CC BY
58
4. Магаева С.В., Морозов С.Г. Нейроиммунофизиология. - М.: Изд-во ГУ НИИ биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича РАМН, 2005. - 160 с.
5. Хаитов Р.М., Гущин И.С., Пинегин Б.В., Зебров А.И. Методические указания по изучению иммуно-тропной активности фармакологических веществ. Руководство по экспериментальному доклиническому изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р.У. Хабриева. - Москва, 2005. -830 с.
6. Fleshner M., Laudenslager M.L. Psychoneuroimmunology: then and now // Behav. Cogn. Neurosci Rev. -2004. - 3(2). - P. 114-30.
7. Irwin M.R. Human psychoneuroimmunology: 20 years of discovery // Brain Behav. Immun. - 2008. -Vol. 22(2). - Р. 129-139.
Гражданцева Наталья Николаевна, ассистент кафедры фармакогнозии с курсом фармацевтической технологии и биотехнологии ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, (8512) 76-14-08, e-mail: [email protected]
Самотруева Марина Александровна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры фармакогнозии с курсом фармацевтической технологии и биотехнологии ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, (8512) 52-41-43, e-mail: [email protected]
Тюренков Иван Николаевич, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой фармакологии и биофармации факультета усовершенствования врачей ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, Россия, 400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1, (8442) 97-81-80, e-mail: [email protected]
Хлебцова Елена Борисовна, доктор медицинских наук, заведующая кафедрой фармакогнозии с курсом фармацевтической технологии и биотехнологии ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцраз-вития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, (8512) 70-80-35; e-mail: [email protected]
Оганесян Эдуард Тоникович, доктор химических наук, профессор, заведующий кафедрой органической химии ГБОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 357524, г. Пятигорск, пр. Калинина 11; e-mail: [email protected]
Кодониди Иван Панайотович, кандидат химических наук, доцент кафедры органической химии ГБОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия» Минздравсоцразвития России
Золотых Денис Сергеевич, аспирант кафедры органической химии ГБОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия» Минздравсоцразвития России
УДК 618.36-008.64-084:615.035
© Е.Н. Гужвина, Л.И. Ильенко, Е.Л. Туманова, Н.Н. Тризно, Л.А. Бахмутова, 2011
Е.Н. Гужвина1, Л.И. Ильенко2, Е.Л. Туманова2, Н.Н. Тризно1, Л.А. Бахмутова1
ПРИМЕНЕНИЕ ПРИРОДНОГО ПРЕПАРАТА «ТРАУМЕЛЬ С» ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЛАЦЕНТАРНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
:ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России 2ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздравсоцразвития России, г. Москва
В статье представлены данные о влиянии антигомотоксического препарата «Траумель С» на строение и функцию плаценты в физиологических условиях и при хронической гипоксии, полученные в ходе эксперимента на белых беспородных крысах.
Ключевые слова: плацента, хроническая гипоксия, эксперимент, крысы.
E.N. Guzvina, L.I. Ilenko, E.L. Tumanova, N.N. Trizno, L.A. Bahmutova
THE USAGE OF NATURAL PREPARATION «TRAUMEL C» FOR THE CORRECTION OF PLACENTAL INSUFFICIENCY IN EXPERIMENT
The article deals with the data about the influence of antigomotoxic preparation «Traumel C» on the structure and function of placenta in the physiological conditions and in case of chronic hypoxia received in the experiment of the white unbreeding rats.
Key words: placenta, chronic hypoxia, experiment, rats.
Неблагоприятное течение беременности независимо от этиологических факторов, чаще всего приводит к развитию хронической гипоксии плода и хронической плацентарной недостаточности (ПН) [10]. Учитывая частоту перинатальных осложнений, среди которых хроническая ПН и гипоксия плода занимают одно из ведущих мест, безусловный интерес представляет разработка новых методических подходов для изучения патогенеза данной патологии и применение эффективных фармакологических корректоров для лечения ПН.
Механизмы действия гипоксии на клетки организма изучены достаточно хорошо.
Экспериментальные исследования на животных показали, что пренатальная гипоксия, как и материнский стресс, приводит к нарушениям формирования поведенческих реакций, развитию двигательной активности, ослаблению способности к обучению [3], снижению массы тела у потомства. Кислородная недостаточность в период беременности снижает адаптационные возможности в постнатальном периоде, обуславливая гибель и рождение физиологически незрелого и отстающего в развитии потомства с выраженными и долгосрочными неврологическими осложнениями [3, 9]. Кроме того, гипоксия изменяет работу генетического аппарата клетки [11] и может инициировать транскрипцию специфических генов, ответственных за программируемую гибель клетки [7]. При этом патологические изменения в ЦНС зависят от длительности гипоксического воздействия и от этапа онтогенетического развития ЦНС, на котором это воздействие применялось [6].
Весьма актуальной остается проблема внедрения методов воздействия на мать и плод, снижающих медикаментозную нагрузку. Среди них следует отметить регулирующие методы лечения, такие как антигомоток-сическая терапия (гомотоксикология), представляющие собой синтез современных достижений медицины и гомеопатического подхода к лечению больных. Высокая эффективность этих препаратов, безопасность (отсутствие побочных и аллергических реакций), отсутствие противопоказаний и возрастных ограничений позволяют широко использовать их у беременных женщин и новорожденных детей [4, 5].
К числу наиболее широко используемых препаратов относится комплексный антигомотоксический препарат «Траумель С», который создан на основе натуральных компонентов, с выраженным противовоспалительным, антиэкссудативным действием. Он улучшает процессы микроциркуляции в любом органе и системе, мягко воздействует на иммунную систему. Данное лекарственное средство хорошо сочетается с другими антиго-мотоксическими препаратами, что повышает общую терапевтическую эффективность клинического применения препарата «Траумель С» [1].
Цель исследования: изучить в эксперименте на беременных крысах влияние препарата «Траумель С» на изменения, происходящие в тканях плаценты в условиях хронической гипоксии.
Материалы и методы исследования. Эксперименты выполнены на 60 лабораторных беспородных белых крысах-самках: 10 животных составили группу контроля (1 группа), 40 животных подвергавшихся гипоксии с 10 по 22 день беременности разделили на 2 равные группы: 2-я группа - животные, получавшие препарат «Траумель С» по 0,2-0,3 мл в/м через 1 день; 3-я группа не получавшие препарат «Траумель С». В четвертую группу вошли 10 животных получавших препарат «Траумель С», но не подвергавшихся гипоксии. Гипоксию моделировали в барокамере проточного типа объемом 10 л. Крыс основной группы наблюдения поднимали на высоту 6 тыс. м со скоростью 50 м/с. Скорость подъема оценивали с помощью самолетного альтиметра и высо-тометра. Экспозиция на высоте составляла 2 ч. Поглотителем СО2 служил 40% раствор КОН.
Перед началом эксперимента животные содержались в карантине (1 месяц) с обязательным клиническим обследованием и выбраковкой подозрительных на заболевание особей. Протокол экспериментов в разделах выбора, содержания животных, моделирования патологических процессов и выведения их из опыта был составлен в соответствии с принципами биоэтики, «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием лабораторных животных» [8]. Эксперимент проводился на кафедре патологической физиологии Астраханской государственной медицинской академии.
Во избежание преждевременных родов самок подвергали эвтаназии путем внутрибрюшного введения 40 мг/кг этаминала натрия на 22-23 день беременности, проводили морфометрическое исследование плодов и плацент, а также гистологическое исследование плацент. Материал был законсервирован в 10% растворе формалина. После стандартной гистологической обработки ткань была залита в парафин. Изготовленные с парафиновых блоков препараты были окрашены гематоксилином и эозином. Исследование проводилось путем осмотра серийного среза под электронным микроскопом. Гистологическое исследование материала проводилось на кафедре патологической анатомии Российского национального исследовательского медицинского университета им. Н.И. Пирогова.
Статистическую обработку результатов проводили с использованием программы Microsoft Wold, Microsoft Exel 2003 для Windows XP, Statistika 6.0. Различия считали статистически достоверными при р<0,05.
Результаты и обсуждение. Проведенные на данной модели исследования показали, что на фоне прена-тальной гипоксии отмечалась замедленная прибавка массы тела у самок к 22 дню беременности во 2-й группе (р>0,05), а в 3-й группе (р<0,05) по сравнению с нормой (табл. 1). При регистрации показателей физического развития установлено, что масса плодов и плацент достоверно снижена по сравнению с контролем у животных 3-й группы (р<0,05) и (р<0,05), соответственно. Полученные данные согласуются с данными литературы, свидетельствующими, что снижение массы плаценты зависит от степени тяжести и длительности патологического процесса. В то же время значительное уменьшение массы и объема плаценты чаще отмечается при беременности, осложненной внутриутробной задержкой роста плода, причем степень уменьшения четко коррелирует с выраженностью гипотрофии плода [2, 10, 12]. Подобные изменения свидетельствуют о нарушении трофической
функции плаценты и развитии вторичной плацентарной недостаточности. Поэтому отдельное значение имеет изучение особенностей морфологического строения плаценты крысы в условиях гипоксии, а также влияние препарата природного происхождения «Траумель С» на строение и функцию плаценты.
Таблица 1
Показатели физического развития у животных исследуемых групп (М±m)
Показатель Контроль 2-я группа (гипоксия+Траумель С) 3-я группа (гипоксия) 4-я группа (ТраумельС)
Прибавка массы тела к 22 дню беременности (г) 66,3±4,7 58,0±6,3 49,6±4,9* 64,8±5,8
Масса плодов (г) 3,1±0,07 2,9±0,09 2,3±0,02* 3,3±0,1
Масса плаценты (г) 0,51±0,05 0,48±0,03 0,42±0,01* 0,53±0,02
Примечание: *- данные статистически значимы по отношению к контролю (р<0,05); ** - (р<0,001).
При гистологическом исследовании в ткани плаценты можно обнаружить все слои, присутствующие в крысиной хориоаллантоисной плаценте в норме (рис. 1).
decidua
Рис. 1. Схематическое изображение слоев в плаценте крысы.
По данным гистологического исследования основным по толщине слоем плацент является лабиринтный слой, в котором обнаруживалось большое количество резко полнокровных анастомозирующих сосудов.
Следующим по выраженности в ткани плаценты был слой спонгиотрофобласта, в котором определялись компактно расположенные скопления базофильных клеток спонгиотрофобласта. Клетки спонгиотрофобласта окружали округлой и неправильной формы сливающиеся очаги, представленные светлыми клетками с пикно-тичным ядром и содержащие расширенные полнокровные сосуды с тонкой стенкой. Децидуальный слой являлся самым периферическим слоем плацентарной ткани и был представлен тонкой прослойкой преимущественно уплощенных децидуальных клеток. Слой хориальной пластинки был не всегда хорошо различим, он был представлен отечной волокнистой тканью с крупными полнокровными сосудами (табл. 2).
Таблица 2
Толщина слоев плаценты крысы (М±m)
Группы наблюдения Толщина слоев плаценты
Толщина плаценты (цш) Толщина лабиринтного слоя (цш) Толщина слоя спонгиотрофобласта (цш) Толщина децидуального слоя (цш)
Группа контроля 2546,91±177,51 1933,80±213,40 461,39±66,67 151,72±35,6
2-я группа наблюдения (гипоксия + Траумель С) 2093,05±258,40 1391,32±179,01* 529,41±122,50 172,32±36,18
3-я группа наблюдения (гипоксия) 1677,62±140,35** 972,69±141,02** 442,45±48,37 262,48±47,69*
4-я группа наблюдения (Траумель С) 2787,76±199,79 2065,71±185,10 569,18±145,24 152,34±37,00
Примечание: *- данные статистически значимы по отношению к контролю (р<0,05); ** - (р<0,001).
Подсчет и обсуждение полученных результатов измерения слоев проводили исходя из толщины основных трех слоев плаценты: лабиринтного слоя, слоя спонгиотрофобласта и децидуального слоя. Особенности гистологии плаценты в исследуемых группах представлены на рисунке 2.
А С
Рис. 2. Фото плаценты крысы на 22 день беременности. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение х100. А. - контрольный образец плаценты крысы (слой лабиринта, спонгиотрофобласт, децидуальный слой);
В. - плацента крысы, получавшей в ходе эксперимента комплексный гомеопатический препарат «Траумель С», имеет схожее строение с контрольным образцом, слой лабиринта несколько истончен; С. - плацента крысы, подвергавшейся гипоксии и не получавшей препарат «Траумель С», отмечается уменьшение толщины плаценты, в основном, ее лабиринтного слоя (в 2 раза по сравнению с контролем),
гиперплазия децидуальной оболочки; Б. - плацента крысы, получавшей препарат «Траумель С» и не подвергавшейся гипоксии «Траумель С»,
не отличается от контрольного образца
Максимальная толщина плаценты отмечалась в 1 и 4 исследуемых группах (2546,91±177,51 цш и 2787,76±199,79 цш соответственно). Выявлено достоверное уменьшение толщины плаценты в 3-й группе наблюдения (р<0,001), во 2-й группе (р>0,05). Максимальная толщина слоя лабиринта наблюдалась в 1 и 4 исследованных группах, в то время как в 2 и 3 группах толщина лабиринтного слоя была в 1,5 и 2 раза меньше, (р<0,05) и (р<0,001) соответственно. Слой лабиринта является основным и крайне важным для снабжения эмбриона питательными веществами и осуществления газообмена. Слой спонгиотрофобласта в меньшей степени влияет на процессы обмена [11]. Толщина слоя спонгиотрофобласта находилась в пределах 400-600 цш, при этом минимальные значения были получены в 3 группе - 442,45 цш (р>0,05), а максимальные в 4 исследованной группе - 562,18 цш (р>0,05). Толщина децидуальной ткани варьировала в пределах от 150 до 300 цш. Максимальная ее толщина была обнаружена в 3 исследованной группе - 262,48 цш (р<0,05). В трех других группах
толщина децидуального слоя была приблизительно одинаковой (151,72 цш в 1 группе, 152,34 цш в 4 группе и 172,32 цш во 2 группе). Максимальная толщина хориальной пластинки при возможности проведения измерений составила 235,76 цш, минимальная 132,51 цш. Провести измерения удалось не во всех случаях. Подобная ситуация повторилась в отношении слоя гигантских клеток. Это было связано с тем, что этот слой не имел четких границ и состоял из 2-3 отдельно располагавшихся клеток с обильной цитоплазмой и одиночным крупным ядром с хорошо выраженным ядрышком.
Заключение. Таким образом, проведенные на данной модели экспериментальные исследования показали, что гипоксия пренатального периода оказывает резко отрицательное влияние на формирование плаценты и развитие плода, следствием чего являются внутриутробная задержка роста и развития плода, снижение плацентарных параметров, свидетельствующих о развитии плацентарной недостаточности. Применение комплексного антигомотоксического препарата «Траумель С» во время беременности, протекающей на фоне хронической гипоксии, оказывает положительное влияние на формирование плаценты, способствует оптимизации показателей физического развития беременных крыс и их потомства.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Арора С., Харрис Т., Шерер К. Клиническая безопасность комплексного гомеопатического препарата Траумель С // Биол. мед. - 2001. - С. 23-27.
2. Афанасьева Н.В., Стрижаков А.Н. Исходы беременности и родов при фетоплацентарной недостаточности различной степени тяжести // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. - 2004. -Т. 3, № 2. - С. 7-13.
3. Журавин И.А., Дубровская Н.М., Туманова Н.Л. Постнатальное физиологическое развитие крыс после острой пренатальной гипоксии // Рос. Физиол. журнал им. И.М. Сеченова. - 2003. - Т. 89, № 5. -С. 522-532.
4. Ильенко Л.И., Бахмутова Л. А., Гужвина Е.Н. Применение препаратов природного происхождения в перинатологии // Педиатрия. - 2009. - Т. 88, № 5. - С. 90-97.
5. Ильенко Л.И., Зубарева Е.А., Холодова И.Н. [и др.]. Современные подходы к диагностике и лечению гипоксически-ишемических поражений ЦНС у доношенных детей первого года жизни // Педиатрия. - 2003. - № 2. - С. 87-92.
6. Кассиль В.Г., Отеллин В. А., Хожай Л.И. Критические периоды развития головного мозга // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. - 2000. - T. 86, № 11. - С. 1418-1425.
7. Маслова М.В., Землянский К.С., Школьников М.В. [и др.]. Пептидергическая коррекция влияний острой гипобарической гипоксии беременных крыс на развитие потомства // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 2001. - Т. 131, № 2. - С. 136-140.
8. Скобелев Д.О., Мурашова Е.Н., Болонкина Т.Е. Международные стандарты в практике работы научных и клинико-диагностических лабораторий // Мир стандартов. - 2006. - № 10. - С. 54-55.
9. Спасов А. А, Трегубова И. А., Косолапов В. А. Моделирование внутриутробной гипоксии // Патологическая физиология и экспериментальная терапия - 2005. - № 4. - С. 25-28.
10. Федорова М.В. Плацентарная недостаточность. // Акушерство и гинекология. - 1997. -№ 6. - С. 403.
11. Balduini W., De Angelis V., Mazzoni E. Long-lasting behavioral alterations following a hypoxic/ischernic brain injury in neonatal rats. // Brain Research. - 2000. - Vol. 859. - P.318-325.
12. Salafia C.M. Placental pathology of fetal growth restriction // Clin. Obstet. Gynecol. - 1997. - Vol. 40. -P. 740-749.
Гужвина Елена Николаевна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры акушерства и гинекологии лечебного факультета ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000 г. Астрахань, ул. Бакинская 121, тел. (8512) 33-14-20, e-mail: [email protected]
Ильенко Лидия Ивановна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой госпитальной педиатрии с курсом традиционных методов лечения ФУВ Московского факультета ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздравсоцразвития России, Россия, г. Москва, ул. Островитяни-нова, 1. тел. (495) 426-27-61.
Туманова Елена Леонидовна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой патологической анатомии ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрав-соцразвития России, Россия, г. Москва, ул. Островитянинова, 1.
Тризно Николай Николаевич, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой патологической физиологии ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, г. Астрахань, ул. Бакинская 121.
Бахмутова Люция Анваровна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой перинатологии с курсом сестринского дела и ухода за больными ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоц-развития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская 121., тел. (8512) 33-14-20.
