CC BY
28
УДК 615.072:615.074
https://doi.org/10.30895/1991-2919-2020-10-2-129-136
Применение метода Европейской фармакопеи для количественного определения антраценпроизводных в противогеморроидальном сборе Проктофитол®
Н. П. Антонова, И. М. Моргунов*, С. С. Прохватилова, Е. П. Шефер, А. М. Калинин, Т. А. Голомазова
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Петровский б-р, д. 8, стр. 2, Москва, 127051, Российская Федерация
Резюме. Совершенствование методик контроля качества многокомпонентных лекарственных растительных препаратов, позволяющих объективно оценивать содержание действующих веществ, определяющих фармакологическое действие препарата, является актуальной задачей специалистов в фармакогнозии. Цель работы: исследовать возможность применения метода Европейской фармакопеи для определения суммы антраценпроизводных в противогеморроидальном сборе Проктофитол®; предложить норму содержания суммы антраценпроизводных. Материалы и методы: в исследовании были использованы отдельные компоненты сбора, содержащие антраценпроизводные (сенны листья и крушины кора), а также модельные смеси сенны листья : крушины кора в соотношении 1:1 и модельная смесь сбора Проктофитол® с использованием тех же компонентов. Для количественного определения антраценпроизводных использовался метод спектрофотометрии. Результаты: установлено, что с помощью метода Европейской фармакопеи можно оценить качество сбора Проктофитол® по содержанию суммы антраценпроизводных. Показано, что спектро-фотометрическая методика Европейской фармакопеи имеет преимущества по отношению к методикам, включенным в отечественные нормативные документы, так как позволяет проводить полное извлечение действующих веществ и является унифицированной для антраценпроизводных. Выводы: для определения антраценпроизводных в сборе Проктофитол® была адаптирована методика Европейской фармакопеи, в качестве экстрагента предложено использовать 70% этанол вместо 70% метанола. Подобраны оптимальная навеска и разведения испытуемого раствора. Рассчитана и экспериментально установлена предлагаемая норма содержания суммы антраценпроизводных — «не менее 1,9%». Предложенная методика может быть рекомендована для включения в Государственную фармакопею Российской Федерации на сборы, аналогичные по составу сбору Проктофитол®.
Ключевые слова: спектрофотометрия; антраценпроизводные; лекарственное растительное сырье; лекарственные растительные препараты; фармакопейные методы; сенны листья; крушины кора
Для цитирования: Антонова НП, Моргунов ИМ, Прохватилова СС, Шефер ЕП, Калинин АМ, Голомазова ТА. Применение метода Европейской фармакопеи для количественного определения антраценпроизводных в противогеморроидаль-ном сборе Проктофитол®. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. 2020;10(2):129—136. https://doi.org/10.30895/1991-2919-2020-10-2-129-136 "Контактное лицо: Моргунов Игорь Михайлович; [email protected]
(CC) ]
BY 4.0
Determination of Anthracene Derivatives in the Antihaemorrhoidal Medicinal Herb Mixture Proctophytol® Using the European Pharmacopoeia Method
N. P. Antonova, I. M. Morgunov*, S. S. Prokhvatilova, E. P. Shefer, A. M. Kalinin, T. A. Golomazova
Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products, 8/2 Petrovsky Blvd, Moscow 127051, Russian Federation
Abstract. Specialists in pharmacognosy are facing an important task of improving quality control methods for combination herbal medicinal products in order to enable reliable assessment of the content of active substances that are responsible for the drug's pharmacological effect. The aim of the study was to investigate the possibility of using the European Pharmacopoeia method to determine the total content of anthracene derivatives in the antihaemorrhoidal medicinal herb mixture Proctophytol® and to propose limit values for the total content of anthracene derivatives. Materials and methods: individual mixture components containing anthracene derivatives, such as senna leaves and frangula bark, as well as model mixtures containing these individual components in a 1:1 ratio, and a model mixture imitating Proctophytol® were used in the study. The determination of the anthracene derivatives content was carried out using spectrophotometry. Results: it was demonstrated that the European Pharmacopoeia method could be used to assess the quality of Proctophytol® in terms of anthracene derivatives total content. The spectrophotometric method described in the European Pharmacopoeia has advantages over the methods described in manufacturer specifications for Russian products, because it allows for thorough extraction of the active substances and is standardized for anthracene derivatives. Conclusions: the European Pharmacopoeia method was adjusted to determine anthracene derivatives in the medicinal herb mixture Proctophytol®. It was proposed to use 70% ethanol instead of 70% methanol as extraction solvent. The authors identified optimum sample weights and test solution dilutions, and calculated and verified the limit for anthracene derivatives content—"Not less than 1.9%". The adjusted method can be recommended for inclusion in the monographs of the State Pharmacopoeia of the Russian Federation for medicinal herb mixtures similar to Proctophytol®.
Key words: spectrophotometry; anthracene derivatives; herbal substances; herbal medicinal products; pharmacopoeial methods; senna leaves; frangula bark
For citation: Antonova NP, Morgunov IM, Prokhvatilova SS, Shefer EP, Kalinin AM, Golomazova TA. Determination of anthracene derivatives in the antihaemorrhoidal medicinal herb mixture Proctophytol® using the European Pharmacopoeia method. Ve-domosti Nauchnogo tsentra ekspertizy sredstv meditsinskogo primeneniya = Тhе Bulletin of the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products. 2020;10(2):129-136. https://doi.org/10.30895/1991-2919-2020-10-2-129-136 Corresponding author: Igor M. Morgunov; [email protected]
Совершенствование методик контроля качества многокомпонентных лекарственных растительных препаратов, позволяющих объективно оценивать содержание действующих веществ, определяющих фармакологическое действие препарата, является актуальной задачей фармакогностов.
Сбор Проктофитол® применяется в медицинской практике как противогеморроидальное средство растительного происхождения, оказывает слабительное, спазмолитическое, гемостатичес-кое действие. В состав сбора входят сенны листья, крушины кора, тысячелистника трава, кориандра плоды, солодки корни в равных частях. Слабительное действие сбора обусловлено наличием производных антрацена, содержащихся в коре крушины и листьях сенны. Учитывая фармакологическое действие препарата, а также то, что 40% препарата составляет сырье, содержащее антраценпроиз-водные, целесообразно стандартизировать сбор по данной группе действующих веществ [1—3]. В отечественной практике для количественного определения антраценпроизводных в основном используется метод спектрофотометрии, общую схему пробоподготовки при этом можно представить как экстракция ^ гидролиз и окисление ^ переэкстракция с образованием окрашенных фенолятов. Для количественного определения суммы антраценпроизводных в сборе Проктофитол® используется модифицированный метод Аутерхоф-фа, основанный на гидролизе гликозидов ледяной уксусной кислотой и экстракции продуктов гидролиза диэтиловым эфиром [4].
Данный метод имеет ряд недостатков:
- получение заниженных результатов содержания антраценпроизводных;
- использование диэтилового эфира в качестве экстрагента, который не является оптимальным;
- метод небезопасный: предусмотрено нагревание смеси диэтилового эфира и ледяной уксусной кислоты;
- метод трудоемкий, так как для построения калибровочного графика выполняются измерения в 12 калибровочных растворах хлорида кобальта;
- использование неспецифичного стандарта — определение антраценпроизводных проводят по калибровочному графику, построенному с помощью хлорида кобальта;
- испытуемые растворы отдельных компонентов сбора имеют разные максимумы поглощения
в условиях методики: сенны листьев — 523 нм, крушины коры — 540 нм;
- установленная норма содержания суммы действующих веществ требует уточнения.
Таким образом, данный метод не является оптимальным, и для его усовершенствования целесообразно использовать зарубежный опыт, а также введенные в действие фармакопейные методики количественного определения антрацен-производных в лекарственном растительном сырье. В ФС.2.5.0021.18 «Крушины ольховидной кора» Государственной фармакопеи Российской Федерации XIV изд. включен метод определения суммы антраценпроизводных, гармонизированный с методом Европейской фармакопеи 9 изд.1 с небольшими изменениями. В Европейской фармакопее методики определения содержания антраценпроизводных в различных видах лекарственного растительного сырья (ЛРС) унифицированы, различия лишь в используемом экстрагенте. Так, например, для сенны листьев и плодов, экстракта алоэ в качестве экстрагента используется вода, для крушины коры — 70% метанол. Максимумы поглощения испытуемых растворов, полученных из листьев сенны, и растворов, полученных из коры крушины, совпадают и находятся в области около 515 нм. Для расчета содержания суммы антраценпроизводных используется удельный показатель поглощения (для листьев сенны — 240, для коры крушины — 204). Теоретический расчет показал, что норма содержания суммы антраценпроизводных может составлять «не менее 1,9%» (7,0% х 0,2 + 2,5% х 0,2 = 1,9%, где коэффициент 0,2 — доля компонента в сборе), так как содержание суммы антраценпроизводных по Европейской фармакопее в коре крушины — не менее 7,0%, в листьях сенны — не менее 2,5% [3].
Цель работы — исследование возможности количественного определения антраценпроизводных в сборе Проктофитол® с использованием метода Европейской фармакопеи и установление нормы их содержания в условиях предложенной методики определения.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Образцы лекарственных растительных препаратов:
- «Крушины ольховидной кора»: ООО «Лек С+», с. 11017; ООО Фирма «Фито-Бот», с. 210417; ОАО «Красногорсклексредства», с. 20217;
1 Monograph 0025. Frangula bark. European Pharmacopoeia. 9th ed. Strasbourg: EDQM; 2016.
- «Сенны листья»: ООО «Лек С+», с. 21117; ООО Фирма «Здоровье», с. 011017; АО «Красногор-склексредства», с. 30317;
- модельная смесь, состоящая из лекарственного растительного сырья, содержащего антраценпроизводные, — крушины кора : сенны листья (1:1), приготовленная из вышеуказанных компонентов, 3 серии;
- модельная смесь, соответствующая по составу сбору Проктофитол®, приготовленная из вышеуказанных компонентов, 3 серии.
В модельные смеси вошли разные серии препаратов крушины коры и сенны листьев с разным содержанием действующих веществ, что привело к разному содержанию в этих модельных смесях ан-траценпроизводных.
Другие компоненты сбора, не содержащие исследуемую группу веществ, используемые для приготовления сбора:
- «Тысячелистника трава», ООО Фирма «Фито-бот», с. 160817;
- «Солодки корни», ООО Фирма «Здоровье», с. 010912РЕГ;
- «Кориандра плоды», Житница здоровья, с. 180119.
Стандартный образец сеннозида Б, Sigma-Aldrich, кат. номер 00530580.
Оборудование: спектрофотометр Cary 100 (Varian), сушильный шкаф Binder ED53, электронные весы Mettler Toledo XPE205DR, баня водяная Julabo TW-12, испаритель ротационный Rotavapor R-300, автоматизированная система нанесения проб CAMAG® Linomat 5, УФ-кабинет CAMAG® TLC Visualizer 2, мельница IKA MF 10 basic c ситом 0,5 мм.
Испытания проводились на 3 модельных смесях сбора в трех параллелях с расчетом относительного стандартного отклонения (RSD). Для приготовления каждой из модельных смесей сбора использовали отдельную серию перечисленных выше компонентов сбора.
Для определения содержания суммы антрацен-производных в сенны листьях и крушины коре использовалась методика Европейской фармакопеи, в которой вместо 70% метанола использовали 70% этанол. Для определения содержания суммы антра-ценпроизводных в сборе Проктофитол® использовалась методика, основанная на методике Европейской фармакопеи2, с использованием в качестве экстрагента 70% этанола.
Для сравнительной оценки компонентного состава продуктов гидролиза в испытуемых растворах и растворе сеннозида Б использовали метод высокоэффективной тонкослойной хроматографии (ВЭТСХ).
Методика количественного определения антраценпроизводных. Аналитическую пробу сырья из-
мельчали до получения частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм. Около 0,5 г (точная навеска) сбора помещали в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляли 50,0 мл 70% этанола, взвешивали с погрешностью ±0,01 г. Колбу присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 15 мин. После охлаждения до комнатной температуры колбу вновь взвешивали и доводили до первоначальной массы 70% этанолом. Содержимое колбы фильтровали через бумажный складчатый фильтр.
20,0 мл фильтрата помещали в делительную воронку вместимостью 250 мл, прибавляли 30 мл воды и 0,1 мл хлористоводородной кислоты концентрированной, осторожно взбалтывали в течение 2—3 мин с 20 мл петролейного эфира (х.ч.) (далее — эфир). После полного расслоения фаз нижний водный слой переносили в стакан вместимостью 100 мл, верхний эфирный слой переносили в колбу вместимостью 250 мл. Водный слой из стакана переносили в ту же делительную воронку и аналогичным образом обрабатывали еще 4 раза эфиром (порциями по 20 мл). Водный слой переносили в мерную колбу вместимостью 100 мл. Объединенные петролейные извлечения переносили обратно в делительную воронку и промывали водой 2 раза (порциями по 15 мл), водный слой помещали в ту же мерную колбу вместимостью 100 мл, оставляя темные хлопья в эфирном слое. В мерную колбу с объединенными водными извлечениями прибавляли 5 мл раствора 5% натрия карбоната и доводили объем раствора водой до метки (раствор А).
50,0 мл раствора А пипеткой переносили в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляли 20 мл железа(Ш) хлорида раствора (плотность 1,07—1,08 г/мл), колбу присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане при периодическом перемешивании в течение 20 мин, погружая ее в воду бани выше уровня раствора в колбе. Затем в колбу добавляли 2 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и, часто встряхивая, продолжали нагревание в течение 20 мин до растворения осадка.
Колбу охлаждали, содержимое колбы переносили в делительную воронку вместимостью 500 мл, колбу ополаскивали 30 мл эфира, присоединяли ополоски к основному раствору в делительной воронке и осторожно взбалтывали в течение 2—3 мин. После полного расслоения фаз нижний водный слой переносили в ту же колбу вместимостью 250 мл, эфирный слой собирали в колбу вместимостью 100 мл. Извлечение повторяли еще 2 раза аналогичным образом. Объединенные эфирные извлечения переносили обратно в делительную воронку и промывали 2 раза водой (по 15 мл), водный слой отбрасывали. Эфирные извлечения фильтровали через воронку с бумажным фильтром, содержащим
2 Monograph 0025. Frangula bark. European Pharmacopoeia. 9th ed. Strasbourg: EDQM; 2016.
3 г натрия сульфата безводного, в мерную колбу вместимостью 100 мл. Воронку с натрия сульфатом безводным промывали эфиром, доводили объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивали (раствор Б).
20,0 мл раствора Б пипеткой переносили в бюкс вместимостью 100 мл и сушили досуха в вытяжном шкафу. Сухой остаток полностью растворяли в 10 мл магния ацетата спиртового раствора 0,5% (раствор В).
Оптическую плотность раствора В измеряли на спектрофотометре при длине волны 515 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения спирт 96%.
Содержание суммы антрагликозидов в пересчете на глюкофрангулин А в абсолютно сухом сырье в процентах (Х) вычисляли по формуле:
Х =
Лх50х100х10х100х100
л%
Лх122,55
А1™х20х50х20ха(100-2У) а(ЮО-иО '
где А — оптическая плотность раствора В; А^ — удельный показатель поглощения глюкофрангули-на А при длине волны 515 нм, равный 204; а — навеска сырья, г; w — влажность сырья, %.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
В работе оценивалась возможность количественного определения антраценпроизводных сен-ны листьев и крушины коры в сборе Проктофитол® с использованием метода Европейской фармакопеи и установления нормы содержания антраценпроиз-водных в условиях предложенной методики.
Для решения поставленной задачи было проведено изучение спектров поглощения образцов крушины ольховидной коры, сенны листьев и модельных смесей крушины и сенны (1:1), модельных смесей сбора Проктофитол®, стандартного образца сеннозида Б. Спектры испытуемых растворов сенны листьев, крушины коры, модельных смесей на их основе, а также продуктов гидролиза стандартного образца сеннозида Б практически идентичны и отличаются незначительным отклонением максимума поглощения (табл. 1, рис. 2, 3).
Использование в качестве экстрагента 70% этанола при определении суммы антраценпроизвод-ных в пересчете на сеннозид Б в листьях сенны дает сопоставимые результаты с методикой, в которой в качестве экстрагента используется вода очищенная (табл. 2). Методом ВЭТСХ была проведена оценка качественного состава испытуемых растворов. Хроматограммы растворов, содержащих экстракты сенны листьев, полученные при экстракции водой и при экстракции этанолом 70%, идентичны по положению и цвету основных зон адсорбции (рис. 1).
Установлено, что при гидролизе и окислении сеннозида Б образуется одно основное вещество и одно дополнительное в незначительном количестве. При гидролизе и окислении в ходе количественного определения испытуемых растворов сенны листьев и крушины коры образуются два основных соединения, зоны адсорбции которых
1
2
3
4
5
6
7
Рис. 1. Хроматограммы компонентов сбора и модельных смесей. 1 — сеннозид Б; 2 — продукты гидролиза сеннози-да Б; 3 — испытуемый раствор сенны (экстракция водой); 4 — испытуемый раствор сенны (экстракция 70% этанолом); 5 — испытуемый раствор крушины коры; 6 — испытуемый раствор смеси сенны и крушины; 7 — испытуемый раствор сбора Проктофитол®
Fig. 1. Chromatograms of the individual components and their mixtures. 1—sennoside B; 2—sennoside B hydrolysis products; 3—senna leaves test solution (water extraction); 4—senna leaves test solution (70% ethanol extraction); 5—frangula bark test solution; 6—senna leaves and frangula bark mixture test solution; 7—Proctophytol® test solution
Таблица 1. Максимумы поглощения образцов компонентов сбора и модельных смесей Table 1. Maximum absorption wavelengths of individual components and their mixtures
Наименование образца Sample Максимум поглощения, серия 1, нм Maximum absorption wavelength of batch 1, nm Максимум поглощения, серия 2, нм Maximum absorption wavelength of batch 2, nm Максимум поглощения, серия 3, нм Maximum absorption wavelength of batch 3, nm
Сенны листья Senna leaves 514 514 513
Крушины кора Frangula bark 510 509 511
Смесь сенны и крушины 1:1 Senna and frangula mixture 1:1 510 511 513
Сбор Проктофитол® Proctophytol® 512 513 512
Таблица 2. Количественное определение суммы антраценпроизводных Table 2. Determination of the total content of anthracene derivatives
Образец Сумма антраценпроизводных в пересчете на: Результат, % Result, %
Sample Total content of anthracene derivatives expressed as: Серия 1 Batch 1 Серия 2 Batch 2 Серия 3 Batch 3
Сенны листья, экстракция водой Senna leaves, water extraction CeHH03Ha E Sennoside B 2,821 (RSD 2,59%) 2,167 (RSD 2,88%) 2,918 (RSD 1,91%)
Сенны листья, экстракция 70% этанолом Senna leaves, 70% ethanol extraction CeHH03Ha E Sennoside B 2,695 (RSD 2,95%) 2,044 (RSD 2,91%) 2,420 (RSD 1,12%)
Крушины кора, экстракция 70% этанолом Frangula bark, 70% ethanol extraction EiroKo^parayjiHH A Glucofrangulin A 6,042 (RSD 1,63%) 5,932 (RSD 0,83%) 7,736 (RSD 1,53%)
Смесь листьев сенны и коры крушины, экстракция 70% этанолом (теоретический расчет) Mixture of senna leaves and frangula bark, 70% ethanol extraction (theoretical value) EiwKo^paHryjiHH A h ceHH03Hg E Glucofrangulin A and sennoside B 4,369 3,988 5,078
EiroKo^parayjiHH A Glucofrangulin A 4,606 4,168 5,292
Смесь листьев сенны и коры крушины, экстракция 70% этанолом Mixture of senna leaves and frangula bark, 70% ethanol extraction EiMKO^paHryuHH A h ceHH03Ha E Glucofrangulin A and sennoside B 5,091 (RSD 2,67%) 4,238 (RSD 2,81%) 5,276 (RSD 2,12%)
EiMKO^paHryuHH A Glucofrangulin A 5,421 (RSD 2,67%) 4,611 (RSD 2,81%) 5,742 (RSD 2,12%)
Модельная смесь Проктофитол® (теоретический расчет) Model mixture imitating Proctophytol® (theoretical value) EiMKO^paHryuHH A h ceHH03Ha E Glucofrangulin A and sennoside B 1,773 1,595 2,031
EiMKO^paHryuHH A Glucofrangulin A 1,872 1,667 2,116
Модельная смесь Проктофитол®, экстракция 70% этанолом Model mixture imitating Proctophytol® EiMKO^paHryuHH A h ceHH03Ha E Glucofrangulin A and sennoside B 2,241 (RSD 2,08%) 1,800 (RSD 2,04%) 1,964 (RSD 1,42%)
EiMKO^paHryuHH A Glucofrangulin A 2,438 (RSD 2,08%) 1,904 (RSD 2,04%) 2,138 (RSD 1,42%)
Примечание. RSD — относительное стандартное отклонение. Note. RSD—relative standard deviation.
400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 Длина волны, нм / Wavelength, nm
— Сенны листья (70% этанол) / Senna leaves (70% ethanol)
— Кора крушины (70% этанол) / Frangula bark (70% ethanol)
— Сенны листья (вода) / Senna leaves (water)
— Сенны листья + Кора крушины (70% этанол) / Senna leaves + Frangula bark (70% ethanol)
— Продукты гидролиза сеннозида Б / Sennoside B hydrolysis products
Рис. 2. Спектры поглощения испытуемых растворов Fig. 2. Absorption spectra of the test solutions
400
450 500 550
Длина волны, нм / Wavelength, nm
600
Рис. 3. Спектр поглощения испытуемого раствора, полученного из сбора Проктофитол® экстракцией 70% этанолом
Fig. 3. Absorption spectrum of the Proctophytol® test solution (70% ethanol extraction)
наблюдаются на хроматограмме смеси крушины и сенны и на хроматограмме сбора Проктофитол®. Все зоны адсорбции четко разделены.
Содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на глюкофрангулин А для смеси крушины кора : сенны листья (1:1) и смеси, идентичной сбору
Проктофитол®, изготовленных из тех же компонентов, незначительно выше в двух испытаниях, чем теоретически рассчитанное по результатам количественного определения суммы антраценпроизвод-ных в коре крушины и листьях сенны, и незначительно ниже в одном испытании (табл. 2). Следует
отметить, что содержание суммы антраценпроиз-водных в смеси крушины кора : сенны листья (1:1) расходится с теоретическим значением больше, чем в смеси, идентичной сбору Проктофитол®.
Для определения содержания суммы антрацен-производных в пересчете на глюкофрангулин А использовался удельный показатель поглощения, приведенный в методике Европейской фармакопеи3, равный 204. Так как сенны листья и крушины кора в сборе находятся в равных количествах (для сенны листьев удельный показатель поглощения равен 240, а для коры крушины — 204), можно было бы использовать усредненный удельный показатель
поглощения, равный 222, но для этого необходимо сопоставить результаты с экспериментальными данными при использовании стандартного раствора глюкофрангулин А : сеннозид Б (1:1). Нами были проведены теоретические расчеты на усредненный удельный коэффициент, равный 222, дающие пропорциональные результаты, но они пригодны лишь для ознакомления (табл. 2).
Была проведена валидация4 использованной методики для подтверждения того, что она пригодна для количественного определения антраценпроиз-водных в сборе Проктофитол®. Результаты ревали-дации представлены в таблице 3.
Таблица 3. Результаты ревалидации аналитической методики количественного определения антраценпроизводных в сборе Проктофитол®
Table 3. The results of revalidation of the assay used for determination of anthracene derivatives in the medicinal herb mixture Proctophytol®
Характеристика Parameter Требования Requirements Результат Result
Специфичность Specificity Присутствие сопутствующих компонентов не влияет непредусмотренным образом на результат анализа The presence of related compounds does not inadvertently affect the result of analysis На УФ-спектре испытуемого раствора присутствует характерный максимум поглощения, совпадающий с максимумом поглощения УФ-спектра раствора глю-кофрангулина А; на УФ-спектре раствора сравнения максимум поглощения отсутствует The UV spectrum of the test solution shows a characteristic absorption maximum which matches the absorption maximum in the UV spectrum of glucofran-gulin А standard solution; the UV spectrum of the reference solution does not have an absorption maximum
Линейность Данные экспериментальных измерений Linearity аналитических сигналов 5 проб с различным содержанием определяемых веществ обработаны методом наименьших квадратов с использованием линейной модели Experimental data obtained from measurements of analytical signals of 5 samples containing different amounts of the analytes were processed using the least squares method and the linear model: y = bx + a Коэффициент корреляции Correlation coefficient: r > 0,99 Навеска сбора Sample weight г (g) % Оптическая плотность Absorbance
0,40 80 0,45612
0,45 90 0,52533
0,50 100 0,57749
0,55 110 0,63343
0,60 120 0,70409
Уравнение прямой Line equation у = 0,0060404* - 0,024748 Коэффициент корреляции Correlation coefficient r = 0,9985571 r > 0,99
Аналитическая область Range Методика применима в интервале от 80 до 120% от минимального допустимого значения The method is applicable in the range from 80 to 120% of the minimum acceptable value Соответствует на основании данных по изучению линейности The result is satisfactory based on linearity data
Правильность Свободный член уравнения меньше своего На основании данных по изучению линейности Trueness доверительного интервала Based on linearity data The constant term of the line equation is a = 0 0247393 less than its confidence interval = о 0189431 Aa = i(0,05, n - 2) x s a , a < Aa a f(0,05, n - 2) = 3,182 Aa = 3,182 x 0,0189431 = 0,0602769442 a < Aa
3 Monograph 0025. Frangula bark. European Pharmacopoeia. 9th ed. 2016.
4 ОФС.1.1.0012.15. Валидация аналитических методик; ОФС.1.1.0013.15. Статистическая обработка результатов химического эксперимента. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV изд. Т. 1. М.; 2018.
Гармаш АВ, Сорокина НМ. Метрологические основы аналитической химии. М.: МГУ им. М.В. Ломоносова; 2012.
Продолжение таблицы 3
Характеристика Требования
Parameter Requirements
Прецизионность RSD результатов 6 определений количес-
Precision твенного содержания антраценпроизвод-
ных должно быть < 3,0%
Повторяемость RSD of 6 determinations of anthracene
Repeatability derivatives < 3.0%
Межлабораторная Полученное значение критерия Фишера,
прецизионность вычисленное по результатам проведения
Intermediate испытаний разными исполнителями на
precision разном оборудовании, должно быть мень-
ше табличного значения
F-test value calculated from the results ob-
tained by different operators with different
equipment is less than the tabular value
F , = s.2/s22 < F, pract. 1 ' 2 teor.
Результат
Result
Результаты 6 определений количественного содержания антраценпроизводных
The results of 6 determinations of anthracene derivatives
№ определения Determination Значение Result
1 2,35402
2 2,49309
3 2,49297
4 2,39394
5 2,38380
6 2,42300
Среднее значение / Mean = 2,42347 RSD = 2,40%
№ определения Determination Исполнитель 1, Оборудование 1 Operator 1, Equipment 1 Исполнитель 2, Оборудование 2 Operator 2, Equipment 2
1 2,46764% 2,40402%
2 2,38684% 2,36211%
3 2,38217% 2,48880%
S 0,048 0,065
S2 0,002304 0,004225
F t = 0,004225/0,002304 = 1,83 pract. 7 ' 7 7 Fteor.(0,05; 2; 2) = 19,00 F8"' < Ft pract. teor.
полученный и табличный критерии Фишера соответственно, где 0,05 — уровень значимости, 2 и 2 — число степеней свободы; s — стандартное отклонение; s1, s2 — большее и меньшее стандартные отклонения полученных результатов соответственно; sa — стандартное отклонение свободного члена, RSD — относительное стандартное отклонение (%).
Note. t(0.95; n—2)—Student's t-test, where 0.95 is probability, n—2—the number of degrees of freedom; Fpract, Fteor.(0.05; 2; 2)—Fisher's test obtained values and table values, respectively, where 0.05 is the significance level, 2 and 2—the number of degrees of freedom; s—standard deviation; s1, s2— larger and smaller values of standard deviations, respectively; s —standard deviation of the constant term; RSD—relative standard deviation (%).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Проведена оценка возможности определения суммы антраценпроизводных в сборе Проктофи-тол® с использованием метода Европейской фармакопеи. Установлено, что спектры поглощения испытуемых растворов сенны листьев и крушины коры, полученные в условиях предложенной методики, практически совпадают.
В результате проведенной работы для определения антраценпроизводных в сборе Проктофитол® была адаптирована методика Европейской фармакопеи. В качестве экстрагента предложено использовать 70% этанол вместо 70% метанола, предусмотренного методикой Европейской фармакопеи. Для расчетов предложено использовать удельный показатель поглощения глюкофрангулина А, равный 204, предусмотренный методикой Европейской фармакопеи. Предложено нормировать сумму
антраценпроизводных в пересчете на глюкофрангу-лин А «не менее 1,9%».
Была проведена валидация предложенной методики для подтверждения того, что она пригодна для количественного определения антраценпроиз-водных в сборе Проктофитол®. Предложенная методика может быть рекомендована для включения в фармакопейные статьи Государственной фармакопеи Российской Федерации на сборы, аналогичные по составу сбору Проктофитол®.
Вклад авторов. Н. П. Антонова — идея, планирование исследования, консультация по вопросам проведения отдельных этапов экспериментальных работ; И. М. Моргунов — выполнение экспериментальной части исследований по количественному определению антраценпроизводных, написание чернового варианта статьи; С. С. Прохватилова — сбор, анализ и обобщение данных литературы; Е. П. Шефер — разработка дизайна вали-дационного исследования и обработка его результатов;
А. М. Калинин —
кое оформление
подготовка иллюстраций, техничес-материала, редактирование текста; проведение практических испытаний
T. À. roAOMmoea
no ваaпflацпп.
Authors' contributions. Natalia P. Antonova—study idea and planning, consultation on individual stages of the experimental work; Igor M. Morgunov—experimental part of the study, quantitative determination of anthracene derivatives, drafting the paper; Svetlana S. Prokhvatilova— collection, analysis and summarising of literature data; Elena P. Shefer—design of the validation study and analysis of its results; Artem M. Kalinin—preparing illustrations, formatting the paper, editing the text; Tatiana A. Golomazova— experimental validation work.
Благодарности. Работа выполнена в рамках государственного задания ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России № 056-00003-20-00 на проведение прикладных научных исследований (номер государственного учета НИР AAAA-A18-118021590049-0).
Acknowledgements. The study reported in this publication was carried out as part of a publicly funded research project No. 056-00003-20-00 and was supported by the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products (R&D public accounting No. AAAA-A18-118021590049-0).
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов, требующего раскрытия в данной статье. Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest requiring disclosure in this article.
ЛИТЕРАТУРА I REFERENCES
Куркин ВА, Шмыгарева АА, Саньков АН. Разработка новых подходов к стандартизации проктофитола. Медицинский альманах. 2014;(2):138-41. [Kurkin VA, Shmygareva AA, San'kov AN. The creation of new approaches to the standardization of Proktofitol. Medit-sinskiy al'manakh = Medical almanac. 2014;(2):138-41 (In Russ.)] Куркин ВА, Шмыгарева АА, Саньков АН. Разработка новых подходов к стандартизации сбора «Для очищения организма». Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2015;(2):171-4. [Kurkin VA, Shmygareva AA, San'kov AN. Working out new approaches to standartization of the medicinal plants collection "For body cleansing". Izvestiya Orenburgskogo gosudarstvennogo agrarnogo universiteta = Izvestia of the Orenburg State Agrarian University. 2015;(2):171-4 (In Russ.)] Куркин ВА, Авдеева ЕВ, Петрухина ИК, Шмыгарева АА, Агапов АИ, Ежков ВН. Актуальные аспекты стандартизации ле-
карственного растительного сырья, содержащего антра-ценпроизводные, и слабительных препаратов на их основе. Фундаментальные исследования. 2015;(2):1424-31. [Kurkin VA, Avdeeva EV, Petrukhina IK, Shmygareva AA, Agapov AI, Ezh-kov VN. The actual aspects of plant medicinal drugs, contained the anthracenderivatives, and laxatixe preparations on the basis of their. Fundamentalnye issledovaniya = Fundamental Research. 2015;(2):1424-31 (In Russ.)]
Марахова АИ, Аврач АС, Скалозубова ТА, Сорокина АА, Сергуно-ва ЕВ, Федоровский НН. Спектрофотометрия в анализе сборов. Медицина и образование в Сибири. 2012;(2):79-89. [Marakhova AI, Avrach AS, Skalozubova TA, Sorokina AA, Sergunova EV, Fedoro-vsky NN. Spectrophotometer^ in analysis of preparations. Meditsi-na i obrazovanie v Sibiri = Journal of Siberian Medical Sciences. 2012;(2):79-89 (In Russ.)]
ОБ АВТОРАХ I AUTHORS
Антонова Наталия Петровна, канд. биол. наyк. Natalia P. Antonova, Cand. Sci. (Biol.). ORCID: https://orcid.org/0000-0002-7818-5303 Моргунов Игорь Михайлович. Igor M. Morgunov. ORCID: https://orcid.org/0000-0002-3907-3456
Прохватилова Светлана Степановна, канд. фарм. наyк. Svetlana S. Prokhvatilova, Cand. Sci. (Pharm.). ORCID: https://orcid.org/0000-0002-3278-1994
Шефер Елена Павловна, канд. фарм. наyк. Elena P. Shefer, Cand. Sci. (Pharm.). ORCID: https://orcid.org/0000-0001-8389-4799 Калинин Артем Михайлович. Artem M. Kalinin. ORCID: https://orcid.org/0000-0002-4980-3248 Голомазова Татьяна Александровна. Tatiana A. Golomazova. ORCID: https://orcid.org/0000-0002-9917-9367
Сmamья nоcmynuлa 04.02.2020 Поcлe доpaбоmкu 27.04.2020 Пpuняma к ne4amu 28.05.2020
Article was received 4 February 2020
Revised 27 April 2020
Accepted for publication 28 May 2020
