CC BY
47
Original articles
Оригинальные статьи
Russian Journal of Infection and Immunity = Infektsiya i immunitet Инфекция и иммунитет
2016, vol. 6, no. 1, pp. 55-66 2016, Т. 6, № 1, с. 55-66
ИЗОТИПИЧЕСКАЯ СТРУКТУРА ВИРУССПЕЦИФИЧЕСКОГО СИСТЕМНОГО ГУМОРАЛЬНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА У ВЗРОСЛЫХ ПАЦИЕНТОВ, ГОСПИТАЛИЗИРОВАННЫХ С ГРИППОМ А
В.З. Кривицкая1, А.А. Васильева1, Е.М. Войцеховская1, Е.Р. Петрова1, М.М. Писарева1, Ж.В. Бузицкая1, Е.А. Елпаева1, А.А. Го1, Л.В. Волощук1, Н.И. Львов2, Т.Д. Смирнова1, А.А. Соминина1
1ФГБУНИИ гриппа МЗ РФ, Санкт-Петербург, Россия
2 ФГБВОУВПО Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова МО РФ, Санкт-Петербург, Россия
Резюме. Целью работы являлся сравнительный анализ изотипической структуры специфического противовирусного системного гуморального иммунного ответа у госпитализированных пациентов с гриппом, вызванным вирусами A(H3N2) или A(H1N1), включая A(H1N1)pdm09. Методом ИФА были проанализированы парные сыворотки крови, полученные в острый и реконвалесцентный периоды заболевания от 109 взрослых пациентов в возрасте от 18 до 67 лет, перенесших лабораторно установленный грипп А. В качестве антигенов для сенсибилизации твердой фазы в ИФА использовали очищенные фракции поверхностных гликопротеи-нов вирусов гриппа А различных субтипов, содержащие гемагглютинин и нейраминидазу. Отсутствие консервативных типоспецифичных внутренних белков в антигенном материале позволило проводить в ИФА субтиповую дифференцировку грипп-специфичных антител. Независимо от субтипа вируса гриппа А, вызвавшего заболевание, наиболее выраженный ответ наблюдали со стороны субтипоспецифичных IgG1 (70— 90% сероконверсий). Впервые было показано, что характерной чертой иммунного ответа на вирус гриппа A(H1N1)pdm09 как при первичном, так и при повторном заболеваниях, является низкая активность вирусин-дуцированных IgG2 (6—9% сероконверсий). В группах пациентов, неоднократно перенесших «сезонный» грипп в 2007—2008 гг. или грипп A(H3N2) в 2012—2014 гг., частота сероконверсий IgG2 составила 40—59% (р < 0,05). Реакция вирусспецифичных IgG3 также была выражена слабее у пациентов с гриппом A(H1N1)pdm09 (29—44% сероконверсий), чем у пациентов, перенесших грипп A(H1N1) или A(H3N2) (65 и 56% сероконверсий соответственно). При гриппе A(H1N1)pdm09 в реакции микронейтрализации были выявлены значимо более низкие показатели среднегеометрических титров вируснейтрализующих антител в фазе реконвалесценции (1/28 и 1/103 при первичном и повторном заболеваниях), чем у пациентов, переболевших гриппом A(H1N1) или гриппом A(H3N2) (СГТ составили 1/594 и 1/378 соответственно). Показано, что поверхностные глико-
Адрес для переписки:
Кривицкая Вера Зорьевна
197376, Россия, Санкт-Петербург, ул. Проф. Попова, 15/17, ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ.
Тел./факс: (812) 499-15-72 (служебн.); 8 (921) 886-37-95 (моб.). E-mail: vera.kriv@influenza.spb.ru
Библиографическое описание:
Кривицкая В.З., Васильева А.А., Войцеховская Е.М., Петрова Е.Р., Писарева М.М., Бузицкая Ж.В., Елпаева Е.А., Го А.А., Волощук Л.В., Львов Н.И., Смирнова Т.Д., Соминина А.А. Изотипическая структура вирусспецифического системного гуморального иммунного ответа у взрослых пациентов, госпитализированных с гриппом А // Инфекция и иммунитет. 2016. Т. 6, № 1. С. 55-66. doi: 10.15789/2220-76192016-1-55-66
© Кривицкая В.З. и соавт., 2016
Contacts:
Vera Z. Krivitskaya
197376, Russian Federation, St. Petersburg, Professor Popov str., 15/17, Research Institute of Influenza.
Phone/fax: (812) 499-15-72 (office); +7 (921) 886-37-95 (mobile). E-mail: vera.kriv@influenza.spb.ru
Citation:
Krivitskaya V.Z., Vasilieva A.A., Voytsekhovskaya E.M., Petrova E.R., Pisareva M.M., Buzitskaya Zh.V., Elpaeva E.A., Go A.A., Voloshchuk L.V., Lvov N.I., Smirnova T.D., Sominina A.A. Virus-specific humoral immune response isotypic structure in adult patients hospitalized with influenza A // Russian Journal of Infection and Immunity = Infektsiya i immunitet, 2016, vol. 6, no. 1, pp. 55-66. doi: 10.15789/2220-7619-2016-1-55-66
DOI: http://dx.doi.org/10.15789/2220-7619-2016-1-55-66
протеины вирусов гриппа А могут выступать в качестве аллергенов. Частоты сероконверсий вирусспецифи-ческих IgE была сопоставима во всех группах пациентов, достигая 25—45%. Выявлена высокая активность вирусспецифических сывороточных IgA в группах пациентов, перенесших грипп A(H3N2) или A(H 1N1)pdm09 (60—79% сероконверсий). Таким образом, изучение активности вирусспецифичных иммуноглобулинов различных изотипов позволяет получить важную информацию о формировании адаптивного противовирусного иммунного ответа при гриппе А, оценить вклад его протективной и иммунопатогенной составляющих в патогенез заболевания.
Ключевые слова: иммуноферментный анализ, грипп А(ЮШ), грипп A(H1N1)pdm09, гуморальный противовирусный иммунитет, изотипы субтипоспецифических иммуноглобулинов, нейтрализующие антитела, взрослые пациенты.
VIRUS-SPECIFIC HUMORAL IMMUNE RESPONSE ISOTYPIC STRUCTURE IN ADULT PATIENTS HOSPITALIZED WITH INFLUENZA A
Krivitskaya V.Z.a, Vasilieva A.A.a, Voytsekhovskaya E.M.a, Petrova E.R.a, Pisareva M.M.a, Buzitskaya Zh.V.a, Elpaeva E.A.a, Go A.A.a, Voloshchuk L.V.a, Lvov N.I.b, Smirnova T.D.a, Sominina A.A.a
a Research Institute of Influenza, St. Petersburg, Russian Federation b Kirov Military Medical Academy, St. Petersburg, Russian Federation
Abstract. The aim of this investigation was a comparative analysis of isotypic structure of specific antiviral systemic humoral immune response in hospitalized patients with influenza caused by virus A(H3N2) or A(H1N1), including the A(H1N1)pdm09. Paired acute and convalescent phase sera from 109 adult patients aged 18 to 67 years with laboratory-confirmed influenza A were analyzed by ELISA. Purified surface glycoproteins of influenza A viruses of different subtypes containing the hemagglutinin and neuraminidase were used as antigen for sensitization of plates in ELISA.The absence of type-specific conserved internal proteins in antigenic material allowed to carry out a subtype-specific differentiation of antibodies against influenza viruses in ELISA. Regardless of the subtype of influenza A viruses caused the disease, the most pronounced response was observed by subtype-specific IgG1 (70—90% of seroconversions). It has been shown for the first time that low activity of virus-induced IgG2 (6—9% of seroconversions) is a peculiarity of the immune response both to primary or recurrent infections with A(H1N1)pdm09. In patients repeatedly suffered by «seasonal» influenza A(H1N1) in 2007/2008 or influenza A(H3N2) in 2012-2014 IgG2 seroconversion's rates were 40-59% (р < 0,05). Reaction virus-specific IgG3 was also weaker in patients with influenza A(H1N1)pdm09 (29-44% of seroconversions) than in subjects with influenza A(H1N1) or A(H3N2) (65% and 56% of seroconversions, respectively). Geometric mean titers of virus neutralizing antibodies identified during recovery phase in patients with primary and secondary influenza A(H1N1)pdm09 (1/28 and 1/103, respectively) were significantly lower than in patients recovered from influenza A(H1N1) or A(H3N2) (GMT were 1/594 and 1/378, respectively). It was shown that the surface glycoproteins of influenza A viruses may be an allergens. Virus-specific IgE seroconversion rates were comparable in all groups reaching 25-45%. The high activity of virus-induced serum IgA was detected in patients with influenza A(H3N2) or A(H1N1)pdm09 (60-79% of seroconversions). Thus, study of virus-specific activity of various immunoglobulin isotypes provides important information about the formation of adaptive antiviral immune resp onse to influenza A viruses, and also estimate the contribution of its protective and immunopathogenic components to pathogenesis of the disease.
Key words: ELISA, influenza A(H3N2), influenza A(H1N1)pdm09, humoral antiviral immunity, isotypes of subtype-specific immunoglobulins, virus neutralizing antibody, adult patients.
Известно, что течение инфекции и характер иммунного ответа на нее во многом определяется типом цитокинной регуляции. Поскольку синтез иммуноглобулинов различных изотипов регулируется определенными факторами, по характеру реагирования вирусспецифичных антител (АТ) можно до определенной степени судить об особенностях регуля-торных механизмов, определяющих патогенез заболевания. Так, у человека ключевым регулятором активности антиген-специфических 1§О1, 1§О2 и 1§О3 является интерферон-гамма (ТБНу), синтез которого обеспечивают
главным образом ТЫ-клетки [5, 27]. ТИ2-опосредованные медиаторы регулируют образование ^Б (1Ь-4, 1Ь-13), ^О4 (1Ь-4, 1Ь-10, 1Ь-13) [7] и ^А (ТОБ-р, 1Ь-4, 1Ь-5) [23].
Помимо отличий в регуляции синтеза, различных изотипов функционально неоднородны. Вирусспецифичные 1§О1, 1§О2, 1§О3 человека оказывают выраженное нейтрализующее действие. 1§О1 и 1§О3 обычно синтезируются в ответ на белковую составляющую антигенов. 1§О2 помимо белковой части антигена взаимодействуют также с его полисахаридной составляющей. Аффинность связи с комплементом
распределяется следующим образом: >
> 1§02. практически не связывается
с комплементом [26]. Синтез АГ-специфичных 1§С4 и четко ассоциирован у людей с аллергией на определенный антиген [8].
До недавнего времени считалось, что наиболее важные характеристики АТ, к которым относятся специфичность и аффинность, зависят исключительно от свойств вариабельного (V) региона молекулы в то время как структура константного (С) региона определяет изо-тип АТ и такие их эффекторные функции, как способность активировать комплемент и Бе-зависимую клеточную цитотоксичность. Тем не менее, в последнее десятилетие появились данные о том, что тонкая специфичность АТ (различия во взаимодействии АТ, обладающих идентичным ^регионом, с антигеном) зависит от изотипа Показано, что различия в структуре СН-домена могут обуславливать вариации в конформации паратопа антител вследствие изменений в микроокружении связующего сайта (электростатические и гидрофобные связи, ионная сила и рН). Эти изменения, в свою очередь, могут оказывать влияние на характер взаимодействия между антигеном (АГ) и АТ. Следовательно, характер и эффективность иммунного ответа на воздействие АГ, включая вирусы, может зависеть не только от специфичности и авидности АТ, определяемой структурой БаЪ-фрагмента, но и от их изотипа [25].
Вместе с тем, роль различных изотипов при вирусных инфекциях изучена недостаточно. Информация о реакции АТ различных изотипов у больных гриппом ограничивается немногочисленными исследованиями.
В этой связи целью настоящей работы являлся сравнительный анализ изотипической структуры специфического противовирусного системного гуморального иммунного ответа у пациентов, перенесших грипп, вызванный вирусами А(И3№) и А(И1№), включая А(ИШ1)рёш09.
Материалы и методы
Клинические материалы. Были проанализированы парные сыворотки крови, полученные в острый (2—4 день) и реконвалесцентный (7— 15 день) периоды заболевания от 109 взрослых пациентов в возрасте от 18 до 67 лет с лабора-торно установленным гриппом легкой и средней тяжести, проходивших лечение на отделении респираторных вирусных инфекций у взрослых ФГБУ НИИ гриппа, а также в Военно-медицинской академии имени С.М. Ки-
рова. Группы сравнения составили 20 человек с гриппом A(H1N1), обследованные в 2007—
2008 гг.; 50 пациентов, болевшие гриппом A(H1N1)pdm09 с ноября 2009 г. по март 2014 г., а также 39 человек, перенесшие грипп A(H3N2) в 2012—2014 гг. Средний возраст в группах составлял 20,2; 31,6 и 25,1 лет соответственно.
Диагноз гриппа А, а также субтип вируса, вызвавшего заболевание, были установлены на основании данных ПЦР при анализе назальных мазков с использованием наборов «АмплиСенс® Influenza virus A/B-FL», «АмплиСенс® Influenza virus A type FL» и «АмплиСенс® Influenza virus A/H1—swine-FL» («Ин-терлабсервис», Москва), по выявлению се-роконверсий противогриппозных АТ в РТГА и/или прироста субтипоспецифичных IgG (без разделения на изотипы) при использовании ИФА-тест-систем производства ООО «Предприятие по производству диагностических препаратов» (Санкт-Петербург).
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) была проведена в соответствии с методическими указаниями [3] с использованием диагнос-тикумов производства ООО «Предприятие по производству диагностических препаратов» (Санкт-Петербург). Во избежание неспецифических реакций, сыворотки крови предварительно подвергали обработке рецептор-разрушающим энзимом (Receptor Destroying Enzyme, RDE) производства Denka Seiken Co., LTD (Токио, Япония).
ИФА для детекции грипп-специфичных иммуноглобулинов различных изотипов в сыворотках крови. В качестве антигенов (АГ) для сенсибилизации твердой фазы использовали очищенные в сахарозном градиенте фракции поверхностных гликопротеинов (ГП) вирусов гриппа А, содержащие гемагглютинин и ней-раминидазу. Отсутствие консервативных ти-поспецифичных внутренних белков в полученном антигенном материале позволило проводить в ИФА субтиповую дифференцировку грипп-специфичных АТ.
Культивирование вирусов гриппа А [штаммы A/Brisbane/59/2007 (H1N1), A/California/07/
2009 (H1N1)pdm09, А/Texas/50/2012 (H3N2)] в аллантоисной полости куриных эмбрионов, их очистка и концентрация, а также получение ГП-фракций из цельновирионных суспензий с использованием неионного детергента Octyl-P-D-glucopyranoside (ОГ) («Sigma», США) проводили согласно описанному ранее [1].
Очищенными ГП (2 мкг/мл), разведенными карбонатно-бикарбонатным буфером, рН 9,5, сенсибилизировали планшеты (ОАО «Фирма Медполимер», Санкт-Петербург) в течение
18 ч при 4°С, после чего вносили анализируемые сыворотки, разведенные 0,01М фосфатно-солевым буфером (ФСБ), рН 7,2, с добавлением 5% обезжиренного молока (ФСБ-М). Планшеты инкубировали 18 ч при 4°С. Сыворотки исследовали в одном разведении, предварительно определенном как оптимальное: 1/200 (IgG1 и IgA), 1/20 (IgG2, IgG4, IgE), 1/40 (IgG3). Связавшиеся с антигеном АТ детектировали с помощью пероксидазных конъюгатов моно-клональных АТ (МКА), специфичных к соответствующим изотипам Ig человека (НПО «Полигност», Санкт-Петербург), разведенных до рабочих концентраций ФСБ-М. После инкубации в течение 1 ч при 37°С пероксидазную реакцию проявляли добавлением субстратной смеси, содержащей 0,1 мг/мл 3,3',5,5'-тетра-метилбензидина (ТМБ) и 0,02% Н2О2 в аце-тат-цитратном буфере, рН 5,0. После остановки реакции 2N H2SO4 измеряли оптическую плотность на фотометре Labsystems Multiskan (Thermo Electron Corp., США) при длине волны 450 нм (OD450).
Сероконверсии в парных сыворотках считали доказанными, если показатель OD450 для пробы, полученной в реконвалесцентный период заболевания, превышал OD450 для сыворотки, взятой в острой фазе гриппа, не менее чем на 0,25. В предварительных экспериментах с титрованием антигриппозных сывороток в ИФА было установлено, что этому показателю соответствуют 4-кратные и более приросты титров АТ в РТГА.
Оценка нейтрализующей активности антител в реакции микронейтрализации (МН) была проведена в соответствии с предложенной ранее модификацией метода [1]. Для анализа использовали сыворотки крови, обработанные RDE и прогретые при 56°С в течение 30 мин. Ингибирование синтеза внутриклеточных вирусных белков в присутствии АТ учитывали в микрокультуральном ИФА с использованием пероксидазного конъюгата МКА, взаимодействующих с NP-белком вирусов гриппа типа А (независимо от субтипа). МКА были получены в лаборатории биотехнологии диагностических препаратов НИИ гриппа.
Статистическая обработка результатов проводилась с использованием компьютерных программ «StatstDirect» и «Statistica 10». Графически уровни АТ (OD450) представлены в виде квантилей. При множественных попарных сравнениях независимых выборок на одном массиве данных (уровень Ig различных изо-типов в сравниваемых группах) использовали критерий Манна—Уитни с поправкой Бонфер-рони на множественность сравнения после
проведения рангового дисперсионного анализа с применением Н-критерия Крускела—Уол-лиса. При сравнении выборочных долей (частоты выявления с ер окон версий) применяли точный критерий Фишера. Мерой связи между двумя качественными признаками служил коэффициента ассоциации Пирсона (гА). Проверяемые критериями нулевые гипотезы отвергались при уровне значимости р < 0,05.
Результаты
Известно, что механизмы противовирусной защиты, так же как и иммунопатологии, в том числе обусловленные действием АТ, различны при первичном инфицировании и повторных эпизодах заболевания, что определяется особенностью формирования иммунного ответа на новый для организма патоген, а также наличием (или отсутствием) иммунологической памяти по отношению к данному агенту. В этой связи обследованные пациенты были разделены на группы в зависимости от того, являлась ли гриппозная инфекция первичной или уже повторной.
Включение пациентов в ту или иную групп у производи лось с у четом данных, представленных в литературе. Так, исследование динамики синтеза АТ у взрослых волонтеров, привитых вакциной против нового патогена А(Н1№)рёт09, показало, что после первой инъекции вирусспецифичные АТ появлялись в крови не раннее, чем через 3—5 дней. У большинства испытуемых сероконверсии наблюдались лишь к 10—14 дню поствакцинации [24]. В противоположность этому, у взрослых больных гриппом А(Н3№), которые в течение жизни встречались с данным патогеном не единожды, содержание в крови Н3-специфичных ^О различных изотипов, выявленное в ИФА уже в первые дни заболевания, было достаточно велико. Вследствие ежегодных эпидемий, в сыворотках здоровых взрослых людей уровни всех 4-х изоти-пов Н3-специфичных ^О также значительно превышали отрицательные значения [11, 13]. При этом даже после первичного заболевания гриппом у большинства взрослых людей АТ, взаимодействующие с поверхностными гли-копротеинами вируса, детектировали в крови на достаточно высоком уровне в течение длительного времени (до 3 лет) [21].
С учетом вышеприведенных данных, первично инфицированными с большой степенью вероятности можно считать пациентов, в крови которых в первые 3 дня заболевания методом ИФА не было обнаружено ^О, взаимодей-
ствующих с поверхностными белками вируса гриппа анализируемого субтипа. Показателем повторного инфицирования служило выявление в сыворотках, полученных в первые дни заболевания, хотя бы одного из изотипов суб-типоспецифичных 1яО.
С целью выявления сывороток, положительных по содержанию вирусспецифичных АТ, были определены пороговые значения. В условиях нашей постановки ИФА сыворотки крови, для которых показатели ОD450 варьировали в пределах 0,15—0,22 в зависимос-
ти от изотипа АТ, были охарактеризованы как негативные. Такие показатели, принятые за отрицательный контроль (ОD450 К-), были получены нами ранее при анализе содержания грипп-специфичных АТ в сыворотках крови детей возрастной группы 1-2 года, еще не болевших гриппом. Положительными по содержанию вирусспецифических АТ считали сыворотки, в которых значения ОD450 при рабочем разведении проб превышали рассчитанное для каждого изотипа пороговое значение (2 х ОD450 К-), что соответствовало «правилу трех сигм».
ор о р ор ор 1дв1 1дв2 1двЗ 1дв4
ор ор ор ор 1дв1 1дв2 1двЗ 1дй4
Рисунок 1. Изменение содержания иммуноглобулинов различных изотипов, специфичных к поверхностным гликопротеинам вируса гриппа А, в сыворотках взрослых пациентов, переболевших гриппом А
Примечания. 1) Лица, переболевшие гриппом, вызванным вирусами гриппа А(Н1Ж), циркулировавшими до 2009 г. (а)
или А(H3N2) (б). 2) Пациенты, первично (в) и повторно (г) инфицированные вирусом гриппа А(Н1Ж)рСт09.
3) * «о» — пробы, полученные в острый период заболевания; ** «р» — пробы, полученные в фазе реконвалесценции.
Примечание. * — учитывали сероконверсии антител, специфичных к вирусу гриппа, являющегося этиологическим фактором заболевания; н/а — не анализировано.
ТАБЛИЦА 1. ИЗОТИПИЧЕСКАЯ СТРУКТУРА СИСТЕМНОГО ГУМОРАЛЬНОГО ВИРУССПЕЦИФИЧЕСКОГО ИММУННОГО ОТВЕТА У ВЗРОСЛЫХ ПАЦИЕНТОВ, ПЕРЕБОЛЕВШИХ ГРИППОМ А
Группа обследованных Характер заболевания Время проведения обследования Численность группы Частота конверсий грипп-специфических антител (%) (по данным ИФА)*
ДО1 ^2 ^3 ^4 ^А
Пациенты, переболевшие гриппом А(Н1Ж) повторное 2007-2008 гг. 20 70 40 65 40 45 н/а
Пациенты, переболевшие гриппом A(H3N2) повторное 2012-2014 гг. 39 90 59 56 13 44 79
Пациенты, переболевшие гриппом А(Н1Ж)р^09 первичное 2009-2013 гг. 34 83 9 29 15 35 68
Пациенты, переболевшие гриппом А(Н1Ж)р^09 повторное 2011-2014 гг. 16 75 6 44 50 25 60
Исходя из предложенных критериев, все переболевшие «эпидемическим» гриппом А(Н1№) или А(Н3№) были отнесены к повторно инфицированным, поскольку у них содержание хотя бы одного из изотипов грипп-специфичных 1§О, выявленное в крови в ранний период заболевания, превышал пороговое значение (рис. 1а и 1б). Пациенты с гриппом А(НШ1)рёт09 были разделены на 2 группы: первично и повторно инфицированные (рис. 1в и 1г).
В ходе исследований прежде всего было проанализировано образование ТЫ-регулируемых АТ (1§О1, 1§О2 и 1§О3), специфичных к поверхностным ГП вирусов гриппа А, поскольку в модельных экспериментах на мышах, инфицированных вирусом гриппа [19], а также в результате клинических испытаний гриппозных
вакцин [20] было показано, что протективное противовирусное, в том числе нейтрализующее, действие сывороточных АТ обусловлено, главным образом, этими изотипами.
Было установлено, что наиболее выраженный ответ у пациентов всех групп наблюдался со стороны 1§О1: частота сероконверсий варьировала в пределах 70—90%. Частота приростов субтипоспецифичных 1§О2 и 1§О3 уступала этим показателям. При этом, в отличие от 1§О1, наблюдались выраженные межгрупповые отличия. У переболевших гриппом, вызванным вирусами А(НШ1), циркулировавшими до 2009 г., а также А(Н3№), частота сероконверсий превышала показатели, полученные в группе больных гриппом А(НШ1) рёт09 как при первичном (р < 0,01 для 1§О2 и р < 0,025 для 1§О3), так и при повторном забо-
ТАБЛИЦА 2. ВИРУСНЕЙТРАЛИЗУЮЩАЯ АКТИВНОСТЬ АНТИТЕЛ КРОВИ У ВЗРОСЛЫХ ПАЦИЕНТОВ, ПЕРЕБОЛЕВШИХ ГРИППОМ А (ПО ДАННЫМ РЕАКЦИИ МИКРОНЕЙТРАЛИЗАЦИИ)
Группа обследованных Характер заболевания Время проведения обследования Численность группы Вируснейтрализующая активность антител
Частота конверсий Средние геометрические титры (СГТ)антител*
Пациенты, переболевшие гриппом А(Н1Ж) повторное 2007-2008 гг. 17 88 83/594
Пациенты, переболевшие гриппом A(H3N2) повторное 2012-2014 гг. 24 83 24/378
Пациенты, переболевшие гриппом А(Н1Ж)р^09 первичное 2009-2013 гг. 17 53 7/28
Пациенты, переболевшие гриппом А(Н1Ж)р^09 повторное 2011-2014 гг. 16 88 10/103
Примечание. * Представлены обратные величины СГТ.
леваниях (в данном случае значимые отличия получены только для 1§О2 — р < 0,025) (табл. 1).
Следует подчеркнуть, что при гриппе А(НШ1) рёт09 реакция 1§О2 при повторном заболевании оставалась столь же слабой, как и в случае первичного инфицирования (одинаково низкие показатели частоты конверсий и содержания в крови в стадии реконвалесцен-ции (табл. 1, рис. 1в и 1г). В отличие от этого, активность 1§О3 при этом заболевании была выше у повторно инфицированных: средне-групповое содержание превышало (р = 0,03) показатели, полученные для группы лиц с первичным гриппом А(Н1№)рёт09 (рис. 1в и 1г). Частота сероконверсий также была выше, хотя и недостоверно (44 против 29%), у лиц, повторно переболевших пандемическим гриппом (табл. 1).
Таким образом, при гриппе А(НШ1)рёт09 реакция вирусспецифичных 1§О3 и, особенно 1§О2, выражена значительно слабее, чем у пациентов, перенесших грипп А(НШ1) или А(Н3Ш).
Оценка нейтрализующей активности АТ крови (табл. 2) показала, что при повторных эпизодах гриппа, вызванных вирусами А(НШ1), циркулирующими до 2009 г., или А(Н3№), частота сероконверсий вируснейтра-лизующих АТ была сопоставимо высока (83— 88%). Для значений среднегеометрических титров (СГТ) нейтрализующих антител в этих группах также не было выявлено статистически значимых отличий. С учетом этих данных сопоставимые показатели частоты сероконверсий 1§О1, 1§О2 и 1§О3 позволяют предположить, что вируснейтрализующая активность в этих двух группах пациентов реализуется за счет функционирования всех трех данных субтипов 1§О.
Для больных гриппом А(НШ1)рёт09 наблюдалась принципиально иная картина. В группе повторно переболевших частота кон-версий нейтрализующих АТ была столь же высока, как и у больных гриппом А(НШ1) или А(Н3№). Однако СГТ нейтрализующих АТ при этом были значительно ниже (р < 0,01).
При первичном заболевании гриппом А(НШ1)рёт09 частота конверсий, также как и СГТ нейтрализующих АТ, были ниже показателей, полученных для пациентов других групп (р < 0,01), включая повторно переболевших пандемическим гриппом. Следует подчеркнуть, что у первично заболевших содержание нейтрализующих АТ в крови в период реконвалесценции было почти в 2 раза ниже показателя СГТ 1:40, принятого в качестве протективного.
Наряду с ТЫ -регулируемым гуморальным иммунным ответом, у больных была проведена оценка активности грипп-специфичных и 1§О4, синтез которых регулируется ТИ2-зависимыми факторами. Роль данных изо-типов в патогенезе вирусных заболеваний, включая грипп, изучена крайне слабо. Основные представления об их функции получены в результате исследования причин возникновения атопических состояний, поскольку синтез аллерген-специфичных и 1§О4 связан с иммунопатологическими механизмами, наблюдаемыми при аллергических заболеваниях. Известно, что является причиной гиперчувствительности немедленного типа [8]. 1§О4, по некоторым данным, — наоборот, играют антисенсибилизирующую, блокирующую по отношению к действию роль [12].
В настоящей работе впервые была проведена сравнительная оценка ответа вирусспеци-фических ^Б и 1§О4 у пациентов с гриппом различной этиологии. При этом мы попробовали применить подход, предложенный некоторыми исследователями для понимания АТ-зависимых иммунопатологических механизмов, наблюдаемых при аллергических заболеваниях. Так, показано, что при атопических состояниях, в зависимости от структуры и нагрузки антигена, состава цитокинной среды в месте воспаления, индивидуальных особенностей иммунной системы пациента соотношение синтезируемых аллерген-специфических ^Б и 1§О4 может существенно меняться, что отражается на клинической картине заболевания. В этой связи сопоставление активности и 1§О4 (соотношение содержания 1§Е/1§О4 в сыворотках крови) было предложено рассматривать как показатель возможного сенсибилизирующего или антисенсибилизи-рующего воздействия антигена на иммунную систему хозяина [16].
В представленной работе приросты грипп-специфических ^Б и 1§О4 наблюдали с различной частотой среди пациентов всех рассмотренных групп (табл. 1), что свидетельствует о том, что поверхностные ГП вирусов гриппа А могут являться аллергенами. Для частоты се-роконверсий (25—45%) не было показано статистически значимых межгрупповых отличий. В отличие от этого, интенсивность реагирования 1§О4 у пациентов, перенесших грипп А(Н3№) или первично инфицированных вирусом А(Н1№)рёт09, была значимо ниже (13—15% конверсий), чем у больных, повторно переболевших сезонным или пандемическим гриппом А(НШ1) (40—50% сероконверсий, р = 0,02).
Показатели соотношения частоты конвер-сий 1§Б/1§04 внутри субтипа А(Н1) составили 2,4 и 0,5 в группе больных с первичным и повторным гриппом А(НШ1)рёш09 и 1,1 у пациентов с заболеванием, вызванным циркулирующими ранее «сезонными» вирусами А(НШ1). При гриппе А(Н3№) этот показатель был существенно выше, составляя 3,4. Так, в группе переболевших гриппом А(Н3№) была показана достаточно высокая частота сероконверсий (44%) при незначительном показателе приростов 1§С4 (13%) (табл. 1).
Таким образом, при условии принятия положения об антисенсибилизирующей роли вирусспецифических 1§04, аллергизирующее действие грипп-специфических на иммунную систему пациентов, не скомпенсированное синтезом блокирующих аллергию 1§04, достаточно высоко при первичном заболевании гриппом А(НШ1)рёш09, но снижается при последующих эпизодах заражения этим вирусом. При гриппе А(Н3№) аллергенная ви-русиндуцированная составляющая гуморального иммунного ответа наиболее выражена. Показателем этого, в дополнение к высокому соотношению активности 1§Б/1§04, является также чрезвычайно высокое содержание ^Б в сыворотках, полученных как в острый, так и в реконвалесцентный период заболевания (рис. 1б).
Ранее, при обследовании нами детей с ре-спираторно-синцитиальной вирусной (РСВ) инфекцией, между возникновением у пациентов аллергических проявлений (стеноза гортани или бронхообструкции) и высоким содержанием сывороточного анти-РСВ ^Б была выявлена прямая связь. В противоположность этому, связь с активностью РСВ-специфичных 1§С4 носила обратный характер [2], что согласуется с концепцией об антиаллергенной роли вирусспецифических 1§С4.
В отличие от этого, у взрослых больных гриппом нам не удалось установить значимых связей между содержанием в крови ^Б или 1§С4 и аллергическими проявлениями, такими, например, как обструкция дыхательных путей. Значения гА Пирсона (гА < 0,1) свидетельствуют об отсутствии сопряженности между анализируемыми признаками.
Помимо ^Б и 1§04, синтез 1§А также регулируется ТИ2-опосредованными факторами. В отличие от секреторного 1§А, противовирусные функции которого хорошо изучены, роль сывороточных АТ этого класса при вирусных заболеваниях во многом неясна. Проведенное нами исследование показало высокую активность вирусспецифичных сывороточных 1§А
у пациентов с гриппом А. Частота сероконвер-сий данного изотипа, взаимодействующих с поверхностными вирусными ГП, была сопоставима в группах пациентов, перенесших грипп А(Н3Ш) или А(НШ1)рёш09 (как при первичном, так и при повторном заболеваниях), варьируя в пределах 60-79% (табл. 1). Однако при сравнимых показателях конверсий, уровень этих АТ в сыворотках, полученных как в острой, так и реконвалесцентной фазах, был значительно выше (р < 0,001) у пациентов, переболевших гриппом А(Н3Н2), по сравнению с больными, инфицированными вирусом А(НШ1)рёш09 как первично, так и повторно (рис. 1б, в, г).
Обсуждение
Представленные данные дополняют результаты немногочисленных работ, посвященных изотипической структуре противогриппозного иммунного ответа. Так, полученные нами данные о том, что у взрослых пациентов, переболевших гриппом А, наиболее выражен ответ со стороны вирусспецифичных 1§01, согласуются с результатами других исследователей [6, 13]. Тем не менее в исследованиях, посвященных роли АТ в патогенезе гриппа, особо подчеркивается важная роль 1§С2. Например показано, что тяжелые случаи гриппа А(НШ1)рёш09 у детей и взрослых ассоциированы со сниженным уровнем 1§С2 в крови как в острый, так и в реконвалесцентный периоды заболевания [10, 28]. Следует, однако, подчеркнуть, что в этих работах анализировали содержание в крови общего, а не вирусспецифичес-кого 1§С2.
Таким образом, проведенное нами исследование впервые показало, что, по сравнению с реакцией, наблюдаемой у больных гриппом А(НШ1) или А(Н3Н2), характерной чертой иммунного ответа на вирус гриппа А(НШ1) рёш09 является низкая активность вирусин-дуцированных субтипоспецифичных 1§С2 как при первичном, так и при повторном заболеваниях. В дополнение к этому, при первичном гриппе А(Н1№)рёш09 снижена также реакция вирусспецифичных 1§03, которая, однако, усиливается при повторных воздействиях патогена.
Предполагаемая причина чрезвычайно низкой активности только одного из ТИ1-регулируемых изотипов иммуноглобулинов (1§С2) у пациентов с гриппом А(НШ1)рёш09 может заключаться в искаженной вирус-инду-цированной цитокинной регуляции. Известно, что образование 1§01, 1§С2 и 1§С3 проис-
ходит в определенной степени независимо друг от друга. Так, действие некоторых регулятор-ных факторов, например, 1Ь-6 и 1Ь-21, на синтез антиген-специфичных 1§О2 значительно отличается от наблюдаемого при образовании других изотипов [14, 17].
Полученные нами данные позволяют предположить, что, несмотря на интенсивный ответ со стороны вирусспецифичных 1§О1 (75 — 83% сероконверсий), сниженная активность 1§О3 (29—44% приростов) и почти полное отсутствие реакции со стороны 1§О2 (6—9% се-роконверсий) может быть одной из причин низкой нейтрализующей активности АТ, наблюдаемой у больных гриппом А(НШ1)рёт09.
В результате проделанной работы впервые была проведена сравнительная оценка реагирования на гриппозную инфекцию ТИ2-зависимых вирусспецифичных ^Б и 1§О4, роль которых в патогенезе вирусных заболеваний изучена крайне слабо.
Известно, что ^Б является причиной гиперчувствительности немедленного типа. При контакте с иммунной системой чувствительных индивидуумов аллергены способны индуцировать синтез АГ-специфичных 1§О4 и ^Б. Взаимодействие мультивалентного аллергена с БаЪ-фрагментами двух молекул ^Б, связанных с высокоаффинными специфическими рецепторами (РсеШ) на поверхности тучной клетки или базофила, приводит к дегрануляции этих клеток и выбросу ряда вазоактивных молекул, таких как гистамин, серотонин, простагландины, лейкотриены. Эти медиаторы увеличивают локальную проницаемость кровеносных сосудов, вызывают сжатие гладкой мускулатуры дыхательных путей, бронхоконстрикцию и создают очаг воспаления. Тучные клетки, активированные ^Б-содержащими иммунными комплексами, продуцируют целый ряд хемокинов (ЯАНТББ, еЛахт, М1Р-1а) и цитокинов (1Ь-3, 1Ь-4, 1Ь-5, 1Ь-6, 1Ь-9, 1Ь-10, 1Ь-13, Т№а и ОМ-СББ), которые обеспечивают приток клеток-эффекторов, ассоциированных с аллергией (Т-клеток, базофилов, эозинофилов, моноцитов, а также В-клеток, продуцирующих ^Б) [8].
В то время как роль ^Б при аллергическом воспалении четко определена, информация о функциях 1§О4 неоднозначна. С одной стороны показано, что эти АТ играют блокирующую толерогенную роль: успешная иммунотерапия аллергических заболеваний приводит к интенсификации синтеза аллерген-специфических 1§О4 и снижению уровня специфических ^Б в крови из-за конкуренции данных двух изотипов за связь с одними и теми же эпитопа-
ми аллергена. Следствием является отсутствие 1§Е-опосредованной активации клеток аллергического воспаления (базофилов и тучных клеток). По данным других авторов, развитие атопии не всегда сопровождается синтезом аллерген-специфических 1§О4, или же его наличие в крови не ассоциировано с антиаллергенным эффектом [12].
Оценке ТИ2-опосредованного вирусспеци-фического гуморального иммунного ответа при гриппе посвящены лишь единичные исследования.
Так, показано, что иммунизация инактиви-рованной или живой вакциной против пандемического гриппа А(НШ1)рёт09 индуцировала у детей и взрослых синтез вирусспецифичес-ких ^Б [22]. У пациентов, инфицированных вирусом гриппа А(НШ1)рёт09, не регистрировали формирования специфических 1§О4 вне зависимости от клинической тяжести заболевания [6]. Тем не менее, у больных гриппом А(Н3№) наблюдали активный ответ вирусспецифичных 1§О4 (до 80% сероконверсий)
[11, 13].
Полученные нами данные свидетельствует о том, что поверхностные ГП вирусов гриппа А(Н3Ш) и А(НШ1), в том числе А(НШ1)рёт09, могут являться аллергенами и индуцировать синтез вирусспецифичных ^Б и/или 1§О4. При этом аллергенная вирусиндуцированная составляющая гуморального иммунного ответа наиболее выражена в группе пациентов, неоднократно инфицированных вирусом гриппа А(Н3№). Дальнейшего изучения требует вопрос, является ли такая картина следствием особенностей патогенеза гриппа А(Н3№), или активность вирусиндуцированного ^Б увеличивается при многократных воздействиях на иммунную систему патогена, ежегодно вызывающего эпидемии.
Одним из объяснений отсутствия связи между аллергическими проявлениями (такими, как обструкция дыхательных путей), у пациентов с гриппом А, в отличие от того, что мы наблюдали ранее при РСВ-инфекции, могут быть различия в схеме лечения. Так, в 40— 60% случаев взрослым пациентам, больных гриппом и имеющим в анамнезе хронические обструктивные респираторные или аллергические заболевания, во избежание вирусин-дуцированных обострений вводили глюкокор-тикостероиды, которые, как известно, отрицательно влияют на синтез АГ-специфических ^Б и/или 1§О4 [4]. В то же время терапия обследованных ранее детей с обструктивными осложнениями РСВ-инфекции не включала гормонотерапию. Таким образом, вопрос
о роли вирусспецифических IgE и IgG4 в патогенезе гриппозной инфекции остается открытым и требует дальнейших исследований.
В отличие от секреторного IgA, защитная противовирусная роль которого хорошо изучена, функции антигенспецифических сывороточных АТ этого класса при инфекционных процессах во многом неясны.
Тем не менее, сывороточные IgA играют важную антивоспалительную роль в регуляции иммунного ответа: ингибирует FcR-зависимые воспалительные реакции (IgG-опосредованный фагоцитоз моноцитов/макрофагов, хемотаксис макрофагов, нейтрофилов и эозинофилов в очаг поражения, секрецию цитокинов). С другой стороны, отмечена связь между высоким содержанием аллерген-специфических IgA в крови и развитием у пациентов аллергического воспаления, а также обострением атопической бронхиальной астмы. У лиц, подверженных аллергии, повышена экспрессия специфических рецепторов для IgA (FcaRI) на поверхности эозинофилов. Иммунные комплексы, содержащие молекулы сывороточного мономерного IgA, могут индуцировать активацию провоспалитель-ных сигнальных путей в клетках-эффекторах. Остается нерешенным вопрос, в каких случаях системный IgA играет антивоспалительную роль, а в каких — провоспалительную, патогенную [18].
Показано, что иммунизация волонтеров различными вариантами гриппозных вакцин приводила к значительному повышению содержания в крови не только вирусспецифических IgG, но и IgA [9]. У пациентов, переболевших гриппом A(H3N2) или A(H1N1)pdm09, в ИФА выявляли 60—67% сероконверсий вирусспецифичных IgA [13, 15]. Полученные нами результаты согласуются с этими данными.
Высокая активность сывороточных IgA, взаимодействующих с поверхностными ГП вирусов гриппа A, свидетельствует о том, что выявление приростов АТ данного класса в ИФА может служить информативным диагностическим серологическим критерием для
Список литературы/References
ретроспективного подтверждения наличия гриппозной инфекции. Каково значение высокой активности системного IgA для патогенеза гриппозной инфекции может быть определено в процессе будущих исследований.
Таким образом, изучение активности ви-русспецифичных иммуноглобулинов различных изотипов позволяет получить интересную информацию об особенностях формирования адаптивного противовирусного иммунного ответа при гриппе А, оценить вклад его про-тективной и иммунопатогенной составляющих в патогенез заболевания.
Выводы
1. У взрослых пациентов, переболевших гриппом А, наиболее выраженный ответ наблюдали со стороны субтипоспецифич-ных IgG1: частота сероконверсий варьировалась в пределах 70—90%. Реакцию IgG2 и IgG3 наблюдали значительно реже.
2. Впервые показано, что характерной чертой иммунного ответа на вирус гриппа A(H1N1)pdm09 как при первичном инфицировании, так и при повторном заболевании является чрезвычайно низкая активность субтипоспецифичных IgG2, а также сниженные показатели СГТ ви-руснейтрализующих антител.
3. Поверхностные гликопротеины вирусов гриппа А могут служить аллергенами. Частота сероконверсий вирусспецифических IgE была сопоставима во всех группах, достигая 25—45%. Интенсивность реагирования IgG4 у пациентов, перенесших грипп A(H3N2) или первично инфицированных вирусом A(H1N1)pdm09, была значительно ниже (13—15% конверсий), чем у больных, повторно переболевших сезонным или пандемическим гриппом A(H1N1) (40—50% сероконверсий).
4. Показана высокая активность вирусспе-цифических сывороточных IgA в группах пациентов, перенесших грипп A(H3N2) или A(H1N1)pdm09.
1. Кривицкая В.З., Соминина А.А., Суховецкая В.Ф., Милькинт К.К., Сверлова М.В. Иммунопатологический аллергический ТИ2-тип противовирусного гуморального иммунного ответа у детей с респираторно-синцитиальной вирусной инфекцией // Цитокины и воспаление. 2004. Т. 3, № 3. С. 34—41. [Krivitskaya V.Z., Sominina A.A., Sukho-vetskaya V.F., Milkint K.K., Sverlova M.V. Immunopathological allergic Th2-type anti-viral humoral immune response in infants with respiratory syncytial viral infection. Tsitokiny i vospalenie = Cytokines and inflammation, 2004, vol. 3, no. 3, pp. 34—41. (In Russ.)]
2. Кривицкая В.З., Соминина А.А., Сорокин Е.В., Войцеховская Е.М., Милькинт К.К., Сироткин А.К. Разработка и изучение диагностических свойств ИФА-тест-систем для субтипоспецифической детекции антител к вирусам гриппа А (H1N1) и A (H3N2) // Вопросы вирусологии. 2002. Т. 47, № 3. С. 40-44. [Krivitskaya V.Z., Sominina A.A.,
Sorokin E.V., Voytsekhovskaia E.M., Milkint K.K., Sirotkin A.K. Development of immunoenzyme assay for subtype-specific detection of antibodies to influenza viruses A (H1N1) and A (H3N2). Voprosy virusologii = Problems of Virology, 2002, vol. 47, no. 3, pp. 40-44. (In Russ.)]
3. Соминина А.А., Кривицкая В.З., Войцеховская Е.М., Медведева Н.А., Липина Н.В., Потапенко Л.Б. Практические рекомендации по диагностике вирусных инфекций. СПб., 2005. 21 c. [Sominina A.A., Krivitskaya V.Z., Voytsekhov-skaya E.M., Medvedeva N.A., Lipina N.V., Potapenko L.B. Prakticheskie rekomendaciipo diagnostike virusnyh infekcij [Practical guidelines for the diagnosis of viral infections]. St. Petersburg, 2005, 21 p. (In Russ.)]
4. Akdis C.A., Blesken T., Akdis M., Alkan S.S., Heusser C.H., Blaser K. Glucocorticoids inhibit human antigen-specific and enhance total IgE and IgG4 production due to differential effects on T and B cells in vitro. Eur. J. Immunol., 1997, vol. 27, no. 9, pp. 2351-2357.
5. Al-Darmaki S., Knightshead K., Ishihara Y., Best A., Schenkein H., Tew J., Barbour S. Delineation of the role of platelet-activating factor in the immunoglobulin G2 antibody response. Clin. Diagnos. Labor. Immunol., 2004, vol. 11, no. 4, pp. 720-728.
6. Arankalle V.A., Lole K.S., Arya R.P., Tripathy A.S., Ramdasi A.Y., Chadha M.S., Sangle S.A., Kadam D.B. Role of host immune response and viral load in the differential outcome of pandemic H1N1 (2009) influenza virus infection in Indian patients. PLoS One, 2010, vol. 5, no. 10, e13099. doi: 10.1371/journal.pone.0013099
7. Braza F., Chesne J., Castagnet S., Magnan A., Brouard S. Regulatory functions of B cells in allergic diseases. Allergy, 2014, vol. 69, no. 11, pp. 1454-1463.
8. Burton O.T., Oettgen H.C. Beyond immediate hypersensitivity: evolving roles for IgE antibodies in immune homeostasis and allergic diseases. Immunol. Rev, 2011, vol. 242, no. 1,pp. 128-143. doi: 10.1111/j.1600-065X.2011.01024.x
9. El-Madhun A.S., Cox R.J., Haaheim L.R. The effect of age and natural priming on the IgG and IgA subclass responses after parenteral influenza vaccination. J. Infect. Dis., 1999, vol. 180, no. 4, pp. 1356-1360.
10. Gordon C.L., Johnson P.D., Permezel M., Holmes N.E., Gutteridge G., McDonald C.F., Eisen D.P., Stewardson A.J., Edington J., Charles P.G., Crinis N., Black M.J., Torresi J., Grayson M.L. Association between severe pandemic 2009 influenza A (H1N1) virus infection and immunoglobulin G(2) subclass deficiency. Clin. Infect. Dis., 2010, vol. 50, no. 5, pp. 672-678. doi: 10.1086/650462
11. Hocart M.J., Mackenzie J.S., Stewart G.A. Serum IgG subclass responses ofhumans to inactivated and live influenza A vaccines compared to natural infections with influenza A. J. Med. Virol., 1990, vol. 30, no. 2, pp. 92-96.
12. Hofmaier S., Comberiati P., Matricardi P.M. Immunoglobulin G in IgE-mediated allergy and allergen-specific immunotherapy. Eur. Ann. Allergy Clin. Immunol., 2014, vol. 46, no. 1, pp. 6-11.
13. Julkunen I., Hovi T., Seppala I., Makela O. Immunoglobulin G subclass antibody responses in influenza A and parainfluenza type 1 virus infections. Clin. Exp. Immunol., 1985, vol. 60, no. 1, pp. 130-138.
14. Kawano Y., Noma T., Yata J. Regulation of human IgG subclass production by cytokines. IFN-gamma and IL-6 act antagonistically in the induction of human IgG1 but additively in the induction of IgG2. J. Immunol., 1994, vol. 153, no. 11, pp. 4948-4958.
15. Li Z.N., Lin S.C., Carney P.J., Li J., Liu F., Lu X., Liu M., Stevens J., Levine M., Katz J.M., Hancock K. IgM, IgG, and IgA antibody responses to influenza A(H1N1)pdm09 hemagglutinin in infected persons during the first wave of the 2009 pandemic in the United States. Clin. Vaccine Immunol, 2014, vol. 21, no. 8, pp. 1054-1060. doi: 10.1128/CVI.00129-14
16. Lima M.T., Wilson D., Pitkin L., Roberts A., Nouri-Aria K., Jacobson M., Walker S., Durham S. Grass pollen sublingual immunotherapy for seasonal rhinoconjunctivitis: a randomized controlled trial. Clin. Exp. Allergy, 2002, vol. 32, no. 4, pp. 507-514.
17. Monteiro R.C. Role of IgA and IgA fc receptors in inflammation. J. Clin. Immunol., 2010, vol. 30, no. 1, pp. 1-9. doi: 10.1007/ s10875-009-9338- 0
18. Mewono L., Matondo Maya D.W., Matsiegui P.B., Agnandji S.T., Kendjo E., Barondi F., Issifou S., Kremsner P.G., Mavoungou E. Interleukin-21 is associated with IgG1 and IgG3 antibodies to erythrocyte-binding antigen-175 peptide 4 of Plasmodium falciparum in Gabonese children with acute falciparum malaria. Eur. Cytokine Netw., 2008, vol. 19, no. 1, pp. 30-36. doi: 10.1684/ ecn.2008.0114
19. Palladino G., Mozdzanowska K., Washko G., Gerhard W. Virus-neutralizing antibodies of immunoglobulin G (IgG) but not of IgM or IgA isotypes can cure influenza virus pneumonia in SCID mice. J. Virol., 1995, vol. 69, no. 4, pp. 2075-2081.
20. Pedersen G.K., Hoschler K., 0ie Solbak S.M., Bredholt G., Pathirana R.D., Afsar A., Breakwell L., Nestbakken J.K., Raae A.J., Brokstad K.A., Sjursen H., Zambon M., Cox R.J. Serum IgG titres, but not avidity, correlates with neutralizing antibody response after H5N1 vaccination. Vaccine, 2014, vol. 32, no. 35,pp. 4550-4557. doi: 10.1016/j.vaccine.2014.06.009
21. Schild G.C., Newman R.W., McGregor I.A., Williams K. The use of transportable single-radial-diffusion immunoplates in sero-epidemiological studies of influenza in the Gambia. The occurrence and persistence of antibody to influenza A/Hong Kong/68 (H3N2) virus in selected inhabitants of two rural villages. Bull. World Health Organ., 1977, vol. 55, no. 1, pp. 3-13.
22. Smith-Norowitz T.A., Kusonruksa M., Wong D., Norowitz M.M., Joks R., Durkin H.G., Bluth M.H. Long-term persistence of IgE anti-influenza A HIN1 virus antibodies in serum of children and adults following influenza A vaccination with subsequent H1N1 infection: a case study. J. Inflamm. Res, 2012, vol. 5, pp. 111-116. doi: 10.2147/JIR.S34152
23. Stavnezer J., Kang J. The surprising discovery that TGF beta specifically induces the IgA class switch. J. Immunol., 2009, vol. 182, no. 1, pp. 5-7.
24. Sun Y., Bian C., Xu K., Hu W., Wang T., Cui J., Wu H., Ling Z., Ji Y., Lin G., Tian L., Zhou Y., Li B., Hu G., Yu N., An W., Pan R., Zhou P., Leng Q., Huang Z., Ma X., Sun B. Immune protection induced on day 10 following administration of the 2009 A/H1N1pandemic influenza vaccine. PLoS One, 2010, vol. 5, no. 12, e14270. doi: 10.1371/journal.pone.0014270
25. Torres M., Casadevall A. The immunoglobulin constant region contributes to affinity and specificity. Trends Immunol., 2008, vol. 29, no. 2,pp. 91-97. doi: 10.1016/j.it.2007.11.004
26. Vidarsson G., Dekkers G., Rispens T. IgG subclasses and allotypes: from structure to effector functions. Front Immunol., 2014, vol. 5:520. doi: 10.3389/fimmu.2014.00520
27. Widhe M., Ekerfelt C., Forsberg P., Bergström S., Ernerudh J. IgG subclasses in Lyme borreliosis: a study of specific IgG subclass distribution in an interferon-gamma-predominated disease. Scand. J. Immunol., 1998, vol. 47, no. 6, pp. 575—581.
28. Yamamoto T., Mizoguchi Y., Kaneno H., Yamamoto K., Inoue Y., Kawashima H., Kase T., Shimotsuji T. Serum immunoglobulin G subclass levels and estimated clinical severity caused by possible influenza A (H1N1) pdm 2009 infection. J. Infect. Chemother., 2013, vol. 19, no. 5, pp. 833-842. doi: 10.1007/s10156-013-0570-4
Авторы:
Кривицкая В.З., д.б.н., ведущий научный сотрудник лаборатории биотехнологии диагностических препаратов ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ, Санкт-Петербург, Россия; Васильева А.А., научный сотрудник лаборатории биотехнологии диагностических препаратов ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ, Санкт-Петербург, Россия;
Войцеховская Е.М., старший научный сотрудник лаборатории биотехнологии диагностических препаратов ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ, Санкт-Петербург, Россия; Петрова Е.Р., младший научный сотрудник лаборатории биотехнологии диагностических препаратов ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ, Санкт-Петербург, Россия; Писарева М.М., к.б.н., ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярной вирусологии и генной инженерии ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ, Санкт-Петербург, Россия; Бузицкая Ж.В., к.б.н., старший научный сотрудник лаборатории молекулярной вирусологии и генной инженерии ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ, Санкт-Петербург, Россия; Елпаева Е.А., научный сотрудник лаборатории молекулярной вирусологии и генной инженерии ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ, Санкт-Петербург, Россия;
Го А.А., к.м.н., зав. отделением респираторных вирусных инфекций у взрослых ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ, Санкт-Петербург, Россия;
Волощук Л.В., к.м.н., старший научный сотрудник отделения
респираторных вирусных инфекций у взрослых ФГБУ НИИ
гриппа МЗ РФ, Санкт-Петербург, Россия;
Львов Н.И., к.м.н., доцент кафедры инфекционных болезней
ФГБОУ ВПО Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова
МО РФ, Санкт-Петербург, Россия;
Смирнова Т.Д., к.б.н., ведущий научный сотрудник
лаборатории клеточных культур ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ,
Санкт-Петербург, Россия;
Соминина А.А., д.б.н., профессор, зав. лабораторией биотехнологии диагностических препаратов ФГБУ НИИ гриппа МЗ РФ, Санкт-Петербург, Россия.
Поступила в редакцию 29.09.2015 Принята к печати 11.01.2016
Authors:
Krivitskaya V.Z., PhD, MD (Biology), Leading Researcher, Laboratory Biotechnology of Diagnostic Reagents, Research Institute of Influenza, St. Petersburg, Russian Federation; Vasilieva A.A., Researcher, Laboratory Biotechnology of Diagnostic Reagents, Research Institute of Influenza, St. Petersburg, Russian Federation;
Voytsekhovskaya E.M., Senior Researcher, Laboratory Biotechnology of Diagnostic Reagents, Research Institute of Influenza, St. Petersburg, Russian Federation; Petrova E.R., Junior Researcher, Laboratory Biotechnology of Diagnostic Reagents, Research Institute of Influenza, St. Petersburg, Russian Federation;
Pisareva M.M., PhD (Biology), Leading Researcher, Laboratory of Molecular Virology and Genetic Engineering, Research Institute of Influenza, St. Petersburg, Russian Federation; Buzitskaya J.V., PhD (Biology), Senior Researcher, Laboratory of Molecular Virology and Genetic Engineering, Research Institute of Influenza, St. Petersburg, Russian Federation; Elpaeva E.A., Researcher, Laboratory of Molecular Virology and Genetic Engineering, Research Institute of Influenza, St. Petersburg, Russian Federation;
Go A.A., PhD (Medicine), Head of the Department of Respiratory Viral Infections in Adults, Research Institute of Influenza, St. Petersburg, Russian Federation;
Voloshchuk L.V., PhD (Medicine), Senior Researcher, Department
of Respiratory Viral Infections in Adults, Research Institute
of Influenza, St. Petersburg, Russian Federation;
Lvov A.I., PhD (Medicine), Associate Professor, Department
of Infectious Diseases, Kirov Military Medical Academy,
St. Petersburg, Russian Federation;
Smirnova T.D., PhD (Biology), Leading Researcher, Laboratory of Cell Cultures, Research Institute of Influenza, St. Petersburg, Russian Federation;
Sominina A.A., PhD, MD (Biology), Professor, Head of the Laboratory Biotechnology of Diagnostic Reagents, Research Institute of Influenza, St. Petersburg, Russian Federation.
Received 29.09.2015 Accepted 11.01.2016
