CC BY
26
Эпидемиология и Вакиинопрофилактика 24 (29)/200б|
ЛИА1НОГ1ИКА
Summary
Presented data about prevalence of HIV-infections / AIDS; about distribution of HIV-infected persons by sex, age, social group, by ways and factor of the contamination; about incidence of HIV-infected persons by dis-panserisation and treatment, about volume of preventive action on administrative territories of Far Eastern federal district. The question is discussed about use of these factors in study of efficiency action on reluctance to groth of HIV-infection epidemic, including realized to account of the facilities of the National priority project in sphere of the public health.
Литература
1. Онищенко Г.Г. ВИЧ-инфекция в России и странах СНГ: современная ситуация и перспективы // Журн. микробиол.
2003. <3. С. 21 - 27.
2. Покровский В.В. ВИЧ-инфекция в России: прогноз // Вопр. вирусол. 2004. <3. С. 31 - 34.
3. ЮНЭЙДС. Руководящие принципы по разработке ключевых показателей: Мониторинг выполнения Декларации о приверженности делу борьбы с ВИЧ / СПИДом. - Женева, июль 2005. - 108 с.
Применение рекомбинантных видоспеиифических белков микобактерий туберкулеза для серологической диагностики инфекиии
С.И. Татьков1, Ю.В. Туманов1, О.В. Носарева1, А.Н. Болдырев1, О.Ю. Смирнова1, Л.Р. Лебедев1, В.А. Порываева2,
A.П. Ивлев-Дунтау3, С.Б. Ткаченко4, А.К. Стрелис5,
B.В. Новицкий5, О.И. Уразова5, О.В. Воронкова5
1 ФГУП ГНЦ ВБ «Вектор», пос. Кольцово, Новосибирская область
2 ЗАО «Вектор-Бест», пос. Кольцово, Новосибирская область
3 НМУ СМО «Фтизиатрия», Новосибирск
4 ГОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования» Росздрава, Москва
5 ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Росздрава, Томск
Г
воевременное выявление больных туберкулезом является важным звеном в системе борьбы с этим заболеванием. Вместе с тем выявление туберкулеза на ранних стадиях заболевания сопряжено с
большими трудностями: применение микроскопии мазка мокроты и бактериологического метода неэффективно при абациллярных формах туберкулеза; рентгенологический метод не дает однозначных ре-
ЛИАГНОСТИКА
зультатов при отсутствии выраженных морфологических изменений в органах; диагностика внелегочных форм туберкулеза возможна только на поздних стадиях развития болезни и при исследовании биоптатов пораженной ткани; кожная проба (реакиия Манту) оказывается слабоспеиифичной, особенно в регионах с массовой вакиинаиией БЦЖ [3].
Поскольку при туберкулезе развивается гуморальный и клеточный ответ, значительные усилия прилагаются для разработки высокоспеиифичных и чувствительных тест-систем, основанных на определении параметров иммунного ответа [2, 11]. Одно из важнейших направлений совершенствования иммунологических тест-систем заключается в поиске антигенов Mycobacterium tuberculosis, использование которых обеспечивало бы высокую спеиифичность и чувствительность тестов. В результате исследований был выявлен иелый ряд высокоиммуногенных антигенов M. tuberculosis (ESAT-6, CFP-10, Ag85B, MPT64 и др.), с помощью которых удалось повысить спеиифичность тестов до 95%, однако их чувствительность значительно варьирует (40 - 85%) [1]. Возможно, что различия в чувствительности тест-систем, основанных на рекомбинантных белках M. tuberculosis, обусловлены генетическими и фенотипическими особенностями населения конкретного географического региона. По всей видимости, изменением состава рекомбинантных антигенов, а также их количественных соотношений можно повысить чувствительность тест-системы при сохранении ее высокой спеиифичности для конкретного географического региона [4].
Среди высокоиммуногенных антигенов M. tuberculosis особый интерес вызывают секретируемые бактериями белки, поскольку против них формируется иммунный ответ на ранних стадиях инфекиии. Одни из таких белков - MPT64.
В настоящей работе нами был проклонирован и экспрессирован на основе белка-носителя глутатион-S-трансферазы (путем присоединения к 3'-кониу соответствующего гена) ген mpt64. Очищенный аффинной хроматографией гибридный белок был использован в качестве антигена для серологической диагностики туберкулеза. Было показано, что при его применении спеиифичность ИФА-теста составляет 76%, чувствительность - 81%.
Материалы и методы
В работе в качестве вектора использовали плазмиду pGEX-2T (Pharmacia, Германия) и штамм BL21 Escherichia coli {F-, dcm, oMPT, hsdS (rB- mB-), gal}. Ген, кодирующий белок MPT64, был амплифииирован с геномной ЛНК M. tuberculosis H37Rv с помощью праймеров: 5'-CGGGATCCGCGCCCAAGACCTACTG-3'; 5'-CGGAATTCGTCCTCGCGAGTCTAGG-3'. Ампли-фикаиия гена проходила на амплификаторе «Тер-иик» («ЛНК-технология», Москва). Условия проведения ПЦР: 94 0C - 2 мин, 33 иикла [94 0C - 30 с, 44 0C - 20 с, 72 0C - 1 мин], 72 0C - 3 мин. Ампли-кон очищали от компонентов реакиионной смеси с помощью GenElute™ PCR DNA Purification Kit (Sigma, USA),
обрабатывали эндонуклеазами рестрикиии BamHI и EcoRI, лигировали ЛНК-лигазой фага Т4 с плазмидой pGEX-2T, предварительно гидролизованной по BamHI- и EcoRI-сайтам, затем осуществляли транс-формаиию лигазной смесью штамма E. coli BL21. Поиск рекомбинантных клонов проводили путем ампли-фикаиии клонированного гена непосредственно из отдельных бактериальных колоний.
Трансформированные клетки выращивали в жидкой среде LB при 37 0C до плотности D550 0,3 - 0,8, после чего индуиировали экспрессию гена добавлением ИПТГ (изопропил-бета^-тиогалактозида) до конечной кониентраиии 0,5 - 1,0 мМ и культивированием при 37 0C с интенсивной аэраиией в течение
3 - 5 часов. Рекомбинантный гибридный белок выделяли аффинной хроматографией на глутатион-сефа-розе 4B (Pharmacia, Германия). Белки анализировали с помощью электрофореза в 12%-ном полиакриламидном геле в денатурирующих условиях по методу U.K. Laemmli [7] и иммуноблоттинга. Соответствующие клеточные лизаты после разделения в 12%-ном ЛСН - ПААГ (дуодеиилсульфат натрия - полиакриламидный гель) переносили на нитроиеллюлозную мембрану. Рекомбинантный гибридный белок GST-MPT64 на фильтрах выявляли с помощью мышиных моноклональных антител 2H3-19 против белка-носителя GST. Образовавшиеся иммунные комплексы идентифииировали с помощью антивидовых IgG-антител кролика против IgG мышей, конъюгированных с щелочной фосфатазой (Sigma, USA). Реакиию визуализировали с помощью стандартных красителей Nitro Blue Tetrazolium и BIP (Bromindolilphosphat фирмы Sigma, USA) в диметилформамиде. Аналогичным образом выполнялся иммуноблоттинг с человеческими сыворотками в разведении 1:100. Антигены выявляли с конъюгированными анти-IgG человека с пероксидазой хрена, реакиию визуализировали с помощью 3',3',5',5'-тетраметилбензидина (ТМБ) (1мг/мл).
Определение антител в сыворотке доноров проводили по двустадийному методу твердофазного им-муноферментного анализа. На твердую фазу (лунки 96-луночного планшета) сорбировали гибридный белок GST-MPT64. Антиген сорбировали в 200 мM карбонатном буфере (Na2CO3; pH = 9,6) в кониентраиии 0,3 - 0,5 мкг/лунку при 4 °С в течение 16 - 18 часов с последующей блокировкой 1%-ным раствором бычьего сывороточного альбумина в 0,15 М фосфатно-солевом буфере ФСБ-Т (pH = 7,5; 0,05%-ным Твин-20) при комнатной температуре в течение 1 часа. Планшет с иммобилизованным антигеном однократно промывали раствором ФСБ-Т. В одну лунку подготовленного планшета вносили 100 мкл положительного контрольного образиа (К+), в другую -100 мкл отрииательной контрольной сыворотки (К-), в остальные - по 90 мкл буфера для разведения сывороток и 10 мкл исследуемой сыворотки. Пробы инкубировали 60 мин при 37 °С, после чего планшет промывали ФСБ-Т не менее 5 раз. Спеиифически связавшиеся антитела выявляли иммунохимически с использовани-
[Эпидемиология и Вакиинопрофилактика <4 (29)/2006
Эпидемиология и Baкuинoпpoфилaктикa <4 (29)/2006І
ЛИЛЖ( )(!I^KA
ем видоспеиифических моноклональных иммуно-пероксидазных конъюгатов антител против IgG человека. Затем лунки отмывали от избытка конъюгата и вносили в них субстратный раствор с тетраметилбен-зидином (ТМБ). В лунках развивалась иветная реак-иия с окраской раствора. Кониентраиию спеиифиче-ских антител в исследуемых сыворотках определяли по интенсивности окраски. После остановки перок-сидазной реакиии стоп-реагентом результаты учитывали путем спектрофотометрии при длине волны 450 нм. Калибровку спектрофотометра осуществляли «по воздуху». Результаты учитывали только в том случае, если значение оптической плотности (ОП) в лунке с контролем конъюгата (ОПКК) не превышало 0,2, в лунке с отрииательной контрольной сывороткой (ОПК-) - 0,3, в лунке с положительным контрольным образиом (ОПК+) - более 0,5.
Если среднее значение ОП (ОП сред.) исследуемого образиа было больше (ОП сред. К-) x 1,4 + 0,15, то результат считали положительным. Если среднее значение ОП исследуемого образиа было меньше (ОП сред. К) x 1,2 + 0,09, то результат считали отри-иательным. Если ОП сред. исследуемого образиа находилось между этими значениями, то результат считали сомнительным. Сомнительные сыворотки анализировали повторно. При аналогичном результате эти сыворотки считали содержащими антитела к возбудителю туберкулеза. В качестве референс-тест-сис-темы использовали тест-систему «Анти-Туб-IgG», любезно предоставленную ЗАО «Вектор-Бест».
Объектом исследования служили 147 сывороток крови больных туберкулезом и здоровых лии, полученные в медииинских учреждениях городов Томска и Новосибирска. Ло начала работ сыворотки хранились при -20 0С.
Проект настоящей работы был рассмотрен на заседании Этического комитета Сибирского государственного медииинского университета (СибГМУ, г. Томск).
Результаты и обсуждение
Клонирование. Ген mpt64, амплифииированный из хромосомной ЛНК M. tuberculosis H37Rv, был клонирован по сайтам EcoRI/BamHI в экспрессионный вектор pGEX-2T. Полученная плазмидная ЛНК была обозначена pGEX-2T/MPT64. О встраивании гена в плазмиду свидетельствовало образование ампликона соответствующего размера (645 пар олигонуклеотидов - п.о.) с применением праймеров и температурно-временного профиля, как и для первоначальной амплификаиии гена из геномной ЛНК M. tuberculosis. Приблизительно такой же длины фрагмент (636 п.о.) обнаруживался при электрофорезе в 2%-ном агарозном геле очищенной плазмидной ЛНК pGEX-2T/MPT64, гидролизованной эндонуклеазами ре-стрикиии BamHI и EcoRI. Проведенное секвенирова-ние клонированного фрагмента окончательно подтвердило полное соответствие его нуклеотидной последовательности таковой в ранее опубликованных работах.
Экспрессия и очистка гибридного белка GST-MPT64. Экспрессировали ген гибридного белка (плазмида pGEX-2T/MPT64) в штамме E. coli BL21. Индуиировали синтез белка ИПТГ. В условиях индук-иии в данной системе обеспечивался высокий уровень синтеза белка GST (рис. 1А), молекулярный вес которого соответствовал расчетному, а наличие в данной интенсивной полосе GST подтверждалось им-му ноблоттингом с моноклональными антителами 2H3-19 против глутатион^-трансферазы (рис. 1В). Результаты иммуноблоттинга свидетельствовали также, что в данной экспрессионной системе белок GST синтезировался без каких-либо значительных дополнений и не подвергался протеолизу в рекомендуемых условиях экспрессии, на что указывало отсутствие дополнительных полос, выявляемых 2H3-19-антите-лами. Соответственно, можно было ожидать хорошего уровня экспрессии гибридного гена gst-mpt64 в тех же условиях, что и в случае экспрессии gst.
Сравнение белковых электрофореграмм суммарных клеточных лизатов штаммов E. coli BL21, E. coli BL21/pGEX-2T, E. coli BL21/pGEX-2T/CFP10 и E. coli BL21/pGEX-2T/MPT64 демонстрировало индукиию ИПТГ синтеза рекомбинантных белков с молекулярной массой соответственно около 27, 40 и 48,8 кЛа (см. рис. 1А). Уровень синтеза гибридного белка GST-MPT64 (при сравнении интенсивности соответствующих белковых полос) был приблизительно таким же, как и белков GST-CFP10, GST, что составляло для всех указанных белков в среднем 20 ± 2% от суммар-
Рисунок 1.
Детекция продуктов экспрессии клонированных генов
esxB и mpt64 M. tuberculosis в E.coli BL21
1 2 34
А - электрофорез по U.K. Laemmli клеточных лизатов:
1 - лизат E. coIi BL21; 2 - лизат E. coIi/pGEX-2T;
3 - лизат E. coli/pGEX-2T/CFP10; 4 - лизат E. coIi/pGEX-2T/MPT64.
В - иммуноблотт соответствующих лизатов с моноклональными антителами к белку-носителю GST: 1 - лизат E. coIi BL21; 2 - лизат E. coIi/pGEX-2T; 3 - лизат E. coIi/ pGEX-2T/CFP10; 4 - лизат E. coIi/pGEX-2T/MPT64.
С - электрофореграмма аффинно очищенного гибридного белка GST-MPT64: 1 - лизат E. coIi BL21; 2 - лизат E. coIi/pGEX-2T; 3 - лизат E. coIi/pGEX2T/MPT64;
4 - аффинно очищенный белок GST/MPT64 - 1-я элю-ция; S - аффинно очищенный белок GST/MPT64 - 2-я элюция; 6 - аффинно очищенный белок GST/MPT64 -3-я элюция.
Согласно денситометрии, чистота антигенного препара та составляла не менее 9S - 98% после одностадийной аффинной хроматографии. После первой элюции с колонки смывалось не менее 66% адсорбированного белка, после второй - 27%, третьей - 7%.
ЛИAГHOCTИKA
ного (2,5 мг с 1 л кyльтypaльнoй среды) клеточного белка. Иммуно6лоттинг с моноклональными антителами против GST (см. рис. 1B) демонстрировал наличие в лизате E. coli/pGEX-2T/MPT64 не только основной полосы белка с молекулярной массой 48,8 кЛа, но и пяти более коротких полос, что позволяет полагать частичный протеолиз на основании теоретически рассчитанных данных о сайтах протеолиза в по-лучєнньіх гибридных белках (термолизин, протеина-за K, трипсин и др.). Гибридный белок GST-MPT64 содержал на N-кoнue белок-носитель GST, наличие которого обеспечивало его аффинитет к глутатион-сефарозе 4B и делало возможным аффинную очистку. Результаты электрофореза аффинно очищенного гибридного белка представлены на рисунке 1C. He-смотря на наличие частичного протеолиза белков в используемом штамме E. coli, удалось подобрать условия получения гомогенного нeпpoueccиpoвaннoгo препарата. Чистота белка GST-MPT64 после одной стадии аффинной хроматографии составляла 98% (см. рис. 1C, дорожка 4). Лостаточно было дважды повторить элюuию, чтобы смыть 93% адсорбированного белка (см. рис. 1C, дорожки 4 - 6): после первой элю-unn смывалось 66% адсорбированного белка, после второй - еще 27%, нaкoнeu после третьей - весь белок удалялся с аффинного сорбента и его можно было повторно использовать для выделения GST-MPT64.
Исследование серологической реактивности к гибридному белку GST-MPT64. Перед формированием опытной и контрольной групп сыворотки крови больных туберкулезом и здоровых лиu были исследованы с помощью тест-системы «Am'H-Tye-IgG». B опытную группу были включены 47 положительных сывороток от больных с различными формами туберкулеза, в контрольную - 100 отриштельных сывороток от людей с иными патологиями (с вирусными гепатитами, гепатитами B и С, BИЧ-инфeкuиeй, хламидиозом, пневмонией, бронхитами, урогенитальными инфешиями) и 62 образш от здоровых людей без клинических жалоб. Перед началом повторного исследования с использованием тест-сисге-мы ИФA на основе гибридного антигена GST-MPT64 все 147 oбpaзuoв сывороток были зашифрованы.
После проведения повторного исследования сыворотки были расшифрованы и распределены на со-
ответствующие группы для оиенки чувствительности, спеиифичности и воспроизводимости испытуемой тест-системы (табл. 1), которые рассчитывались (в %) на основе гибридного антигена GST-MPT64 в сравнении с референс-тест-системой «Анти-Туб-IgG». Воспроизводимость теста оиенивали путем троекратной постановки ИФА с одними и теми же сыворотками (21 положительной и 21 отрииательной сывороткой по референс-тест-системе). Она составила 98%. Чувствительность испытуемой тест-системы по отношению к референс-тест-системе составила 81%, спе-иифичность - 76%.
Белок MPT64 является одним из основных секре-тируемых M. tuberculosis белков и ключевой мишенью воздействия иммунной системы как на гуморальном, так и на клеточном уровнях. Клонирование гена mpt64 [9] и исследование его В- и Т-клеточных эпитопов доказало, что все они сосредоточены в нескольких районах зрелого белка, многие являются конформаиионными, но особенно реактивные кон-иентрируются в С-кониевой области молекулы [9, 10]. С учетом такого характера распределения эпитопов мы клонировали в С-конеи белка-носителя аминокислотную последовательность зрелого белка MPT64 (рис. 2), что позволяло рассчитывать на развитие гуморального и клеточного ответа к гибридному белку GST-MPT64. Связанные с конструированием гибридного белка ожидания оправдались, подтверждением чего служат высокие значения выявляемое™ положительных сывороток (см. табл. 1). Вместе с тем спе-иифичность теста на основе гибридного белка оказалась далекой от 100%. На панели из 100 отрииатель-ных сывороток (см. табл. 1) мы получили отрииатель-ный результат на наличие антител IgG к гибридному белку в 76 образиах. Антитела были выявлены лишь в 24 образиах, при этом спеиифичность теста была приблизительно одинаковой при тестировании панели сывороток как от здоровых доноров (79%), так и от больных с другой инфекиионной патологией (71%). Как было установлено ранее, белок MPT64 имеет очень большое сходство с белком MВT64, ген которого присутствует в геноме M. bovis, а также во многих вакиинных штаммах БЦЖ, в том числе применяемых для производства БЦЖ-вакиины в России [8, 9, 15]. Видимо, этим обстоятельством и объ-
Таблица 1.
Результаты изучения иммуноферментной реактивности (IgG) к гибридному белку GST-MPT64
Группы исследования Выявляемость
абс. %
Опытная группа (чувствительность) (Положительные сыворотки)
Положительные сыворотки от больных различными формами туберкулеза (активный туберкулез легких) 38/47 80,8
Контрольная группа (специфичность) (Отрицательные сыворотки)
Отрицательные сыворотки от здоровых доноров 49/62 79,0
Отрицательные сыворотки от больных с нетуберкулезной инфекционной патологией (гепатитами В и С, ВИЧ-инфекцией, хламидиозом, пневмонией, бронхитами, урогенитальными инфекциями) 27/38 71,0
Суммарная специфичность 76/100 76,0
[Эпидемиология и Baкuинoпpoфилaктикa <4 (29)/2006
Эпидемиология и Baкuинoпpoфилaктикa <4 (29)/2006І
ЛИЛГЖ )(!I^KA
Рисунок 2. Аминокислотная последовательность (в однобуквенном коде) зрелого белка MPT64 (без сигнального пептида на N-конце), клонированного в С-конец белка-носителя GST
1 APKTYCEELK GTDTGQACQI QMSDPAYNIN ISLPSYYPDQ KSLENYIAQT
S1 RDKFLSAATS STPREAPYEL NITSATYQSA IPPRGTQAVV LKVYQNAGGT
101 HPTTTYKAFD WDQAYRKPIT YDMLWQADTD PLPVVFPIVQ GELSKQTGQQ
1S1 VSIAPNAGLD PVNYQNFAVT NDGVIFFFNP GELLPEAAGP TQVLVPRSAI
201 DSMLA
Подчеркнуты основные районы локализации B-, ^клеточных эпитопов (по литературным данным)
ясняется появление антител к белкам МРТ64 в сыворотке крови у здоровых доноров - в связи с их обязательной вакцинацией против туберкулеза.
Очевидно, специфичность выявления туберкулеза по !§С против гибридного белка СБТ-МРТ64 можно повысить, если наблюдать за динамикой изменения титра антител, возрастание которого в
2 - 3 раза по сравнению с первоначальным его уровнем может служить показанием к дополнительному обследованию пациента на наличие туберкулеза. Наконец, комбинируя рекомбинантные антигены и проводя параллельное исследование другими методами, мы можем существенно повысить чувствительность такого рода комплексных обследований, не снизив при этом их специфичность [6, 7]. Продолжение изысканий в данном направлении представляется весьма перспективным, поскольку существует реальная возможность создания простого диагностического экспресс-теста туберкулезной
инфекиии по определению уровня спеиифических антител в моче [13].
Полученные нами рекомбинантные гибридные белки могут быть использованы для диагностики туберкулеза по степени стимуляиии синтеза гамма-интерферона при обработке лимфоиитов периферической крови антигенами [14], а также в обычном кожном тесте - аналоге реакиии Манту [14]. В кожном тесте рекомбинантные антигены, полученные в E. coli, не показывают чувствительности, сравнимой с туберкулиновой пробой. Предполагается, что это может быть связано с отсутствием соответствующей посттрансляиионной модификаиии антигенов, поскольку при их экспрессии в M. smegmatis, в которой системы посттрансляиионной модификаиии не отличаются от таковых в M. tuberculosis, чувствительность кожной пробы и диаметр гиперемированного участка являются идентичными таковым при использовании туберкулина [12].
Summary
The extracellular antigen from M. tuberculosis with potential relevance to the diagnosis of tuberculosis (TB) MPT64 have been cloned and characterized. The opportunity of application hybrid recombinant protein GST-MPT64 for diagnostics of the active form of a tuberculosis is proved. We have used the expression system, based on carrier GST, for obtaining hybrid recombinant antigens of M. tuberculosis, which were fused with C-terminus of carrier. This system simplifies allocation of hybrid proteins, definition of their concentration by the IFA with using pro-tein-carrier and reception of compositions from various antigens. For expressing recombinant protein GST- MPT64 gene mpt64 from M. tuberculosis H37Rv was amplified by PCR and cloned into plasmid pGEX-2T. Antigenicity of protein is confirmed by Western blotting with monoclonal antibodies against GST and serum samples from TB patients. MPT64 has been evaluated as reagent in IFA using human sera. We have confirmed ability of recombinant protein to reveal IgG against tuberculosis by panel of serum specimens collected from 47 tuberculosis (TB) patients and 100 control donors (62 - healthy and 38 - nontuberculosis patients). In humans, the recombinant GST-MPT64 had a high sensitivity (81%) and a specificity (76%).
BHУTPИБOЛbHИЧHЫE ИHФEKUИИ;
Литература
1. Arend S.M., Geluk A., van Meijgaarden K.E. et al. Antigenic Equivalence of Human T-Cell Responses to Mycobacterium tuberculosis-Specific RD1-Encoded Protein Antigens ESAT-6 and Culture Filtrate Protein 10 and to Mixtures of Synthetic Peptides // Infection and Immunity. 2000. V. 68, <6. Р. 3314 - 3321.
2. Bothamley G.H. Serological Diagnosis of Tuberculosis // Eur. Respir. J. 1995. Suppl. 8. V. 20. P. 676 - 688.
3. Bozaykut A., Atay E., Sevim H. et al. Effect of BCG vaccine on tuberculin skin tests in 7 - 11-year-old children // Acta Paediatr.
2004. V. 93, <8. P. 1033 - 1035.
4. Dye C., Scheele S., Dolin P. et al. for the WHO Global Surveillance and Monitoring Project. Global burden of tuberculosis: estimated incidence, prevalence, and mortality by country // JAMA. 1999. V. 282. P. 677 - 686.
5. Johnson P.D., Stuart R.L., Grayson M.L. et al. Tuberculin-purified protein derivative-, MPT-64-, and ESAT-6-stimulated gamma interferon responses in medical students before and after Mycobacterium bovis BCG vaccination and in patients with tuberculosis // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 1999. V. 6. P. 934 - 937.
6. Kaisermann M.C., Sardella I.G., Trajman A. et al. IgA antibody responses to Mycobacterium tuberculosis recombinant MPT-64 and MT-10.3 (Rv3019c) antigens in pleural fluid of patients with tuberculous pleurisy // Int. J. Tuberc. Lung Dis. 2005. V. 9. P. 461 - 466.
7. Kanaujia G.V., Lam P.K., Perry S. et al. Integration of microscopy and serodiagnostic tests to screen for active tuberculosis // Int. J. Tuberc. Lung Dis. 2005. V. 9, <10. Р. 1120 - 1126.
8. Li H., Ulstrup J.C., Jonassen T.O. et al. Evidence for absence of
the MPB64 gene in some substrains of Mycobacterium bovis BCG // Infect. Immun. 1993. V. 61. P. 1730 - 1734.
9. Oeitinger T., Andersen A.B. Cloning and B-Cell-Epitope
Mapping of MPT64 from Mycobacterium tuberculosis H37Rv // Infection and Immunity. 1994. V. 62, <5. P. 2058 - 2064.
10. Oettinger T., Holm A., Mtoni I.M. et al. Mapping of the
delayed-type hypersensitivity-inducing epitope of secreted
protein MPT64 from Mycobacterium tuberculosis // Infect. Immun. 1995. V. 63. P. 4613 - 4618.
11. Pottumarthy S., Wells V.C., Morris A.J. A Comparison of Seven Tests for Serological Diagnosis of Tuberculosis // J. Clin. Microbiol. 2000. V. 38, <6. P. 2227 - 2231.
12. Roche P.W., Winter N., Triccas J.A. Expression of Mycobacterium tuberculosis MPT64 in recombinant Mycob. smegmatis: purification, immunogenicity and application to skin tests for tuberculosis // Clin. Exp. Immunol. 1996. V. 103. P. 226 - 232.
13. Singh K.K., Dong Y., Hinds L. et al. Combined use of serum and urinary antibody for diagnosis of tuberculosis // J. Infect. Dis. 2003.V. 188, <3. P. 371 - 377.
14. Wilcke J.T., Jensen B.N., Ravn P. et al. Clinical evaluation of MPT-64 and MPT-59, two proteins secreted from Mycobacterium tuberculosis, for skin test reagents // Tuber. Lung Dis. 1996. V. 77. P. 250 - 256.
15. Yamaguchi R., Matsuo K., Yamazaki A. et al. Cloning and characterization of the gene for immunogenic protein MPB64 of Mycobacterium bovis BCG // Infect. Immun. 1989. V. 57. P. 283 - 288.
Многолетняя динамика выявления маркеров гемоконтактных вирусных инфекции в стационаре скорой медицинской помощи
Н М.А. Годков
ГУЗМ «НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского», Москва
В
нутрибольничные инфекции (ВБИ) являются острой проблемой современного здравоохранения в связи с высоким уровнем заболеваемости и летальности, а также значительным социально-экономическим ущербом, причиняемым ими [3]. В лечебнопрофилактических учреждениях (ЛПУ), особенно стационарного типа, процесс возникновения и распространения ВБИ с разной степенью интенсивности протекает постоянно [4]. При этом риску заражения ВБИ подвергаются не только пациенты ЛПУ. Медицинский персонал - одна из основных групп риска
ВБИ, для которых гепатиты В и С стали профессиональным заболеванием [1]. В этой связи крайне важна информация о частоте заносов в ЛПУ общеклинического профиля гемоконтактных вирусных инфекций (ГВИ) - ВИЧ-инфекции, гепатитов В и С, которые могут быть причиной возникновения и распространения внутрибольничных инфекций.
Целью исследования стал анализ динамики выявления лиц, инфицированных ГВИ, среди пациентов, поступавших в стационар скорой медицинской помощи. Проведена оценка выявляемое™ мар-
Эпидемиология и Baкuинoпpoфилaктикa <4 (29)/2006
