CC BY
33
mia (ECIL-4, 2011). Haematologica. 2013; 98(12): 1836-47. doi: 10.3324/haematol.2013.091330
13. Oken M.M., Creech R.H., Tormey D.C., Horton J., Davis T.E., Mc-Fadden E.T., et al. Toxicity and response criteria of the Eastern Cooperative Oncology Group. Am. J. Clin. Oncol. 1982; 5(6): 649-55.
14. Pizzo P.A., Robichaud K.J., Gill F.A., Witebsky F.G., Levine A.S., Deisseroth A.B., et al. Duration of empiric antibiotic-therapy in granulocytopenic patients with cancer. Am J. Med. 1979; 67(2): 194200. doi: 10.1016/0002-9343(79)90390-5.
15. Joshi J.H., Schimpff S.C., Tenney J.H., Newman K.A., de Jongh C.A. Can antibacterial therapy be discontinued in persistently febrile granulocytopenic cancer patients? Am. J. Med. 1984; 76(3): 450-7. doi:10.1016/0002-9343(84)90664-8.
16. Cornelissen J.J., Arska M.R., Dekker A.W. Discontinuation of intravenous antibiotic therapy during persistent neutropenia in patients receiving prophylaxis with oral ciprofloxacin. Clin. Infect. Dis. 1995; 21(5) :1300-2. doi: 10.1093/clinids/21.5.1300.
17. Horowitz H.W., Holmgren D., Seiter K. Stepdown single agent antibiotic therapy for the management of the high risk neutropenic adult with hematologic malignancies. Leuk. Lymphoma. 1996; 23(1-2): 159-63.
18. Aquino V.M., Tkaczewski I., Buchanan G.R. Early discharge of low-risk febrile neutropenic children and adolescents with cancer. Clin. Infect. Dis. 1997; 25(1): 74-8. doi:10.1086/514512.
19. Cherif H., Bjorkholm M., Engervall P., Johansson P., Ljungman P., Hast R., et al. A prospective, randomized study comparing ce-fepime and imipenem-cilastatin in the empirical treatment of febrile neutropenia in patients treated for haematological malignancies. Scand J. Infect. Dis. Sweden; 2004; 36(8): 593-600. doi: 10.1080/00365540410017590.
20. Santolaya M.E., Villarroel M., Avendano L. F., Cofré J. Discontinuation of antimicrobial therapy for febrile, neutropenic children with cancer: a prospective study. Clin. Infect. Dis. 1993; 25(1): 92-7. doi: 10.1086/514500.
21. Lehrnbecher T., Stanescu A., Kühl J. Short courses of intravenous empirical antibiotic treatment in selected febrile neutropenic children with cancer. Infection. 2002; 30(1): 17-21. doi: 10.1007/s15010-002-2094-1.
22. Hodgson-Viden H., Grundy P.E., Robinson J.L. Early discontinuation of intravenous antimicrobial therapy in pediatric oncology patients with febrile neutropenia. BMC Pediatr. 2005; 5(1): 10. doi: 10.1186/1471-2431-5-10.
23. Slobbe L., Waal L.V.D., Jongman L.R., Lugtenburg P.J., Rijnders B.J. Three-day treatment with imipenem for unexplained fever during prolonged neutropaenia in haematology patients receiving fluoroquinolone
and fluconazole prophylaxis: A prospective observational safety study. Eur. J. Cancer 2009; 45(16): 2810-7. doi:10.1016/j.ejca.2009.06.025
24. Pizzo P.A. After empiric therapy: what to do until the granulocyte comes back. Rev. Infect. Dis. 1987; 9(1): 214-19. doi:10.1093/clinids/9.1.214
25. Micol J.B., Chahine C., Woerther P.L., Ghez D., Netzer F., Dufour
C., et al. Discontinuation of empirical antibiotic therapy in neutropenic acute myeloid leukaemia patients with fever of unknown origin: is it ethical? Clin. Microbiol. Infect. 2014; 20(7): O453-5. doi: 10.1111/1469-0691.12445.
26. Orasch C., Averbuch D., Mikulska M., Cordonnier C., Livermore
D.M., Gyssens I.C., et al. Discontinuation of empirical antibiotic therapy in neutropenic leukaemia patients with fever of unknown origin is ethical. Clin. Microbiol. Infect. 2015; 21(3): e25-7. doi: 10.1016/j.cmi.2014.10.014.
27. Korucu B., Inkaya A., Cagkan E., Ari A., Okay M., Ascioglu S., et al. Early cessation of empirical antibacterial therapy in high-risk febrile neutropenic patients with FUO. In: Infections in neutropenia and stem cell transplantation: Proc. 25th European Congress of Clin. Microbriol. Infect. Dis. 2015, Apr. 25-28; Copenhagen. Available at: https://www.escmid.org/escmid_library/online_lecture_library/ material/?mid=23674 (accessed 2 July 2015).
28. Bash R.O., Katz J.A., Cash J.V., Buchanan G.R. Safety and cost effectiveness of early hospital discharge of lower risk children with cancer admitted for fever and neutropenia. Cancer. 1994; 74(1): 189-96. doi: 10.1002/1097-0142(19940701)74:1<189::AIDCNCR2 820740130>3.0.C0;2-7.
29. Mullen C.A., Buchanan G.R. Early hospital discharge of children with cancer treated for fever and neutropenia: identification and management of the low-risk patient. J. Clin. Oncol. 1990; 8(12): 1998-2004.
30. Griffin T.C., Buchanan G.R. Hematologic predictors of bone marrow recovery in neutropenic patients hospitalized for fever: implications for discontinuation of antibiotics and early discharge from the hospital. J. Pediatr. 1992; 121(1): 28-33. doi: 10.1016/S0022-3476(05)82536-3.
31. Aquino V.M., Buchanan G.R., Tkaczewski I., Mustafa M.M. Safety of early hospital discharge of selected febrile children and adolescents with cancer with prolonged neutropenia. Med. Pediatr. Oncol. 1997; 28(3): 191-5. doi: 10.1002/(SICI)1096-911X(199703)28:3<191::AID-MP07>3.0.C0;2-E.
32. Klaassen R.J., Allen U., Doyle J.J. Randomized placebo-controlled trial of oral antibiotics in pediatric oncology patients at low-risk with fever and neutropenia. J. Pediatr. Hematol. Oncol. 2000; 22(5): 405-11.
Поступила 25.05.15 Received 25.05.15
© КРИВЕНКО С.И., 2015 УДК 616.15:614.2]: 615.387.012
ПРИМЕНЕНИЕ СУБСТАНЦИЙ ГРУППОСПЕЦИФИЧЕСКИХ ПОЛИСАХАРИДОВ В ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ ТРАНСФУЗИОЛОГИИ
Кривенко С.И.
Республиканский центр гематологии и пересадки костного мозга на базе УЗ 9-я городская клиническая
больница, 220045, Минск, Беларусь
Резюме. Производство и практическое применение препаратов и компонентов донорской крови, а также стандартных реагентов из нее осуществляется с учетом их групповой принадлежности в системе АВО. Нередки случаи относительного дефицита диагностикумов и гемопродуктов определенной группы, что обусловлено неравномерностью распределения людей по группам крови в популяции. Для универсализации в системе АВО на этапе производства стандартных реагентов для выявления антигенов системы Rh-Hr и других эритроцитарных антигенов, а также гемопродуктов для клинического применения предложено использовать группоспецифические полисахариды А и группоспецифические полисахариды Б, являющиеся субстанциями иммуномодулирующих лекарственных средств фруглюмин А и фруглюмин Б. Их применение обеспечивает полную нейтрализацию а- и в-изогемагглютининов с образованием стабильных комплексов антиген-антитело, не оказывая при этом влияния на активность изоантител другой специфичности. Группоспецифические полисахариды не влияют на показатели вторичного гемостаза - активированное частичное тромбопластиновое время, протромбиновое время, тромбиновое время плазмы крови и на активность фактора VIII в криопреципитате. Иммунизация доноров субстанциями группоспецифических полисахаридов обеспечивает значительное повышение титров изогемагглютининов плазмы крови и может быть рекомендована для использования в производстве стандартных сывороток для определения групп крови системы АВО.
Ключевые слова: производственная трансфузиология; гемопродукты; изогемагглютинин; эри-троцитарные антигены; иммунизация доноров крови; вторичный гемостаз; фактор VIII; группоспецифические полисахариды.
Для цитирования: Кривенко С.И. Применение субстанций группоспецифических полисахаридов в производственной трансфузиологии. Гематология и трансфузиология. 2015; 60(3): 10-15.
USE OF GROUP-SPECIFIC POLYSACCHARIDE SUBSTANCS IN TRANSFUSIOLOGICAL PRODUCTION
Krivenko S.I.
Republican Center of Hematology and Bone Marrow Transplantation, 220045 Minsk, Belarus
Summary. The manufacture and practical use of donor blood preparations and components and standard reagents from blood are carried out in accordance with their ABO group appurtenance. Deficit of diagnostic agents and blood products of a certain group is explained by uneven distribution of humans by blood groups in the population. Group-specific polysaccharides A and group-specific polysaccharides B (substances of immunomodulating drugs fruglumin A and fruglumin B) are suggested for ABO standardization at the stage of manufacture of standard reagents for detection of Rh-Hr antigens and other erythrocytic reagents and hemoproducts for clinical use. The use of these polysaccharides is expected to completely neutralize a- and b-isohemagglutinins with the formation of stable antigen-antibody complexes without modulating the activities of isoantibodies of other specificity. Group-specific polysaccharides cause no changes in the secondary hemostasis values - plasma activated partial thromboplastin time, prothrombin time, and thrombin time and in factor VIII activity in cryoprecipitate. Immunization of donors by group-specific polysaccharide substances will lead to a significant elevation of plasma isohemagglutinin titers and can be recommended for use in the manufacture of standard sera for detection of ABO blood groups.
Key words: transfusiological production; blood products; isohemagglutinin; erythrocytic antigens; immunization of blood donors; secondary hemostasis; factor VIII; group-specific polysaccharides. Citation: Gematologiya i transfuziologiya. 2015; 60(3): 10-15. (in Russian)
Получение промышленным способом препаратов и компонентов донорской крови, а также стандартных реагентов из нее является основной задачей производственной трансфузиологии. Производство их в странах СНГ большей частью развернуто в учреждениях службы крови (станции переливания крови - СПК, Центры крови, отделения трансфузиологии).
Несмотря на постоянное совершенствование автоматизированных методов иммуногематологических исследований в клинико-лабораторной практике, актуальность методов определения антигенных систем крови (АВО, резус и др.) классическими методами с помощью стандартных реагентов не утрачивает своей актуальности. Это обусловлено, в первую очередь, высокой точностью и простотой ручных методов, которые не требуют специального оборудования и дорогостоящих реагентов. В Республике Беларусь метод определения групп крови и резус-фактора с использованием стандартных сывороток и стандартных эритроцитов является наиболее распространенным в системе здравоохранения. Увеличение объема выпуска реагентов для определения групп крови возможно за счет использования в качестве сырья плазмы крови доноров с более высокими титрами агглютининов.
Однако сыворотки, изготовленные из крови доноров, сохраняют присущую ей групповую принадлежность в системе АВО, в связи с чем использование анти-КЪ-Нг-сывороток и антисывороток к другим эритроцитарным антигенам требует групповой совместимости этих реагентов и исследуемых тест-клеток в системе АВО, что существенно ограничивает их применение. Значительно упро-
Для корреспонденции:
Кривенко Светлана Ивановна, кандидат медицинских наук, доцент, заместитель главного врача по научной работе УЗ «9-я городская клиническая больница» г. Минска (Республиканский центр гематологии и пересадки костного мозга). Адрес: 220045, г. Минск, ул. Семашко, д. 8. Телефон: (017)277-07-63. E-mail: [email protected].
Corresponding author:
Krivenko Svetlana, MD, PhD, docent ([email protected]).
стить процесс выявления изоантигенных факторов крови можно путем создания универсальных сывороток, позволяющих определять изоантигены эритроцитов независимо от групповой принадлежности последних. Универсальные сыворотки могут быть получены путем удаления естественных изогемагглютининов с помощью различного рода препаратов, содержащих соответствующие груп-поспецифические субстанции. Данный подход наиболее эффективно может проявить себя при получении сывороток редкой специфичности: анти-rh' (Cc), анти-rh'' (Ee), анти-Даффи и других, которые обладают невысоким титром редких антител и не поддаются лишению групповых свойств другими методами (разведением коллоидными и солевыми растворами, адсорбцией) без изменения своих основных качеств.
Применение в клинической практике большинства компонентов и препаратов крови, в том числе свежезамороженной плазмы (СЗП) и криопреципи-тата, также осуществляется с учетом их групповой принадлежности в системе АВО. При оказании экстренной медицинской помощи пациентам нередки случаи относительного дефицита криопреципитата и СЗП, что связано с необходимостью использования большого количества данных гемопродуктов для достижения терапевтического эффекта, а также с неравномерностью распределения людей по группам крови в популяции [1, 2].
Дефицит гемокомпонентов и препаратов крови определенной группы усугубляется в ситуациях, когда в силу различных причин определение группы крови пациента невозможно. Неспецифическая агглютинация, когда эритроциты агглютинируются сыворотками всех групп, включая AB(IV), наблюдается при аутоиммунной гемолитической анемии и других аутоиммунных заболеваниях, при гемолитической болезни новорожденных. Установление группы крови затруднено и у пациентов с кровяными химерами, когда одновременно в кровяном русле пребывают две популяции эритроцитов, различающихся по группе крови и другим антигенам, а также при различных патологических состояниях, сопровождающихся на-
рушением агглютинабельности эритроцитов, таких как цирроз печени, ожоги, сепсис, лейкозы [3, 4].
При наличии жизненных показаний и невозможности определения группы крови пациенту переливают резус-отрицательные эритроциты группы О(1) и плазму группы АВ(^), количество которой с учетом частоты встречаемости в популяции доноров группы АВ(^) не превышает 10% от объема заготовки [3, 4].
Эффективным путем устранения подобного дефицита, как и в случае с получением стандартных реагентов для определения различных изоантиге-нов крови, является удаление естественных а- и Р-изогемагглютининов на этапе производства различных гемопродуктов. Среди известных на сегодняшний день методов универсализации лишь нейтрализация изогемагглютининов с помощью различного рода препаратов, содержащих соответствующие группоспецифические субстанции, приемлема для получения компонентов (препаратов) крови для терапевтических целей.
На базе ГУ Республиканский научно-практический центр трансфузиологии и медицинских биотехнологий Минздрава Республики Беларусь (РНПЦТиМБ) разработана технология получения группоспецифических полисахаридов А (ПА) и группоспецифических полисахаридов Б (ПБ) из слизистых оболочек свиных и лошадиных желудков соответственно, включающая этапы ферментативного гидролиза с последующим осаждением полисахаридов и освобождением от балластных примесей. Комплексное медико-биологическое и клиническое исследование свойств данных группоспецифических полисахаридов позволило разработать на основе полученных субстанций набор реагентов для нейтрализации а- и Р-изогемагглютининов и оригинальные лекарственные средства фруглюмин А и фруглюмин Б, которые, помимо основного специфического (имму-номодулирующего) действия, характеризуются способностью нейтрализовать изогемагглютинины [5], что открывает перспективы их применения в технологической цепочке для универсализации в системе АВО сырья при производстве препаратов и компонентов крови.
Целью данной работы являлось изучение возможности применения субстанций группоспецифи-ческих полисахаридов в производстве препаратов и компонентов донорской крови, а также стандартных реагентов из нее.
В рамках данного исследования:
- изучено влияние группоспецифических полисахаридов и образуемых при их применении для нейтрализации а- и Р-изогемагглютининов комплексов антиген-антитело на серологическую активность антител другой специфичности с оценкой стабильности указанных комплексов в процессе длительного хранения;
- проведена оценка влияния группоспецифиче-ских полисахаридов на показатели свертывающей системы плазмы крови и активность фактора VIII в криопреципитате при полной нейтрализации изоге-магглютининов;
- проведена оценка эффективности метода иммунизации доноров субстанциями группоспецифических полисахаридов для повышения титров изоге-магглютининов плазмы крови, используемой в производстве стандартных сывороток для определения групп крови.
Материалы и методы
В работе использованы наработанные в условиях производства РНПЦТиМБ опытно-промышленные серии субстанций группоспецифических полисахаридов, а также образцы криопреципитата, СЗП и стандартные реагенты для изосерологических исследований.
Активность группоспецифических полисахаридов составляла 0,01 усл.ед., что соответствует полной нейтрализации изогемагглютининов в 1 мл плазмы крови равным объемом 0,01% раствора субстанции.
В исследованиях использовали 25 пулов анти-D, анти-Е и анти-КеИ-сывороток O(I)-, A(II)- и В(Ш)-групп крови от изоиммунных доноров. Для инактивации серологической активности в опытные пробы вносили ПА и/ или ПБ в концентрациях, обеспечивающих полную нейтрализацию а- и ß-изогемагглютининов (соотношение сыворотки и субстанции 1:100 - 1:200), в контрольные раствор 0,9% NaCl в тех же количествах. Определение титров а- и ß-изогемагглютининов проводили в реакции гемагглютинации на плоскости; антител системы Rh-Hr и Kell - в непрямой пробе Кумбса с использованием анти-глобулиновой сыворотки ("Sanofi", Франция) и в тесте конглютинации с применением желатины.
Стабильность образующихся комплексов агглюти-нин-группоспецифический полисахарид оценивали на протяжении 6 мес в тесте гемагглютинации на плоскости в экспериментах на 20 образцах сывороток A(II)- и В(Ш)-групп крови здоровых доноров и 12 образцах сывороток, содержащих анти-Э-антитела. Определение титра анти-Э-антител проводили методом конглютинации с применением желатины.
В исследованиях, выполненных на 31 образце криопреципитата групп O(I) (n = 10), A(II) (n = 12) и B(III) (n = 9), ПА и/или ПБ вносили непосредственно в криопре-ципитат в количестве 0,05 мл 1% раствора на 0,4 мл криопреципитата, что 10-кратно превышало концентрацию группоспецифических полисахаридов, необходимую для полной нейтрализации изогемагглютининов. Образцы криопреципитата с группоспецифическими полисахаридами инкубировали в течение 5-10 мин для определения активности фактора VIII и в течение 24 ч - для контроля активности а- или ß-изогемагглютининов.
Параллельно оценивали эффективность связывания а- или ß-изогемагглютининов группоспецифическими ПА и ПБ и их влияние в концентрациях, полностью нейтрализующих серологическую активность изогемагглю-тининов, на активность фактора VIII, определяемую по модифицированному методу Рутберга [6].
Оценку влияния группоспецифических полисахаридов на показатели системы гемостаза проводили в параллельных постановках контрольных (с 0,9% раствором натрия хлорида) и опытных (с группоспецифическими полисахаридами) проб на 26 образцах бестромбоцитарной плазмы крови A(II)- и B(III)- групп (по 13 образцов каждой группы). Группоспецифические полисахариды вно-
Таблица 1
Влияние группоспецифических полисахаридов А и Б на активность анти-Э, анти-Е, анти-Ке11-антител в сыворотках крови; Ме (мин-макс)
Титр изогемагглютининов Титр специфических антител
Сыворотка (пул) после обработки после обработки
контроль опыт контроль опыт
А(11) анти-D (n = 7) b 1:8 (1:2-1:64) b 1:8(1:2-1:64) b 0 128 (1:64-1:256) 128 (1:64-1:256) 128 (1:64-1:256)
B(III) анти-D (n = 6) a 1:4 (1:2-1:32) a 1:4 (1:2-1:32) a 0 256 (1:64-1:512) 256 (1:64-1:512) 256 (1:64-1:512)
B(III) анти-E (n = 6) O(I) анти-Kell (n = 6)
a 1:8 (1:2-1:32) a 1:8 (1:2-1:32)
a 1:8 (1:2-1:32) a 1:8 (1:2-1:32)
b 1:8 (1:2-1:64) b 1:8 (1:2-1:64)
a 0 a 0 b 0
1:8 (1:8-1:32) 1:8 (1:8-1:32)
1:8 (1:8-1:32) 1:8 (1:8-1:32)
1:8 (1:8-1:32) 1:8 (1:8-1:32)
сили в плазму опытных проб в количестве 0,15 (0,30) мл 1% раствора на 1,2 мл плазмы. Конечная концентрация группоспецифических полисахаридов более чем в 10 (20) раз превышала необходимую для полной нейтрализации изо-гемагглютининов. Для параллельной постановки контрольной пробы в плазму добавляли соответствующее количество 0,9% раствора хлорида натрия.
Пробы инкубировали в течение 15 мин и оценивали основные показатели системы вторичного гемостаза, регистрируя активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), протромбиновое время (ПВ), тромбиновое время (ТВ) на гемокоагулометре CGL 2110 («СОЛАР», Республика Беларусь) с использованием диагностических реагентов АЧТВ-тест, Ренампластин МИЧ 1,1-1,2; Тромбин-реагент («Ренам», Россия).
В рамках проведения 1-й и 2-й фаз клинических испытаний лекарственных средств на основе субстанций груп-поспецифических ПА и ПБ в исследование были включены 30 доноров крови, обследованных в соответствии со стандартами, утвержденными Минздравом Республики Беларусь, и подписавших информированное согласие.
Определение эффективности иммунизации для каждой субстанции было проведено на группах из 10 доноров крови, сформированных с учетом групповой (системы АВО) принадлежности. Группа сравнения включала 10 доноров - по 5 доноров A(II)P и B(III)a. В каждой из групп выполняли трехкратное внутримышечное введение препаратов или плацебо с интервалом в 5 дней. Донорам, имевшим В(Ш)а-группу крови, вводили по 1 мл 2% раствора ПА, донорам с А(П)Р-группой крови - 1 мл 2% раствора ПБ. Донорам группы сравнения вводили по 2 мл 0,9% раствора натрия хлорида (плацебо). Контроль титра изогемагглютининов проводили до иммунизации и через 5 дней после завершения иммунизации.
Статистическую обработку результатов проводили с помощью непараметрических методов. Средние величины представлены в виде значений медианы и диапазона. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05.
Результаты и обсуждение
С целью оценки возможности применения субстанций группоспецифических полисахаридов для универсализации в системе АВО плазмы крови, предназначенной для производства стандартных реагентов для определения изоантигенов системы резус (Rh-Hr), было изучено влияние ПА и ПБ в концентрациях, обеспечивающих полную нейтрализацию естественных а- и Р-изогемагглютининов, на активность анти-D, анти-Е и анти-Ке11-антител в сыворотках крови.
Титры изогемагглютининов и специфических (анти-D, анти-Е, анти-Kell) антител определяли исходно и после внесения соответствующих группо-специфических полисахаридов (опыт) либо 0,9% раствора натрия хлорида (контроль) в тех же количествах. Установлено, что группоспецифические ПА и ПБ на фоне полной нейтрализации естественных а- и Р-изогемагглютининов обеспечивают 100% сохранение анти-D, анти-Е и анти-Ке11-активности сывороток (табл. 1).
Применение данного метода универсализации в системе АВО с использованием субстанций груп-поспецифических полисахаридов в процессе производства стандартных реагентов возможно лишь при сохранении эффекта связывания изогемагглютини-нов в течение нормативного срока хранения стандартных сывороток (6 мес). При оценке стабильности образовавшихся комплексов агглютинин-груп-
Таблица 2
Оценка стабильности комплексов изогемагглютинин-группоспецифические полисахариды при хранении и их влияние на титр
специфических анти-Э-антител; Ме (мин-макс)
Сыворотка Титр изогемагглютининов Титр специфических антител
исходный после полной нейтрализации в процессе хранения, мес исходный в процессе хранения, мес
1 3 6 1 3 6
A(II)P (n = 10) 1:32 (1:16-1:64) 0 0 0 - - - -
B(III)a (n = 10) 1:16 (1:16-1:64) 0 0 0 - - - -
А(11) анти-D (n 6) 1:16 (1:8-1:32) 0 0 0 256 (1:128-1:512) 256 (1:128-1:512) 256 (1:128-1:512) 256 (1:128-1:512)
B(III) анти-D (n = 6) 1:8 (1:4-1:32) 0 0 0 128 (1:64-1:512) 128 (1:64-1:512) 128 (1:64-1:512) 128 (1:64-1:512)
Таблица 3
Влияние группоспецифических полисахаридов на показатели системы гемостаза плазмы крови
A(II)ß (n = 13) B(III)a (n = 13)
Показатель 10-кратная концентрация ПБ 20-кратная концентрация ПБ 10-кратная концентрация ПА 20-кратная концентрация ПА
АЧТВ, R 1,01 (0,95-1,06) 1,04 (1,01-1,06) 0,98 (0,97-1,02) 1,0 (0,99-1,03)
ПВ, R 1,03 (0,99-1,07) 1,05 (1,01-1,07) 0,98 (0,98-1,0) 1,02 (1,01-1,02)
ТВ, R 0,99 (0,98-1,04) 1,0 (0,99-1,04) 1,01 (0,98-1,03) 1,0 (0,98-1,03)
Примечание. Результаты представлены в значениях медианы и диапазона (25-75 процентили)
R =
П
П
контроль
где П - показатель в пробе с добавлением группоспецифических полисахаридов; Птнтрюжь - показатель в пробе с добавлением 0,9% раствора натрия хлорида; р > 0,05 для всех вариантов постановки.
опыт
поспецифическая субстанция было установлено, что в процессе хранения сывороток на протяжении указанного срока не происходит диссоциации комплекса антиген-антитело (табл. 2). Действительно, ни в одном случае на протяжении всего срока наблюдения в универсализированных сыворотках активность а- или ß-изогемагглютининов не проявлялась, а серологическая активность анти-Э-антител во всех случаях сохранялась на исходном уровне.
Таким образом, полученные результаты демонстрируют высокую группоспецифическую активность ПА и ПБ в отношении а- и ß-изогемагглютининов, стабильность образующихся при их взаимодействии комплексов на протяжении как минимум 6 мес и отсутствие влияния последних на специфические (целевые) свойства реагентов, предназначенных для идентификации экспрессии на эритроцитах антигенов систем Rh-Hr и Kell.
При контакте с группоспецифическими полисахаридами изосерологический статус клеток остается стабильным, а сорбция группоспецифических полисахаридов на форменных элементах крови не имеет специфической молекулярной основы и носит неспецифический характер. Сами же группоспецифи-ческие полисахариды индифферентны относительно функциональных свойств клеток крови в случае кратковременного контакта, что подтверждается ресорбцией в элюирующей среде адсорбированных на поверхности эритроцитов группоспецифических полисахаридов с полным сохранением изосерологи-ческих свойств последних [7].
Эти данные обосновывают целесообразность включения группоспецифиче-ских полисахаридов в технологический процесс производства стандартных сывороток для определения редких эритро-цитарных антигенов.
Применение разработанных на основе группоспецифических полисахаридов лекарственных средств позволяет получать не только реагенты, но и препараты и компоненты крови, лишенные групповой принадлежности в системе АВО. Однако применение метода универсализации, как и в случае с реагентами, требует предварительного изучения влияния субстанций указанных препаратов на целевые свойства продуктов крови.
Данные по оценке стабильности основных показателей свертывающей системы крови в присутствии группоспецифических полисахаридов представлены в табл. 3.
Как видно из табл. 3, внесение группоспецифи-ческих ПА в образцы бестромбоцитарной плазмы В(Ш)-группы с титрами а-изогемагглютининов 1:41:64 не изменяло определяемых в них показателей АЧТВ, ПВ и ТВ в них по сравнению с контрольными образцами. R^g в присутствии ПА в концентрациях, 10-кратно превышающих необходимую для нейтрализации а-изогемагглютининов, составил 1,01 (0,951,06), RnT - 1,03 (0,99-1,07), RIH - 0,99 (0,98-1,04). Увеличение количества добавляемых группоспецифических полисахаридов вдвое (20-кратное превышение дозы, обеспечивающей полную нейтрализацию изогемагглютининов) также не оказывало влияния на исследуемые показатели гемостаза.
Аналогичные результаты получены и в постановках с донорской плазмой А(П)-группы, содержащей Р-изогемагглютинины в титрах 1:2-1:16. Присутствие группоспецифических ПБ в количествах, как 10-кратно, так и 20-кратно превышающих необходимую для универсализации компонентов (препаратов) крови в системе АВО, не оказало влияния ни на один из исследуемых показателей.
При оценке эффективности нейтрализации а- и Р-изогемагглютининов спустя 24 ч после внесения группоспецифических ПА и ПБ в исследуемых образцах плазмы крови реакция агглютинации стандартных эритроцитов группы В(Ш) и группы А(П) соответственно, отсутствовала.
Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии влияния группоспецифических полисахаридов на показатели системы вторичного гемостаза на фоне полной нейтрализации изогемагглютининов донорской плазмы.
Криопреципитат, широкое использование которого в качестве заместительной терапии определяется содержащимися в нем коагуляционным фактором VIII и фибриногеном, также характеризуется групповой принадлежностью в системе АВО, и его введение пациенту
Таблица 4
Изменение титров изогемагглютининов у доноров крови после иммунизации субстанциями группоспецифических полисахаридов; Ме (мин-макс)
Донор, Препарат иммунизации Титр изогемагглютининов
группа крови до иммунизации после иммунизации Р
A(II)ß ПБ 1:128 (1:16-1:256) 1:1024 (1:64-1:2048) 0,0017
A(II)ß Контроль (плацебо) 1:32 (1:16-1:64) 1:32 (1:16-1:64) 1,0000
B(III)a ПА 1:64 (1:8-1:128) 1:1024 (1:32- 1:1024) 0,0052
B(III)a Контроль (плацебо) 1:16 (1:8-1:32) 1:16 (1:16-1:32) 0,6761
осуществляется только при условии идентичности препарата и реципиента в этой системе.
В экспериментальных постановках, выполненных на 31 образце криопреципитата, установлено, что внесение группоспецифических полисахаридов в дозах, полностью нейтрализующих серологическую активность изогемагглютининов, не оказывает влияния на активность фактора VIII в нем. Так, исходно медиана активности фактора VIII в криопре-ципитате О(!)-группы составила 73,5 (73-74) с, в криопреципитате A(II)- и В(Ш)-групп - 74 (73-75). Внесение группоспецифических полисахаридов в концентрациях, обеспечивающих полную нейтрализацию изогемагглютининов, не изменяло приведенные выше показатели активности фактора VIII.
С целью повышения качества исходного сырья при производстве стандартных сывороток для определения групп крови был разработан метод иммунизации доноров лекарственными средствами, основным действующим компонентом которых являются группоспецифические полисахариды. Результаты применения данного метода представлены в табл. 4.
В группе доноров B(III)a до иммунизации груп-поспецифическими ПА медиана титра изогемагглютининов a составила 1:64 (1:8-1:128). После проведения иммунизации по приведенной выше схеме данный показатель статистически значимо повысился и составил от 1:1024 (1:32-1:1024) (р = 0,0052). В группе доноров A(II)ß в результате иммунизации группоспецифическими ПБ также наблюдалось повышение титров ß-изогемагглютининов, медиана данного показателя составила 1:1024 (1:64-1:2048) по сравнению с 1:128 (1:16-1:256) до иммунизации (р = 0,0017).
В группе сравнения для доноров A(II)ß исходно медиана титра изогемагглютининов составила 1:32 (1:16-1:64), для доноров B(III)a - 1:16 (1:8-1:32). После введения по схеме иммунизации 0,9% раствора натрия хлорида (плацебо) титры соответствующих изогемагглютининов не изменились: их медианы составили 1:32 (1:16-1:64) и 1:16 (1:16-1:32) соответственно.
Трехкратное внутримышечное введение донорам крови 1 мл 2% раствора субстанций группоспецифи-ческих полисахаридов не вызывало побочных эффектов и реакций в месте введения, что позволяет рекомендовать данный метод иммунизации доноров крови для повышения качества сырья при производстве стандартных сывороток для определения групп крови.
Выводы
1. Применение группоспецифических полисахаридов обеспечивает полную нейтрализацию a- и ß-изогемагглютининов с образованием стабильных комплексов антиген-антитело, не оказывая при этом влияния на активность изоантител другой специфичности.
2. Внесение группоспецифических полисахаридов в плазму крови не приводит к существенному изменению величин показателей вторичного гемостаза (АЧТВ, ПВ и ТВ), но обеспечивает полное связывание соответствующих изогемагглютининов в плазме крови.
3. Группоспецифические полисахариды не оказывают влияния на активность фактора VIII при полной нейтрализации изогемагглютининов в криопре-ципитате.
4. Метод иммунизации доноров лекарственными средствами на основе группоспецифических полисахаридов не вызывает побочных эффектов и осложнений, обеспечивает значительное повышение титров изогемагглютининов плазмы крови и может быть рекомендован для использования в производстве стандартных сывороток для определения групп крови системы АВО.
ЛИТЕРАТУРА
1. Донсков С.И., Мороков В.А. Группы крови человека. Руководство по иммуносерологии. М.: ИП Скороходов В.А.; 2011.
2. Минеева Н.В. Группы крови человека. Основы иммуногема-тологии. СПб.; 2004.
3. Воробьев А.И., ред. Очерки по производственной и клинической трансфузиологии. М.: Ньюдиамед; 2006.
4. Козинец Г.И., ред. Практическая трансфузиология. М.: Практическая медицина; 2005.
5. Кривенко С.И., Гапанович В.Н. Иммуномодулирующие лекарственные средства и реагенты на основе группоспецифи-ческих полисахаридов. АрсМедика. 2012; 13(68): 89-93.
6. Иванов Е.П. Руководство по гемостазиологии: Норма и нарушения функции системы гемостаза, клинико-лаборатор-ная диагностика кровотечений, тромбозов и ДВС-синдрома. Минск: Беларусь; 1991.
7. Пинчук Л.А., Левин В.И., Кривенко С.И., Гапанович В.Н. Изосерологические свойства и электрофоретическая подвижность клеток крови в присутствии группоспецифических полисахаридов животного происхождения. Медицинские новости. 2007; 4: 98-102.
Поступила 12.05.15
REFERENCES
1. Donskov S.I., Morokov VA. Groups of human blood. Guide to im-munoserology. Mоscow: IP Skorohodov VA.; 2011. (in Russian)
2. Mineeva N.V. Groups of human blood. Basics of immunohaematology. St. Petersburg; 2004. (in Russian)
3. Vorobiev A.I., ed. Essays on the production and clinical transfusion. Mоscow: Nyudiamed; 2006. (in Russian)
4. Kozinets G.I., ed. Practical transfusiology. Mоscow: Practiches-kaya meditsina; 2005. (in Russian)
5. Krivenko S.I., Gapanovich V.N. Immunomodulatory drugs and reagents based group- specific polysaccharides. ArsMedika. 2012; 13 (68): 89-93. (in Russian)
6. Ivanov E.P. Guide Hemostasis (Norm and the hemostatic system dysfunction, clinical and laboratory diagnosis of bleeding, thrombosis and DIC). Minsk: Belarus; 1991. (in Russian)
7. Pinchuk L.A., Levin V.I., Krivenko S.I., Gapanovich V.N. Iso-serological properties and electrophoretic mobility of the blood cells in the presence of a group-specific polysaccharides of animal origin. Meditsynskie Novosti. 2007; 4: 98-102. (in Russian)
Received 12.05.15
