CC BY
13
ПРИМЕНЕНИЕ МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ У ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ С МОДЕЛИРОВАННЫМ АДЪЮВАНТНЫМ АРТРИТОМ
Кутузова Лилиана Алексеевна
канд. мед. наук, ассистент кафедры нормальной анатомии ФГАОУВО «Крымский федеральный университет имени
В.И. Вернадского» Медицинская академия имени С.И. Георгиевского, Симферополь Верченко Игорь Анатольевич, Куница Виктор Николаевич
канд. мед.наук, доценты кафедры нормальной анатомии ФГАОУВО «Крымский федеральный университет имени
В.И. Вернадского» Медицинская академия имени С.И. Георгиевского, Симферополь
АННОТАЦИЯ
Проведены исследования сердечно-сосудистой системы при моделировании адъювантного артрита на 24 крысах линии «Wistar». В статье проанализированы морфологические изменения миокарда у животных с экспериментально вызванным адъювантным артритом позволили выявить дистрофические и деструктивные процессы в мио-кардиоцитах, что свидетельствует о необходимости метаболической коррекции. ABSTRACT
In the article morphological heart analyzed the experimentally causedjuvinal rheumatoid arthritis on the 24 white breed «Wistar» rats. It was carried out morphological research of hearts of animals with rheumatoid arthritis depending on the methods of treatments - hormonal therapy and metabolic correction. Dystrophy and disturbance of cardiovascular system of this experiment testifies to necessity of metabolic correction.
Ключевые слова: ювенильный ревматоидный артрит, эксперимент, миокард, крысы.
Key words: juvenil rheumatoid arthritis, experiment, cardiovascular system, rats, metabolic correction.
Ювенильный ревматоидный артрит (ЮРА) занимает одно из ведущих мест в системе здравоохранения. Прогрессирующее течение со склонностью к хронизации, часто сопровождается вовлечением внутренних органов и систем организма [1, 4, 7].
Трудные этапы диагностирования, часто несоответствующие проявления клинического и морфологического состояния кардиомиоцитов и сосудов сердца, а так же неопределенность данных при поражении миокарда во многом определяют прогноз и течение заболевания у больных [4,8, 9,]. Характерно раннее развитие дистрофических изменений в миокарде, которые нарастают с прогрессирова-нием заболевания, однако морфологические изменения в сердце встречаются чаще, чем проявляются клинически [3, 5, 8]. Создание экспериментальной модели хронического аутоиммунного воспаления позволило изучить и выявить особенности сердечно-сосудистой системы у пациентов при ювенильном ревматоидном артрите (ЮРА).
Целью нашей работы явилось изучение динамику в миокарде у экспериментальных животных с моделированным адъювантным артритом на фоне проведенной гормонотерапии и метаболической коррекции.
Исследование проведено на 24 самцах и самках крыс линии «Wistar» 2-х месячного возраста весом 70-100 г., находившихся в стационарных условиях вивария. Все эксперименты на животных проводили с соблюдением международных принципов Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемые для экспериментальных и других научных целей (Страсбург, 1985), а также в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» [1].
Для моделирования ювенильного ревматоидного артрита применяли введение адъюванта Фрейнда. Нами были взяты белые крысы в возрасте 28-30 дней (что соответствует 4-15 лет жизни ребенка), весом 60-80г (по классификации В. И. Западнюка) [2, 6]. Моделировали аутоиммунный процесс путем сенсибилизации организма животного полным адъювантом Фрейнда (ПАФ) по ранее принятой методике [7]. В течении 28 дней вводили ПАФ методом субплантарной инокуляцией 0,01 мл 2 раза в неделю в задние лапки животных. У всех экспериментальных животных к 5-й неделе развивался полиартрит с преимущественной локализацией в крупных суставах
передних и задних конечностях, с менее выраженным поражением мелких сочленений. В соответствии с экспериментом животные были разделены на 4 группы. Первую нозологическую группу составили животные с экспериментально вызванным адъювантным артритом (АдАр) (п = 6), не получавшая лечение. Вторую группу составили 6 животных в возрасте 16-ти недель с моделированным АдАр при введении преднизолона (глюкокортикоидная модель) на протяжении 4-х недель. В третью нозологическую группу вошли животные (п = 6, возраст - 16 недель), которые на фоне моделированного АдАр, получили метаболическую коррекцию препаратом «кардонат» в течении 4-х недель. Четвертую группу составили здоровые животные (п = 6) контрольной группы (КГ). Забор материала проводился через 20 недель с момента моделирования АдАр и лечения препаратами.
Результаты полученные при электронной микроскопии свидетельствуют о создании аутоиммунного воспаления, характерного для ЮРА, а также выявлении изменений в сердечно-сосудистой системе у экспериментальных животных. Анализируя ультратонкую морфологическую картину миокарда, у животных первой группы с моделированным аутоиммунным процессом выявляли в кардиомиоцитах выраженные деструктивные изменения. Степень выраженности ультраструктурных изменений не зависела от отдела сердца и расположения кардиомиоцитов по отношению к сердечным слоям. Определяли множественные разрывы и нарушение целостности митохондриальных мембран, вакуолизацию и фрагментацию подавляющего числа митохондрий. (рис.1., 2.).
Кристы митохондрий были укорочены, дезориентированы и фрагментированы; на них в большом числе наблюдали кристаллические включения высокой электронной плотности. В большинстве митохондрий не удавалось проследить двухконтурность крист и мембран; при этом в матриксе подавляющего большинства митохондрий визуализировался хлопьевидный аморфный материал различной электронной плотности. Зачастую среди митохондрий располагались миелиновоподобные структуры, сравнимые по размеру с крупной митохондрией. Вблизи ядра регистрировали появление полисом и гиперплазия элементов комплекса Гольджи. Ядерный хроматин
конденсировался по периферии кариоплазмы. Карио-лемма формировала множество инвагинаций, отчего ее край приобретал неровные и фестончатые очертания. Ге-терохроматин распределялся преимущественно по пери-
ферии ядра. В центре ядра определяли зону полной декон-денсации с глыбками незначительного размера конденсированного хроматина. Ядерные поры были резко расширенными. Они порой граничили с околоядерными вакуолями, расположенными в цитоплазме (Рис. 3.).
Рис. 1. Электронная микрофотография. Дезориентация, фрагментация и укорочение крист митохондрий в миокарде. В матриксе митохондрий - хлопьевидный аморфный материал (отмечено стрелками). Гиперплазия элементов комплекса Гольджи (отмечено пунктирными стрелками). Ув. 15 000.
Рис. 2. Электронная микрофотография. Разрыв мембран и вакуолизация митохондрий миокардиоцитов (отмечено стрелками). Ув. 15 000.
Рис. 3. Электронная микрофотография. Кариолемма мио-кардиоцитов синцития формирует множество инвагинаций. Ядерные поры расширены, граничат с вакуолями (отмечено стрелками). Ув. 15 000.
Рис. 4. Электронная микрофотография. 2- линии миокардиоцитов неравномерной электронной плотности, де-структурированы, представляют собой цепочки поперечно ориентированного электронноплотного глобулярного материала (отмечено стрелками). Ув. 15 000.
Наблюдали расширение саркоплазматических ретикулярных канальцев, очаговый лизис саркоплазматиче-ского матрикса, отек миокардиальной стромы, разобщение и лизис миофибриллярных пучков, что является свидетельством выраженного повреждения. 2- линии миосинцития неравномерной электронной плотности, во многих случаях деструктурированы и представляют собой цепочки поперечно ориентированного электронноплот-ного глобулярного материала (Рис. 4.).
Местами были деструктурированы сами мышечные филаменты. Сократительные фибриллы при этом сохраняли упорядоченное расположение актиновых и миозино-вых нитей. Участок цитоплазмы клетки, занимаемый ими ранее, был просветленным и содержал разрозненные, фрагментированные и ориентированные хаотично фибриллы. М-линии прослеживали во всех препаратах, при этом они не всегда сохраняли свою четкость. И-диски за счет деструкции и отделения нитей актина от 2-линий
имели также множество просветлений. Капилляры выглядели запустевшими, цитоплазма эндотелиоцитов была заполнена множеством просветлений, вакуолями. Полученные при электроной микроскопии морфологические результаты миокардиоцитов свидетельствовали о создании хронического аутоиммунного воспаления, характерного для ЮРА у экспериментальных животных.
Во второй группе глюкокортикоидной модели созданной на фоне введения преднизолона деструктивные изменения выражены в гораздо меньшей степени, однако в той же мере сохраняются явления дезорганизации стромы миокарда и самих миокардиоцитов (Рис. 5.).
На рисунке 6. наблюдается вакуолизация подавляющего числа митохондрий, а также дезориентация, фрагментация и укорочение крист митохондрий. Ядра кардио-миоцитов сохраняют свою форму и занимают центральное положение в клетке. Кариолемма ровная, околоядерное пространство визуализируется в виде тонкой
электроннопрозрачной каймы. Отек миокардиальной свою направленность и четкость. Размер таких просветле-стромы выражен в меньшей степени, чем в предыдущей ний, имеющих вид размытых, проходящих параллельно Ъ
группе и носит очаговый характер. Ъ - линии электронно-плотные, прослеживаются во всех препаратах, сохраняют
- линиям, полос, составляет 400 или 500 нм
Рис. 5. Электронная микрофотография. Дезориентация. фрагментация и укорочение крист митохондрий (отмечено стрелками). Ув. 20 000.
Рис. 6. Электронная микрофотография. Отделение от Ъ -линии нитей актина (отмечено стрелками). Пунктирной линией показаны миелиновоподобные структуры. Ув. 20 000.
Изменения в миокарде пациентов третьей наблюдаемой группы получивших метаболическую коррекцию препаратом «кардонат» по сравнению с двумя предыдущими, оказываются мало значимыми и носят поверхностный, но обратимый характер. В области интредигитаций и десмосом кардиомиоциты прочно соединены между собой. Отек миокардиальной стромы не выражен, визуали-
Рис. 7. Электронная микрофотография. Гигантские митохондрии. Ув. 15 000.
зируется лишь в виде незначительных очаговых просветлений. Ядра сохраняют свою форму, занимают центральное положение в клетке, хорошо выявляется расположенный по периферии, а в центре ядра - в виде нескольких ядрышек, гетерохроматин. Ядерные поры и околоядерное пространство визуализируются достаточно ясно. (Рис. 7.).
Рис. 8. Электронная микрофотография. Ъ - линии и М - линии выражены хорошо, сохраняют четкость, прослеживаются во всех препаратах (показаны стрелкой). Ув.
20 000.
Подобная картина создает ощущение существования единой митохондриальной межфибриллярной сети, субъединицы которой отделены друг от друга внутренними мембранами. Митохондриальные мембраны и кри-сты сохраняют двухконтурность и направленность. В нескольких препаратах обнаруживается дезориентация и укорочение крист, очаговое просветление матрикса митохондрий, а также миелиновоподобные структуры.
Ъ - линии и М - линии выражены хорошо, сохраняют четкость, прослеживаются во всех препаратах. Встречаются электронносветлые участки разволокненных дезорганизованных фибрилл саркомера, размерами до 200 нм. Локализованы такие участки в саркомере, относительно Ъ - линий и М - линий, в равной степени одинаково и без видимой периодичности (Рис. 8.).
ВЫВОДЫ
1. Обнаруженные изменения клеток и сосудов сердечной мышцы при адъювантном артрите в сравнении с контрольной группой здоровых животных свидетельствуют о преобладании дистрофических и деструктивных процессов, приводящих к необратимой структурной перестройке миокарда.
2. Использование гормонального лечения при данной патологии до определенной степени нивелирует указанные изменения. Но при этом во второй группе все же выявляются признаки необратимых ультраструктурных изменений.
3. Отмечена положительная динамика в третьей наблюдаемой группе с применением метаболической терапии препаратом «кардонат».
Список литературы
1. Западнюк В.И. Лабораторные животные / В.И. За-паднюк, И.П. Западнюк, Е.А. Захария. - К.:Выща школа, 1985.- 385 с.
2. Западнюк В. И. Гериатрическая фармакология. -Киев: Здоров'я, 1977. - 340 с.
3. Котельникова Г. П. Поражение сердца при ревматоидном артрите // Ревматоидный артрит. - М.: Медицина, 2002. - С. 89-90.
4. Макаров Л.М. ЭКГ в педиатрии. - М.: Медпрак-тика, 2006. - 544с.
5. Плецитый К.Д., Шатерникова И.Н. Влияние витамина D на развитие и генерализацию адъювантного
артрита у крыс // Патол.физ. и эксп.терапия.- 1984.-N4.- С.40-44.
6. Раденска-Лоповок С. Г. Морфологические методы исследования и диагностики в ревматологии В кн. : Ревматические болезни (руководство по внутренним болезням) под ред. В. А. Насоновой и Н. В. Бунчука. М.: Медицина, 1997. С. 80-94.
7. Цурко В.В., Котельникова Г.Н., Раденска-Лоповок С.Г. Поражение сердца и сосудов при ревматоидном артрите //Лечащий врач.- 2003. -№3. С.39-42.
8. Yuda Y. Formation of lipid peroxides in adjuvant arthritis. // J. Pharm. Soc. Jap. - 1987. - Vol. 107, N 4. - P. 287 - 293.
ОРГАНИЗАЦИОННО - СКРИНИНГОВЫЕ МЕРОПРИЯТИЯ ПО ВЫЯВЛЕНИЮ ПРИЗНАКОВ ДИСПЛАЗИИ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ У ДЕВОЧЕК ПОДРОСТКОВ
Лукина Татьяна Сергеевна
Тульский Государственный медицинский институт, г. Тулы
ORGANIZATIONALLY - SCREENING ACTIONS FOR IDENTIFICA TION OF SIGNS OF DISPLAZIYA OF CONNECTING FABRIC AT GIRLS OF TEENAGERS. Lukina Tatyana Sergeyevna Tula State medical institute, Tula АННОТАЦИЯ
В статье представлены мероприятия по выявлению признаков дисплазии соединительной ткани у девочек подростков. Последние годы одним из актуальных медицинских направлений исследований является изучение вопросов, связанных с недифференцированными формами дисплазии соединительной ткани (ДСТ), которые позволяют отнести девочек подростков с данным заболеванием к группе риска по репродуктивным нарушениям.
Ключевые слова: дисплазии соединительной ткани, подростки девочки, организация, выявление. Summary
Actions for identification of signs of a displaziya of connecting fabric at girls of teenagers are presented in article. The last years one of the actual medical directions of researches is studying of the questions connected with undifferentiated fo rms of the displaziya of connecting fabric (DCF) which allow to carry girls of teenagers with this disease to group of risk on reproductive violations.
Keywords: displaziya of connecting fabric, girl's teenagers, organization, identification.
Совершенствование системы организационных мероприятий по выявлению признаков дисплазии соединительной ткани у девочек подростков должно обеспечиваться решением задач по повышению эффективности организационных мероприятий и медицинской помощи девочкам подросткам, с улучшением медицинской информированности, профилактической и медико-социальной активности, оптимизацией их качества жизни, обеспечением доступности и качества клинико-диагностических услуг, снижением уровня воздействия факторов риска, влияющих на репродуктивное здоровье девочек подростков с НДСТ. Принято выделять дифференцированные и недифференцированные формы ДСТ. К дифференцированным ДСТ относятся болезни монофакторного характера с установленным генным фактором и, как правило, выраженной и четкой очерченной клинической симптоматикой. Классическим примером дифференцированным ДСТ являются наследственные кологено-патии Синдром Марфана (СМ),Элерса -Данлоса, возникновение которых обусловлено мутациями в генах, контролирующих синтез определенных типов кологена. Синдром Марфана (СМ) -наследственное нарушение обмена соединительной ткани с аутосомно-доминантным типом наследования и популя-ционной частотой 1:10000 - 1:15000. В его основе лежат мутации в гене белка фибриллина (БЬЮ) или а2-цепи коллагена I типа. В типичном случае СМ представляет со-
бой сочетание характерных изменений опорно-двигательного аппарата, глаз и сердечно-сосудистой системы. Современное консервативное и хирургическое ведение больных с СМ продлевает жизнь в среднем на 13 лет, все больше пациенток достигают репродуктивного возраста. В контексте проблемы беременности при СМ, в первую очередь, требуют обсуждения два наиболее серьезных аспекта - вероятность расслоения и разрыва аорты и риск иметь больного ребенка. Серьезной проблемой, стоящей перед женщиной с СМ, является высокий генетический риск для потомства. Аутосомно-доминантный тип наследования означает вероятность рождения больного ребенка равную 50%. Расшифровка генных дефектов, ответственных за возникновение СМ, позволяет проводить прена-тальную и преимплантационную диагностику и избегать рождения больного ребенка. Особые диагностические проблемы создают спорадические случаи заболевания, частота которых составляет около 30% от общего количества больных с СМ. В практической работе гораздо чаще приходится сталкиваться с недифференцированной дис-плазией соединительной ткани. Ее клинические проявления не укладываются ни в одну из известных наследственных болезней, но могут их весьма напоминать ( морфано-или элерсоподобный фенотип). Теоретической предпосылкой к настоящему разделу исследования соединитель-
