CC BY
70
иммунология
© коллектив авторов, 2012
УДК 616.98:578.831.31]-078.33
в.З. Кривицкая, А. А. Соминина, Е. м. Бойцеховская, И. в. Амосова, К. К. милькинт, в. Ф. Суховецкая, Е. Г. Головачева, Н. И. Львов, Г. П. власов
применение синтетических пептидов для характеристики сайт-направленного противовирусного гуморального иммунного ответа у пациентов с рЕспирдторно-синцитидльной вирусной инфекцией
ФГБУ НИИ гриппа Минздравсоцразвития РФ, Санкт-Петербург
Цель исследования состояла в изучении особенностей эпитоп-специфического гуморального иммунного ответа на респираторно-синцитиальную вирусную (РСВ) инфекцию (РСВИ) в зависимости от характера заболевания и возраста пациентов. Проанализированы парные сыворотки 226 детей и взрослых с РСВИ. Для выявления в ИФА эпитоп-специфичных IgG использовали синтетические пептиды, имитирующие структуру функционально значимых эпитопов F-белка РСВ с аминокислотной последовательностью (АП) 221-232 (F-SP12) и АП 479-491 (F-SP13), а также G-белка с АП 152-164 (G-H13) и АП 184-198 (G-T15). РСВ-нейтрализующие антитела (АТ) выявляли в реакции микронейтрализации. Частота сероконверсий эпитоп-специфичных IgG составила 21-25% при первичной РСВИ у детей в возрасте до 3 лет и увеличивалась до 42-50%% при повторных эпизодах заболевания у детей в возрасте 3-18 лет и взрослых. Сероконверсии РСВ-нейтрализующих АТ в этих группах наблюдались в 42, 65 и 58% случаев соответственно. Независимо от возраста пациентов с выявленной РСВИ, отсутствие конверсий нейтрализующих АТ было статистически значимо ассоциировано с отсутствием ответа со стороны эпитоп-специфичных IgG. Впервые было показано наличие иммунодоминирования среди B-клеточных эпитопов поверхностных гликопротеинов РСВ у пациентов с повторными (но не первичными) РСВИ. Иерархия эпитоп-специфичного иммунного ответа при осложненном течении заболевания (активность ответа на эпитопы: SP12 = G-T15 > G-H13) отличалась от таковой при неосложненном (G-H13 > G-T15 > SP12).
Ключевые слова: респираторно-синцитиальная вирусная инфекция, F-белок РСВ, G-белок РСВ, синтетические пептиды, эпитоп-специфические IgG, дети и взрослые, иммуноферментный анализ
V.Z. Krivitskaya, A.A. Sominina, Ye.M. Voytsekhovskaya, I.V. Amosova, K.K. Milkint, V.F. Sukhovetskaya, Ye.G. Golovatcheva, N.I. Lyvov, G.P. Vlasov
the application of synthetic peptides to characterize the site-directed antiviral humoral immune response in patients with respiratory syncytial viral infection
The article deals with the study of characteristics of epitope-specific humoral immune response to respiratory syncytial viral infection depending on nature of disease and patients' age. The couple serums from 226 children and adults with respiratory syncytial viral infection were analyzed. To detect in enzyme immunoassay the epitope-specific IgG the synthetic peptides were applied imitating the structure of functionally depended epitopes ofF-protein of respiratory syncytial virus with amino acid sequences 221-232 (F=SP12), 479-491 (F-SP13) and G-protein with amino acid sequences 152-164 (G-H13), 184-198 (G-T15). The respiratory syncytial viral infection neutralizing antibodies were detected using the microneutralization reaction. The rate of seroconversions of epitope-specific IgG consisted 21-25% in children 3-18 years old under primary respiratory syncytial viral infection and increased up to 42-50% in children 3-18 years old and adults under recurrent episodes of diseases. In these groups, the seroconversions of respiratory syncytial virus neutralizing antibodies were observed in 42%%, 65% and 58% of cases correspondingly. Independently of age of patients with diagnosed respiratory syncytial viral infection, the absence of conversions of neutralizing antibodies was statistically significant associated with the absence of response from epitope-specific IgG.
The presence among B-cell epitopes of immune dominance of surface glycoproteins of respiratory syncytial virus in patients with recurrent (but not primary) respiratory syncytial viral infection is detected. The hierarchy ofepitope-specific immune response in case ofcomplicated course of disease (response activity to epitopes: SP12=G-T15>G-H13) differed from the case of uncomplicated course of disease.
Key words: respiratory syncytial viral infection, F-protein ofrespiratory syncytial virus, G-protein ofrespiratory syncytial virus, synthetic peptides, epitope-specific IgG, children, adults, enzyme immunoassay
Респираторно-синцитиальный вирус (РСВ) является одной из основных причин респираторной патологии у детей первых двух лет жизни, а также важным патогенетическим фактором в структуре респираторных заболеваний
Для корреспонденции:
Кривицкая Вера Зорьевна, канд. биол. наук, вед. науч. сотр. Адрес: 197376, Санкт-Петербург, ул. проф. Попова, 15/17 Телефон: 346-12-70 E-mail: [email protected]
взрослых. Характерной особенностью РСВ является способность вызывать иммунопатологические реакции (обструкцию дыхательных путей, аллергизацию организма, формирование хронической бронхолегочной патологии), причем в значительно большей степени, чем показано для других респираторных вирусов человека. Иммуномодули-рующие свойства РСВ во многом обусловлены действием на иммунную систему хозяина определенных антигенных детерминант вирусных белков. При этом некоторые эпи-топы белков РСВ способны индуцировать синтез биологически активных факторов, оказывающих в зависимости от
конкретных условий протективное или повреждающее действие [4]. Анти-РСВ антитела (АТ) также могут обладать не только вируснейтрализующими, но и патогенными свойствами за счет различных АТ-опосредованных механизмов, утяжеляющих течение заболевания [7]. В этой связи изучение тонкой структуры анти-РСВ гуморального ответа имеет большое значение для выяснения роли сайт-специфичных АТ как в антивирусной защите, так и в развитии осложнений, что необходимо учитывать при разработке вакцин. Поскольку риск тяжелого течения инфекции, вызванной РСВ (РСВИ), наиболее велик у детей первых двух лет жизни, подавляющее большинство клинических исследований посвящено изучению патогенеза первичного заболевания. Характер гуморального ответа на повторные эпизоды РСВИ у детей старшего возраста и взрослых практически не изучен. В нашей работе впервые был проведен сравнительный анализ эпитоп-специфического анти-РСВ ответа у пациентов различных возрастных групп.
Цель проведенного исследования состояла в изучении особенностей эпитоп-специфического анти-РСВ гуморального иммунного ответа в зависимости от характера заболевания и возраста пациентов.
Для решения поставленных задач широкие возможности предоставляет иммуноферментный анализ (ИФА) с использованием синтетических пептидов (СП), имитирующих структуру отдельных эпитопов вирусных белков.
Материалы и методы. Клинические материалы. Были проанализированы парные сыворотки, полученные в острой и реконвалесцентной фазах (в среднем через 2,5 и 9,7 дня после начала заболевания) от 226 детей и взрослых с РСВИ, госпитализированных в клиники Санкт-Петербурга. Осложнения РСВИ проявлялись у детей стенозирующим ларин-готрахеитом (СЛТ) или острым обструктивным бронхитом (ООБ), у взрослых - острой пневмонией (ОП).
Диагностика заболевания. РСВИ диагностировали детекцией вирусных антигенов (АГ) в клетках эпителия носовых ходов в реакции иммунофлюоресценции и в секретах носовой полости методом ИФА (тест-системы производства ООО «ППДП» НИИ гриппа, Санкт-Петербург), а также выявлением сывороточных РСВ-специфических IgM в ИФА "с захватом АТ" с помощью сенсибилизированных анти-IgM моноклональных АТ (МКА) и серокон-версий анти-РСВ IgG в непрямом ИФА с использованием в качестве АГ на стадии захвата цельновирионного РСВ (РСВ-ЦВ), очищенного ультрацентрифугированием в градиенте плотности сахарозы. Условия проведения ИФА были описаны ранее [1, 2]. РСВИ считали установленной в случае положительных результатов, регистрируемых, по крайней мере, двумя тестами.
Синтетические пептиды. Были синтезированы СП, имитирующие первичную структуру функционально значимых эпитопов F-белка РСВ с аминокислотной последовательностью (АП) 221-232 IEFQQKNNRLLE (F-SP12) и АП 479-491 YDPL VFPSDEFDA (F-SP13), а также СП, имитирующие структуру эпитопов в составе консервативного центрального негликозилированного региона G-белка РСВ - АП 152164 QNKPPNKPNNDFH (G-H13) и АП 184-198 AIC(Acm) KRIPNKKPQKKT (G-T15). Синтез пептидов был осуществлен в НИИ высокомолекулярных соединений РАН (Санкт-Петербург).
Выявление эпитоп-специфических IgG (анти-СП IgG) в ИФА. Сенсибилизацию планшетов раствором СП (10 мкг/ мл) в карбонатно-бикарбонатном буфере (pH 9,5) проводили в течение 18 ч при комнатной температуре. Детекцию связавшихся с ними АТ при разведении сывороток 1:25 проводили пероксидазным конъюгатом МКА (МКА-Пх) к IgG человека (НПО "Полигност", Санкт-Петербург). Сероконверсии считали доказанными, если различия оптической плотности (OD450) для сывороток, полученных в реконвалесцентной и острой фазах, составляли не менее 0,2.
Вируснейтрализующие антитела выявляли в реакции микронейтрализации, проводимой в 96-луночных планшетах для культуральных работ (NUNC, Дания). Для оценки уровня анти-РСВ АТ использовали культуру клеток МА-104 и штамм РСВ Long. Анализ антигриппозных нейтрализующих АТ проводили на клетках MDCK с эпидемическими штаммами вируса гриппа A(H1N1) и A(H3N2). Снижение уровня репродукции вирусов (100 ТИД50) в присутствии АТ оценивали в ИФА с помощью МКА-Пх к F-белку РСВ или NP вируса гриппа A [1]. За нейтрализующий титр принимали последнее разведение сыворотки, при котором наблюдалось двукратное снижение OD450 по сравнению с показателем, полученным для контрольных лунок, где вирус культивировали в отсутствие сывороток. Сероконверсиями считали четырехкратное и более увеличение титров АТ.
Статистическая обработка результатов. Сравнение частоты выявления сероконверсий в различных группах пациентов проводили с использованием критерия хи-квадрат. Для определения наличия связи между двумя качественными признаками применяли коэффициенты ассоциации Пирсона (RA).
Результаты и обсуждение. Основными индукторами синтеза анти-РСВ нейтрализующих АТ являются два поверхностных вирусных гликопротеина - F и G. Как известно, G-белок обеспечивает присоединение РСВ к клеточным рецепторам. F-белок ответственен за механизмы слияния (fusion) вирусной оболочки с мембраной клетки, а также мембран инфицированной клетки и соседней неинфициро-ванной в процессе репродукции вируса.
По результатам анализа данных литературы для проведения исследования были синтезированы СП, имитирующие первичную структуру консервативных линейных иммуногенных эпитопов F- и G-белков, играющих важную роль в репродукции вируса. Эпитоп F-SP12 идентифицирован как часть "главного вируснейтрализующего домена" F-белка РСВ, поскольку индуцирует синтез вируснейтрали-зующих АТ у лабораторных животных [9]. Ранее нами было показано, что АТ к F-SP12 и F-SP13 образуются также у пациентов, инфицированных РСВ [1]. Эпитопы F-SP12 и F-SP13 входят в состав регионов, задействованных в кон-формационных перестройках F-белка, необходимых для проникновения РСВ в клетку. Предполагается, что взаимодействующие с ними АТ могут ингибировать репродукцию вируса за счет блокирования процесса конформационных изменений [11]. Эпитопы G-H13 и G-T15 входят в состав домена G-белка, играющего важную роль в присоединении РСВ к клетке, и стимулируют формирование защитного анти-РСВ иммунитета у лабораторных животных [6, 8]. С другой стороны, эпитоп G-T15 ответственен за индукцию синтеза CD4+-T-клетками медиаторов (интерлейкины (ИЛ) 5, 6, 13), способствующих иммунопатологии - гиперреактивности и обструкции бронхов [10].
На основе синтезированных СП нами были сконструированы иммуноферментные тест-системы (ИФТС-СП) для детекции эпитоп-специфических IgG в сыворотке крови.
Пациенты с установленной РСВИ были разделены на 3 группы (см. таблицу) с учетом того, что иммунный ответ при первичной РСВИ, которую большинство детей переносят в течение первых двух лет жизни, существенно отличается от реакции на повторные эпизоды заболевания.
В нашем исследовании критерием первичной РСВИ служило отсутствие анти-РСВ-IgG в сыворотках, полученных в первые дни заболевания, поскольку АТ этого типа не продуцируются de novo ранее 4-го дня после появления симптомов ОРВИ. После перенесенной РСВИ высокий уровень циркулирующих в крови вирусспецифических IgG поддерживается в течение длительного времени (по крайней мере, в течение года) В-лимфоцитами памяти или длительно живущими плазматическими клетками. В соответствии с этим РСВИ была определена как повторная у всех обследован-
характер реагирования антител, специфичных к антигенным детерминантам F- и G-белка рсВ, у пациентов разных возрастных групп с установленной рсВи
Группа больных Возрастной диапазон Средний Частота сероконверсий АТ (в %), специфичных к вирусным антигенам:
больных возраст, годы РСВ-ЦВ-IgM+IgG РСВ-ЦВ-IgG F-SP12-IgG G-T15-IgG G-H13-IgG
Дети с первичной РСВИ 33 3 мес - 2,9 года 1,1 97 42|,# 21a,b 21+,* 24J,**
Дети и подростки с повторной РСВИ 47 3-18 лет 6,8 100 66# 45a 43+ 47J
Взрослые пациенты с повторной РСВИ 64 19-40 лет 27,8 97 72t 42b 47* 45**
Примечание. t - p = 0,005, # - p = 0,04, a - p = 0,04, b - p = 0,04, + - p = 0,05, * - p = 0,03, J - p = 0,04, ** - p = 0,04.
ных нами пациентов старше 3 лет, поскольку уже в первые 3 дня заболевания в крови регистрировали высокий уровень анти-РСВ-IgG, что являлось результатом синтеза "иммуноглобулинов памяти".
Результаты, полученные с использованием ИФТС-СП, показали, что IgG к анализируемым эпитопам образуются у РСВ-инфицированных пациентов всех возрастных групп, однако с различной интенсивностью. При первичной инфекции у детей младшего возраста (до 3 лет) частота сероконверсий IgG, специфичных к эпитопам F-SP12, G-T15 и G-H13, так же как и к РСВ-ЦВ, была в 1,7-2,2 раза ниже, чем в среднем у пациентов старших возрастных групп с повторными РСВИ (см. таблицу).
Большую иммуногенность анализируемых антигенных детерминант поверхностных гликопротеинов РСВ для лиц старшего возраста можно объяснить «созреванием» иммунной системы и усилением адаптивного противовирусного ответа по мере увеличения числа эпизодов перенесенной РСВИ. Это проявляется в возрастном расширении спектра реагирования эпитоп-специфических АТ. Так, отношение частоты сероконверсий IgG, взаимодействующих только с одним СП, к частоте конверсий, выявленных одновременно к трем анализируемым эпитопам, составило 1,27 у маленьких детей с первичной РСВИ, 0,42 и 0,48 соответственно у детей стершего возраста и взрослых пациентов с реинфекциями.
Однако, несмотря на повышение иммуногенности вирусных B-клеточных детерминант при реинфекциях (с возрастом), частота регистрируемых сероконверсий эпитоп-специфических АТ была тем не менее недостаточно высокой даже в группе взрослых пациентов (42-47%). Диагностическая эффективность ИФТС для оценки IgG, взаимодействующих с РСВ-ЦВ, представляющих совокупность иммуноген-ных эпитопов всех вирусных белков, была значительно выше, чем при использовании СП, однако также не достигала 100%. Следует подчеркнуть, что при одновременном определении наличия в крови IgM и сероконверсий IgG, взаимодействующих с РСВ-ЦВ, эффективность диагностирования РСВИ в группах достигала 97-100% (см. таблицу).
Поскольку все анализируемые вирусные детерминанты играют важную роль в репродукции РСВ, взаимодействующие с ними АТ оказывают противовирусное действие. В связи с этим наблюдаемый нами низкий уровень реагирования эпитоп-специфических IgG может быть причиной сниженной вируснейтрализующей активности. Для проверки этого положения на другом контингенте (82 пациента с РСВИ), но в рамках тех же возрастных групп, было проведено сопоставление активности IgG, специфичных к двум эпитопам F-белка РСВ (F-SP12 и F-SP13), индуцирующих синтез нейтрализующих АТ, с эффективностью образования вируснейтрализующих АТ. Как и ранее, при обследовании маленьких детей с первичным заболеванием (24 пациента) регистрировали низкую частоту конверсий IgG, реагировавших в ИФА с СП F-SP12 и F-SP13 (21-25%), несколько чаще
- при анализе проб сывороток, полученных от 34 детей старшего возраста (47-50%) и 24 взрослых пациентов (42%) с повторными РСВИ. Частота выявления сероконверсий РСВ-нейтрализующих АТ в этих группах была также недостаточно высока - 42, 65 и 58% соответственно. При этом независимо от возраста пациентов с выявленной РСВИ отсутствие конверсий анти-РСВ-нейтрализующих АТ было статистически значимо ассоциировано с отсутствием ответа со стороны эпитоп-специфичных (Дд = 0,36; p = 0,02).
Для сравнения был проведен анализ сывороток, полученных в то же время от пациентов с установленной повторной гриппозной инфекцией: 17 детей и 29 взрослых (средний возраст 7,8 года и 35,0 лет). Частота конверсий АТ, нейтрализующих т укго эпидемический вирус гомологичного субтипа НШ1 или Н3№, была значительно выше ^ < 0,01), чем в группе РСВ-инфицированных лиц соответствующего возраста, и составила 76% у детей и 90% у взрослых.
Полученные данные свидетельствуют о том, что одной из причин недостаточно высокого уровня гуморальной анти-РСВ защиты может быть низкая иммуногенность функционально значимых вирусных антигенных детерминант, которая является общей особенностью патогенеза РСВИ, поскольку проявляется не только при первичном инфицировании у маленьких детей, но и при повторных РСВИ у лиц старшего возраста.
Несмотря на то что ИФТС-СП оказались малоэффективными с диагностической точки зрения из-за низкой иммуногенности вирусных антигенных детерминант, их использование позволило выявить некоторые особенности вирусспеци-фического гуморального ответа, которые невозможно было обнаружить при использовании в ИФА РСВ-ЦВ. Так, нами впервые было показано наличие иммунодоминирования (иерархии иммунного ответа) среди В-клеточных эпитопов поверхностных белков РСВ. Изучение иммунодоминирования при РСВИ ограничивается несколькими работами, в которых анализируется иерархия ответа СБ4+- или СБ8+-лимфоцитов на Т-клеточные эпитопы белков РСВ в модельных экспериментах. Проделанная нами работа является пионерской в области изучения иммунодоминирования среди В-клеточных эпитопов РСВ у инфицированных людей.
Было показано, что при первичной РСВИ независимо от тяжести заболевания сероконверсии АТ, направленных к эпитопам Р^Р12, 0-Т15 и 0-Н13, выявляли с одинаковой частотой. В отличие от этого у пациентов старших возрастных групп с повторными РСВИ наблюдалась определенная иерархия иммунного ответа, которая зависела от характера заболевания. Так, частота конверсий АТ к Р^Р12 была значительно выше, а к 0-Н13, наоборот, ниже при осложненном течении инфекции по сравнению с неосложненным. При этом активность специфичных к 0-Т15, не зависела от тяжести РСВИ (см. рисунок).
Иерархию иммунодоминирования среди В-клеточных антигенных детерминант поверхностных белков РСВ, наблюдаемую при повторном заболевании, можно схематиче-
Дети с первичной РСВИ
Пациенты с повторной РСВИ
>s s о а а> m х
S
о
Q.
CD О
Я I-
о
I-
о л т
90 80 70 60 50 Н 40 ЗОН 20 10 0
Неосложненное течение л=18
H3F-SP12
Осложненное (СЛТ, ООБ) течение п=15
ÜG-T15
Неосложненное течение п=69
[ÜG-H13
р=0,008
р=0,0007
Осложненное
течение (СЛТ, ООБ, ОП) п=42
] PCB-IgG
Изменение реагирования IgG, специфичных к иммунодоминантным эпитопам F- и G-белка РСВ, в зависимости от характера РСВИ.
В группу "пациенты с повторной РСВИ" объединены дети старшего возраста и взрослые пациенты в связи с практически одинаковыми показателями частоты сероконверсий IgG, специфичных ко всем анализируемым вирусным антигенным детерминантам.
ски представить следующим образом: эффективность ответа на эпитопы G-H13 > G-T15 > spi2 - при неосложненной РСВИ, sp12 = G-T15 > G-H13 - при осложненном течении инфекции.
В отличие от СП-специфичных АТ ответ IgG к РСВ-ЦВ, определяемый по результатам ИФА, не зависел от клинического течения РСВИ (см. рисунок). По-видимому, различия, касающиеся отдельных эпитопов, нивелируются при использовании в качестве антигена сложной смеси антигенных детерминант, представленных в составе цельных вирусных частиц.
Полученные результаты указывают на то, что формирование определенной иерархии ответа на анализируемые эпитопы поверхностных гликопротеинов РСВ происходит только при повторных эпизодах РСВИ, т. е. является результатом активности вирусспецифических В-клеток памяти, поскольку у детей с первичными заболеваниями в условиях отсутствия иммунологической памяти этого явления не наблюдалось. Сопоставление с данными литературы показало общность некоторых закономерностей иммунодоминирования В- и T-клеточных эпитопов РСВ. Так, в экспериментах на животных было показано, что иерархия ответа CD4+-T-клеток на эпитопы F-белка РСВ различна при первичной и повторной иммунизации. Предполагается, что одной из причин могут быть различия в представлении вирусных АГ иммунокомпетентным клеткам. При первичной РСВИ антигены презентируются преимущественно дендритными клетками, в то время как при повторном ответе T-клетки памяти активируются также и другими антигенпрезентирующими клетками (макрофагами, В-клетками) [3].
Поскольку наблюдаемая нами картина иммунодоминиро-вания изменялась при осложненном течении заболевания по сравнению с таковой при неосложненном, можно предполо-
жить, что одним из факторов формирования иерархии иммунного ответа на В-клеточные вирусные детерминанты могут быть различия в составе воспалительной среды в очаге поражения. Известно, что тяжелое течение РСВИ отличается от неосложненного дисбалансом синтеза ТЫЛЪ2-факторов со сдвигом в сторону повышенной секреции Th2-зависимых медиаторов (ИЛ 4, 5, 10, 11, 13), обусловливающих иммунопатологические проявления (гиперреактивность бронхов, легочную эозинофилию, бронхообструкцию), при одновременном снижении активности ТЫ-регулируемых факторов (интерферон-у (ИФН-у) и ИЛ-12) [4]. В экспериментах на животных показано, что некоторые цито-кины (ИФН-у, ИЛ-12) могут модулировать степень реагирования Т-хелперов на некоторые (не все) антигенные детерминанты белков [5], что отражается на уровне синтеза Т-зависимых IgG, специфичных к этим эпи-топам.
Заключение. При использовании ИФТС на основе СП было установлено, что имму-ногенность функционально значимых эпи-топов F- и G-белков РСВ увеличивается с возрастом, но является достаточно низкой как у маленьких детей с первичной РСВИ, так и при повторных заболеваниях у пациентов старшего возраста.
Впервые было показано наличие иммунодоминирова-ния среди В-клеточных эпитопов поверхностных гликопро-теинов РСВ у пациентов с повторными (но не первичными) РСВИ. Иерархия эпитоп-специфичного иммунного ответа при осложненном течении заболевания отличается от таковой при неосложненном.
ЛИТЕРАТУРА
1. Кривицкая В. З., Соминина А. А., Власов Г. П. и др. // Вопр. вирусол. - 2004. - Т. 49, № 4. - С. 25-29.
2. Кривицкая В. З., Сверлова М. В., Суховецкая В. Ф. и др. // Мед. иммунол. - 2008. - Т. 10, № 2-3. - С. 229-238.
3. Castilow E. M., VargaS. M. // Future Virol. - 2008. - Vol. 3, N 5. - P. 445-454.
4. Oshansky C. M., Zhang W., Moore E., Tripp R. A. // Future Microbiol. - 2009. - Vol. 4. - P. 279-297.
5. Peter K., Brunda M. J., Corradin G. // J. Immunol. - 2002. - Vol. 169, N 1. - P. 63-67.
6. Plotnicky-GilquinH., Cyblat-ChanalD., Aubry J. P. et al. // J. Virol.
- 2002. - Vol. 76, N 20. - P. 10203-10210.
7. Polack F. P., TengM. N., Collins P. L. et al. // J. Exp. Med. - 2002. -Vol. 196, N 6. - P. 859-865.
8. Power U. F., Plotnicky-Gilquin H., Goetsch L. et al. // Vaccine. -2001. - Vol. 19, N 17-19. - P. 2345-2351.
9. TrudelM., Nadon F., Seguin C. et al. // J. Gen. Virol. - 1987. - Vol. 68. - P. 2273-2280.
10. Varga S. M., Wissinger E. L., Braciale T. J. // J. Immunol. - 2000. -Vol. 165, N 11. - P. 6487-6495.
11. Wang E., Sun X., Qian Y. et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun.
- 2003. - Vol. 302, N 3. - P. 469-475.
Поступила 28.09.11
