание малонового диальдегида в мицелии грибов на стадии активного роста и после продолжительного хранения культуры при температуре 4°С, нмоль/г (р<0,05, повторность трехкратная)
Время развития мицелия с момента инокуляции Вид, штамм
G. lucidum, Gl+ S. crispa, AI-10 G. frondosa, Grf-11
Трое суток (фаза адаптации) 82,6±1,22 123,4±3,24 123,4±5,64
Пять суток (фаза логарифмического роста) 78,6±2,04 112,7±5,96 92,7±4,22
Семь суток (фаза стационарного роста) 55,0±1,31 88,4±1,90 87,4±2,15
Девять суток (фаза стационарного роста) 62,4±1,11 84,2±3,77 84,9±2,12
После хранения в течение:
3 месяцев 40,8±1,80 77,8±6,12 91,9±1,25
6 месяцев 93,8±7,24 126,9±4,38 85,5±3,74
9 месяцев 95,9±3,53 162,5±5,30 112,3±2,55
12 месяцев 98,1±4,57 147,9±5,84 198,3±6,05
18 месяцев 107,8±4,08 - 122,3±4,33
24 месяцев 91,2±2,54 - -
§ « * s
О П
" I
s
H
o $
3
o a С
200
150
8 100
□ Исходное содержание в контрольном образце, принятое за 100%
Ш 0пыт 1
□ Опыт 2
□ Контроль
Рис. 2. Динамика содержания малонового диальдегида (МДА) в образцах мицелия (на примере S. crispa, AI-10) при продолжительном хранении на различных средах: контроль - КГА; опыт 1 - КГА, обогащенный Na2SeO4; опыт 2 - КГА, обогащенный 9-фенил-симметричным-октагидроселеноксантеном (вещества добавлены в концентрации 10-4 г/л среды в пересчете на селен)
разного ресурса для образования МДА при активизации окислительных процессов в мицелии.
Уровень МДА в мицелии предварительно определяли на этапе адаптации к субстрату, в периоды логарифмического и стационарного роста, на разных сроках хранения. В фазу адаптации уровень МДА находится на довольно высоком уровне, что свидетельствует о наличии окислительного стресса (табл. 3). С переходом культур к логарифмическому и стационарному росту содержание МДА в мицелии несколько снижается и стабилизируется.
При анализе результатов, полученных при определении содержания МДА в образцах мицелия, хранящихся на средах с добавлением соединений селена (10-4 г/л в пересчете на элемент), сравнение проводили с показателями, отмеченными в исходных образцах на стадии логарифмического роста.
Содержание МДА в хранящемся мицелии штаммов всех трех изученных видов, различающихся трофическими особенностями в природных условиях, достоверно ниже контрольных показателей мицелия аналогичного возраста и срока хранения, что иллюстрируется на примере S. crispa, штамм AI-10 (рис. 2).
Сохранение культур в жизнеспособном состоянии в течение длительного периода хранения, более стабильный относительно контрольных показателей антиокси-дантный статус мицелия в совокупности свидетельствуют о значительном нивели-
ровании фактора окислительного стресса. Возможно, в данном случае имеет место стабилизация обменных процессов, на фоне которой замедление метаболических реакций определяет торможение свобод-норадикальных процессов. Полученные результаты однозначно свидетельствуют в пользу целесообразности использования соединений селена в практике хранения культур редких видов ксилотрофных базидиомицетов.
Приоритетным направлением охраны редких видов остается поиск новых природных популяций и поддержание необходимой для их существования структуры лесных экосистем в целом. В настоящее время ведутся наблюдения за состоянием популяций грибов изученных видов с целью обогащения коллекции новыми штаммами и исследования их развития в условиях чистой культуры; готовится к изданию новая редакция Красной книги Пензенской области. Проводимые в рамках наших исследований наблюдения и эксперименты способствуют уточнению и, при необходимости, обосновывают изменения статусов отдельных видов.
Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ № 12-04-97078-р_поволжье_а.
Литература
1. Коваленко, А. Е. Филогеография как новое направление микологических исследований / А. Е. Коваленко, В. Ф. Малышева, Е. Ф. Малышева // Микология и фитопатология. - 2011. - Т.45, вып. 4. - С. 303-311.
Нива Поволжья № 4 (25) 2012 25
2. Красная книга РСФСР. Растения. -М.: Росагропромиздат, 1988. - 590 с.
3. Красная книга РФ (растения и грибы). - М.: Товарищество научных изданий КМК, 2008. - 612 с.
4. Гарибова, Л. В. Теоретическое и практическое значение коллекций высших ба-зидиальных грибов в развитии биотехнологий / Л. В. Гарибова, Л. А. Завьялова, М. Н. Чайка // Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты. - М., 2007. - С. 17-24.
5. Гарибова, Л. В. Региональные коллекции мицелиальных культур как возможность сохранения природного разнообразия штаммов базидиомицетов / Л. В. Гарибова, Г. В. Ильина // Иммунопатология, аллергология, инфектология. - 2009. - № 1. -С. 38-39.
6. Гарибова, Л. В. Рост и морфологические признаки мицелия трутовика лакированного Ganoderma lucidum в зависимости от условий культивирования / Л. В. Га-рибова, А. В. Антимонова, Л. А. Завьялова, Л. М. Краснопольская // Микология и фитопатология. - 2003. - Т. 37., вып. 3. - С. 14-19.
7. Ильина, Г. В. Коллекция культур ба-зидиальных макромицетов (Basidiomycota)
Пензенской ГСХА. Каталог видов и штаммов / Г. В. Ильина, Д. Ю. Ильин, А. В. Ско-банев. - Пенза, 2009. - 64 с.
8. Красная книга Пензенской области. Т.1. Редкие виды растений и грибов. Пенза, 2002. - 296 с.
9. Бондарцева, М. А. Определитель грибов России. Порядок афиллофоровые. Вып. 2 / М. А. Бондарцева. - СПб.: Наука, 1998. - 391 с.
10. Методы экспериментальной микологии / Под ред. В. И. Билай. - Киев, 1982. -550 с.
11. Терешина, Е. В. Старение, окислительный стресс и антиоксиданты / Е. В. Те-решина // Геронтология и гериатрия. - 2005. -Вып. 5. - С. 39-52.
12. Choundry, S. Induction of oxidative stress and ultrastructural changes in moss Taxithelium nepalense (Schwaegr.) Broth. under lead and arsenic phytotoxity / S. Choundry, S. K. Panda // Current science. - 2004. - Vol. 87, № 3. - P. 342-348.
13. Rezanka, T. Biologically active compounds of semi-metals / T. Rezanka, К. Sigler // Phytochemistry. - 2008. - Vol. 69 - P. 585606.
