Иммунотропные свойства производного хинозолинона-4 и его предшественника с остатком гамма-аминомасляной кислоты Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК 612.017.1: 615.37

© Н.Н. Гражданцева, М.А. Самотруева, И.Н. Тюренков,

Е.Б. Хлебцова, Э.Т. Оганесян, И.П. Кодониди, Д.С. Золотых, 2011

Н.Н. Гражданцева1, М.А. Самотруева1, И.Н. Тюренков2 Е.Б. Хлебцова1, Э.Т. Оганесян 3, И.П. Кодониди3, Д.С. Золотых3

ИММУНОТРОПНЫЕ СВОЙСТВА ПРОИЗВОДНОГО ХИНОЗОЛИНОНА-4 И ЕГО ПРЕДШЕСТВЕННИКА С ОСТАТКОМ ГАММА-АМИНОМАСЛЯНОЙ КИСЛОТЫ

1ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России 2ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет»

Минздравсоцразвития России 3ГБОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия» Минздравсоцразвития России

В экспериментальной работе на мышах линии СВА мы проводили изучение иммунотропных свойств нового производного хинозолинона-4 (QPh-GABA) и его предшественника (N cycl QPh-GABA), созданных на основе у-аминомасляной кислоты (ГАМК). В ходе исследования установлено, что новые фармакологические вещества при внутрибрюшинном (аналог внутривенному введению в эксперименте) введении в дозе 40 мг/кг в течение 3-х дней проявляют стимулирующие свойства в отношении клеточной и гуморальной иммунореактивности, что определяет актуальность проведения дальнейших углубленных исследований химических соединений под лабораторными шифрами N cycl. QPh-GABA и QPh-GABA на моделях иммунопатологии.

Ключевые слова: у-аминомасляная кислота, иммунотропные свойства, реакция гиперчувствительности замедленного типа, реакция пассивной гемагглютинации.

N.N. Grajdansceva, M.A. Samotrueva, I.N. Turenkov, E.B. Hlebscova, A.T. Oganesyan, I.P. Kodonidy, D.S. Zolotyh

IMMUNOTROPIC PROPERTIES OF HINOZOLIN-4 DERIVATIVE AND ITS PREDECESSOR WITH REMAINS

OF GAMMA-AMINOBUTYRIC ACID

The experimental work was done on mice SVA studying immunotropic properties of hinozolin-4 derivative and its predecessor created on the base of gamma-aminobutyric acid. During investigation it was stated out that new pharmacological substances in case of intra-abdominal introduction (analogue of intravenous introduction in experiment) in dose of 40 mg/kg during 3 days showed stimulated properties in accordance to cellular and humoral immunoreactivity, it may define the actuality of making further deep investigations of chemical combinations under laboratory signs N cycle QPh-GABA and QPh-GABA on the models of immunopa-thology.

Key words: gamma-aminobutyric acid, immunotropic properties, hypersensitivity reaction of slower type, reaction ofpassive hemaglutination.

Нейроиммунная патология является одной из ведущих патологий в медицинской практике, интерес химиков и фармакологов направлен на синтез и активное изучение свойств новых химических соединений, созданных на основе нейроактивных аминокислот [1, 6, 7]. Одним из перспективных путей создания новых лекарственных препаратов остается принцип модификации структуры эндогенных физиологически активных соединений [2, 3, 4], в том числе и гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК).

На базе кафедры фармакогнозии с курсом фармацевтической технологии и биотехнологии Астраханской государственной медицинской академии совместно с фармакологами Волгоградского Государственного медицинского университета и химиками Пятигорской государственной фармацевтической академии ведется активный поиск среди новых производных хиназолинона с фрагментами нейроактивных аминокислот с иммуно-тропной активностью и способных оказать иммуномодулирующее действие - с целью подавления либо с целью активизации в зависимости от исходного состояния иммунитета.

Целью настоящей работы явилось изучение иммунотропных свойств нового производного хинозолино-на-4 (QPh-GABA) и его предшественника (N cycl QPh-GABA), созданных на основе у-аминомасляной кислоты (ГАМК).

O O

n-ch2-ch2-ch2-c

-,А — 0н

N cycl GABA (N cycl QPh GABA)

NH

Материалы и методы. Исследование выполнено на 72 мышах-самцах линии СВА 3-4-месячного возраста. Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми «Международной конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей» (Страсбург, 1986). Экспериментальные животные были разделены на группы (п=8): контроль (физиологический раствор), опыт

№ 1 ^РИ-САВА в дозе 40 мг/кг, внутрибрюшинно, 3 дня) и опыт № 2 (К сус1 QPh-GABA в дозе 40 мг/кг, внут-рибрюшинно, 3 дня). Исследование проведено в три серии: в 1-ой - мы изучали влияние веществ на фагоцитарную активность нейтрофилов, во 2-ой и 3-ей - на клеточное и гуморальное звенья антиэритроцитарного иммунного ответа.

Для определения изменений массы и клеточности иммунокомпетентных органов под влиянием веществ, после выведения животных из эксперимента извлекали тимус и селезенку. Лимфоидные органы взвешивали, готовили клеточные суспензии в среде 199 из расчета для селезенки 50 мг/мл, для тимуса - 10 мг/мл. Суспензии фильтровали, отмывали двукратно средой 199 от частиц жировой ткани (по 10 мин при 1500 об/мин), после чего ресуспендировали в среде 199 до исходной концентрации. Суспензии лимфоидных органов для подсчета предварительно 1:1 смешивали с 3% уксусной кислотой, подкрашенной метиленовой синью, и подсчитывали количество ядросодержащих клеток (ЯСК) в камере Горяева. Количество ЯСК выражали в относительных (по отношению к массе лимфоидного органа) значениях [5].

Изучение влияния веществ на клеточное звено иммунного ответа проводили на основе реакции гиперчувствительности замедленного типа (РГЗТ). Иммунизацию проводили однократно подкожно в подлопаточную область эритроцитами барана (ЭБ) в дозе 1*107 клеток в объеме 100 мкл. Для выявления сенсибилизации на 5 сутки вводили разрешающую дозу антигена 1*108 ЭБ в объеме 20 мкл под апоневротическую пластинку правой задней конечности («опытная» лапа), в контрлатеральную лапу вводили соответственно 20 мкл физиологического раствора («контрольная» лапа). Учет интенсивности местной реакции проводили через 24 ч после введения разрешающей дозы антигена. Индекс реакции ГЗТ (ИР) подсчитывали по формуле:

ИР=(Мо-Мк) : Мкх100%,

где Мо - масса «опытной» лапы, Мк - масса «контрольной» лапы [5].

Изучение влияния новых веществ на гуморальное звено иммунного ответа осуществляли на основе реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). Иммунизацию проводили однократно внутрибрюшинно 5*108 ЭБ в объеме 100 мкл. Через 7 дней после иммунизации животных выводили из эксперимента путем быстрой декапи-тации с использованием хлороформа, получали сыворотку. Для инактивации комплемента сыворотку прогревали при температуре 56°С в течение 30 мин. Реакцию гемагглютинации проводили в 96-луночных планшетах в объеме 50 мкл разводящей жидкости (0,5% раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА), приготовленного на физиологическом растворе), в которой последовательно двукратно разводили исследуемые сыворотки. После разведения сывороток в лунки вносили по 25 мкл 1% взвеси ЭБ. Предварительный учет результатов РПГА производили через 1 час инкубации при температуре 37°С; через 18 часов (4°С) реакцию учитывали окончательно. Титр антител (наибольше разведение сыворотки, при котором наблюдается агглютинация ЭБ) выражали в среднегеометрических показателях (1д) [5]. Также оценивали влияние веществ на показатели лейкоцитарной формулы.

Исследование проводилось в соответствии с существующими международными этическими и научными стандартами качества планирования и проведения исследований на животных [6]. Экспериментальные данные обрабатывали общепринятыми методами вариационной статистики. Для определения вероятных изменений между показателями опытных и контрольных животных использовали ^критерий Стьюдента.

Результаты исследования и их обсуждение. В ходе эксперимента установлено, что изучаемое вещество под лабораторным шифром N сус1 QPh-GABA проявляет иммуностимулирующие свойства в отношении гуморальной реакции: титр гемагглютининов в РПГА превышает показатели в контрольной группе более чем на 20% (р<0,05) (рис. 1Б), тогда как индекс местной клеточной реактивности сохраняется на уровне фоновых значений (р>0,05) (рис. 1А). Кроме того, под влиянием N сус1 QPh-GABA количество спленоцитов увеличивается практически в 3 раза (р<0,05) (рис. 1 В и 1 Д). Показатели массы тимуса и количества тимоцитов практически не превышают уровень контрольных значений (р>0,05) (рис. 1Г и 1Е).

Химическое соединение под шифром QPh-GABA оказывает стимулирующее действие лишь в отношении клеточного состава тимуса и селезенки: количество спленоцитов превышает контрольные показатели практически в 2 раза (р<0,05), уровень тимоцитов достоверно превышает показатели животных, получавших «плацебо», более чем на 15% (р<0,05) (рис. 1В-1Е). Индекс местноклеточной реакции ГЗТ (рис. 1А) и титр гемагг-лютининов в РПГА (рис. 1 Б) превышают параметры иммунитета животных контрольной группы не более чем на 10% (р>0,05).

10,8/ 10,6 10,4' 10,2' 10+1 9,8 9,6

А

115-'

110-И

105 100

к н

2/1

1,5 1

0,5 0

40,5/

40 39,5 39' 38,5 38 37,5

*

2

3

2

3

Б

2

3

1

2

3

В

о н к я

ч о

7/ 6-' 5-К

4 3 2' 1

о н к я

у

2,6 2,5 2,4' 2,3 2,2' 2,1

Д Е

Рис. 1. Влияние соединений N сус1 QPh-GABA и QPh-GABA на формирование РГЗТ, РИГА, на массу и клеточность иммунокомпетентных органов

1 - контроль 2 - N сус1 QPh-GABA (40 мг/кг) 3 - дРИ-ОАБА (40 мг/кг) ИР ГЗТ - индекс реакции гиперчувствительности замедленного типа;

РПГА - реакция пассивной гемагглютинации; * - р<0,05 по сравнению с контролем

В качестве одного из показателей иммунного ответа при введении антигена (эритроцитов барана), мы использовали состав лейкоцитов периферической крови животных. Во всех опытных группах отмечается увеличение общего количества лейкоцитов, под влиянием N сус1 QPh-GABA изменения носят статистически достоверный характер (рис. 2).

Г

*

0

2

3

2

3

Рис. 2. Влияние соединений N сус1 QPh-GABA и QPh-GABA на общее количество лейкоцитов

1 - контроль 2 - N сус1 QPh-GABA (40 мг/кг) 3 - дРИ-ОАБА (40 мг/кг) * - р<0,05 по сравнению с контролем

Обращает на себя внимание тот факт, что количество лейкоцитов под влиянием химических веществ N сус1 QPh-GABA и QPh-GABA увеличивается за счет лимфоидного ростка, что также указывает на наличие иммунотропных свойств у изучаемых веществ (рис. 3).

палочкоядерные НФ 2% Ч

лимфоциты 55%

сегментоядерные НФ 41%

м оноциты 2%

1

лимфоциты 63%

палочкоядерные НФ

2% сегментоядерные 2%_ у- НФ

' 32%

моноциты 3%

3

Рис. 3. Влияние соединений N cycl QPh-GABA и QPh-GABA на популяции лейкоцитов периферической крови

1 - контроль 2 - N сус1 дРИ-ОЛБЛ (40мг/кг) 3 - дРИ-ОЛБЛ (40 мг/кг)

НФ - нейтрофилы

Таким образом, новое производное хинозолинона-4 и его предшественник, созданные на основе гамма-аминомасляной кислоты, под лабораторными шифрами N сус1 QPh-GABA и QPh-GABA проявляют иммуностимулирующие свойства, что отражено в способности веществ активировать определенные звенья иммуногенеза. Следует признать актуальным дальнейшее изучение иммунокорригирующей активности веществ на различных моделях иммунопатологии.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Акмаев И.Г. Нейроиммуноэндокринология: истоки и перспективы развития // Успехи физиологических наук. - 2003. - Т. 34, № 4. - С. 4-15.

2. Девойно Л.В., Ильюченок Р.Ю. Нейромедиаторные системы в психонейроиммуномодуляции: дофамин, серотонин, ГАМК, нейропептиды. - Новосибирск: ЦЭ РИС, 1993. - 237 с.

3. Корнева Е.А. Введение в иммунофизиологию. - СПб.: ЭЛБИ, 2003. - 48 с.

4. Магаева С.В., Морозов С.Г. Нейроиммунофизиология. - М.: Изд-во ГУ НИИ биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича РАМН, 2005. - 160 с.

5. Хаитов Р.М., Гущин И.С., Пинегин Б.В., Зебров А.И. Методические указания по изучению иммуно-тропной активности фармакологических веществ. Руководство по экспериментальному доклиническому изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р.У. Хабриева. - Москва, 2005. -830 с.

6. Fleshner M., Laudenslager M.L. Psychoneuroimmunology: then and now // Behav. Cogn. Neurosci Rev. -2004. - 3(2). - P. 114-30.

7. Irwin M.R. Human psychoneuroimmunology: 20 years of discovery // Brain Behav. Immun. - 2008. -Vol. 22(2). - Р. 129-139.

Гражданцева Наталья Николаевна, ассистент кафедры фармакогнозии с курсом фармацевтической технологии и биотехнологии ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, (8512) 76-14-08, e-mail: nng1972@mail.ru

Самотруева Марина Aлександровна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры фармакогнозии с курсом фармацевтической технологии и биотехнологии ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрав-соцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, (8512) 52-41-43, e-mail: ms1506@mail.ru

Тюренков Иван Николаевич, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой фармакологии и биофармации факультета усовершенствования врачей ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, Россия, 400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1, (8442) 97-81-80, e-mail: fibfuv@mail.ru

Хлебцова Елена Борисовна, доктор медицинских наук, заведующая кафедрой фармакогнозии с курсом фармацевтической технологии и биотехнологии ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцраз-вития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, (8512) 70-80-35; e-mail: khlebtsova@rambler.ru

Оганесян Эдуард Тоникович, доктор химических наук, профессор, заведующий кафедрой органической химии ГБОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 357524, г. Пятигорск, пр. Калинина 11; e-mail: edwardov@mail.ru

Кодониди Иван Панайотович, кандидат химических наук, доцент кафедры органической химии ГБОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия» Минздравсоцразвития России

Золотых Денис Сергеевич, аспирант кафедры органической химии ГБОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия» Минздравсоцразвития России

УДК 618.36-008.64-084:615.035

© Е.Н. Гужвина, Л.И. Ильенко, Е.Л. Туманова, Н.Н. Тризно, Л.А. Бахмутова, 2011

Е.Н. Гужвина1, Л.И. Ильенко2, Е.Л. Туманова2, Н.Н. Тризно1, Л.А. Бахмутова1

ПРИМЕНЕНИЕ ПРИРОДНОГО ПРЕПАРАТА «ТРАУМЕЛЬ С» ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПЛАЦЕНТАРНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

:ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России 2ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздравсоцразвития России, г. Москва

В статье представлены данные о влиянии антигомотоксического препарата «Траумель С» на строение и функцию плаценты в физиологических условиях и при хронической гипоксии, полученные в ходе эксперимента на белых беспородных крысах.

Ключевые слова: плацента, хроническая гипоксия, эксперимент, крысы.

E.N. Guzvina, L.I. Ilenko, E.L. Tumanova, N.N. Trizno, L.A. Bahmutova

THE USAGE OF NATURAL PREPARATION «TRAUMEL C» FOR THE CORRECTION OF PLACENTAL INSUFFICIENCY IN EXPERIMENT

The article deals with the data about the influence of antigomotoxic preparation «Traumel C» on the structure and function of placenta in the physiological conditions and in case of chronic hypoxia received in the experiment of the white unbreeding rats.

Key words: placenta, chronic hypoxia, experiment, rats.